全反式维甲酸对结肠癌不同增殖潜能细胞株增殖的抑制作用研究

目的:研究ATBA对结肠癌不同增殖能力细胞株生长抑制的可能机制,为ATRA应用于结肠癌的治疗提供可靠依 据。方法:应用细胞观察、FACS和MTT方法,研究ATRA对结肠癌不同增殖能力细胞株LS174T和CW-2细胞的生长抑制现 象。结果:LS174T的生长速度明显比CW-2细胞快。ATRA对体外培养的结肠癌细胞株LS174T和CW-2细胞的生长有明显 抑制和诱导细胞分化作用。结论:ATRA对LS174T和CW-2细胞的生长有抑制作用,抑制细胞增殖的程度与ATRA的浓度有 关,ATRA对结肠癌细胞有一定的抑制癌细胞增殖和诱导癌细胞分化作用。

糖基化终产物对大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子作用的研究

目的 :探讨糖基化终产物 (AGEs)对大鼠肾系膜细胞结缔组织生长因子 (CTGF)mRNA表达及细胞外基质 (ECM)合成的影响。方法 :在培养的大鼠肾系膜细胞中 ,分别加入不同浓度的糖化牛血清白蛋白 (AGE -BSA)及牛血清白蛋白 (BSA)进行刺激 ,ELISA法检测培养上清中的纤连蛋白 (FN)及Ⅳ型胶原 (ColⅣ )含量 ,RT -PCR检测细胞CTGFmRNA表达。结果 :与加入BSA组比较 ,AGE -BSA组CTGFmRNA表达明显增强 (P <0 . 0 1) ,上清中FN及ColⅣ合成增加 (P <0 . 0 1) ,与CTGFmRNA表达量之间呈正相关 (r=0 . 83)。结论 :AGEs能明显诱导大鼠肾系膜细胞CTGFmRNA的表达 ,提示AGEs可能通过上调CTGFmRNA的表达引起ECM积聚。

胡芦巴降血糖作用及其机制的研究进展

中医药典记载胡芦巴种子有"温润阳,逐寒湿"的功效。近年来研究发现,胡芦巴种子能够降低血糖、改善某些糖代谢酶的活性、增强胰岛素的分泌和调解脂质代谢障碍等作用。本文就胡芦巴降血糖作用及其机制研究进展作一概述。

人胶质瘤细胞的侵袭能力和胶原溶解作用的体外研究

目的:观察人胶质瘤细胞的体外侵袭能力及对胶原的溶解作用。方法:在体外用Boyden小室侵袭实验评价人恶性胶质瘤细胞株U87MG穿过Matrigel基膜胶的迁移能力;用琼脂-明胶凝胶观察U87MG细胞条件培养基对基质胶原溶解的影响。结果:U87MG胶质瘤细胞穿过Matrigel膜的细胞数明显多于加入EDTA或加入抗MMP-2抗体的U87MG胶质瘤细胞的穿膜细胞数(P<0.01),而后两者穿膜细胞数之间的差异无显著性(P>0.05),EDTA或抗MMP-2抗体对U87MG细胞的穿膜细胞数有明显的抑制作用,抑制率分别为79.2%和77.1%。U87MG细胞条件培养液能在凝胶孔周围引起明显增大的透明环,用EDTA或抗MMP-2抗体抑制MMP-2酶活性可明显减少透明环的形成。结论:U87MG胶质瘤细胞的侵袭能力和胶原降解作用取决于MMP-2,提示MMP-2在胶质瘤侵袭生长中起重要作用。

