细菌溶解产物在预防儿童肾病综合征频繁复发中的应用

目的观察细菌溶解产物(泛福舒)对预防儿童原发性肾病综合征(PNS)频繁复发的疗效,探讨其临床应用价值。方法选择诊断为PNS频繁复发型患儿50例,将其分为两组,对照组(22例)给予常规的泼尼松和(或)免疫抑制剂等综合治疗,观察组(28例)在常规的泼尼松和(或)免疫抑制剂治疗的同时加用泛福舒口服治疗6个月,观察6个月内两组患儿呼吸道感染次数、因呼吸道感染引起肾病复发次数以及尿蛋白由阳性转为阴性的时间。两组患儿在治疗前及治疗6个月后分别抽血查T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+及免疫球蛋白Ig A、Ig G、Ig E和Ig M的变化及服药期间的不良反应。结果观察组呼吸道感染次数、因呼吸道感染引起肾病复发次数以及尿蛋白由阳性转为阴性的时间较对照组均明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组与对照组比较,治疗前各项指标差异无统计学意义(P>0.05),治疗后CD3+、Ig M无明显变化(P>0.05),而观察组CD4+、CD4+/CD8+、Ig A、Ig G高于对照组,CD8+、Ig E低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组PNS完全缓解15例,部分缓解10例,无效3例;对照组完全缓解11例,部分缓解6例,无效5例,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于PNS频繁复发的患儿,使用糖皮质激素和(或)免疫抑制剂治疗的同时,加用泛福舒可提高其机体免疫力,减少患儿呼吸道感染的次数,延长PNS缓解的时间,能有效预防呼吸道感染诱发的原发性肾病频繁复发及减少尿蛋白,较安全且不良反应少。

肾小球足细胞自噬与PI3K/Akt信号通路的研究进展

自噬是细胞利用溶酶体降解自身受损的细胞器和大分子物质的过程,是广泛存在于自然界中的一种生命现象,对于维持细胞结构及功能的稳定性起着重要的作用。研究表明,参与多个生理及病理过程的PI3K/Akt信号通路是影响细胞自噬的重要信号通路之一。近年来研究发现,肾小球足细胞自噬活性水平以及足细胞病的产生都与PI3K/Akt信号通路存在密切关系。文章主要介绍肾小球足细胞自噬与PI3K/Akt信号通路的关系。

儿童肾病综合征红细胞分布宽度与肾功能损害的相关分析

目的探讨儿童肾病综合征(NS)的红细胞分布宽度(RDW)与肾功能损害的关系。方法收集168例NS患者作为观察组,根据e GFR分期分为三组,按照起病时长4月为界限分为两组;选健康儿童100例为对照组。检测各组血常规、肝肾功能等,采用SPSS 21.0软件进行统计分析。结果 1与对照组相比,NS患儿的RBC[(4.86±0.69)vs(4.32±0.48)],RDW[(13.39±1.69)vs(12.99±1.04)]升高,差异有统计学意义(P<0.05);2RDW在肾功能3期(14.60±1.36)较2期(12.84±0.79)升高,在起病时长≤4月患儿(13.66±1.78)较健康儿童(12.99±1.04)上升,差异有统计学意义(P<0.05);红细胞平均容积(MCV)在起病时长≤4月较对照组下降,起病时间>4月组较起病时长≤4月上升,差异有统计学意义(P<0.05)。结论儿童NS患者的RBC、RDW较健康儿童升高,RDW在肾功能3期较2期升高。

儿童肾病综合征血小板参数与肾损害的分析

目的探讨儿童肾病综合征（NS）的血小板相关参数与。肾功能损害的关系。方法选择168例NS患者作为观察组，根据估算肾小球滤过率（eGFR）分期分为3组，选健康儿童100例为对照组。检测各组血常规、肝肾功能等，采用SPSS21．0软件进行统计分析。结果①观察组患儿与对照组比较，血小板总数（PLT）f（407．38±114．53）×10^9／L：（312．44±120．98）×10^9/L升高，血小板平均容积（MPV）[（9．36±0．83）fl：（9．62±0．88）f1]降低，差异有统计学意义（P〈0．05）；②PLT、MPV、血小板分布宽度（PDW）在肾功能3个分期比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论儿童NS患者的PLT、MPV较健康儿童升高。

