北五味子果实有效部位的连续制备技术研究

目的建立北五味子中不同组分的制备方法。方法通过CO2超临界流体萃取(SFE)技术得到北五味子油;油中的3种主要木脂素含量及亚油酸含量的检测方法为高效液相色谱法和气相色谱法;SFE提取后的残渣用来提取多酚类成分,提取工艺用响应曲面法优化,提取物中的多酚含量用Folin-cicalteu's试剂进行测定;多酚提取残渣再进行水提醇沉,得到北五味子粗多糖,用苯酚硫酸法进行多糖含量测定。结果北五味子油的出油率为14.1%,油中亚油酸含量为58.4%,3种主要木脂素(五味子醇甲、五味子乙素、五味子甲素)总含量为9.44%;北五味子多酚最佳提取条件为60%乙醇,溶液倍量25,提取时间31 min,在此提取条件下,出膏率为41.2%,其中多酚含量为2.56%;北五味子粗多糖提取率为3.88%。结论本制备工艺提高了北五味子的利用率,同时也为开发北五味子中不同药品及保健功能产品提供了原材料。

RNA干扰技术给药途径的研究进展

RNA干扰（RNAi）是序列特异性双链RNA（dsRNA）介导的基因沉默机制,这种机制将有希望成为治疗多种疾病的有力工具。Castanotto和Rossi[1]在新杆状线虫中发现双链RNA有沉默基因表达的能力。

生物制药技术的发展现状及未来趋势

科学技术的不断地发展,使我们的社会发生了翻天覆地的变化,在各个领域都进行变革,大大的改变了我们如今的社会。尤其在生物制药领域表现得更为明显,环境的不断的破坏使得人们的身体健康受到了严重的威胁,这样对于我们相关的医学研究面临着严峻的挑战。目前的高发病症包括脑血栓、癌症、肿瘤等,并且近几年发病率呈上升趋势,迫切要求我们开发新的治疗手段。生物制药行业是高技术含量的朝阳行业,生物制药技术的研究和开发,必将改善人类生活的质量,延长人类的寿命,同时为社会和经济的发展做出贡献。

单克隆抗体纯化技术研究进展

抗体使用特殊的蛋白质,是机体免疫系统最为重要的效应因子,不管何种抗体,如何来源的抗体,只用之前都应该经过纯化。纯化大致可分为沉淀法和色谱法两类。本文通过对几种重要的纯化方法的阐述,推出了单克隆抗体纯化的研究紧张。

浅谈蛋白纯化技术的研究进展

本文根据蛋白质的特性,从其分子的带电性质,溶解度,分子大小以及配体特异性四个方面,对蛋白质纯化的方法进行研究。希望能为这一技术制备提供参考,并为其应用研究总结理论根据。

超滤技术在蛋白质分离纯化中应用

超滤是一种非常实用的膜分离技术,在生物工程制药领域,可有效去除发酵液中的内毒素,实现蛋白质溶液快速脱盐、脱醇和浓缩等。本文仅对超滤技术在蛋白质分离纯化中的应用进行综述。

Anti-hEGFR轻、重链共表达及高表达细胞株快速筛选

为实现h EGFR全长抗体(anti-h EGFR)轻、重链共表达以及建立快速、高效筛选方法并获得共表达细胞株。采用分子克隆技术获得重链和轻链基因,将之连入peedual真核表达载体;经GS-Neo加压及流式细胞术筛选获得稳定表达细胞株;通过protein A亲和层析技术纯化出目标抗体;应用cck-8法、Annexin V/PI法以及q PCR技术检测anti-h EGFR对A431细胞增殖、凋亡影响。SDS-PAGE分析结果显示,纯化后抗体纯度为95.0%、分子质量约为150 ku。cck-8试验中不同浓度anti-h EGFR对A431细胞增殖均有极显著抑制作用,且与商品化Cetuximab效果相近;anti-h EGFR与Cetuximab均可诱导A431细胞产生凋亡,作用效果相近,均达极显著。全长抗体轻、重链的共表达,省去分别表达的重组过程,保证抗体天然结构;GS-Neo双加压结合流式筛选,实现阳性细胞株快速、高效分离;建立省时、高效抗体共表达平台,为抗体类药物真核构建及筛选提供新思路。

均匀设计和回归分析优化安神宁软胶囊的制备工艺

目的研究安神宁软胶囊的最佳制备工艺。方法采用均匀实验设计和多元逐步回归分析,以内容物混悬液的沉降体积比和流动性评价为指标,考察药物与分散介质的比例、助悬剂的用量和润湿剂的用量对内容物稳定性的影响;以软胶囊崩解时限和加速试验条件下的崩解时限二者的综合评分为指标,考察明胶-甘油、明胶-纯化水比例以及熔胶温度对囊皮溶解性能的影响。结果安神宁软胶囊内容物处方为:药物干粉与大豆油比例为1:1.5,助悬剂蜂蜡用量为内容物质量分数的4%,润湿剂大豆磷脂用量为内容物质量分数的2%。软胶囊囊皮处方为明胶:甘油:水=1:0.5:1(以质量比计算)。结论均匀设计和回归模型可以对实验结果进行高精度预测,优化了安神宁软胶囊的制备工艺。