小鼠吸入性鼠疫病理学和毒力相关基因的体内转录

目的探讨吸入感染鼠疫的发生、发展过程及重要鼠疫菌致病相关基因的体内表达规律。方法采用滴鼻法建立小鼠吸入性鼠疫感染模型,并观察不同感染时间的组织病理学改变;采用免疫组化和逆转录-实时定量PCR方法检测感染小鼠组织中鼠疫菌5种毒力相关蛋白及其基因(caf1、lcrV、lcrG、pla、psaA)的表达和转录。结果鼠疫菌吸入后可诱导小鼠产生肺鼠疫型和非肺鼠疫型鼠疫。在小鼠体内感染状态下的鼠疫菌体表面能够检测到上述5种毒力相关蛋白的表达。其毒力基因的转录呈时相、组织差异性。结论在体内感染状态下,5种毒力相关蛋白均呈菌体表面可检测到的表达;各毒力相关基因在不同时间、不同组织中转录具有很大的差异性,这种差异性可能与其功能及宿主细胞的作用密切相关。

糖基化终末产物对大鼠肾系膜细胞基质金属蛋白酶2活性和表达的影响

目的 :观察糖基化终末产物 (AGEs)对大鼠肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶 2 (MMP- 2 )活性和表达的影响。方法 :体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞 ,糖化牛血清白蛋白作为刺激物 ,未经糖化的牛血清白蛋白及常规培养作为对照 ,分别用含 10 0 m g· L- 1 AGEs (AGEs组 )、 10 0 mg· L- 1 牛血清白蛋白 (BSA组 )和不含刺激物 (DMEM组 )的无血清 DMEM培养基 ,作用于系膜细胞 4 8h后 ,酶谱法检测各组系膜细胞上清 MMP- 2活性 ,逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR)检测系膜细胞 MMP- 2 m RNA的表达。结果 :与 BSA组及 DMEM组比较 ,AGEs组系膜细胞 MMP- 2 m RNA的表达明显下降 (P<0 .0 1) ,上清 MMP- 2活性明显降低 (P<0 .0 1)。结论 :AGEs能降低大鼠肾小球系膜细胞 MMP- 2的活性和表达。

胡芦巴对实验性糖尿病大鼠脂代谢及肾脏抗氧化防御功能的影响

目的 :探讨胡芦巴对糖尿病大鼠脂代谢及肾脏抗氧化能力的影响。方法 :用胡芦巴治疗糖尿病大鼠12周后 ,观察其血脂水平及肾脏的抗氧化能力。结果 :经过胡芦巴治疗的糖尿病大鼠血脂水平下降 ,肾脏超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)及过氧化氢酶 (CAT)活性有所升高 ,丙二醛 (MDA)水平下降。结论 :胡芦巴能够调解糖尿病大鼠的脂代谢紊乱 ,增强肾脏的抗氧化能力。

PPAR-γ激活对糖基化终末产物引起的大鼠肾系膜细胞外基质积聚的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)激活对糖基化终末产物(AGEs)引起的大鼠肾系膜细胞细胞外基质积聚的影响.方法:体外培养正常大鼠肾系膜细胞,分别用糖化牛血清白蛋白(AGEs)及未经糖化的牛血清白蛋白(BSA)处理,检测不同浓度AGEs(0、12.5、25、50、100及200 mg·L-1)对肾系膜细胞条件培养基纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原含量的影响及不同浓度罗格列酮(0、1.25、2.5、5及10 mmol·L-1)对AGEs(100 mg·L-1)引起的Ⅳ型胶原及FN积聚的影响.ELISA测定肾系膜细胞条件培养基中FN和Ⅳ型胶原蛋白含量,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测系膜细胞PPAR-γmRNA的表达.结果:大鼠系膜细胞有PPAR-γ mRNA的表达;与相应浓度的BSA比较,AGEs(12.5～200 mg·L-1)可不同程度地刺激系膜细胞FN和Ⅳ型胶原的产生(P＜0.01);给予PPAR-γ激活剂(1.25～10 mmol·L-1)可明显减轻AGEs(100 mg·L-1)引起的Ⅳ型胶原含量增加(P＜0.01).结论:PPAR-γ激活可以明显减轻AGEs引起的Ⅳ型胶原积聚.

