梅毒螺旋体抗体快速试剂的实验室性能评价

目的使用梅毒螺旋抗体快速试剂国家参考品以及商品化的血清转化盘和不同临床时期的梅毒样本对目前市面主要使用的TP抗体快速检测试剂进行性能评价。方法选取34批次梅毒螺旋抗体快速试剂对梅毒螺旋抗体快速试剂国家参考品以及商品化的血清转化盘和51份不同临床时期梅毒感染样本进行检测,分析不同试剂的检测性能差异并依据检测结果进行评分。结果34批次梅毒螺旋抗体快速试剂有5批次产品不符合梅毒螺旋抗体快速试剂国家参考品的性能要求,均为阳性参考品符合率项目;34批次梅毒螺旋抗体快速试剂检测血清转换盘阳转天数最大相差4周时间;评价梅毒螺旋抗体快速试剂对51份临床样本检测阳性率为84.3%~100%。来自14个厂家的16批次试剂评分结果为84.3~99.4分。结论部分梅毒螺旋抗体快速试剂对早期梅毒感染样本的检出率较低,一方面需要选取合适的评价样本,另一方面需要加强试剂生产的工艺稳定性。

乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品的研制

目的建立乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,确定其质量标准。方法通过对24份病原体培养物的复核、确证,全基因组测序及基因分型,组成乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品,经多家实验室的协助标定,确定参考品的质量标准,并对参考品进行均匀性及稳定性评估。结果乙型脑炎病毒核酸检测试剂国家参考品由10份阴性、14份阳性、1份最低检出限和1份精密度样品组成。质量标准为10份阴性参考品应均检出阴性;14份阳性参考品应至少检出13份阳性;精密度考品重复检测10次,要求均为乙型脑炎病毒阳性,且其检测值的CV应不大于5.0%;最低检出限参考品要求1∶102倍稀释及以上浓度时应为乙型脑炎病毒阳性。参考品的均匀性及稳定性均符合要求。结论该参考品可用作乙型脑炎病毒核酸检测试剂的质量控制及评价。

重大病毒疫情与诊断试剂

新发或重发病毒疫情严重威胁人类健康。回顾人类与病毒疫情漫长艰苦的对抗历史,快速准确地诊断疫情病原能够帮助我们获得制胜先机。然而,有效且可靠的诊断试剂,从最初的设计开发到验证和确认,再到转化生产以及临床应用,须要消耗大量资源和时间。为了在下一次病毒疫情来临前做好诊断试剂的准备工作,不仅须要加强基础和转化研究的投入,还须要制定有效的医疗对策和积极的监管政策。最终目的是不断提高我国的病毒诊断能力以及诊断试剂响应速度,从而为病毒疫情防控工作打下坚实的基础。

第二代人乳头瘤病毒全基因组分型国家参考品的研制

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一个小的环状双链-DNA病毒,属于乳头瘤病毒家族。主要感染皮肤、生殖器和上呼吸道的表皮细胞。目前,大约200多种HPV型别被鉴定发现[1]。HPV的基因组长约为8000 bp,主要分为三个区:早期基因、晚期基因和长调控区。早期基因编码6个早期蛋白,包括E1、E2、E4、E5、E6和E7,主要负责病毒的转录和复制。其中,E6和E7基因编码与细胞癌变转化相关的蛋白。晚期基因L1和L2主要负责编码衣壳蛋白[2]。根据其与癌症的相关性,分为高危型HPV(HR-HPV)和低危型HPV(LR-HPV)。目前,将14种HPV型别(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68)定为HR-HPV,4种HPV型别(26、53、73、82)列为潜在HR-HPV。HR-HPV的持续性感染是造成宫颈癌及多种生殖道癌症的主要病原体。在中国,69.1%的宫颈癌病例为HPV16和HPV18感染,14.7%为HPV31、33、52、58和59。HPV39、45和56占宫颈癌的4.5%,剩余的病例是比较少见的其他型别,如HPV66[3]。

人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒国家监督抽检质量分析

目的:评价国内不同使用环节的人乳头瘤病毒核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)的质量现状。方法:依据企业产品技术要求,对准确性、特异性、检测限、精密度4个项目进行检验。同时,以国家参考品和细胞质控品为样品,进行探索性研究。结果:本次国家监督抽检共抽检15批次产品,其中13批次的准确性、特异性、检测限和精密度检测结果均符合要求,2批次结果因质量控制不符合要求判定为不合格,抽检合格率为87%。探索性研究结果显示,以国家参考品为样品进行评价,6批次试剂盒未能满足检测限要求;以9种不同型别的高、低浓度细胞质控品为样品进行评价,各试剂检测高浓度样品符合率较高,检测低浓度样品符合率较低。结论:企业需进一步规范和完善产品技术要求,改进和完善企业参考品和产品的设计,建议采用国家参考品优化检测限标准。

