绞股蓝总皂苷通过PPAR-γ与Wnt途径影响大鼠动脉粥样硬化及部分有效成分预测

目的探讨绞股蓝总皂苷对动脉粥样硬化大鼠主动脉炎症反应的影响及预测部分绞股蓝有效成分。方法将60只SD大鼠分为空白对照组(Nor组,)、模型组(Mod组)、辛伐他汀组(Sim组,5 mg/kg灌胃,13周)、绞股蓝总皂苷组(GPs组,160 mg/kg灌胃,13周)、GW9662组(PPAR-γ抑制剂,10 mg/kg灌胃,13周)及GPs+GW9662组[GPs 160 mg/kg及GW966210 mg/(kg·d),灌胃,13周],其中Nor组普通饮食,其他组予以高脂饲料联合腹腔注射维生素D 3以构建动脉粥样硬化大鼠模型;建模13周后取大鼠血液、胸主动脉和腹主动脉,HE切片染色观察胸主动脉组织学变化,ELISA测定血清中IL-6含量,Western blot检测腹主动脉过氧化酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ),Wnt3a及β-catenin蛋白表达、qRT-PCR检测腹主动脉PPAR-γ及Wnt3a及β-catenin mRNA表达;利用分子对接初步筛选绞股蓝总皂苷与PPAR-γ亲和力较高的有效成分。结果与Nor组比较,Mod组及其他干预组大鼠主动脉切片可见AS特征性病变,其中GW9662组病变明显,辛伐他汀和绞股蓝总皂苷各干预组病变较轻;与Mor组相比,GPs组大鼠血清白细胞介素-6(IL-6)含量显著减少;与Mor组大鼠腹主动脉比较,GPs组PPAR-γ蛋白和mRNA的表达显著减少(P<0.05)、其他非阳性对照干预组均不同程度增高,而Mor组Wnt3a、β-catenin和mRNA表达与Nor组相比明显升高(P<0.05)、其他非阳性对照干预组均不同程度减少,其中GPs组显著降低;分子对接结果显示野黄芩苷、胆固醇、菜油甾醇、谷甾醇、3′-甲基鼠李素对PPAR-γ具有较强的亲和力。结论绞股蓝总皂苷可能是通过调节PPAR-γ与Wnt经典途径改善大鼠动脉粥样硬化,野黄芩苷、胆固醇、菜油甾醇、谷甾醇、3′-甲基鼠李素成分是绞股蓝部分有效成分。

Wnt途径──调控细胞增殖和癌变的关键途径

Ｗ ｎｔ／Ｗｉｎｇｌｅｓｓ途径是调控细胞生长增殖的关键途径，在胚胎发育和肿瘤发生中起着重要作用。 由于肿瘤抑制基因ＡＰＣ失活突变或原癌基因β－ｃａｔｅｎｉｎ激活突变等因素引起的该途径的异常激活可以 启动下游靶基因ｃ－ｍｙｃ和ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１，致使细胞恶性转化，发生肿瘤；尤其是结肠癌。本文对Ｗｎｔ－ ＡＰＣ－β－ｃａｔｅｎｉｎ－ＴＣＦ／ＬＥＦ－ｃ－ｍｙｃ／ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１信号途径的最新研究进展作一综述。

