PAF对肠上皮细胞紧密连接的影响及ITF的保护作用

目的:探讨血小板活化因子(PAF)是否会引起肠黏膜屏障的破坏以及这种破坏机制是否与紧密连接相关,并观察肠三叶因子(ITF)的保护作用.方法:培养人结肠腺癌细胞株Caco-2,分别设正常对照组:不加刺激物及干预因素;实验组:加入PAF,终浓度分别为50 ng/L、100 ng/L和200 ng/L;ITF预防组:先加入ITF0.3 g/L,30 min后加入PAF 100 ng/L;ITF治疗组:先加入PAF 100 ng/L,30 min后加入ITF0.3 g/L,24 h后进行实验.MTT比色法检测细胞活力;测定跨上皮电阻TER和荧光黄的透过量反映肠上皮细胞单层通透性;RT-PCR法检测紧密连接蛋白ZO-1和Occludin mRNA表达的变化;免疫荧光染色观察紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的形态学.结果:PAF未影响到细胞的增殖和细胞活力.各浓度PAF作用24 h后,细胞单层通透性增加,跨上皮电阻(TER)下降,荧光黄透过增加.ITF治疗组及预防组TER下降值较模型组明显降低(122.2±14.7,100.3±10.9 vs 210.3±26.4,P<0.05),荧光黄透过量减少(10226.1±556.2,9711.2±364.9 vs 11601.2±693.5,P<0.05),预防组作用更明显.PAF作用后,ZO-1和Occludin mRNA表达均有下降,以100 ng/L组改变最为明显,ITF预防组较之表达增加(1.28±0.06 vs 1.07±0.05,1.13±0.07 vs 0.81±0.06,P<0.05),ITF治疗组改变不明显.免疫荧光染色发现ZO-1和Occludin主要分布在细胞内近胞膜处.PAF作用后,ZO-1及Occludin形态学改变,预防性给予ITF后,可明显减轻这种改变.结论:PAF可引起肠黏膜屏障破坏,其机制可能和紧密连接蛋白的破坏相关;ITF可以通过改变紧密连接蛋白的表达而部分恢复肠黏膜正常通透性,起到保护作用.

谷氨酰胺对内毒素血症肠组织TLR2、4表达的影响

目的:探讨谷氨酰胺对TLR2、4表达的调节与肠组织损伤的关系.方法:将24只10日龄Wistar幼鼠随机分为对照组(n=8),ip生理盐水,1 mL/kg;LPS组(n=8),ip LPS,5 mg/kg;谷氨酰胺组(n=8),ip LPS 5 mg/kg+谷氨酰胺10 mL/kg,3 h后取肠组织,HE染色观察病理改变,RT-PCR检测肠组织TLR2、4 mRNA的表达.Western blot检测TLR蛋白表达.结果:对照组TLR2、4 mRNA均较LPS组弱(TLR2 mRNA:1.386±0.04 vs 4.093±0.90.TLR4 mRNA:9.872±0.36 vs 16.706±1.28.TLR2蛋白:22.28±0.96 vs 79.27±3.16.TLR4蛋白:35.07±0.17 vs 65.18±0.46):与LPS组相比,谷氨酰胺组TLR2、4mRNA和蛋白表达明显下调(TLR2 mRNA:3.055±0.51.TLR4 mRNA:3.920±0.5.TLR2蛋白:51.15±1.84.TLR4蛋白:43.25±0.27),肠组织损伤明显减轻.结论:谷氨酰胺通过抑制TLR2、4 mRNA的表达,减轻肠组织的损伤.

谷氨酰胺和地塞米松对脓毒症幼年大鼠肝脏肿瘤坏死因子-α与基质金属蛋白酶3的影响

目的:通探讨谷氨酰胺(Gln)和地塞米松(Dex)对脓毒症肝损伤的保护作用方法:ip大肠杆菌脂多糖(LPS)制备幼年大鼠脓毒症模型,按照ip药物不同分为对照组(C,n =8,ip生理盐水1 mL/kg);内毒素组(L,n=40,ip LPS 4 mg/kg),治疗组(T,n=40,ip LPS 4 mg/kg后1 h ip Dex 5 mg/kg+Gln 1 mL/kg),在注射内毒素后0 h(只限对照组),2,4,6,24和72 h取肝右叶,采用免疫组化的方法测定肝组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)和基质金属蛋白酶3(MMP3)蛋白质合成水平。结果:与C相比,L组TNF-α蛋白质表达明显高于对照组(P<0.01),24 h达高峰,72 h虽然有所降低但仍明显高于对照组(P<0.05).T组各时点TNF-α蛋白质表达均高于对照组,但增高幅度明显低于L组(P<0.01),与对照组相比,L组MMP3蛋白质表达明显升高,24 h达高峰,72 h有所降低,但仍高于对照组(P<0.01);T组较L组明显减低(P<0.01)。L和T组肝脏组织中TNF-α与MMP3改变均呈明显正相关(r= 0.928,r=0.939)。结论:联合应用谷氨酰胺与地塞米松可以抑制TNF-α和MMP3的合成,从而减轻脓毒症幼年大鼠的肝脏损伤和重塑。