期刊文献+
共找到15篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
人类肝脏cDNA文库的构建及hHGF基因的筛选、克隆与表达 被引量:1
1
作者 张锦前 牛俊奇 王峰 《生物医学工程与临床》 CAS 2006年第5期315-319,共5页
目的构建人类肝脏的cDNA文库,从中筛选hHGF基因并进行克隆与表达。方法从人类胎儿肝脏中快速分离提取出mRNA;将已提取出的mRNA构建成cDNA文库;从中筛选出hHGF(hepatocyte growth factor)基因后,进行克隆并测序确定;构建表达质粒pBV221-h... 目的构建人类肝脏的cDNA文库,从中筛选hHGF基因并进行克隆与表达。方法从人类胎儿肝脏中快速分离提取出mRNA;将已提取出的mRNA构建成cDNA文库;从中筛选出hHGF(hepatocyte growth factor)基因后,进行克隆并测序确定;构建表达质粒pBV221-hHGF后转化大肠杆菌BL21(DE3α),以异丙基硫代-B-D-半乳糖苷(IPTG)诱导,收集菌体后提取蛋白样品并对其进行SDS-PAGE电泳及蛋白免疫印迹检测。结果成功地构建了人类肝脏的cDNA文库;经筛选得到约2200bp的hHGF基因;对其进行测序确认;成功地构建该基因的表达型质粒,并对表达蛋白进行蛋白免疫印迹检测,检测出其表达产生的蛋白质相对分子量在100000左右。结论人类肝脏cDNA文库成功地构建后可用于筛选获取完整的cDNA基因,从中筛选、克隆hHGF基因,并测序确认,进行表达蛋白质检测,结果正确,以上工作为进一步深入地进行与人类肝脏cDNA文库及hHGF相关的实验研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 人类肝脏cDNA文库 hhgf基因 筛选、克隆及表达
下载PDF
hHGF基因肾脏电转染对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用 被引量:2
2
作者 李宓 杜艺 +2 位作者 陈家湄 彭莉 邹和群 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第11期991-994,共4页
目的:使用肾脏直接基因电转染方法对大鼠肾脏进行hHGF基因转染,观察该基因转染对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法:雄性SD大鼠20只,随机分为转染组和对照组,每组10只.在热缺血前3d将含有hHGF基因的质粒用电转染方法转入大鼠肾脏,3d后... 目的:使用肾脏直接基因电转染方法对大鼠肾脏进行hHGF基因转染,观察该基因转染对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法:雄性SD大鼠20只,随机分为转染组和对照组,每组10只.在热缺血前3d将含有hHGF基因的质粒用电转染方法转入大鼠肾脏,3d后建立大鼠肾热缺血模型,观察hHGF的药代动力学,并对缺血肾脏进行功能和组织学评价.结果:hHGF基因电转染组肾组织及血浆hHGF基因表达水平高于对照组(P<0.01).转染组血肌酐水平低于对照组(P<0.01),肾功能恢复快于对照组.组织学评价显示,转染组肾小管细胞凋亡评分低于对照组(P<0.05).转染组淋巴细胞、巨噬细胞及中性粒细胞浸润均较对照组少.结论:肾脏hHGF基因电转染组hHGF药代动力学和治疗效果均显示,该基因电转染对肾脏缺血再灌注损伤有保护作用. 展开更多
关键词 肾脏 缺血再灌注损伤 人肝细胞生长因子 基因治疗
下载PDF
hHGF基因肾脏电转染对大鼠慢性移植肾病的影响 被引量:1
3
作者 李宓 杜艺 +2 位作者 陈家湄 彭莉 邹和群 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期510-512,517,共4页
