小儿全身麻醉苏醒期躁动的危险因素分析

【目的】探讨小儿手术患者全身麻醉苏醒期躁动的危险因素。【方法】选择小儿全身麻醉患者410例,按照镇静躁动分级法对其苏醒状况进行评分,排除4分以下的患儿,对余下165例患儿的相关病史及麻醉病历分别作单因素和多因素logistic回归分析,评价小儿全身麻醉苏醒期躁动相关危险因素。【结果】单因素分析发现:手术史、手术大小、术后疼痛、麻醉维持方式、右美托咪啶、氯胺酮、曲马多、术后镇痛与躁动的发生相关(P<0.05)。多因素分析发现:年龄、术前焦虑、手术大小、术后疼痛、麻醉维持方式、右美托咪啶、留置尿管、术后镇痛等与躁动发生相关(P<0.05)。性别、性格、留置胃管、中心静脉置管、手术时间、拮抗、吸痰和腹腔镜手术与躁动发生无关(P>0.05)。【结论】小儿麻醉患者中学龄前儿童、术前焦虑、中等以上手术、全凭七氟醚吸入麻醉维持、留置尿管及术后疼痛患儿的术后躁动发生率显著增高。

小儿腹腔镜阑尾切除与开腹阑尾切除的临床对比研究

目的 对比研究小儿腹腔镜阑尾切除术（LA）与传统开腹阑尾切除术（OA）的临床疗效及安全性.方法 回顾性分析2009年1月～2012年12月期间进行LA和OA的93例小儿阑尾炎患者的临床资料,对两组手术时间、术中出血情况、术后恢复情况等进行统计对比分析.结果 两组患儿手术及恢复顺利,术后无严重并发症.两组手术时间及术中出血量差异均无统计学意义（P＞0.05）;LA组术后肛门排气时间、下床活动时间、切口疼痛时间、术后住院天数均低于OA组,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 与OA比较,小儿LA具有创伤小、并发症少,恢复快及美容等优势,是治疗小儿阑尾炎理想的手术方式.

腹腔镜下单孔法治疗小儿腹股沟斜疝的优势探讨

目的通过比较腹腔镜下单孔法及双孔法治疗小儿腹股沟斜疝的临床应用,探讨腹腔镜下单孔法在治疗小儿腹股沟斜疝中的优势。方法通过回顾性分析我科自2006年1月至2011年3月收治的80例小儿腹股沟斜疝患儿,分别采用腹腔镜下双孔法及单孔法缝扎腹股沟斜疝单侧疝囊内环治疗,每组各收治40例,年龄在6个月到5岁范围。结果在缝合正常大小内环口的病例中,腹腔镜下单孔法缝扎单侧内环口操作时间平均为11.8min(手术用时范围10～13min),双孔法操作平均时间为12.3min(手术用时范围11～14min);而在缝合较大内环口的用时时间上,单孔法手术用时明显较双孔法手术时间短(11.3min,14.23min)。术后随访平均6个月(3个月～1年),手术患儿均无腹股沟斜疝复发。结论相比较腹腔镜下双孔法高位结扎腹股沟疝疝囊,采用腹腔镜下单孔法高位缝扎腹股沟斜疝疝囊,不仅具有美观、创伤小的优势,同时操作时间较短,更适合治疗较大内环口的腹股沟斜疝。

394例小儿可触及隐睾的腹腔镜治疗体会

目的:探讨腹腔镜在小儿可触及隐睾手术中的应用价值。方法:分析了2012年1月至2020年6月,我院小儿外科收治的394例隐睾患儿,分别施行腹腔镜睾丸下降固定术;腹腔镜结扎鞘状突,直接于阴囊取切口行睾丸下降固定术;腹腔镜打开同侧鞘状突,将睾丸拉入腹腔分离,再行睾丸下降固定术。结果:394例可触及隐睾患儿中双侧隐睾有113例(28.7%),右侧隐睾有160例(40.6%),左侧隐睾有121例(30.7%)。其中有325例存在一侧或双侧鞘状突未闭,均在术中同时行腹腔镜下鞘状突高位结扎术。另有6例患儿,术中发现同侧鞘状突已闭合,但睾丸位于腹股沟中段,遂于腹腔镜下打开鞘状突,将睾丸拉入腹腔分离后行睾丸下降固定术。394例患儿均能Ⅰ期将睾丸下降及固定于阴囊,术后均不存在腹股沟区切口。结论:腹腔镜下治疗小儿可触及隐睾,可以更彻底地分离精索血管及输精管,创伤小,手术效果好,术后美观,在临床中值得推广。