二氢丹参酮经GSK3β/Wnt途径调节膀胱癌T-24细胞增殖及侵袭的机制研究

目的:探讨二氢丹参酮经糖原合成酶激酶3β(GSK3β)/Wnt途径调节膀胱癌T-24细胞增殖及侵袭的机制。方法:体外培养膀胱癌T-24细胞,选择对数生长期细胞进行实验。实验分为对照组、阳性组、二氢丹参酮低、中、高剂量组。对照组不进行处理,阳性组给予终浓度为1mg·L^-1的吉西他滨,二氢丹参酮低、中、高剂量组分别给予终浓度为10,20,40 mg·L^-1的二氢丹参酮,继续培养24 h后检测细胞增殖率、细胞体外侵袭能力、细胞凋亡和细胞周期,用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测GSK3β、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)mRNA表达。结果:与对照组比较,阳性组和二氢丹参酮各剂量组的T-24细胞增殖率、侵袭细胞数、β-catenin、Cyclin D1和Vimentin mRNA表达降低(P<0.05),细胞凋亡率、S期细胞数、GSK3β、E-cadherin mRNA表达增加(P<0.05),且二氢丹参酮各剂量组呈剂量依赖性,但效果不如阳性组(P<0.05)。结论:二氢丹参酮可以抑制膀胱癌T-24细胞增殖和侵袭,其机制可能与激活GSK3β/Wnt途径有关。

丹皮酚通过调节Wnt途径对强直性脊柱炎小鼠疗效及滑膜组织中RANKL和Smadl水平的影响

目的分析丹皮酚对强直性脊柱炎(AS)小鼠治疗疗效及对Wnt通路与RANKL和Smadl水平的影响。方法取100只小鼠随机分为模型组、阳性药物组、空白组、丹皮酚组;除空白组外,其余三组均使用100μl蛋白聚糖+100μl弗氏完全佐剂建立强直性脊柱炎模型;造模成功后开始给药,阳性药物组给予柳氮磺吡啶9 mg/kg进行灌胃,丹皮酚组给与丹皮酚3 mg/kg进行灌胃,模型组及空白组给予等体积的蒸馏水。各组每天给药1次,连续进行20 d。在造模前及造模后每一周对小鼠的后足关节炎体征进行评分;采集所有小鼠关节滑膜细胞,采用PCR法检测细胞中RANKL、Smadl水平;采用Westernblot法检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)、骨谷氨酸蛋白(BGP)、DKK1、Wnt5a水平。结果造模后模型组、阳性药物组、丹皮酚组小鼠关节炎症评分无显著差异(P>0.05),但均高于空白组(P<0.05);治疗1周、治疗2周及治疗3周时阳性药物组及丹皮酚组小鼠后足关节炎体征评分均明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,模型组小鼠RANK、Smadl、Wnt5a水平均高于空白组,ALP、BGP、DKK1水平低于空白组(均P<0.05);阳性药物组、丹皮酚组小鼠RANK、Smadl、Wnt5a水平均明显低于模型组,滑膜细胞中ALP、BGP、DKK1水平明显高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05);阳性药物组与丹皮酚组小鼠各指标比较无显著差异(P>0.05)。结论采用丹皮酚对AS小鼠治疗后可有效改善小鼠后足炎症评分,并可有效调节Wnt通路,降低滑膜组织中RANKL及Smadl水平。

Wnt途径相关基因蛋白在大肠癌中的表达及其临床意义

研究Wnt途径相关基因蛋白在大肠癌中的表达及其与临床病理参数之间的关系 ,探讨它们在大肠癌发生发展中的作用。方法 应用免疫组织化学方法检测 82例大肠癌、41例癌旁组织和 2 0例“正常”大肠组织中 β catenin、c myc和EGFR的表达状态。结果 大肠癌中 β catenin异常表达率和EGFR高表达率显著高于癌旁组织和“正常”组织 ;c myc在癌组织中高表达率为 46 .3%。β catenin异常表达和EGFR、c myc高表达与肿瘤的分化程度、有无淋巴结转移、Dukes分期相关。 结论 Wnt途径相关基因蛋白EGFR、β catenin和c myc表达异常在大肠癌的发生发展中起重要作用 ,并与其分化程度、有无淋巴结转移和Dukes分期相关。EGFR高表达、β catenin异常表达和c myc高表达之间在大肠癌的发生发展过程中存在协同作用。