结核抗体检测试剂国家参考品的建立

目的:制备结核抗体检测试剂的国家参考品。方法:利用9家公司的胶体金和酶联免疫法结核抗体检测试剂对参考品原料进行筛选和复核,分装后由9家公司协作标定,最终确定国家参考品的组成和质量标准,同时,对参考品的均匀性和稳定性进行了考察。结果:协作标定样本中预期为阳性的部分,不同试剂间检出的差异较大。根据协作标定结果和适当督促的原则,确定了参考品由10份阴性参考品、10份阳性参考品、5份最低检出限参考品和1份精密度参考品组成。参考品的质量标准确定为:阴性参考品符合率应为10/10;阳性参考品符合率应≥9/10;最低检出限参考品S1~S5中S1和S2应均为阳性,S3~S5可为阳性或阴性;精密度参考品R平行检测10次,结果应均为阳性,且检测结果的变异系数(CV值)应≤15%。本参考品的均匀性为各分装样品间差异不超出30%,且稳定性条件处理组与-20℃对照组无差异。结论:本研究首次建立了一套适用于酶联免疫法和固相蛋白芯片法结核抗体检测试剂的国家参考品,可用于该类试剂的质量评价。

结核抗原检测试剂国家参考品的研制

目的:建立结核抗原检测试剂的国家参考品。方法:结核抗原国家参考品经原料复核、分散稀释、分装和组装等步骤制备而成,并使用结核分枝杆菌核酸检测试剂盒进行拷贝数标定。使用两家不同企业的胶体金法进行协作标定研究,最终确定其质量标准要求。同时对参考品的均匀性和稳定性进行考察。结果:两家公司的试剂对阳性参考品候选样本(5/5)和阴性参考品候选样本(5/5)均能正确检出;对于倍比稀释后的参考品(编号Rv),两家公司均可检出32倍阳性,64倍阴性。根据协作标定结果,参考品由5份阴性参考品、5份阳性参考品、1份最低检出限/精密度参考品(P0)组成。参考品的质量标准确定为:阴性参考品符合率应为5/5;阳性参考品符合率应为5/5;最低检出限参考品P0进行倍比稀释至64倍,其中16倍稀释的检测结果应为阳性;精密度参考品P0进行8倍稀释后平行检测10次,检测结果应均为阳性,且显色条带均一。结论:本研究首次建立了一套能够满足胶体金免疫层析法结核抗原检测试剂盒的质量评价和控制要求的国家参考品。

梅毒诊断试剂的应用和发展

梅毒是一种由密螺旋体属苍白螺旋体种苍白亚种,即梅毒螺旋体(treponema pallidum,TP)引起的慢性经典性传播疾病。梅毒病原体早期通过黏膜或有破损的皮肤侵入,形成感染灶,潜伏期后相继侵犯多种组织,包括皮肤、骨、中枢神经系统和心血管系统^[1-2]。梅毒可由受感染的孕妇传给胎儿,威胁下一代健康^[3];系统性的梅毒也增加了其他病原体感染的机会,如人类免疫缺陷病毒^[4]。梅毒是一种威胁全球人类健康的性传播疾病,据世界卫生组织统计,全球每年有近两千万的梅毒新发感染者^[5],所以在欧美一些国家和日本的血液筛查项目都包含梅毒项目。

EB病毒实验室检测技术研究进展

EB病毒是一种普遍存在的病原体,主要由口腔分泌物传播,与多种恶性肿瘤密切相关。EBV的检测方法主要包含血清学和分子生物学方法,各种检测方法各有优缺点。实际应用时应根据临床需求选择合适的检测手段,必要时可两种或多种方法联合使用。目前还需要更进一步的证据和共识推动EBV实验室检测技术的标准化,为EBV相关临床病症的诊断和治疗提供更可靠的依据。本文介绍了EBV检测技术现状,为EBV相关疾病的诊断、治疗和预后等提供参考。

血源筛查诊断试剂及其质量控制

血源筛查试剂,指用于血源筛查的体外诊断试剂,其质量与公共健康密切相关。本文重点关注血筛试剂的种类、监管现状、质量控制、相关标准物质和标准等。

2022年结核分枝杆菌分子检测能力验证结果分析

目的通过组织实施能力验证了解我国实验室在结核分子检测能力方面的现状。方法在2022年组织相关实验室报名参加本次能力验证,并制备能力验证样本并发放给参加实验室。通过对参加实验室的所在地区、实验室类型、上报结果和错误类型等方面进行统计和分析,评估其结核分子检测能力和管理水平。结果共有来自于11个省份的20家实验室参加本次能力验证活动,总体满意率为89.5%。不满意的原因主要为将阴性样本错误地检测为阳性。部分实验室出现填报结果错误等实验室管理问题。结论大多数参加本次能力验证的实验室具有较好的结核分子检测能力,但部分实验室应当关注实验室核酸交叉污染和实验室质量管理问题。本能力验证有助于进一步提升我国实验室的结核分子检测能力。