目的:使用肾脏直接基因电转染方法对大鼠移植肾进行hHGF基因转染,观察该基因对防治大鼠慢性移植肾病的作用。方法:雄性SD大鼠20只,随机分为治疗组和对照组,每组10只。利用移植肾离体灌流时机将含有hHGF基因的质粒(治疗组)及空质粒(对照... 目的:使用肾脏直接基因电转染方法对大鼠移植肾进行hHGF基因转染,观察该基因对防治大鼠慢性移植肾病的作用。方法:雄性SD大鼠20只,随机分为治疗组和对照组,每组10只。利用移植肾离体灌流时机将含有hHGF基因的质粒(治疗组)及空质粒(对照组)用电转染方法转入大鼠肾脏,并行自体肾移植及对侧单肾切除。于移植第8天及12周后观察hHGF基因在肾组织中的表达,并对移植肾进行功能和组织学评价。结果:治疗组肾组织hHGF基因表达于移植后第8天为阳性,对照组及治疗组移植后12周hHGF基因表达阴性,治疗组血浆hHGF水平在电转染后第7天为(76.9±11.7)pg/ml,第12周的hHGF浓度为0,而对照组第7天及第12周均未测到hHGF。治疗组血肌酐、尿素氮水平于移植后12周显著低于对照组。组织学评价显示,于肾移植后12周,治疗组肾间质纤维化程度显著轻于对照组。结论:hHGF基因转染治疗对减轻移植肾的肾功能损伤和肾间质的纤维化具有远期效果,这种远期效果可能与hHGF基因对移植肾早期缺血再灌注损伤的保护作用及抗纤维化作用有关。因此,本组认为hHGF基因转染在肾移植初期的治疗作用对预防慢性移植肾病的发生和发展起了重要的作用。 展开更多
关键词 慢性移植肾病 人肝细胞生长因子 基因治疗
下载PDF
重组人肝细胞生长因子抗四氯化碳染毒小鼠肝的保护效应 被引量:5
4
作者 宫德正 邹原 梅懋华 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期339-342,共4页
为检测重组人肝细胞生长因子(r-hHGF)的保肝作用,本工作观察到r-hHGF降低CCl4染毒小鼠血清ALT和AST升高的幅度,减轻肝组织受损的程度和防止肝细胞器的破坏,而且,r-hHGF的这种保肝效应所需剂量极小,... 为检测重组人肝细胞生长因子(r-hHGF)的保肝作用,本工作观察到r-hHGF降低CCl4染毒小鼠血清ALT和AST升高的幅度,减轻肝组织受损的程度和防止肝细胞器的破坏,而且,r-hHGF的这种保肝效应所需剂量极小,为ng级。根据上述资料推测。 展开更多
关键词 四氯化碳 保护作用 γ-hhgf
下载PDF
重组人肝细胞生长因子重链在大肠杆菌中的表达研究 被引量:1
5
作者 党素英 程牛亮 +2 位作者 牛勃 王惠珍 赵建滨 《山西医科大学学报》 CAS 2000年第6期481-483,共3页
目的 观察经过转录前加工、修饰后克隆至表达载体pBV2 2 0中的人肝细胞生长因子α链cDNA在大肠杆菌的表达情况 ,优化表达条件 ,以建立hHGFα原核高效表达体系 ,并进一步研究hHGF -α蛋白的生物学功能。方法与结果 将重组表达质粒pBV2 ... 目的 观察经过转录前加工、修饰后克隆至表达载体pBV2 2 0中的人肝细胞生长因子α链cDNA在大肠杆菌的表达情况 ,优化表达条件 ,以建立hHGFα原核高效表达体系 ,并进一步研究hHGF -α蛋白的生物学功能。方法与结果 将重组表达质粒pBV2 2 0 hHGF α转化大肠杆菌DH5α、Plyss ,通过升温诱导法 ,即将温度由 30℃升高到 42℃ ,诱导外源基因表达。SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳检测hHGF α蛋白表达 ,电泳图谱显示一特异的分子量与单体hHGF α链吻合的蛋白带。SDS PAGE光密度扫描对外源基因表达产物进行初步定量 ,表达产物分别占细菌可溶性蛋白总量的 2 5 %、30 %。进一步行West ern blot对表达产物进行定性 ,外源基因表达蛋白与特异的hHGF α抗体呈阳性反应。结论 成功地建立了hHGF 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 基因表达 大肠杆菌 hhgf重链
下载PDF
肝细胞生长因子对四氯化碳损伤原代培养大鼠肝细胞的保护作用 被引量:21
6
作者 邹原 宫德正 +1 位作者 孙丽娟 梅懋华 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 1997年第3期228-230,共3页
本工作采用无血清原代培养大鼠肝细胞法,观察了重组人肝细胞生长因子(r-hHGF)对四氯化碳(CCl4)致大鼠肝细胞损伤的保护作用。结果表明,r-hHGF对CCl4染毒肝细胞有明显的保护作用。r-hHGF保护组较CCl... 本工作采用无血清原代培养大鼠肝细胞法,观察了重组人肝细胞生长因子(r-hHGF)对四氯化碳(CCl4)致大鼠肝细胞损伤的保护作用。结果表明,r-hHGF对CCl4染毒肝细胞有明显的保护作用。r-hHGF保护组较CCl4染毒组细胞存活率显著升高,细胞内丙氨酸转氨酶、钾离子漏出明显降低。结果提示,r-hHGF可减轻CCl4对肝细胞膜的损伤。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 四氧化碳 肝细胞 原代培养 损伤
