反相高效液相色谱荧光法测定氨基酸类神经递质

反相高效液相色谱荧光法测定氨基酸类神经递质顾拥军，倪文，包维丽，程介士（医学神经生物学国家重点实验室，上海医科大学基础医学院神经生物学教研室）谷氨酸（Ｇｌｕ）、门冬氨酸（Ａｓｐ）、γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）、甘氨酸（Ｇｌｙ）、牛磺酸（Ｔａｕ）等氨基酸是...

大鼠脊髓横断损伤后移植胚胎5－羟色胺能神经元的研究

成年ＳＤ大鼠于第九胸髓（Ｔ９）处横断损伤，一周后将大鼠胚胎脑干中缝组织细胞悬液植入Ｔ９以下的脊髓内，动物存活１～１２月，分期处死取材，作５－羟色胺（５－ＨＴ）免疫组化的光镜和电镜观察。结果：脊髓损伤后在损伤部位尾侧的脊髓内５－ＨＴ阳性标记的纤维末梢消失，移植后于植入部位见许多５－ＨＴ阳性标记细胞，其突起在脊髓灰质内长距离延伸，末梢的分布与正常动物相似，并在免疫电镜下见到５－ＨＴ能神经末梢的突触形成。

颧髎穴针刺和尾部痛刺激后c-fos蛋白在5-HT神经元中的表达

应用同一切片,顺序Fos-ABC-DABni和5-HT-PAP-DAB法在电针及痛组大鼠中进行双免疫细胞化学染色法,观察大鼠中脑中缝背核(dr)和延髓头端腹侧区5-HT神经元和Fos免疫阳性胞核的共存研究。观察表明,针刺和痛组动物均可在dr、中缝大核(rm)和巨细胞旁网状外侧核(PGCL)部位观察到Fos和5-HT神经元的共存。但针刺动物在延髓头端腹侧区的共存数较多,远远超过Fos表达数的半数以上。

电惊厥大鼠海马生长抑素神经元的超微结构变化

观察电惊厥大鼠海马生长抑素神经元的超微结构变化，为探讨生长抑素在癫痫发病中的作用机制提供形态学依据。采用电惊厥癫痫动物模型和免疫电镜方法观察。结果：电惊厥时海马内生长抑素神经元胞体和突起出现不同程度的结构损伤，表现为线粒体肿胀、细胞器崩解和神经末梢变性等；在海马区多形细胞层和分子层生长抑素神经元胞体、突起与非生长抑素神经元胞体、突起之间有复杂的突触联系。结论：电惊厥时海马CA4生长抑素神经元结构发生损伤。

大鼠触液神经元的免疫组化观察

应用５－ＨＴ、ＤＢＨ、ＰＮＭＴ、ＧＡＢＡ、加压素、催产素、Ｐ物质、Ｌ－ＥｎＫ、Ｍ－ＥｎＫ、 Ｄｙｎ－Ａ、神经降压肽（ＮＴ）及ＣＧＲＰ抗血清的免疫组化法，检测了大鼠脑室中央管系统 （ＣＣＣＶＳ）的室管膜与软膜面的一些ＣＳＦＣ神经元。研究表明：管膜上皮和软膜结缔组织中， 存在有多种递质或调质的阳性ＣＳＦＣ神经元。脑室游离面除由管膜表面神经元胞体或突起及 远隔部位神经元突起伸入与脑脊液接触外，管膜上皮间神经元也可伸入突起，构成ＣＳＦＣ神经 元。它们的突起也可和远隔部位神经元连系。管膜上皮间神经元大多可排列成数层；细胞形 态以多突或多角形为主，这与以往报道认为主要为双极神经元不同。此外本研究也观察到具 有两个突起的双极神经元与脑组织中神经元发出膨体状轴突支配管膜上皮。