教具改良在外科基本操作课程中的应用和效果

目的探讨外科见习中教具改良在外科基本操作课程中的的应用及效果。方法选择2020年11月—2021年5月在中山大学孙逸仙纪念医院进行外科见习的2017级临床医学专业本科见习生共180名,分别作为对照组(90名)和观察组(90名)。对照组使用传统外科教具,观察组使用猪皮、猪肠作为模具、增加缝针种类并辅以制作更完整生动的视频。两组进行了调查问卷分析和考核成绩对比。结果观察组正确选择器械、正确握持器械、正确穿针引线、缝合方法、缝合技巧、打结、剪线的考核成绩明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组学生对外科基本操作中常用器械的认识、对皮肤各层结构的认识、对缝合方式的认识、对持针打结的认识、对后续动物外科有否帮助、增加自信及学习信心、可激发学习兴趣、对该学习方法满意度等方面学习效果评价结果均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采取教具改良能调动学生学习兴趣,增强学生满意度,从而有效提高学生学习效果。

应用商环行小儿改良包皮环切术800例治疗体会

目的探讨应用商环行改良包皮环切术的临床效果。方法应用商环行改良性包皮环切术,用3把血管钳提起包皮口,将商环内环倾斜塞入龟头与包皮内板之间,再将商环外环套于包皮外板外并卡紧,对800例患儿行包皮环切术,分析其手术时间、出血量、脱环时间、术后并发症、术后外观满意情况。结果手术时间为4.65±1.25 min,平均出血量<3 mL,术后并发症主要为感染0.50%(4/800)、包皮明显水肿3.12%(25/800)、伤口裂开0.25%(2/800)、伤口出血0.25%(2/800),脱环时间14±5 d,术后再粘连2.25%(18/800),外观满意率达99.38%(795/800),98.13%(785/800)的家长觉得治疗费用合理。结论应用商环行小儿改良包皮环切术,手术时间短、出血量少、术后并发症少、外观满意率高,是治疗小儿包茎、包皮过长的良好方法,具有优势。

改良腹腔镜Swenson与Soave术对儿童短段型先天性巨结肠疗效差异

目的对腹腔镜Soave术(LS)和改良腹腔镜Swenson术(MLSw)在儿童短段型巨结肠的治疗效果和并发症进行比较分析。方法回顾分析我科自2007年3月至2016年12月收治的77例儿童短段型巨结肠临床资料。LS术26例,MLSw术51例。收集两组术前、术中和术后临床资料进行分析,随访12~48个月。结果 MLSw组平均手术时间、术中出血量和住院时间比LS组少。两组术后平均进食时间无明显差异。MLSw组术后早期并发症的发生率较LS组低,但两组术后晚期并发症发生率无明显差异。结论 LS和MLSw术都适用于儿童短段型巨结肠的治疗。但MLSw操作更简单,术后早期的排便控制更好。更重要的是,MLSw术可完全切除无神经节细胞肠段,而无需保留直肠肌鞘。

miRNA-122促进小鼠胚胎干细胞源性肝前体细胞的分化与成熟

目的:通过miRNA-122(miR-122)转染胚胎干细胞(ESCs)源性肝前体细胞,观察及评估其是否能推进ESCs向肝细胞的分化过程。方法:采用丁酸钠、成纤维细胞生长因子4(FGF-4)及地塞米松(Dex)联合序贯诱导小鼠ESCs使之初步分化为肝前体细胞,然后利用Gateway技术构建出pAV.Ex1d-CMV>miR122/IRES/eGFP重组腺病毒表达载体,使其转染贴壁诱导第9天的小鼠ESCs源性肝前体细胞,获得稳定高表达miR-122的细胞后继续培养。采用荧光显微镜观察转染后细胞形态的变化;使用real-time RT-PCR检测肝特异性基因的表达;免疫荧光检测肝特异性蛋白表达水平;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验检测肝细胞功能。结果:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞。转染miR-122后,细胞在形态学上更接近成熟肝细胞;肝特异性基因白蛋白(ALB)、甲状腺素运载蛋白、α1抗胰蛋白酶、葡萄糖-6-磷酸酶、细胞角蛋白8、胆固醇7α-羟化酶及细胞色素P450 3A4的mRNA表达均增高;肝特异性蛋白ALB及细胞角蛋白18均表达增高,而甲胎蛋白表达降低;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验结果均显示转染miR-122后肝细胞功能较对照组明显增强。结论:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞;miR-122能够有效地促进小鼠肝前体细胞的分化与成熟。