银杏叶片对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用

目的:研究银杏叶片对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏的保护作用。方法:Wistar大鼠随机分为假手术组、UUO模型组、苯那普利组及银杏叶片组,于给药后2周和4周分别测定各组大鼠肾脏指数、左右肾重比、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)酶活性、尿液尿素氮、尿肌酐、血尿素氮、血肌酐及24 h尿蛋白排泄量等指标。结果:给药后2周,银杏叶组大鼠NAG酶活性[(18.0±5.4)U.L-1]、血尿素氮[(7.3±1.3)mmol.L-1]、血肌酐[(35.2±8.4)μmol.L-1]及24 h尿蛋白排泄量[(9.82±4.42)mg]均明显低于模型组(P<0.05);给药后4周,银杏叶片组大鼠NAG酶活性[(10.3±4.1)U.L-1]、血尿素氮[(8.7±0.9)mol.L-1]、血肌酐[(44.2±6.7)μmol.L-1]及24 h尿蛋白排泄量[(10.17±8.42)mg]均较模型组明显降低(P<0.05);给予银杏叶片能减轻UUO大鼠肾间质纤维化程度。结论:口服银杏叶片对UUO大鼠肾功能和结构具有明显保护作用。

胡芦巴种子有效成分对实验性糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用

目的:探讨胡芦巴种子A、B成分对实验性糖尿病大鼠肾脏病变的保护作用。方法:利用链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病大鼠模型,随机分为:糖尿病组(D)8只,胡芦巴种子A成分治疗组(A)10只,胡芦巴种子B成分治疗组(B)10只,另设正常对照组(C)6只。用胡芦巴种子A、B成分灌胃糖尿病大鼠12周后,观察其对血糖、血脂水平、肾功能、肾脏指数、肾小球体积及肾脏病变的影响。结果:实验性糖尿病大鼠应用胡芦巴种子A、B成分治疗后,A、B组血糖,尿蛋白排泄率、血肌酐和尿素氮、肾指数和肾小球体积均明显低于D组(P<0.05,P<0.01)。A组大鼠甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDLC)比D组明显降低(P<0.05),高密度脂蛋白(HDLC)较D组明显升高(P<0.01),而胆固醇(CHO)无明显改变(P>0.05);B药治疗组大鼠TG、LDLC及CHO均明显降低,而HDLC水平则明显升高,与D组比较差异有显著性(P<0.01)。光电镜结果显示,A、B两组肾小球病变均轻于D组,且B组肾小球结构稍强于A组。结论:胡芦巴种子A、B成分能够调节实验性糖尿病大鼠糖、脂代谢,改善肾功能,减轻肾脏病变程度,对实验性糖尿病大鼠肾脏病变具有一定的保护作用,B成分的作用强于A成分。

乳痛宁对大鼠乳腺增生病模型的作用

目的:探讨乳痛宁对大鼠乳腺增生病模型的作用效果和机理。方法:Wistar雌性未孕大鼠50只,随机分为正常对照组、模型组及低、中、高剂量乳痛宁组,每组10只,用雌二醇和黄体酮诱导大鼠发生乳腺增生病,用乳痛宁进行灌胃,测量大鼠第2对乳头直径,观察乳腺组织结构,测定血液中生殖激素水平,免疫组化法测定乳腺组织中雌、孕激素受体阳性细胞。结果:中、高剂量乳痛宁组与模型组大鼠比较血液中的催乳素、促卵泡激素和雌二醇的浓度明显降低(P<0.05),黄体生成素和孕酮则明显升高(P<0.05),大鼠第2对乳头直径明显减小(P<0.05),腺泡和腺管数目减少,体积缩小(P<0.01),雌、孕激素受体阳性细胞明显减少。结论:乳痛宁通过调整大鼠体内的激素分泌水平,减弱雌激素和孕激素在乳腺的生物学效应,从而使增生的乳腺恢复正常。