下载PDF
重叠片段法克隆全长人肝细胞生长因子cDNA
7
作者 李清朗 阳燕 +1 位作者 詹慧清 张雪梅 《微生物学免疫学进展》 1999年第1期22-25,共4页
通过重叠片段的RT-PCR方法,从人胎盘组织克隆了人全长肝细胞生长因子cDNA片段(约2200bp),经酶切证实和测序分析都表明该片段确为人HGFcDNA。本文所用方法解决了扩增较长目的基因片段时,由于RNA酶及反转... 通过重叠片段的RT-PCR方法,从人胎盘组织克隆了人全长肝细胞生长因子cDNA片段(约2200bp),经酶切证实和测序分析都表明该片段确为人HGFcDNA。本文所用方法解决了扩增较长目的基因片段时,由于RNA酶及反转录酶的RNA酶H活性和mRNA二级结构等多种因素的影响。 展开更多
关键词 hhgf RT-PCR CDNA克隆 重叠片段 肝细胞生长因子
下载PDF
人肝细胞生长因子β链在E.coli中的表达、纯化及活性测定
8
作者 常冰梅 牛勃 +3 位作者 程牛亮 张悦红 王惠珍 解军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期193-196,共4页
目的 为获得重组人肝细胞生长因子β(rhHGF-β)的高效表达体系,分离纯化rhHGF-β,以期研究其在生物学和医学中的作用。方法 从人胎肝组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术,对HGF-β基因加工修饰,与载体PBV220重组,构建rhHGF-β的表达载体,转... 目的 为获得重组人肝细胞生长因子β(rhHGF-β)的高效表达体系,分离纯化rhHGF-β,以期研究其在生物学和医学中的作用。方法 从人胎肝组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术,对HGF-β基因加工修饰,与载体PBV220重组,构建rhHGF-β的表达载体,转化大肠杆菌,筛选rhHGF-β的高效表达菌株。对rhHGF-β进行粗纯化,透析复性后MTT法检测生物活性。结果 获得了rhHGF-β完整的cDNA序列,重组克隆的酶切结果与设计一致。目的 蛋白的表达量占全菌蛋白的30%,粗纯化后纯度达90%,复性产物能刺激大鼠肝细胞的增殖。结论 建立了rhHGF-β的表达体系,获得了具有生物活性的rhHGF-β,为进一步大量制备和研究HGF的生物学功能提供了重要的实验数据。 展开更多
关键词 人肝细胞生长因子β链基因 克隆 生物学活性 表达
下载PDF
人肝细胞生长因子基因肌肉电转染对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用
9
作者 李宓 杜艺 +2 位作者 陈家湄 彭莉 邹和群 《中国医院药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1016-1020,共5页
目的:探讨人肝细胞生长因子(hHGF)基因肌肉电转染对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法:♂SD大鼠20只,随机分为2组,即研究组和对照组,每组10只。研究组大鼠接受hHGF肌肉电转染,在热缺血前3d将含有hHGF基因的质粒用电转染技术转入... 目的:探讨人肝细胞生长因子(hHGF)基因肌肉电转染对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法:♂SD大鼠20只,随机分为2组,即研究组和对照组,每组10只。研究组大鼠接受hHGF肌肉电转染,在热缺血前3d将含有hHGF基因的质粒用电转染技术转入大鼠双侧胫前肌肉内,3d后建立大鼠肾热缺血模型,测定hHGF的血药浓度,并对缺血再灌注肾脏进行功能和组织学评价。结果:研究组肾组织及血浆hHGF基因表达水平显著高于对照组。研究组血肌酐水平较对照组低。组织学评价结果显示,研究组肾小管细胞凋亡评分显著低于对照组。研究组淋巴细胞、巨噬细胞及中性粒细胞浸润均较对照组少。结论:本研究结果表明hHGF基因肌肉电转染对大鼠肾脏缺血再灌注损伤具有保护作用,并提示肌肉hHGF基因电转染有可能成为防治移植肾缺血再灌注损伤的安全有效的方法之一。 展开更多
关键词 肾脏 缺血再灌注损伤 人肝细胞生长因子 基因治疗
下载PDF
人肝细胞生长因子在CHO细胞中的高效表达
10
作者 谭昌耀 蒋丽明 +2 位作者 蓝崧 王静 张雪梅 《预防医学情报杂志》 CAS 2002年第2期102-103,共2页