中药转录组学及lncRNA挖掘的应用研究

中药植物在我国已有上千年的应用历史,研究人员从中药中已提取出多种药用活性成分。但由于中药的特殊性,其次级代谢过程中的活性物质合成的遗传基础尚不清楚。中药转录组学研究已经成为中药基因组研究的一个新领域。本文介绍了转录组学当前采用的技术手段以及在若干中药的功能基因中的研究进展。

三色堇小孢子发生和雄配子体发育的解剖学研究

运用石蜡切片法对三色堇（Viola tricolor L．）小孢子发生及雄配子体形成进行研究。结果表明，三色堇成熟的花药有4个小孢子囊，花药壁发育为基本型，共6-7层，从外至内依次是表皮、药室内壁、中层和绒毡层，绒毡层发育类型为腺质绒毡层。小孢子母细胞减数分裂为连续型，四分体呈四面体型排列。成熟花粉为2-细胞型或3-细胞型，在一个横切面上最多具有5个萌发孔。

G-B-R复配物对模拟微重力效应诱导骨丢失的防护作用

目的从天然产物中寻找到对微重力效应诱导骨丢失具有防护作用的复配物。方法通过24种天然产物对骨髓干细胞和成骨细胞的增殖活性,筛选出具有较强效果的天然产物并对其进行复配;随后通过复配物对模拟微重力效应下昆明小鼠骨质丢失的影响来评价其骨丢失防护作用。结果银杏叶和荞麦花粉的复配物显示出最强的骨髓干细胞增殖活性;熟地黄显示出最强的成骨细胞增殖活性;在模拟微重力环境下不同剂量的银杏叶、荞麦花粉与熟地黄的复配物均显示出不同程度的骨丢失防护作用;高剂量组可以显著提高模型组小鼠血清中碱性磷酸酶的活性及股骨中的有机物含量。结论通过对天然产物促骨髓干细胞和成骨细胞增殖活性进行筛选和复配,发现所获得的G-B-R复配物对微重力效应诱导的骨丢失具有良好的防护作用。

珍珠梅总黄酮及槲皮素含量的测定

珍珠梅(Sorbaria sorbifolia)，又名山高粱，蔷薇科灌木，生于村边，山谷，溪旁。民间用其活血祛瘀，消肿止痛，治疗骨折，跌打损伤。前苏联在20世纪60年代曾报道珍珠梅中含有珍珠梅甙和黄酮类物质等，但对其化学成分和定量研究尚未见报道。我们在研究中发现珍珠梅中的黄酮有极强的抗乏氧作用，很可能成为治疗心血管病的良药。于是，我们对珍珠梅总黄酮和槲皮素的含量进行了测定。

豨莶草对尿酸钠引起痛风性关节炎IL-1β、TNF-α、NF-κB表达的影响

目的：研究豨莶草对尿酸钠引起的痛风性关节炎细胞炎性因子的作用机制。方法：选取健康清洁级10-13周龄雄性Wistar大鼠108只,随机分为空白对照组、模型对照组、莶草高剂量组、莶草中剂量组、莶草低剂量组、秋水仙碱组,每组18只。除空白对照组外,其余各组均通过尿酸钠致大鼠痛风性关节炎模型,用莶草不同剂量和秋水仙碱对模型大鼠灌胃给药。观察各组大鼠关节组织的病理学变化和测定白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、核转录因子-κB（NF-κB）的表达。结果：模型对照组大鼠膝关节红肿明显且不敢发力,肿胀关节浸出液中IL-1β、TNF-α、NF-κB水平显著升高,滑膜细胞增生、炎性细胞浸润,排列紊乱,成纤维细胞增生,组织坏死并且炎性渗出。莶草高、中剂量组治疗效果明显,红肿减弱,莶草高剂量组周围软组织中炎细胞浸润并不明显,肿胀关节浸出液中IL-1β、TNF-α、NF-κB均显著降低。结论：莶草通过抑制IL-1β、TNF-α、NF-κB表达,可有效抑制痛风性关节炎局部的炎症反应。