过量氟对大鼠破骨细胞活性的影响

目的 :探讨过量氟对大鼠破骨细胞 (osteoclasts,OCs)活性的影响。方法 :对经饮水投氟 2 0周的大鼠胫骨进行常规组织切片 ,并对其进行 HE及抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)染色 ,观察染氟大鼠胫骨 OCs的变化。同时提取股骨干骺端的总蛋白质 ,应用蛋白质印迹法 (Western blotting)观察长骨干骺端基质金属蛋白酶 9(MMP- 9) (又称明胶酶 B)的变化。结果 :染氟组大鼠胫骨各个包被及干骺端 OCs增多 ,骨皮质密质骨松质化。常食加氟组、偏食对照组 (低钙偏食饲料组 )、偏食加氟组 TRAP阳性细胞数较对照组均有增加 ,但差异无显著性 (P>0 .0 5 )。Western blotting结果显示 ,常食加氟组大鼠干骺端 MMP- 9蛋白表达增高 ,与常食对照组比较差异有显著性 (P<0 .0 5 )。偏食加氟组与偏食对照组比较差异也有显著性 (P<0 .0 5 )。且二者与常食对照组差异均有显著性 (P<0 .0 5 )。结论 :过量氟造成骨转换增高 ,破骨性骨吸收增强 ,低钙偏食是氟骨症的促发因素。氟可通过增强 MMP- 9的蛋白质表达来加强

尾加压素Ⅱ对大鼠肾小管上皮细胞的促丝裂作用

目的:研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠肾小管上皮细胞的促丝裂作用。方法:采用机械分离和酶消化法获取肾小管上皮细胞进行培养、鉴定;用免疫细胞化学法定位溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入到肾小管上皮细胞DNA内;用MTT和BrdU掺入法观察不同浓度UⅡ(0、10-10、10-9、10-8、10-7和10-6mol.L-1)对肾小管上皮细胞增殖和DNA合成的影响,以确定其促丝裂作用。结果:培养的细胞经Cytokeratin-18免疫细胞化学染色后,强度不一和不均匀分布的棕黄色颗粒定位于大部分细胞的胞核周围和胞浆内。培养的肾小管上皮细胞经BrdU掺入和免疫细胞化学显色后,细胞核内有棕黄色颗粒沉着。10-10mol.L-1UⅡ组的MTT值、BrdU掺入量与对照组(0 mol.L-1UⅡ)比较差异无显著性(P>0.05);10-9和10-8mol.L-1UⅡ组的MTT值、BrdU掺入量高于对照组(P<0.01或P<0.05);与对照组比较,10-7和10-6mol.L-1UⅡ组的MTT值明显增加(P<0.05),但增加的幅度较10-9和10-8mol.L-1UⅡ组低,而BrdU掺入量无明显改变。结论:UⅡ对体外培养的大鼠肾小管上皮细胞具有促丝裂作用。

胡芦巴提取物对实验性糖尿病大鼠的降血糖作用

目的：探讨胡芦巴提取物作用不同时间实验性糖尿病大鼠血糖的变化。方法：采用链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型，随机分为糖尿病组（D）8只、胡芦巴提取物治疗组（F）10只，另设正常对照组（C）6只，观察胡芦巴提取物作用不同时间糖尿病大鼠血糖的变化。结果：与糖尿病组比较，给予胡芦巴提取物治疗组糖尿病大鼠血糖第9天开始明显下降（P〈0．05），第21天（3周）时血糖显著降低（P〈0．01）；第27天（4周）左右降至与对照组同样水平（P〉0．05），给药4周内血糖水平随治疗时间延长而降低，呈负相关关系（r=-0．97，P〈0．05）。4～12周血糖水平保持平稳，血糖水平不随时间延长而改变。胡芦巴提取物治疗组给药4周后停给2周，停止给药期间血糖回升较缓慢。结论：胡芦巴提取物能明显降低糖尿病大鼠血糖含量，使其恢复到正常大鼠血糖水平，并在给药4周内呈明显的时效关系。