左侧胎儿横纹肌样肾母细胞瘤1例分析

患者男,2岁6个月,2010年3月8日因＂发现左侧腹部包块10d＂入院,入院时食欲胃纳好,无发热,无咳嗽、无咳痰,大小便通畅,无血尿,无尿频尿急。入院查体：神清、精神好,营养中等,

MYCN-siRNA和神经生长因子联合诱导神经母细胞瘤细胞分化凋亡的实验研究

目的:探讨应用MYCN-siRNA和神经生长因子(NGF)联合诱导神经母细胞瘤细胞分化凋亡的分子机制。方法:实验分组包括MYCN-siRNA与NGF联合诱导组、NGF诱导组、siRNA诱导组和空白对照组。观察各实验组神经母细胞瘤细胞的形态学变化及细胞的增殖变化,通过Real-TimePCR检测MYCN-mRNA和NSE的表达、Western Blot检测MYCN基因沉默后MYCN蛋白的表达情况。结果:神经母细胞瘤MYCN基因沉默后,RT-PCR检测IMR-32细胞MYCN-mRNA表达的抑制率达到89%;Western Blot检测IMR-32转染MYCN-siRNA后的第3天MYCN蛋白的表达率达到最低,表达率下降至26.6%。在NGF和MYCN-siRNA的共同作用下,神经母细胞瘤细胞出现了较明显的细胞形态学分化,细胞的增殖能力明显下降,IMR-32细胞NSE的表达明显下降。结论:MYCN-siRNA和NGF联合诱导神经母细胞瘤细胞,可使MYCN-mRNA的表达和NSE的表达均明显下降,并促进神经母细胞瘤细胞分化凋亡。

抑制SHARPIN激活Rip1促进LNCaP-AI细胞坏死性凋亡

目的:探讨SHARPIN对去势抵抗性前列腺癌细胞LNCaP-AI坏死性凋亡关键因子Rip1的调控作用,以及对细胞坏死性凋亡的影响。方法:将LNCaP-AI细胞分为TNF-α+Z-VAD(caspase抑制剂)处理组与TNF-α+Z-VAD+Nec-1(Rip1抑制剂)处理组,应用MTS检测各组细胞的活力,研究坏死性凋亡机制在诱导LNCaP-AI细胞死亡中的作用。将LNCaP-AI细胞分为阴性对照组和SHARPIN干扰(si-SHARPIN)组,RT-qPCR验证抑制效率,通过免疫荧光等技术进一步探讨SHARPIN调控坏死性凋亡的具体分子机制。结果:与对照组相比,TNF-α+Z-VAD处理组的LNCaP-AI细胞活力下降28%(P<0.05),而TNF-α+Z-VAD+Nec-1处理组的细胞在Rip1被抑制后,细胞活力无明显改变。在LNCaP-AI细胞中,通过siRNA抑制SHARPIN表达后,Rip1表达水平上调,同时,LNCaP-AI细胞坏死性凋亡比例升高。结论:LNCaP-AI细胞可通过坏死性凋亡机制诱导死亡,下调SHARPIN可能通过激活Rip1增强LNCaP-AI细胞坏死性凋亡。

沉默婆罗双树样基因4对前列腺癌LNCaP细胞增殖和凋亡生物学行为的影响

目的:使用小干扰RNA(siRNA)抑制人前列腺癌LNCa P细胞中婆罗双树样基因4(SALL4)的表达并对抑制效果进行测定,检测沉默(SALL4)后LNCa P细胞增殖、集落形成及凋亡等生物学行为的变化。方法:培养LNCa P细胞,分为si-SALL4组、阴性对照组与空白对照组。Real-time PCR与Western blotting技术检测SALL4 mRNA与蛋白水平。采用MTS比色法观察各组细胞增殖能力的变化,采用集落形成实验观察各组细胞集落形成能力的变化,流式细胞术研究SALL4对细胞凋亡的影响,利用Western blotting方法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达情况。结果:与阴性对照组相比,si-SALL4组SALL4 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖能力、细胞集落形成能力均明显降低(P<0.05),而凋亡细胞明显增加(P<0.05),Bcl-2的表达减弱,而Bax的表达增强。结论:通过siRNA技术沉默(SALL4)表达可抑制前列腺癌LNCa P细胞增殖和集落形成能力,促进细胞凋亡,其促进凋亡作用可能与Bcl-2及Bax表达有关。