巨细胞旁(网状)外侧核神经元的Golgi法研究

应用改良的Golgi银浸法对大鼠巨细胞旁外侧核的细胞构筑学进行了研究。结果表明,大鼠巨细胞旁外侧核的神经元,根据其轴突是否伸至核外或进入邻近神经网丛分成长、短轴突两种。长轴突神经元根据树突有无棘,又分有棘长轴突、无棘长轴突神经元两种。短轴突神经元则分成:有棘短轴突;树突缺乏明显的棘但树突局部有明显膨大;树轴突区分不明显和树突或轴突末端形成网丛状分枝几种。

电惊厥及电刺激耳大神经抗惊厥后海马生长抑素mRNA的变化

目的观察实验性癫及抗痫时海马生长抑制（ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ，ＳＳ）ｍＲＮＡ的变化。方法采用电惊厥癫和电刺激耳大神经抗惊厥动物模型，利用原位杂交和计算机显微图像处理技术观察。结果正常组海马下托、ＣＡ１－４区和齿状回的多形细胞层有ＳＳｍＲＮＡ表达，其中以下托、ＣＡ４区表达量最多，且在各组的变化最明显；与正常组比较，电惊厥组ＳＳｍＲＮＡ阳性细胞数显著增多（Ｐ＜０．０５），平均光密度显著增高（Ｐ＜０．０５）；与电惊厥组相比，电刺激耳大神经抗惊厥组ＳＳｍＲＮＡ阳性细胞数无明显差异，平均光密度显著减少（Ｐ＜０．０５）；单纯电刺激耳大神经组与正常组比较，ＳＳｍＲＮＡ阳性细胞数和平均光密度无明显差异。结论电惊厥时，海马ＳＳｍＲＮＡ表达增强，电刺激耳大神经抗惊厥时ＳＳｍＲＮＡ表达下降，电刺激耳大神经对电惊厥的抑制作用可能与其在海马不同区域调节ＳＳｍＲＮＡ的表达有关。

颧髎穴电针尾部镇痛见效后大鼠中枢神经内fos的表达

电针大鼠面部颧髎穴观察到确能抑制尾部电流致痛所致的甩尾反射后，用免疫组化ＡＢＣ法检测大鼠脑和脊髓中ｆｏｓ蛋白的变化。结果表明，与痛组比较，骶、尾段脊髓ｆｏｓ的表达重又消失；额前皮质内侧也大为减少，而外侧份则出现ｆｏｓ表达，此时延髓网状巨细胞核、导水管背外侧灰质、上丘中、深层灰质、楔状核、脚间核、下丘脑弓状核和视前区等结构，也明显增多。

针刺抗癫痫的机理——海马内阿片肽及氨基酸系统与针刺治疗癫痫作用的关系

本项目将针刺治病原理的研究具体用于常见的重要神经系统疾病——癫痫,并与当代神经科学研究的前沿热点—内阿片肽及兴奋性和抑制性氨基酸的研究紧密结合,力求在该领域内进行系统而深入的实验研究,所用实验技术主要有:局部青霉素致痫,海人藻酸致痫及电惊厥。

电针对创伤大鼠白介素－1和β－内啡肽影响的时效观察

动态观察电针穴位对创伤大鼠神经内分泌免疫功能的影响。用手术创伤大鼠的模型，电针刺激＂足三里＂、＂阑尾穴＂，经３Ｈ－胸腺嘧啶核苷孵育分析，测定巨噬细胞分泌白介素－１（ＩＬ─１）的功能及外围血β─内啡呔和皮质酮水平。结果：创伤组２、４、８、１２ｈ大鼠胸腔巨噬细胞（ＭΦ）分泌ＩＬ─１的功能明显增强（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．００１）。各时期的血浆β─内啡肽（β─Ｅｎｄ）和皮质酮（ｃｓ）含量极明显升高（Ｐ＜０．０５；Ｐ＜０．００１），创伤大鼠经电针后，１、２、４ｈ，ＩＬ─１显著升高（Ｐ＜０．０５），８ｈ与正常大鼠巨噬细胞分泌ＩＬ─１的功能无区别，较创伤组大鼠提早４ｈ恢复正常功能，β─Ｅｎｄ含量各时相均明显低于创伤组大鼠水平（Ｐ＜０．０５；Ｐ＜０．００１）。皮质酮的含量１、２、４ｈ明显低于创伤组大鼠水平（Ｐ＜０．０５；Ｐ＜０．００１）。结论：电针穴位对手术创伤引起的机体应激状态具有良性调节作用。