香叶木素通过抑制Wnt/β-catenin途径抑制A549细胞增殖和肿瘤球形成

目的探究香叶木素对A549细胞增殖、干细胞特性的影响及其机制。方法MTT法检测不同浓度香叶木素对细胞活性的作用,随后将A549细胞分为对照组、香叶木素低、中、高剂量组和顺铂处理组。集落形成实验检测A549细胞增殖;成球实验检测成球直径和成球数量;流式细胞术检测肿瘤干细胞标记物CD133的表达,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Westernbolt分别检测CD44、SOX2、乙醛脱氢酶1(ALDH1)、OCT4、Wnt、β-catenin和GSK-3β的mRNA和蛋白相对表达量。建立异种移植瘤模型,免疫组化检测CD44和SOX2的表达,Westernblot检测β-catenin蛋白表达量。结果与对照组相比,中、高剂量香叶木素处理后,A549细胞活力和克隆形成率降低,干细胞成球直径和成球数量降低,CD133阳性细胞率减少,CD44、SOX2、ALDH1、OCT4、Wnt和β-catenin的mRNA和蛋白相对表达量降低,GSK-3β的mRNA和蛋白相对表达量升高,GSK-3β蛋白磷酸化水平降低。在体内,香叶木素处理组的肿瘤重量减轻,肿瘤组织中CD44和SOX2阳性细胞数均减少,β-catenin蛋白表达量下调。结论香叶木素可能通过抑制Wnt/β-catenin途径抑制A549细胞增殖及干细胞活性。

WNT信号传导途径与肿瘤

WNT途径是传递生长刺激信号的通路 ,对动物的生长发育是必需的 ,而其活化却在结肠癌、黑素瘤等越来越多的肿瘤和癌细胞中被发现。WNT途径活化后可影响基因表达而促进细胞增殖 ,在动物胚胎发育过程中是必需的 ,但在成年动物细胞中则会导致肿瘤的发生和生长。因此 ,对WNT途径的传导及调控的研究可增进人们对胚胎发育机制和肿瘤的发生、发展机制的认识。

胶质瘤患者中BMI1通过抑制CXXC4表达激活Wnt途径对胶质瘤细胞转移的影响

目的 探究BMI1对胶质瘤的作用及可能的作用机制。方法 收集胶质瘤和正常脑组织各25例。RT-PCR和免疫组化检测BMI1的表达;RT-PCR检测U251和SVGp12细胞中BMI1和CXXC4 m RNA表达;Western blot检测BMI1、CXXC4、N-cadherin、Vimentin、E-cadherin、β-catenin、C-myc和Cyclin D1表达;Ch IP-PCR实验检测BMI1与CXXC4启动子的结合;CCK-8检测细胞活力;Ed U试剂盒检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果 胶质瘤组BMI1 m RNA表达和免疫组化评分较正常组明显上调(P <0.05)。U251组细胞中BMI1 m RNA和蛋白表达较SVGp12组明显上调(P <0.05),CXXC4 m RNA和蛋白表达明显下调(P <0.05)。BMI1可与CXXC4启动子相结合。si RNA-BMI1+si RNA-CXXC4组细胞中CXXC4 m RNA表达以及CXXC4和E-cadherin蛋白表达较si RNA-BMI1组明显下调(P <0.05),N-cadherin、Vimentin、β-catenin、C-myc和Cyclin D1蛋白表达明显上调(P <0.05),细胞活力、Ed U+细胞数、迁移和侵袭细胞数明显上调(P <0.05),BMI1 m RNA和蛋白表达差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 BMI1通抑制CXXC4表达激活Wnt途径促进胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭和上皮-间质转化。