不同气腹压力对腹腔镜疝囊高位结扎患儿生命体征的影响

目的评估不同气腹压力对腹腔镜疝囊高位结扎患儿围手术期恢复的影响。方法采用前瞻性随机对照的研究方法,将60例接受腹腔镜疝囊高位结扎的患儿随机分为3组。A组为常规气腹压力组(9 mm Hg)、B组为低气腹压力组(7 mm Hg)、C组为阶梯式气腹压力组(9 mm Hg^5 mm Hg)。观察并比较不同气腹压力下,建立气腹前10 min、建立气腹后10 min、手术结束时3个时间点患儿的生命体征、血气变化及术后疼痛情况。结果 3组患儿手术均顺利完成,无中转改开放手术,无围手术期并发症发生。气腹后10min各组内收缩压、舒张压较气腹前升高,手术结束时常规气腹压组收缩压及心率较气腹前升高(P<0.05);在建立气腹后10min及手术结束时各组间及组内脉血二氧化碳分压(Pa CO_2)、呼末二氧化碳分压(PETCO_2)差异有显著性差异(P<0.05);3组患儿CO_2消耗量、手术时间无显著性差异(P>0.05);在疼痛评估方面,低气腹压组、阶梯式气腹组患儿术后12h疼痛程度低于常规气腹压组患儿(P<0.05)。结论医护人员密切配合、适时动态调节气腹压力(阶梯式气腹压力)下实施腹腔镜疝囊高位结扎术是安全、可行的,并可显著降低患儿术后疼痛程度。

热诱导调控序列的合成及其热诱导特性的研究

目的探讨合成热诱导性的HSP70启动子调控序列,并鉴定加热条件下诱导其下游报告基因表达的特性。方法利用PCR方法,以肝癌细胞株HepG2基因组为模板,体外合成热休克蛋白70(HSP70)启动子序列。利用双酶切法构建HSP70启动子调控的含EGFP报告基因的真核表达载体pcDNA-HSP70-EGFP。以脂质体为载体,体外转染肝癌细胞株HepG2,在不同的温度下(37℃、39℃、41℃、43℃、45℃)加热不同时间(0、15、30、45、60min)后,利用流式细胞术检测报告基因EGFP表达强度,从而判定温度及时间对HSP70启动子热诱导活性的影响。结果合成的HSP70启动子序列测序结果与GeneBank中AL671762所提供序列完全一致。低温加热后EGFP在HepG2细胞中的表达强度不同程度增强,在43℃/30min时最为明显,为未加热组的3.3倍。结论成功合成可热诱导的HSP70启动子序列;HSP70启动子在低温加热下能明显增强其下游外源基因的表达,为进一步研究肿瘤热疗-基因治疗提供了实验基础。

人FoxA1基因重组慢病毒载体的构建和鉴定

目的构建叉头盒蛋白A1（Forkhead-box A1,Fox A1）的重组慢病毒表达载体,为探究其功能和作用机制奠定基础。方法设计基因引物,采用聚合酶链反应（PCR）扩增出Fox A1的c DNA序列,然后将其克隆至PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP-puro慢病毒表达载体上,经PCR、双酶切反应及DNA测序鉴定,将阳性重组Fox A1表达载体、p CMV-VSV-G和p CMV-d R8.91包装质粒共转染到HEK-293T细胞进行病毒包装收集病毒浓缩液,然后再感染293T细胞,通过观察绿色荧光蛋白来计算病毒滴度,最后用病毒转染原代培养人皮肤成纤维细胞（HFFs）,通过实时荧光定量PCR检测Fox A1 m RNA的表达水平。结果重组慢病毒表达载体Fox A1经PCR扩增、酶切及测序鉴定正确,并得到滴度为1×10~8 TU/m L的病毒液,病毒感染人皮肤成纤维细胞后表达显著增强。结论成功构建了人Fox A1重组慢病毒载体,并可在HFFs内高效表达,为后续Fox A1的功能和机理研究奠定了实验基础。

大鼠脂肪干细胞向肠神经样干细胞转分化的初步实验研究

目的初步探讨应用小分子SB431542、noggin和LDN1931897将大鼠脂肪干细胞(ADSCs)转分化成肠神经样干细胞的可行性,为先天性巨结肠的细胞治疗提供一种新的种子细胞。方法取SD大鼠腹股沟脂肪组织分离培养ADSCs。当ADSCs传代至第3代时,加入小分子SB431542、noggin、LDN1931897以及肠神经培养基进行转分化实验。通过光学显微镜观察细胞形态学变化和应用免疫荧光染色检测其肠神经干细胞特异性标记物表达情况。结果ADSCs在含有3种小分子的肠神经细胞培养基中转分化培养7天后形成神经球样的细胞团。免疫荧光染色法检测发现神经干细胞特异性标记物Nestin呈阳性表达,肠神经干细胞标记物Sox2呈阳性表达。结论小分子SB431542、noggin和LDN1931897可在肠神经培养基中将ADSCs转分化为肠神经样干细胞。ADSCs有可能作为先天性巨结肠干细胞移植的种子细胞来源。