苯环利定对离体豚鼠心脏冠状动脉流量的影响

应用离体豚鼠心脏灌流法观察苯环利定（ｐｈｅｎｃｙｃｌｉｄｉｎｅ，ＰＣＰ）对豚鼠冠脉流量的影响。结果：１００μｌＰＣＰ（０．１～１００μｍｏｌ／Ｌ）由动脉套管侧支于３０ｓ内恒速注入冠脉内，剂量依赖性地使冠脉流量减少，由给药前的、１０．５ｍｌ／ｍｉｎ分别减少了１．４ｍｌ／ｍｉｎ２．６ｍｌ／ｍｉｎ、３．５ｍｌ／ｍｉｎ和５．４ｍｌ／ｍｉｎ；ＰＣＰ受体特异性拮抗剂右吗喃和Ｓｉｇｍａ受体拮抗剂氟哌啶醇均可以拮抗ＰＣＰ收缩冠脉的作用，使冠脉流量分别由给ＰＣＰ后的６．６ｍｌ／ｍｉｎ和６．４ｍｌ／ｍｉｎ恢复到９．４ｍｌ／ｍｉｎ和９．９ｍｌ／ｍｉｎ。结果提示ＰＣＰ可能是通过激动豚鼠冠脉和心脏的ＰＣＰ受体发挥减少冠脉流量的作用。

一种用漂浮法进行的地高辛标记组织化学原位杂交技术

一种用漂浮法进行的地高辛标记组织化学原位杂交技术李晓艳，朱崇斌，殷霞，朱燕华，许绍芬（医学神经生物学国家重点实验室，上海医科大学基础医学院神经生物学教研室）组织切片原位杂交技术是研究神经细胞内ｍＲＮＡ的表达、调控的一个有效方法，在分子生物学的研究中有...

c－fos蛋白在沙鼠全脑缺血后再灌注时海马中的表达及其与电针抗脑缺血关系的探讨

在沙鼠急性全脑缺血的模型上，采用免疫组化方法观察了电针对海马各区ｃ－ｆｏｓ蛋白表达及神经元细胞形态改变的影响。电针穴位为“风府”和“筋缩”，频率７Ｈｚ，强度６ｍＡ，电针持续３０ｍｉｎ。结果表明，电针能明显加强急性全脑缺血沙鼠海马各区ｃ－ｆｏｓ蛋白的表达，ＣＡ１区尤为明显。同时电针能明显改善缺血后ＣＡ１区神经元的变性坏死。提示电针对缺血后海马神经元细胞的保护作用可能与加强ｃ－ｆｏｓ蛋白的表达有关。

大鼠中央灰质Fos蛋白与甲啡肽的共存

用免疫组织化学方法观察福尔马林脚掌皮下注射和足三里穴电针后清醒大鼠中脑导水管周围灰质（ＰＡＧ）中快速反应基因ｃ－ｆｏｓ在含甲啡肽神经元中的表达。实验中看到福尔马林注射组和电针刺激组动物的ＰＡＧ内均有Ｆｏｓ样免疫阳性反应（ＦＬＩ）标记神经元及ＦＬＩ与甲啡肽样免疫阳性反应（ＭＥＬＩ）双标记神经元，它们在ＰＡＧ的腹侧腹外侧部分布较多，对照动物ＦＬＩ标记神经元很少，共存现象极为少见。实验组与对照组神经无计数经统计处理差异非常显著。这一结果表明，福尔马林致痛和电针都能诱导ＰＡＧ中含脑啡肽神经元内（ｃ－ｆｏｓ的表达，提示伤害性刺激及针刺均可激活ＰＡＧ的腹侧腹外侧部这一重要的中枢镇痛部位。神经元中ＦＬＩ与ＭＥＬＩ的并存提示ＰＡＧ中Ｆｏｓ可能对前脑啡肽原基因表达有调控作用。