经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化与肺癌发生的关系

目的检测肺癌中经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1,sFRP-1,DKK-3)启动子的甲基化状态及β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在肺癌发病中的作用。方法应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测66例肺癌组织、25例相应的癌旁组织和10例正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化;免疫组化SP法检测β-catenin的表达情况。结果正常肺组织均未检测到所选基因的甲基化,肿瘤组织和癌旁组织中WIF-1,sFRP-1,DKK-3基因启动子甲基化的发生率分别为:50·0%vs24·0%(P<0·05),36·4%vs12·0%(P<0·05)和36·4%vs8·0%(P<0·01);重度吸烟患者肿瘤组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P<0·05)。肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态。免疫组织化学显示肺癌组织中β-catenin的阳性表达率为81·2%,异常表达率为64·4%,且与组织学类型无关(P>0·05)。结论经典Wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌表观遗传干预治疗的新靶点。

中介素通过经典Wnt信号途径促进肝癌细胞增殖

目的探讨中介素(IMD)在肝细胞癌中的作用及其相关分子机制。方法以重组人IMD1-53及其受体拮抗剂IMD17-47处理肝癌细胞系Hep G2细胞,CCK-8法检测细胞增殖,TOPFlash/FOPFlash荧光素酶活性比值检测经典Wnt信号通路转录活性,实时定量PCR法检测Wnt信号通路下游c-myc、cyclin D1表达。结果 IMD可以呈剂量依赖性关系诱导肝癌Hep G2细胞增殖,并可被IMD受体竞争性拮抗剂IMD17-47阻断;IMD可激活经典Wnt信号转录活性及下游靶基因m RNA水平,阻断Wnt信号途径可在一定程度上抑制由IMD导致的Hep G2细胞增殖。结论 IMD通过与受体结合,激活Wnt信号通路发挥其促肝癌细胞增殖作用,为肝癌的治疗提出新的思路。

靶向NAC-1基因的siRNA对卵巢癌HO8910细胞生长及其Wnt/β-catenin信号途径的影响

目的 :研究NAC-1调节卵巢癌HO8910细胞生长增殖的机制。方法 NAC-1基因特异性小干扰RNA(siRNA)处理HO8910细胞,然后检测细胞增殖率、细胞周期、以及NAC-1蛋白、WNT信号途径β-链蛋白、低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP6)基因及其下游靶基因cyclin D1和survivin基因表达。结果 NAC-1基因的特异性siRNA不仅显著抑制HO8910细胞中NAC-1 mRNA和蛋白的表达,明显抑制细胞增殖,细胞周期被阻滞于G1期,而且显著抑制其Wnt/β-catenin信号途径活性:转染48 h,β-catenin、cyclin D1、survivin蛋白水平显著下降,cyclin D1、survivin基因mRNA表达水平显著下降,与空白对照组相比较有显著差异(P<0.01)。结论 NAC-1通过调节β-catenin蛋白水平增强WNT信号途径活性、促进卵巢癌HO8910细胞增殖。

经典Wnt信号途径相关因子与大肠癌分期的关系

目的:探讨经典Wnt信号途径相关因子与大肠癌分期的关系。方法:搜集2013年1月1日至2014年1月1日皖南医学院第一附属医院胃肠外科收治的46例大肠癌患者的临床资料、血清样本及病理组织标本,根据Dukes分期分为四组。搜集10例正常的肠黏膜组织标本作为对照组1,应用免疫组化法检测大肠癌及正常肠黏膜组织中Wnt-2蛋白、β-catenin蛋白、Axin蛋白、APC蛋白的表达。搜集15例健康人的血清样本作为对照组2,应用酶联免疫吸附试验检测大肠癌患者和对照组2血清中Wnt-2蛋白、Axin蛋白的表达。结果:Wnt-2、β-catenin在大肠癌组织中高表达,Axin、APC在大肠癌组织中低表达,且各个分期之间差异有统计学意义;46例大肠癌患者血清中Wnt-2浓度明显高于健康人,各个分期之间的差异也有统计学意义。Axin血清浓度低于健康人,但是各个分期之间的差异无统计学意义。结论:经典Wnt信号途径相关蛋白的表达与大肠癌Dukes分期有关,经典Wnt信号途径相关因子可作为大肠癌筛查的血清学辅助指标,有助于提高大肠癌检出的灵敏度。

