大鼠骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究

目的：研究体外不同诱导条件下大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌细胞分化的潜能。方法：取Wistar大鼠股骨和胫骨骨髓,分离培养MsCs,采用第二代或第三代MScs,以5-氮杂胞苷(5-aza)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及两者联合作用,作为分化诱导剂,连续观察三周,相差显微镜下观察其形态变化。免疫细胞化学方法鉴定心肌特异性蛋白T(Troponin T,cT- nT)、连接蛋白43(Connexin43)、α-横纹肌动蛋白(α-Sarcomeric Actin)的表达,应用半定量RT-PCR技术分析Nkx2．5、GATA-4、TGF-?等相关调控基因在分化过程中的表达。结果：免疫细胞化学显示cTnT、Connexin43、α-Sarcomcric Actin诱导前无表达,单纯bFGF诱导组及对照组未发现cTnT、Comexln43、α-Sarcomeric Actin染色阳性细胞,单纯5-aza诱导组诱导后上述三种蛋白阳性细胞表达比例分别为22%、28%、32%,5-aza与bFGF联合诱导组诱导后上述三者阳性细胞表达比例分别为28%、33%、40%,联合诱导组诱导后细胞阳性率明显高于单纯5-aza诱导组,两组相比较差异有显著性意义(P＜0．05)。RT-PCR检测结果显示,GATA-4、Nkx2．5、TGF-β在诱导前的MSCs有低表达,单纯5-aza诱导组及5-aza与bFGF联合诱导组诱导后3周,这三种基因有较强的表达,单纯5-aza诱导组诱导检测结果显示,GATA-4、Nkx2．5、TGF-β在诱导前的MSCs有低表达,单纯5-aza诱导组及5-aza与bFGF联合诱导组诱导后3周,这三种基因有较强的表达,单纯5-aza诱导组诱导前后相比较,差异有显著性意义(P＜0．05),5-aza与bFGF联合诱导组诱导前后相比较,差异也有显著性意义(P＜0．05),单纯5-aza诱导组与5-aza和bFGF联合诱导组诱导后两组之间相比较,差异亦有显著性意义(P＜0．05),表明单纯5-aza诱导及5-aza与bFGF联合诱导均可使MSCs向心肌细胞转化,联合诱导可以使更多的MSCs向心肌细胞方向转化。单纯bFGF诱导组诱导前后无显著性差异。结论：5-aza及bFGF联合诱导,可以作为更好的促进MSCs向心肌细胞分化的条件。

缬沙坦对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响

目的:观察特异性血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂缬沙坦对大鼠自体移植静脉内膜增生的影响。方法:①实验于2004-06/2004-10在哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心完成。取Wistar成年大鼠150只,雌雄不拘。②大鼠自体移植静脉模型的建立:将大鼠麻醉后,显露并游离左颈总动脉及左颈外静脉长约1.5cm,游离并切取静脉长约1.0cm,肝素生理盐水冲洗,阻断并切取动脉0.8cm,将静脉端吻合于左颈总动脉。③实验过程中有4只大鼠因出血而死亡,有6只大鼠因移植静脉阻塞而不符合模型要求,随机将剩余140只大鼠分为2组,缬沙坦组和对照组,每组70只。缬沙坦组于造模前2天开始用缬沙坦灌胃[3mg/(kg·d)],对照组造模前2天开始用等量生理盐水灌胃,1次/d,直至取材。两组动物分别于造模后1,3d及1,2,4,6,8周取材备检,每组每个时间点10只。④采用苏木精-伊红染色,应用计算机图像分析仪计算新生内膜面积/中膜面积表示内膜增生程度;应用免疫组化方法检测增殖细胞核抗原和P-选择素的表达。光镜下观察,400倍高倍镜下,随机选取4个视野,计数单位视野阳性细胞数占总细胞数百分比,并取平均值。⑤两组间均数比较采用t检验。结果:实验过程中有4只大鼠因出血而死亡,有6只大鼠因移植静脉阻塞而不符合模型要求,最终进入结果分析140只,缬沙坦组、对照组各70只。①移植静脉新生内膜面积与中膜面积比:造模后2,4,6,8周缬沙坦组明显低于对照组(0.2752±0.0061,0.7836±0.0058,0.8809±0.0050,0.7609±0.0053;0.6999±0.0048,1.6131±0.0056,1.9339±0.0071,1.7897±0.0091,t=173.35,325.29,382.91,308.95,P<0.01)。②移植静脉增殖细胞核抗原阳性细胞百分比:造模后1,2,4,6周缬沙坦组明显低于对照组[(26.88±6.28)%,(30.45±6.80)%,(16.20±3.57)%,(5.37±1.34)%;(35.33±8.34)%,(40.49±10.04)%,(20.87±4.51)%(9.29±2.44)%,t=2.56,2.62,2.57,4.45,P<0.01]。③移植静脉P-选择素阳性细胞百分比:造模后1,2,4,6,8周缬沙坦组明显低于对照组[(6.41±2.61)%,(12.82±3.71)%,(23.46±7.75)%,(30.33±7.78)%,(18.61±5.90)%;(9.88±3.05)%,(18.41±5.33)%,(34.61±11.19)%,(40.11±7.36)%,(28.71±5.58)%,t=2.73,2.73,2.59,2.88,3.93,P<0.01]。结论:自体静脉移植后,移植静脉发生了内膜增生性变化;缬沙坦可抑制静脉移植术后增殖细胞核抗原及P-选择素的表达,从而减少白细胞与血管内皮细胞间的黏附,达到抑制内膜增生的目的。

临床压疮护理预防及基础循证研究

探讨国内外医学对于压疮护理的认识,预防、治疗方法等方面的不同观点,阐述基础循证研究在护理领域的应用现状,明确压疮发生机制,以求进一步提高压疮护理技术。