目的 建立高效表达人肝细胞生长因子 (hHGF)的CHO细胞株。方法 将hHGF全长cDNA亚克隆到真核表达载体pTargetTM上 ,构建出pTargetTM-hHGF哺乳动物细胞表达质粒。通过该表达质粒和扩增质粒pSV2 dhfr对二氢叶酸还原酶基因缺失的CHO细胞 ... 目的 建立高效表达人肝细胞生长因子 (hHGF)的CHO细胞株。方法 将hHGF全长cDNA亚克隆到真核表达载体pTargetTM上 ,构建出pTargetTM-hHGF哺乳动物细胞表达质粒。通过该表达质粒和扩增质粒pSV2 dhfr对二氢叶酸还原酶基因缺失的CHO细胞 (CHO DG44)的共转染 ,经G41 8和MTX双筛选 ,建立稳定表达hHGF的CHO细胞株。该细胞株经MTX加压进行基因扩增 ,促使hHGF表达量显著提高。结果 获得的CHO细胞株hHGF表达量达到 1 1 2 μg/ml。结论 hHGF在CHO细胞中得到了高效表达 。 展开更多
关键词 hhgf 克隆 转染 表达
下载PDF
人肝细胞生长因子cDNA克隆在CHO细胞中的表达
11
作者 李孝圭 应其龙 +3 位作者 顾云娣 朱慧 张艳玲 宋后燕 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期449-451,共3页
肝细胞生长因子是一种由α、β链组成的杂合二聚体糖蛋白,能促进肝细胞、多种上皮细胞、内皮细胞和神经胶质细胞的有丝分裂,并对多种肿瘤细胞具有细胞毒性作用或者抑制其生长[1~4],其作用无种属特异性,如人肝细胞生长因子能促... 肝细胞生长因子是一种由α、β链组成的杂合二聚体糖蛋白,能促进肝细胞、多种上皮细胞、内皮细胞和神经胶质细胞的有丝分裂,并对多种肿瘤细胞具有细胞毒性作用或者抑制其生长[1~4],其作用无种属特异性,如人肝细胞生长因子能促进大鼠肝细胞增殖[5]。由于天然H... 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 CDNA 克隆 CHO细胞 表达
下载PDF
人肝细胞生长因子杂交瘤细胞株的建立
12
作者 韩伟国 杨伟珠 +3 位作者 钱宇平 吕伟中 张利能 查锡良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2000年第2期72-74,共3页
目的 建立能分泌人肝细胞生长因子(hHGF)的杂交瘤细胞株。方法 从4~5月龄的人胎肝中分 离贮脂细胞,与次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型人肝癌细胞株(SMMC-7721)融合成杂交瘤细胞,用 超滤膜对... 目的 建立能分泌人肝细胞生长因子(hHGF)的杂交瘤细胞株。方法 从4~5月龄的人胎肝中分 离贮脂细胞,与次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)缺陷型人肝癌细胞株(SMMC-7721)融合成杂交瘤细胞,用 超滤膜对培养上清液初步分离,并用H3-TdR掺入法测定各组分中hHGF的生物活性。结果 培养上清液中相对分 子质量 10 000~ 30 000的组分hHGF活性显著增高,对小鼠肝细胞增殖有明显的促进作用,并存在量效依赖关系,而 相对分子质量小于10 000或大于 30 000的组分与对照相比 hHGF活性无明显改变。结论 hHGF杂交瘤细胞的建 立可作为获得hHGF的一条新途径。 展开更多
关键词 肝细胞生长因子 次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT) 肝癌细胞株(SMMG-7721) 杂交瘤细胞
下载PDF
冷冻对视网膜色素上皮细胞分泌肝细胞生长因子的影响
13
作者 陶晓锋 王方 顾青 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第5期305-308,共4页
本研究观察冷冻处理后的人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epitheliumcells,hRPE)在体外培养和体内玻璃体环境中分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)水平的变化,调查变化后的玻璃体对正常RPE细胞的促增生作用... 本研究观察冷冻处理后的人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epitheliumcells,hRPE)在体外培养和体内玻璃体环境中分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)水平的变化,调查变化后的玻璃体对正常RPE细胞的促增生作用。体外培养的RPE细胞在-80℃下进行冷冻,冷冻时间分为0s、15s和60s,随后继续体外培养和注入正常兔眼玻璃体,冷冻后的第3d和6d收集细胞培养液和玻璃体样本,ELISA法测定hHGF含量;进一步,用MTT法测定正常RPE细胞加入玻璃体样本后的生长状态。结果显示冷冻刺激RPE细胞hHGF的分泌增多,并可促进RPE细胞增生。 展开更多