先天性巨结肠的腹腔镜治疗体会

目的探讨腹腔镜技术在小儿先天性巨结肠治疗中的应用。方法对12例先天性巨结肠患儿行腹腔镜Swenson手术,其中短段型3例,普通型8例,长段型1例。结果 12例患者均在腹腔镜下完成手术,无中转开腹病例。手术切除痉挛段和扩张段病变肠管送病理检查,其中最短者约15cm,最长者约60cm。术后病理均显示符合先天性巨结肠诊断。所有病例均未出现吻合口漏、尿潴留、肛周感染等并发症。术后随访3～12个月,所有病例排便功能恢复良好,而且无大便失禁和便秘症状。结论腹腔镜先天性巨结肠根治术创伤小、术后恢复快,手术安全,效果满意。

小鼠miR-122重组慢病毒载体的构建和鉴定

目的构建携带miR-122的重组慢病毒表达载体,为研究miR-122的功能和作用机制奠定基础。方法从小鼠基因组DNA采用PCR法扩增出pre-miR-122基因,测序后克隆至pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP逆转录病毒载体上,测序鉴定,病毒包装后,转染NIH3T3细胞,并通过绿色荧光蛋白进行病毒滴度测定。将重组慢病毒感染肝前体细胞(HPCs),利用实时定量PCR检测miR-122的表达。结果重组慢病毒载体pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP经PCR扩增及测序鉴定正确,并得到了滴度为(1～5)×106IU/mL的病毒液。pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP感染的肝前体细胞中miR-122表达显著增强。结论成功构建了小鼠miR-122重组慢病毒,并在肝前体细胞中高效表达出miR-122,为进行miR-122的功能和机理奠定了良好的基础。

婆罗双树样基因4在人前列腺癌细胞和组织中的表达及其与临床预后之间的关系

目的:评估婆罗双树样基因4(SALL4)在人前列腺癌细胞系和前列腺癌组织中的表达情况,并明确其表达水平和临床病理学参数间的关系。方法:用免疫荧光技术、RT-PCR和Western blotting检测SALL4在LNCaP、DU145、PC-3细胞系和RWPE-1正常前列腺上皮细胞系中的表达。同时用免疫组化方法检测SALL4在前列腺增生及前列腺癌组织中的表达,并探讨其与Gleason评分等临床病理参数的关系。结果:SALL4蛋白在细胞中主要表达于胞浆,在3种前列腺癌细胞株中SALL4蛋白表达水平要明显高于正常前列腺上皮细胞RWPE-1(P<0.05),而SALL4mRNA表达水平在4种细胞系中无明显差异(P>0.05)。免疫组化结果显示SALL4在前列腺癌组织中的表达水平明显高于增生和正常前列腺组织(P<0.01)。SALL4蛋白表达水平与Gleason评分、前列腺癌临床分期、预后及组织前列腺特异抗原(PSA)表达密切相关,而与患者年龄、治疗前血清总PSA水平、前列腺体积及组织雄激素受体表达无明显相关性。结论:SALL4蛋白在前列腺癌中高表达,提示其在前列腺癌的发生、发展过程中可能起重要作用,有可能成为诊断前列腺癌新的肿瘤标志物及评估其恶性程度、进展和预后的参考指标。

人肝脏特异性miR-122重组慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建microRNA-122(miR-122)的重组过表达慢病毒,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定,为进一步研究miR-122的功能和作用机制奠定基础。方法利用PCR法扩增人类基因组DNA中miR-122发夹前体结构RNA,并将其克隆至PCDH-CMV-MCS-EF1a-GFP-puro慢病毒表达载体上,经酶切及基因测序鉴定,将阳性重组PCDH-CMV-miR-122-EF1a-GFP-puro表达载体、p CMV-VSV-G和p CMVdR8.91三质粒共转染到HEK-293T细胞,收获上清液,将所得病毒悬液浓缩后梯度稀释后感染HEK-293T细胞,并利用绿色荧光蛋白进行病毒滴度测定。将重组慢病毒转染原代培养人皮肤成纤维细胞,并利用实时定量PCR检测miR-122的表达。结果重组慢病毒表达载体PCDH-CMV-miR-122-EF1a-GFP-puro酶切及测序鉴定证明载体构建成功,并得到滴度为3×108TU/m L的病毒液。病毒感染人皮肤成纤维细胞后miR-122表达明显增强。结论通过优化miRNA载体构建方法成功构建人miR-122的重组慢病毒载体并可在人类成纤维细胞内显著过表达miR-122,为miR-122的研究提供更高效稳定的基因载体。