温度和时间对临床应用间充质干细胞长距离运输的影响

间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)具有多向分化潜能和免疫调节能力,而且没有免疫原性,在临床上应用广泛,可以用于同种异体治疗多种自身免疫性疾病和组织修复等。但是干细胞的长距离运输和保存问题给间充质干细胞的广泛应用带来了一定的困难。目前,运输过程中时间和温度对干细胞存活率的影响不是十分明确。本实验以6组第4代骨髓间充质干细胞为例,采集细胞清洗后重悬于密封的生理盐水瓶中,可以直接用于临床注射。对注射前的细胞进行细胞表面标记和分化潜能鉴定,同时检测0℃、4℃、冰盒环境(8℃-17℃)、常温和37℃等不同的环境温度下干细胞随着时间的延长存活率的变化。实验结果显示,在设置温度为4℃的小型车载冰箱中运输的干细胞状态保存最好,在6小时内细胞存活率可以保持在90%以上,在保温箱中放置冰袋(8℃-17℃)保存的效果次之,在2小时内细胞存活率可以保持在90%以上。因此,推荐在超过2小时并保持在6小时内的长距离运输过程中,用4℃恒温小型冰箱保持干细胞的活性。如果运输时间超过6小时,不建议进行远距离运输,应该选择更快捷的交通工具,让运输过程保持在6小时内。

TNF-α诱导滑膜MSCsMSCs与BMSCs凋亡的比较研究

目的通过比较TNF-α诱导滑膜MSCs（synovium-derived MSCs,SMSCs）与BMSCs凋亡,探讨SMSCs的抗凋亡能力。方法取患者自愿捐赠的滑膜组织及骨髓,分别采用组织贴壁法和密度梯度离心法分离培养SMSCs和BMSCs并传代,取第3-5代细胞行细胞免疫表型及三系分化鉴定后进行实验。实验分为4组,其中SMSCs、BMSCs凋亡诱导组（SMSCs、BMSCs实验组）用20 ng/m L TNF-α和10μg/m L放线菌酮对细胞进行凋亡诱导,其对应对照组以正常培养基培养。倒置相差显微镜下观察凋亡诱导细胞形态变化;培养24 h取各组细胞,采用细胞计数试剂盒8及流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率,Western blot法检测细胞半胱氨酶天冬氨酶蛋白酶降解产物8、3（Cleaved Caspase-8、3）的表达。结果经细胞表型及三系分化鉴定培养获得的细胞均符合MSCs鉴定标准。倒置相差显微镜观察示,随凋亡诱导培养时间延长,两实验组细胞形态及生长均较对应的对照组差。培养24 h,两对照组细胞存活率均为100%,未见细胞凋亡;SMSCs、BMSCs实验组细胞存活率分别降至60.13%±8.63%及46.55%±10.54%,均显著低于对照组（P〈0.05）,SMSCs实验组细胞存活率显著高于BMSCs实验组（t=3.152,P=0.006）。SMSCs和BMSCs对照组细胞凋亡率分别为1.12%±0.24%和1.35%±0.31%,两实验组分别增高至36.54%±8.63%及53.77%±11.52%,均显著高于对照组（P〈0.05）,且SMSCs实验组细胞凋亡率显著低于BMSCs实验组（t=3.785,P=0.001）。两对照组细胞Cleaved Caspase-8、3蛋白几乎不表达,且SMSCs实验组和BMSCs组细胞Cleaved Caspase-8、3蛋白明显高表达;其中BMSCs实验组明显高于SMSCs实验组（t=13.870,P=0.000;t=7.309,P=0.000）。结论经TNF-α诱导培养,SMSCs凋亡明显少于BMSCs,具有更强的抗凋亡能力。