体液免疫及血管炎指标对HSP的诊断价值分析

目的分析儿童过敏性紫癜（HSP）患者的血管炎及免疫球蛋白等生物学指标，用ROC曲线评价目标生物学指标诊断HSP的价值。方法以2013年1月至2015年12月住院诊断HSP的66例患者为研究对象，另选取同期健康儿童60例为对照组。分析HSP患者的临床表现、过敏原检测结果；检测两组儿童血管炎四项[抗中性粒细胞胞浆抗体核周型（p-ANCA）、抗中性粒细胞胞浆抗体胞浆型（c—ANCA）、抗心磷脂抗体IgG（ACLIgG）、抗心磷脂抗体IgM（ACLIgM）]、体液免疫指标（IgE、IgA、IgM）、CRP、WBC、尿蛋白、尿红细胞等11项生物学指标。采用SPSS21．0软件进行受试者工作特征曲线（ROC）统计分析生物学指标对HSP的诊断价值。结果（1）HSP组IgE、IgA、p-ANCA、c—ANCA、ACLIgG、ACLIgM、WBC、尿蛋白、尿红细胞9项生物学指标均显著高于健康对照组（P〈0．05）；（2）ROC曲线分析结果提示血清IgA、尿红细胞的AUG均〉0．7，差异有统计学意义（P〈0．05）；（3）11项列入研究的生物学指标中，IgA的敏感度为0．875，特异度为1．000，最佳临界点是1．310。结论血清IgA、尿红细胞对诊断HSP有一定的诊断价值，其中IgA的诊断价值最高。

儿童肾脏病相关基因筛查的进展

近年来,随着人类对儿童肾脏病特定致病基因的深入研究,越来越多的致病基因被检测,这些基因被敲除或破坏时对肾脏病的发生发展产生重要影响。基因检测是在DNA水平或mRNA水平来鉴定个体是否携带致病基因的方法。目前突变基因分析和连锁分析是最常见的两种基因检测的方法。

环磷酰胺联合泼尼松治疗婴幼儿肾病综合征的疗效评价

目的探讨环磷酰胺联合泼尼松治疗婴幼儿肾病综合征(nephrotic syndrome,NS)的临床疗效。方法对2010年1月至2014年12月在本科收治住院的NS患儿61例进行回顾性分析,选取环磷酰胺联合泼尼松治疗的患儿29例作为治疗组,仅应用泼尼松治疗的患儿32例作为对照组。随访观察6个月,统计并分析治疗前和治疗6个月时两组患儿24小时尿蛋白定量等各项生化指标变化,并记录不良反应。结果治疗6个月时,治疗组24小时尿蛋白定量等各项生化指标较对照组降低,差异有显著性(P<0.05)。治疗组完全缓解18例,部分缓解4例,有效率76%,对照组完全缓解9例,部分缓解6例,有效率47%,两组有效率差异有显著性(P<0.05)。治疗组感染性疾病发生率明显少于对照组,但胃肠道反应发生率高于对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论环磷酰胺联合泼尼松治疗婴幼儿NS比单用泼尼松缓解率高,感染性疾病的发生率低,值得临床推广及应用。

他克莫司与环磷酰胺治疗儿童激素依赖/频复发型肾病综合征的效果比较

目的比较口服他克莫司(FK506)与环磷酰胺(CTX)静脉冲击治疗儿童激素依赖型肾病综合征(SDNS)/频复发型肾病综合征(FRNS)的临床效果及安全性。方法将38例SDNS/FRNS患儿分为FK506组21例和CTX组17例。FK506组在口服泼尼松基础上,加FK506口服,CTX组在口服泼尼松基础上,加CTX静脉冲击治疗。随访观察至少1年,比较两组治疗前后的复发频率、激素剂量的变化以及治疗6、12个月时各项生化指标的变化,并记录其不良反应。结果 (1)FK506组复发频率由(5.7±2.8)次/年降至(1.2±0.7)次/年,激素剂量由(37.9±15.3)mg/d降至(14.6±8.3)mg/d(P<0.01);CTX组复发频率由(4.8±2.5)次/年降至(1.0±0.6)次/年(P<0.01),激素剂量由(35.3±14.2)mg/d降至(12.4±7.8)mg/d(P<0.01);(2)两组患儿在治疗6、12个月时的各项生化值均较治疗前好转,差异有统计学意义(P<0.05),而同时间点组间比较差异无统计学意义(P>0.05);(3)FK506组2例患儿出现轻度胃肠道反应,CTX组4例患儿有不同程度胃肠道反应,1例外周血白细胞轻度下降,1例转氨酶轻度升高,给予对症处理后均好转,两组均未见严重感染。结论在治疗SDNS/FRNS中FK506与CTX在降低复发频率、协助激素减量等方面疗效相似。鉴于FK506治疗效果好、不良反应少及对性腺无损害的优势,尤其是青春期阶段的患儿,考虑选择FK506替代CTX治疗。