间充质干细胞释放Dkk-1抑制乳腺癌细胞Wnt/β-catenin途径的实验研究

研究表明,间充质干细胞具有向肿瘤细胞定向迁移并且抑制肿瘤细胞的特性,然而其分子机理目前尚不清楚.为了探讨间充质干细胞抑制肿瘤细胞作用的分子机制,应用BMMS-03人间充质干细胞的条件培养液作用于MCF-7乳腺癌细胞,通过软琼脂克隆形成实验、MTT实验、免疫印迹和免疫荧光染色等技术观察细胞克隆形成、增殖和基因表达的变化.结果显示:在BMMS-03细胞条件培养液作用下,MCF-7细胞的克隆形成和增殖受到了明显的抑制,β-catenin及其下游靶蛋白c-Myc、Bcl-2、PCNA和survivin的表达被明显下调,MCF-7细胞浆和细胞核内β-catenin的表达被明显抑制.BMMS-03细胞中Dkk-1的表达水平与MCF-7细胞相比较高.利用抗Dkk-1的抗体中和BMMS-03细胞条件培养液中的Dkk-1后,可明显拮抗BMMS-03细胞条件培养液对MCF-7细胞中β-catenin及c-Myc表达的抑制作用,基因转染使MCF-7细胞过表达Dkk-1后,MCF-7细胞的β-catenin及c-Myc的表达明显下调.同样经基因转染使BMMS-03细胞过表达Dkk-1后,其条件培养液可进一步下调MCF-7细胞β-catenin及c-Myc的表达.上述结果表明,间充质干细胞BMMS-03对乳腺癌MCF-7细胞的恶性表型具有明显抑制作用,其分子机制与间充质干细胞释放Dkk-1抑制乳腺癌细胞Wnt/β-catenin信号途径有关.

Wnt信号途径的分子机制

Wnt信号途径调节控制着许多生命过程,也与肿瘤发生密切相关,在目前已知的癌症中,有十几种高发性癌变源于Wnt信号转导途径的失调。根据Wnt蛋白转导信号的方式,人们又将Wnt信号转导途径分为经典Wnt信号途径和非经典的Wnt信号途径,Wnt途径信号转导的主要特点是基于蛋白质相互作用对转导中心分子的细胞定位、修饰/去修饰、以及对蛋白质稳定性进行调节等。

孕鼠叶酸缺乏对子代心脏叶酸结合蛋白1基因及WNT信号转导途径的影响

目的探讨孕鼠叶酸缺乏(FD)对子代心脏发育过程中叶酸结合蛋白1(Folbp1)基因表达及WNT信号转导途径的影响。方法成熟雌性SD大鼠36只随机分为实验组和对照组各18只,分别喂以缺乏叶酸和添加叶酸的纯合饲料。2周后与成熟SD雄性大鼠交配,分别取孕13.51、7.5 d胚胎鼠及新生鼠心脏。用RT-PCR方法检测Folbp1基因及WNT信号转导途径中Wnt和-βcatenin基因mRNA表达。结果Folbp1、Wnt及-βcatenin基因mRNA在孕13.51、7.5 d胚胎心脏及新生鼠心脏中的表达量,实验组均显著低于对照组(P均<0.05)。结论FD影响Folbp1、WNT及-βcatenin基因表达,可能引起叶酸受体功能低下和WNT信号转导途径障碍,从而可能导致心脏发育中形态异常,造成心脏功能缺陷。