关键词 视网膜色素上皮细胞 冷冻 肝细胞生长因子 增生性玻璃体视网膜病变
下载PDF
肝切除术后人肝细胞生长因子含量的改变 被引量:1
14
作者 杨镇 《国际外科学杂志》 北大核心 1996年第2期105-106,共2页
肝细胞生长因子是一强效的促有丝分裂原,在再生肝DNA合成中它具有重要作用.人肝细胞生长因子(hHGF)可预示暴发性肝炎病人的存活率.肝叶切除术后肝细胞生长因子改变的临床意义尚不明确.当合并肝硬化或慢性肝炎时hHGF的变化多不规则.本文... 肝细胞生长因子是一强效的促有丝分裂原,在再生肝DNA合成中它具有重要作用.人肝细胞生长因子(hHGF)可预示暴发性肝炎病人的存活率.肝叶切除术后肝细胞生长因子改变的临床意义尚不明确.当合并肝硬化或慢性肝炎时hHGF的变化多不规则.本文研究肝叶切除术围手术期间血清hHGF的改变,探讨其临床意义.病人与方法:62例日本病人肝叶切除术前及术后1、3、5、7天分别测血清hHGF.病人分为两组:组I(n=49)术后hHGF增加,术后1或3天达高峰;组Ⅱ(n=13)术后第1天hHGF下降.38例为肝细胞癌,8例为胆管细胞癌,2例为转移性肝肿瘤,1例为肝血管瘤.根据所切肿块的最大直径计算其体积.术后1个月余肝体积增加百分比(ILV)根据以下公式计算,百分比ILV=(C-(B-A))/(B-A)×100其中A代表总切除的肿瘤体积减去切除的肿瘤体积,B代表术前总肝体积减去术前肿瘤体积,C代表术后28天肝脏体积.hHGF=(b-a)/a×100.a是术前血清hHGF,b是术后第一天血清hHGF. 展开更多
关键词 细胞生长因子 肝切除术后 hhgf 肝再生 枯否细胞 肝肿瘤 临床意义 肿瘤体积 肝功能衰竭 胆管细胞癌
原文传递
人肝细胞生长因子基因真核表达质粒的构建及其在人骨髓间充质干细胞中的表达
15
作者 崔洁 蒋明德 +4 位作者 梅浙川 陈丽 曾维政 郑淑梅 王钊 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第1期27-31,35,共6页
目的构建人肝细胞生长因子(Human hepatocyte growth factor,hHGF)真核表达质粒,并检测其在人骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中的表达及其对细胞生长的影响。方法采用密度梯度法从人骨髓中分离BMSCs,流式... 目的构建人肝细胞生长因子(Human hepatocyte growth factor,hHGF)真核表达质粒,并检测其在人骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中的表达及其对细胞生长的影响。方法采用密度梯度法从人骨髓中分离BMSCs,流式细胞术检测细胞表型,成脂及成骨诱导其分化。PCR扩增hHGF基因,定向克隆至pEGFP-N1载体中,构建重组表达质粒pEGFP-N1-hHGF,通过电穿孔法转染BMSCs,荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR及Western blot法检测hHGF基因mRNA的转录及蛋白的表达,MTT法检测hHGF对BMSCs增殖活力的影响。结果 BMSCs高表达CD29和CD44,不表达CD34和CD45;BMSCs在体外有向成脂及成骨细胞诱导分化的能力。酶切及基因测序证实,重组表达质粒pEGFP-N1-hHGF构建正确;转染后48 h观察到转染细胞中有绿色荧光蛋白表达;RT-PCR法和Western blot检测到hHGF基因在BMSCs中表达;转染hHGF基因的BMSCs增殖活力明显高于空白对照组和空载体转染组(P<0.05)。结论成功构建了hHGF基因真核表达质粒,转染人BMSCs后获得表达,表达的hHGF可促进BMSCs增殖。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 人肝细胞生长因子 转染 表达
原文传递
上一页 1 下一页 到第
使用帮助 返回顶部