人细小病毒B19核酸检测试剂国家参考品的建立

目的建立人细小病毒B19核酸检测试剂国家参考品并制定质量标准。方法收集并筛选人细小病毒核酸阳性和阴性血浆样本,建立人细小病毒B19核酸检测试剂国家参考品,溯源至世界卫生组织第三代人细小病毒B19核酸国际标准品,并对参考品稳定性和均匀性进行考核。结果建立的国家参考品包括阳性参考品8份、阴性参考品10份、精密度参考品2份和最低检出限参考品2份。经溯源标定,最低检出限参考品L1与L2的浓度分别为2.4×10^3IU/mL与2.4×10^2IU/mL;参考品均匀性符合要求,室温(25℃)放置24 h、反复冻融3次均未影响参考品的稳定性。国家参考品的质量标准为阳性符合率8/8,阴性符合率10/10,精密度要求两个浓度水平的Ct值或定量值变异系数均不高于5.0%,最低检出限要求浓度为2.4×10^3IU/mL的L1应为人细小病毒B19核酸阳性,浓度为2.4×10^2IU/mL的L2可为阳性或阴性。结论建立了人细小病毒B19核酸检测试剂国家参考品,可用于企业试剂研发的质量控制及评价。

2024版《梅毒实验室检测建议》的解读

自21世纪初以来,梅毒(syphilis)在全球发病率大幅回升,然而梅毒尚无有效疫苗进行预防。因此防控的手段主要依靠早期诊断发现传染源并进行治疗,所以在公共卫生方面,实验室诊断对防控梅毒流行发挥着关键作用。2024年2月8日美国疾病预防与控制中心(Centers for Disease Control and Prevention,CDC)发布了《梅毒实验室检测建议》,不仅详细描述了目前梅毒血清学诊断的现状,还对病原学检测方法及快速检测性能特点加以阐述。为方便中国从事梅毒诊疗的医护人员和技术人员等学习、研究和借鉴,现就2024版《梅毒实验室检测建议》核心要点进行解读。

人乳头状瘤病毒核酸分型检测试剂的研究进展

高危型人乳头状瘤病毒（HPV）的持续性感染是引起宫颈癌的主要原因。分子生物学检测HPV核酸DNA或RNA，可用于HPV的流行病学调查、疫苗的效力评价和宫颈癌的筛查。许多商业化的HPV核酸（分型）检测试剂盒基于不同的方法学和检测系统，从原理上主要包括两大类，即信号放大法和靶向扩增法，大多数以PCR扩增为主，不同检测试剂的性能存在一定的差异。目前，基于二代测序和定量HPV核酸检测试剂也在不断研究中，只有少量试剂在临床上进行了验证，大量的试剂亟需进行临床适用性验证，从而发挥更大的临床价值。

梅毒螺旋体抗体检测试剂盒(免疫层析法)国家监督抽检情况分析及建议

梅毒是由梅毒螺旋体(treponema pallidum,TP)引起的慢性、系统性性传播疾病。它是全球最常见的性传播感染疾病,据估计每年约有630万人感染[1]。梅毒的发病率在20世纪80年代和90年代有所下降,部分原因是由于艾滋病毒开始流行,各国对安全性行为做了大量科普宣传[2]。然而,自21世纪初以来,梅毒发病率大幅回升,在一些国家激增了300%以上[3-4]。据中国疾控中心的数据显示.

流感病毒抗原快速检测试剂灵敏度评价

目的对9种流感病毒抗原快速检测试剂盒(rapid influenza virus diagnostic tests,RIDTs)的灵敏度进行评价。方法季节性流感毒株收集后,通过TCID50(组织细胞半数感染量)和病毒核酸序列测定分别确定病毒滴度及型别;流感毒株进行系列稀释后,使用流感病毒抗原快速检测试剂盒进行检测,以评价不同试剂的灵敏度。结果不同试剂对同一株病毒的检出灵敏度差异最大为32倍稀释度(>10^1 TCID50/ml);同一种试剂对不同型别、亚型/系流感病毒的检出灵敏度不同。结论市场上的RIDTs灵敏度存在差别;使用多株不同流感型别、不同亚型/系的流感病毒将有助于对RIDTs产品质量进行全面评价和控制。