Wnt非经典途径对小鼠阿尔茨海默病模型的作用及机制的初步探讨

目的探讨Wnt非经典途径对小鼠阿尔茨海默病模型的作用以及机制。方法选取90只4个月龄的SD雄性小鼠,随机均分为正常对照组、假手术组、模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组15只。正常对照组不予处理,假手术组注入一定量的生理盐水,模型组、低剂量组、中剂量组和高剂量组的小鼠用基底核注射海人藻酸建立阿尔茨海默病模型,造模成功后连续给药氯化锂,经过小鼠跳台实验测定被动回避次数;处死小鼠后,测定脑组织中白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)的浓度变化。结果模型组、低剂量组的被动回避次数与假手术组比较明显升高(P<0.05),高、中剂量组小鼠与模型组比较被动回避次数均明显降低(P<0.05);与模型组比较,低、中和高剂量组细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α明显下降(P<0.05),且中、高剂量组下降更显著(P<0.05)。结论高、中剂量组剂量的氯化锂能显著改善小鼠的学习记忆成绩,且疗效均优于低剂量氯化锂。氯化锂Wnt非经典途径对小鼠阿尔茨海默病模型起积极的作用,有助于改善阿尔茨海默病。

Wnt/β-catenin信号途径与肾纤维化的相关研究进展

肾纤维化是各种不同病因的慢性肾脏疾病进行性发展的共同病理改变，是导致终末期肾病的主要病理基础。Wnt／βcatenin信号途径参与了肾纤维化、肾脏发育及肾肿瘤、多囊肾、急性肾衰竭、糖尿病肾病等多种肾脏病的发病。该途径在调控细胞的黏附、迁移、上皮间质转化、生长、分化、凋亡等过程，以及在胚胎发育、器官发生和维持组织器官内环境稳定中具有重要作用[1]。近年来研究证实Wnt信号途径与肾纤维化的形成息息相关，在肾间质纤维化的发生发展中发挥重要作用[2]。

Wnt/β-catenin信号途径在糖尿病肾病患者肾小管间质损伤中的作用

目的探讨Wnt/β-catenin信号途径在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)患者肾小管间质损伤中的作用。方法收集DN患者46例,根据肾小管间质损伤程度分为轻+中度组及重度组,以10例肾肿瘤患者瘤旁组织作为对照组。采用免疫组化SP法检测肾组织中Wnt4、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(phospho-glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)、β-catenin的表达;分析三者表达与临床指标、肾小管间质损伤积分的相关性。结果与轻+中度DN组及对照组相比,重度组DN尿蛋白增多,肾小管间质损伤积分增高。肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate,e GFR)下降。DN轻+中度组肾小管上皮细胞Wnt4、p-GSK-3β、β-catenin表达较对照组增强;且三者表达与24 h尿蛋白、肾小管间质损伤积分呈正相关,与e GFR呈负相关。结论 Wnt/β-catenin信号途径可能参与DN患者肾小管间质纤维化的过程。

Wnt信号转导途径及其与结肠癌的关联

Wnt信号转导途径参与细胞多种复杂的生化反应过程。目前认为Wnt通路的组成主要包括 :细胞外因子(Wnt)、跨膜受体Frizzled(Frz)、β 连环蛋白 (β catenin)及T细胞趋化因子 (Tcellfactor,TCF)等一系列蛋白。细胞外因子Wnt激活的信号通过胞质蛋白的相互作用 ,能够使胞浆内β 连环蛋白保持稳定并累积 ,β 连环蛋白进而入核与T细胞趋化因子联合作用激活靶基因 (多数是参与细胞增殖与凋亡的基因 ,如 :CyclinD1、c myc等 )的转录 ,而且在Wnt信号途径的不同阶段有各种蛋白因子进行调控 ;另外 ,Wnt胞内信号途径的异常激活与人类各种癌症的产生有联系 ,尤其是结肠癌变。大多数结肠癌患者的转化细胞存在APC(adenomatouspolyposiscoli)基因缺失突变或失活 ,导致 β 连环蛋白在核内的累积 ,并能影响相关基因转录 ,被认为是结肠癌发生的关键因素之一。由于该信号转导途径具有如此重要的作用 。