用原位杂交法研究大鼠脑损伤后胆囊收缩素和脑啡肽mRNA量的变化

应用原位杂交技术，研究大鼠脑损伤后前胆囊收缩素（ＰＣＣＫ）和前脑啡肽原（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ的表达。结果表明，在大鼠脑损伤２４ｈ后同侧脑内ＰＣＣＫ和ＰＰＥｍＲＮＡ量增加，尤其以新皮质和海马显著。给予ＮＭＤＡ受体非竞争性拮抗剂ｋｅｔａｍｉｎｅ可以抑制增加。因此，作者认为在脑损伤后可诱发胆囊收缩素（ＣＣＫ）和脑啡肽（ＥＮＫ）合成增加，并参与脑损伤病理改变，另外这种合成增加可能由ＮＭＤＡ受体介导。

褪黑素抑制低氧引起大鼠大脑皮层氨基酸递质释放

为研究褪黑素对低氧引起大鼠大脑皮层脑片氨基酸释放变化的影响， 利用反相高效液相色谱结合荧光检测法， 测定了孵育液中氨基酸类神经递质的含量。低氧条件为通入９１－６％ Ｎ２ 和８－４ ％ Ｏ２ 的混合气体。低氧３０ ｍｉｎ 时， 大鼠大脑皮层脑片孵育液中， 氨基酸类神经递质天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、牛磺酸和γ氨基丁酸的含量显著增加， 其含量分别是正常氧组的２４０－４ ％ ，３３４－３ ％ ，２００－６ ％ ，２１０－４ ％ ，１６８－６ ％ 和２６３－９ ％ ， 与正常氧组比较Ｐ＜ ０－０１ 。予以褪黑素可以显著降低兴奋性氨基酸的释放， 其中天冬氨酸和谷氨酸的含量分别是低氧组的５５－１ ％ 和５７－０ ％ 。结果表明， 褪黑素具有降低低氧所致的脑片释放兴奋性氨基酸的作用。

苯环利定致大鼠心肌损伤的研究

作者观察了苯环利定（ＰＣＰ）注入大鼠静脉内可以造成急性心肌损害的心电图变化，即Ｔ波明显抬高；而侧脑室注入ＰＣＰ，在２ｈ内未见这种变化，提示ＰＯＰ致大鼠心肌损害主要通过外周作用。经典扩冠药硝酸甘油和对ＰＣＰ受体具有拮抗作用的氟哌啶醇均完全阻断ＰＣＰ所致的心电图改变，提示ＰＣＰ造成大鼠心肌损伤可能是由于冠脉收缩所致，氟哌啶醇对抗冠状动脉的收缩有一定的作用。

光密度的由来及其物理意义

光密度（ＣＤ）及其衍生参量积分光密度（ＩＯＤ）是生物医学特别是分子生物学实验中所需测定的重要参数。ＯＤ来源于Ｌａｍｂｅｒ－Ｂｅｅｒ定律，它仅与样品中所测位置上的阳性物质的含量有关。ＩＯＤ为样品中的所测区域内的各点光密度的总和，它与样品中所测区域内的阳性物质总的含量有关。施加了本底修正，ＯＤ就能客观地、科学地反映出样品中所测位置上的阳性物质的真实含量。ＩＯＤ也是如此。在具体测定一批样品ＯＤ前，还必须注意诸如光源选择等问题。

大鼠海人藻酸致痫时海马内一氧化氮合成酶mRNA含量的时程变化

观察海马内一氧化氮合成酶 ｍＲＮＡ（ＮＯＳ ｍＲＮＡ）在海人藻酸（ｋａｉｎｉｃ ａｃｉｄ， ＫＡ）致病时的时程变化。用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法分别观察用药前及致痫后１，４，６，１２，２４ ｈ海马内ＮＯＳ ｍＲＮＡ的含量变化。结果：致痫后１ｈ，ＮＯＳ ｍＲＮＡ即显著增加，并在以后癫痫连续发作的２４ｈ中一直维持这种高含量。结论：ＫＡ致病可能与海马ＮＯＳ ｍＲＮＡ含量变化相关。