基于CRISPR/Cas13a的马尔堡病毒核酸检测方法的建立

【目的】建立一种基于成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白13a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated protein 13a,CRISPR/Cas13a),针对马尔堡病毒核酸的快速检测方法。【方法】根据马尔堡病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)基因保守区序列设计合成特异性的逆转录酶重组酶介导链替换核酸扩增(reverse transcription recombinase aided amplification,RT-RAA)引物及CRISPR RNA(crRNA),利用RT-RAA等温扩增技术对靶序列进行扩增,通过CRISPR/Cas13a系统检测扩增产物,并结合消线法(easy-readout and sensitive enhanced,ERASE)侧流层析试纸进行结果判读。最后利用国家标准品对建立的新方法的灵敏度和特异性进行评估。【结果】筛选出一组针对马尔堡病毒NP基因的高效扩增引物和crRNA,建立了用于马尔堡病毒检测的CRISPR-ERASE方法,可在1 h内检测出浓度为1 copy/μL目标核酸,并与其他多种病原体无交叉反应。【结论】本研究基于CRISPR/Cas13a建立了一种快速、简便、高灵敏度和高特异性的马尔堡病毒核酸检测方法。

两种不同人乳头瘤病毒核酸检测试剂的性能比较

目的评价Cobas4800和INNO-LiPA两种人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)核酸检测试剂检测宫颈脱落细胞样本中14种高危型HPV(high-risk HPV,HR-HPV)的一致性。方法采用Cobas4800和INNO-LiPA两种HPV核酸检测试剂,分别对收集的489份宫颈脱落细胞样本进行一对一检测。通过计算κ值和配对χ~2检验比较2种试剂检测14种HR-HPV的特异性、灵敏度和一致率。结果Cobas4800和INNO-LiPA两种核酸检测试剂,检测HPV16和HPV18的一致性较好,总符合率为94.4%和97.3%(κ>0.8,P>0.1);检测其他12种HR-HPV的一致性为83.44%(κ=0.670,P<0.001)。进一步分析检测结果不一致样本,发现INNO-LiPA试剂比Cobas4800试剂检出更多的HR-HPV型别(HPV52、HPV58和HPV68)。结论Cobas4800和INNO-LiPA两种HPV核酸检测试剂,检测HPV16和HPV18的一致性较高。在检测其他12种HR-HPV型别上,INNO-LiPA的灵敏度优于Cobas4800。

肠道病毒71型核酸检测试剂国家参考品的建立

目的建立肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)核酸检测试剂国家参考品,用于该类试剂的质量评价。方法收集培养多株EV株,包括不同亚型的EV71及不同型别的柯萨奇病毒(Coxsackievirus)株。经测序分析确证,再经商业化核酸检测试剂筛选验证后,分装、冻干组成国家参考品盘。利用数字PCR法(droplet digital PCR,ddPCR)对EV71代表性病毒株C4亚型进行核酸定量,作为最低检测限参考品。采用不同企业的试剂对参考品进行协作标定,分析标定后结果,最终确定参考品的质量标准,并考察其稳定性。结果EV71核酸检测试剂国家参考品由6支阳性参考品、8支阴性参考品、1份精密度参考品和1支检测限参考品组成。其质量标准为:阳性参考品符合率应为6/6;阴性参考品符合率应为8/8;检测限应不高于3.6×10^3 copies/mL;重复检测精密度参考品10次,要求10次结果均为阳性,且对于荧光PCR法,要求其Ct值的CV<5.0%。阳性参考品各样品在室温放置1 d和反复冻融3次条件下相对比较稳定。结论成功建立了评价EV71核酸检测试剂质量的国家参考品。

基于不同型别腺病毒标准品的呼吸道病原体核酸试剂最低检测限性能评价

目的利用不同型别呼吸道腺病毒核酸标准品对呼吸道病原体核酸检测试剂进行最低检测限性能评价。方法选择已研制的1、2、3、4、5、7、55型呼吸道腺病毒核酸标准品,参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)的EP17-A2文件,采用Probit回归方法对28种不同方法学原理的呼吸道病原体核酸检测试剂的最低检测限(Lod)进行评估,比较各试剂盒声称Lod和评估Lod之间以及对不同腺病毒型别检测Lod之间的差异。结果28种试剂盒中能够准确评估Lod的比例为50%(12/24)。12种试剂盒的评估Lod与声称Lod一致性较好;12种试剂盒一致性较差,其中4种试剂盒差异较小(measured Lod<5×claimed Lod),8种试剂盒差异较大(measured Lod>5×claimed Lod),最大者可达24000倍。不同试剂间评估的Lod浓度差异可达106数量级以上(最低和最高分别为20拷贝/ml和4.8×10^(7)拷贝/ml);同种试剂对不同型别腺病毒的检测Lod均不相同,其浓度差异最高可达104数量级(最低和最高分别为5.0×10^(3)拷贝/ml和4.8×10^(7)拷贝/ml)。结论部分呼吸道病原体核酸检测试剂检测腺病毒的最低检测限性能评估缺乏准确性,使用检测范围内的多种病原体型别或亚型进行性能评估尤为必要。