糖基化终末产物对大鼠肾皮质过氧物酶体增殖体激活受体-γ mRNA表达的影响

目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对大鼠肾皮质过氧物酶体增殖体激活受体-γ(PPAR-γ)mRNA表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠20只随机分为4组(每组5只),AGEs组(给予AGEs同时尾静脉注射AGE-修饰大鼠血清蛋白),AGEs+AG组[给予AGEs同时腹腔注射氨基胍(AG)],天然血清组(注射天然大鼠血清蛋白)和空白对照组(不施加处理的正常大鼠)。各组大鼠每日注射1次,连续注射6周,RT-PCR检测PPAR-γmRNA表达水平。结果:各组大鼠肾皮质均有PPAR-γ表达;与天然血清组及空白对照组比较,AGEs组大鼠肾皮质PPAR-γmRNA表达明显降低(P<0.01),而同时注射AG的大鼠PPAR-γmRNA表达水平无明显降低。结论:大鼠肾皮质表达PPAR-γ;AGEs能降低大鼠肾皮质PPAR-γmRNA的表达水平,提示AGEs可能通过对肾脏保护性因子PPAR-γ的影响参与糖尿病肾病的发病机制。

苯那普利对糖尿病大鼠肾脏结缔组织生长因子mRNA表达的影响

目的:观察苯那普利对糖尿病(DM)大鼠肾脏结缔组织生长因子(CTGF)基因表达和肾脏病变的影响。方法:将实验动物分为正常对照组(CON)、糖尿病组(DM)和苯那普利治疗组(DM+B)。苯那普利处理12周后检测血清肌酐、尿素氮水平、尿白蛋白排泄率(UAER)和肾皮质血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量,RT-PCR检测肾皮质CTGF mRNA表达,免疫组化检测肾纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)蛋白表达水平。结果:实验终止时,DM组UAER(12.92±3.56)mg.24 h-1明显高于CON组(2.74±1.09)mg.24 h-1(P<0.01),DM+B组大鼠UAER(5.69±2.74)mg.24 h-1明显低于DM组(P<0.01)。与CON组相比,DM组血清肌酐和尿素氮水平均明显增高(P<0.01);苯那普利治疗使其水平明显降低(P<0.01)。DM大鼠肾皮质CTGF mRNA表达水平约为CON组的2.65倍(P<0.01),在DM+B组其表达水平减少23.68%(P<0.05)。DM大鼠肾小球FN和ColⅣ蛋白表达均较CON组明显上调(均为P<0.01),苯那普利治疗后其表达水平明显降低(P<0.01)。结论:苯那普利能降低DM大鼠肾脏CTGF基因表达,并能明显减轻肾病变。

阿魏酸钠对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏损害的改善作用

目的观察阿魏酸钠(SF)对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾脏损害的改善作用。方法将W istar大鼠48只随机分为假手术组、UUO组、苯那普利治疗组及阿魏酸钠治疗组,于给药2和4 w后分别检测各组大鼠肾脏指数、左右肾重比、尿NAG酶活性、尿液尿素氮、尿肌酐、血尿素氮、血肌酐及24 h尿蛋白排泄量等指标。结果给药2 w后,与模型组比较,阿魏酸钠组大鼠肾脏指数(0.64±0.10)、尿NAG酶活性〔(18.0±5.43)U/L〕、血尿素氮〔(7.3±1.1)mmol/L〕、血肌酐〔(35.2±8.4)μmol/L〕及24 h尿蛋白排泄量〔(9.8±4.4)mg/24 h〕均明显降低(P<0.05),苯那普利组与阿魏酸钠组结果相似;给药4 w后,阿魏酸钠组大鼠肾脏指数(0.57±0.23)、尿肌酐〔(551±196)μmol/L〕和血尿素氮〔(11.1±1.8)mmol/L〕均较模型组明显减低(P<0.05)。结论阿魏酸钠对UUO引起的大鼠肾损害具有明显改善作用。