雌激素受体抑制下氯化锂对成骨细胞AKT-mTOR通路的影响

背景:氯化锂可以通过Wnt通路激活来治疗骨质疏松,并能激活诱导骨细胞自噬,推测提高氯化锂在Akt,mTOR磷酸化表达可以作为提高成骨细胞分化的作用机制之一。目的:分析雌激素受体抑制下氯化锂对大鼠成骨细胞AKT-mTOR通路作用机制。方法:SPF级出生3 d的SD乳鼠,购买于黑龙江中医药大学动物实验中心。麻醉下分离乳鼠颅骨成骨细胞,采用酶消化法和茜素红染色法获得和鉴定成骨细胞。将成骨细胞随机分为空白组(正常培养细胞)、抑制剂组(ICI182780)、治疗组(氯化锂+ICI182780)。倒置显微镜下观察细胞形态;加入不同浓度的氯化锂(0,1,2,5 nmol/L)处理细胞24 h,采用CCK-8检测各组细胞增殖情况;采用茜素红染色及碱性磷酸酶活性检测成骨细胞分化情况;Western blot法测定成骨细胞中p-AKT,p-mTOR的表达。结果与结论:①倒置显微镜下观察细胞多为单核、多边形及梭形,局部有细胞密集的细胞团;②不同浓度的氯化锂都能对成骨细胞增殖产生促进作用,在一定范围内随着氯化锂浓度的增加促进作用逐渐增强;③与空白组比较,抑制剂组成骨细胞矿化能力明显降低,与抑制剂组比较,治疗组成骨细胞矿化结节能力明显增加;④与空白组比较,抑制剂组中碱性磷酸酶活性明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中碱性磷酸酶活性明显增加;⑤与空白组比较,抑制剂组中细胞p-AKT,p-mTOR蛋白表达明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中p-AKT,p-mTOR蛋白表达显著增加;⑥结果说明,雌激素受体抑制下氯化锂可以通过激活AKT-mTOR通路促进成骨细胞增殖分化。

重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子喷雾剂的制备及药效研究

目的研制重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子喷雾剂,探索其治疗溃疡、烧伤和烫伤的有效性。方法使用合理比例的保护剂、透皮吸收促进剂、抑菌剂和缓冲体系等,将重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子制备成喷雾剂,通过动物药效实验探索其治疗溃疡、烧伤和烫伤的效果。结果重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子喷雾剂通过2～8℃条件24个月长期稳定性考察,理化性质和生物活性没有明显变化。通过豚鼠溃疡模型和家兔烧伤和烫伤模型显示,药效非常显著。结论重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子可制备成喷雾剂,为临床治疗溃疡、烧伤和烫伤等创面疾病提供了依据。

硅钨酸质量法测定延胡索总生物碱质量分数

建立延胡索总生物碱质量分数检测方法.运用硅钨酸质量法,将延胡索总生物碱中生物碱物质转化为可以准确称量的形式,计算延胡索总生物碱质量分数.三批样品质量分数平均值为57.12%,符合中药五类新药技术研究要求.所建立的方法操作简便、准确、可靠,适用于延胡索总生物碱的质量控制.

葡萄座腔菌A13人工诱导对白木香叶化学组成影响研究

分析了葡萄座腔菌(Botryosphaeria rhodina)A13人工诱导对白木香叶化学组成的影响。以B.rhodina A13人工诱导前后白木香叶为材料,GC-MS联用技术分析白木香叶三氯甲烷提取物挥发性成分。研究发现,已结香、未结香白木香叶化学组成差异较大,十六烷酸、角鲨烯、β-谷甾醇、γ-谷甾醇和α-生育酚为差异组分。结果表明,B.rhodina A13人工诱导沉香(树脂)形成过程中,对白木香叶挥发性成分可产生一定影响。

多西他赛注射液对血管刺激性与溶血性试验研究

目的:观察多西他赛注射液是否具有血管刺激性、溶血反应。方法:家兔耳缘静脉注射多西他赛注射液高、低剂量组,每日一次,连续5次,每天给药前及最后给药后48h、96h对动物和注射部位进行肉眼观察耳局部血管刺激情况,停药96h后对注射部位做病理组织学检查;体外不同浓度的多西他赛注射液0.1～0.5ml在2%兔红细胞混悬液中放置15min～4h,观察对兔红细胞悬液的溶血作用及有无红细胞凝聚作用。结果:多西他赛注射液对家兔血管内皮没有损伤和刺激作用;对兔红细胞没有致溶血作用和凝聚作用。结论:多西他赛注射液用药血管没有刺激性反应,无溶血及红细胞凝聚现象。制剂有关安全性检测结果符合新药申报要求。

盐酸头孢他美酯中间体的合成

目的:通过设计出最佳工艺条件,提高产品质量、收率。方法:通过对头孢母核7-氨基-3-甲基-3-头孢烯-4-羧酸(7-ADCA)上7号位置上氨基侧链的改造,得到具有药用活性物质盐酸头孢他美酯的重要中间体——头孢他美酸。结果:经溶媒法析结晶并养晶后,将湿品减压干燥,得到质量、收率较好的头孢他美酸。结论:该工艺是合成盐酸头孢他美酯的重要中间体——头孢他美酸的较佳工艺,适合工业化规模生产。