糖基化终末产物对大鼠肾系膜细胞胰岛素样生长因子-1表达的影响

目的：观察糖基化终末产物（AGEs）对大鼠肾系膜细胞胰岛素样生长因子-1（IGF-1）表达的影响及其与细胞外基质（ECM）成分含量的关系。方法：体外培养正常大鼠肾系膜细胞，分别用不同浓度（0、12．5、25．0、50．0、100．0和200．0mg·L^-1）糖基化牛血清白蛋白（AGEs）处理，相应浓度未经糖化的牛血清白蛋白（BSA）作为对照，ELISA法检测纤维连接蛋白（FN）和Ⅳ型胶原及IGF-1含量。结果：与相应浓度的BSA组比较，12．5～200．0mg·L^-1 AGEs组FN含量明显升高（P〈0．01），100．0～200．0mg·L^-1 AGEs组Ⅳ型胶原含量明显升高（P〈O．01），25．0～100．0mg·L^-1 AGEs组IGF-1蛋白含量明显升高（P〈0．01），200．0mg·L^-1 AGEs组IGF-1含量无明显变化。结论：AGEs引起的细胞外基质积聚可能在一定范围内与IGF-1上调有关。

人胶质瘤MMP-2及TIMP-2 mRNA表达和酶活性的改变及其意义

目的:探讨人胶质瘤基质金属蛋白酶2 (明胶酶A,MMP- 2 )及金属蛋白酶组织抑制物2 (TIMP- 2 )m RNA表达和活性的意义。方法:按WHO分类标准将2 6例人胶质瘤标本分为4组,用RT- PCR检测MMP- 2和TIMP- 2 m RNA表达,用酶谱法检测其活性。结果:在明胶酶谱分析MMP- 2显示两条带,分别是定位于6 2 0 0 0活性形式和72 0 0 0酶原形式。在各级别胶质瘤之间MMP- 2的酶原形式(72 0 0 0 )无差别。随胶质瘤恶性程度的增加,MMP- 2 m RNA的表达水平和酶活性均明显增加,而TIMP- 2 m RNA的表达水平和酶活性均随胶质瘤恶性程度的增加而明显降低。结论:在不同恶性级别人胶质瘤,MMP- 2和TIMP- 2的基因转录及酶活性均发生改变,这些改变在促进胶质瘤的侵袭生长中起重要作用。

氟对成纤维细胞和成骨细胞TGF-β和Smad2/3表达的影响

目的：观察不同浓度氟化物在不同时间段对成纤维细胞和成骨细胞中转化生长因子β（TGF-β）和Smad2／3表达的影响。方法：将成纤维细胞和成骨细胞各分7个染氟组（0、0．0001、0．001、0．1、1、10和20mg·L^-1），在5个染氟时间段（2、4、24、48和72h）采集细胞培养上清，应用酶联免疫吸附（ELISA）法检测TGF—β和Smad2／3含量，应用RT—PCR方法检测染氟48h细胞TGF-β mRNA的表达。结果：与染氟0mg·L^-1组比较，氟作用2h的0．001、0．1、1、10和20mg·L^-1组和氟作用4h的0．0001、0．001、0．1、10和20mg·L^-1组成纤维细胞TGF—β蛋白表达明显降低（P〈0．01或P〈0．05）；染氟48h时1和20mg·L^-1组成纤维细胞TGF—β mRNA表达有所增强，染氟2～24h时Smad2／3表达多呈上升趋势，但差异无显著性（P〉0．05）；成骨细胞染氟48h时0．0001、0．001和1mg·L^-1组TGF—β蛋白表达增强（P〈0．01或P〈0．05），TGF-β mRNA的表达呈增强趋势；染氟成骨细胞Smad2／3表达多呈上升趋势，其中染氟48h的20mg·L^-1组表达明显升高（P〈0．01）。结论：染氟对成纤维细胞和成骨细胞TGF—β表达具有不同的作用特点，TGF—β在成纤维细胞成骨表型转换过程中可能起重要作用。