儿童肾病综合征患者外周血单个核细胞中IL-18和NF-κB表达及意义

目的探讨在活动期和缓解期激素敏感型肾病综合征(SSNS)患儿外周血单个核细胞(PBMC)中白细胞介素18(IL-18)和核因子-κB(NF-κB)检测的临床意义。方法将30例SSNS患儿治疗前和治疗后4周分为活动期组和缓解期组,20例健康儿童作为对照组,收集外周静脉血和24 h尿液,检测生化指标血清白蛋白、总胆固醇、三酰甘油、血尿素氮、血肌酐和24 h尿蛋白定量;提取PBMC,应用酶联免疫吸附试验方法检测上清液中IL-18和NF-κB的表达水平;比较各组IL-18和NF-κB浓度与24 h尿蛋白定量的相关性。结果活动期组与缓解期组生化指标及24 h尿蛋白定量比较差异均有统计学意义(P<0.05);活动期组与缓解期组比较,以及活动期组与对照组比较,IL-18浓度均明显下降(P<0.05),NF-κB浓度均显著下降(P<0.01);缓解期组与对照组比较,IL-18和NF-κB浓度差异均无统计学意义(P>0.05);且IL-18和NF-κB浓度均与24 h尿蛋白定量呈明显正相关(P<0.05)。结论儿童原发性肾病综合征的发病可能与PBMC分泌IL-18和NF-κB活性升高有关,监测IL-18和NF-κB浓度的变化或可作为观察儿童原发性肾病综合征活动的一个重要参考。

他克莫司对嘌呤霉素损伤的肾小球足细胞重组人帕金森蛋白7表达的影响

目的探讨嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)对小鼠肾小球足细胞(mouse podocyte clone 5,MPC-5)凋亡及重组人帕金森蛋白7(Parkinson's disease 7,Park7)表达的影响,以及他克莫司(tacrolimus,FK506)对MPC-5损伤的保护机制。方法体外培养MPC-5,分为空白对照组(对照组)、PAN组和FK506组。PAN组滴加PAN(浓度50 mg/L)构建MPC-5损伤模型,FK506组同时滴加PAN(浓度50 mg/L)和FK506(浓度5 mg/L)。分别于12、24、48 h在倒置显微镜下观察MPC-5的形态结构;采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;采用实时荧光定量PCR法检测Park7 mRNA的表达;采用Western blot、免疫荧光染色法检测Park7蛋白表达。结果对照组各时间点细胞体足突数量多,细胞之间连接紧密,呈正常形态;PAN组各时间点细胞体积较对照组明显缩小,细胞间连接松散,可见破碎细胞;FK506组各时间点细胞体积较PAN组增大,细胞之间的连接较紧密,形态好转。PAN组各时间点细胞凋亡率较对照组明显升高,FK506组各时间点细胞凋亡率较PAN组均下降(P<0.05)。PAN组各时间点的Park7 mRNA表达量均较对照组显著增高,FK506组各时间点Park7 mRNA表达量较PAN组均下降(P<0.05)。Western blot结果显示PAN组中各时间点Park7蛋白表达量均较对照组显著增高,FK506组各时间点Park7蛋白表达量较PAN组均下降(P<0.05)。免疫荧光染色显示PAN组Park7蛋白分布在细胞膜和细胞质中,较对照组明显增加,呈密集团状分布,荧光强度增加;FK506组Park7蛋白分布较PAN组明显降低。结论PAN作用于MPC-5可引起细胞形态结构损伤及凋亡,以及Park7 mRNA及其蛋白的表达上调;FK506可使MPC-5损伤模型的Park7 mRNA及其蛋白表达下调,维持细胞功能稳态,减轻蛋白尿,延缓肾小球硬化。

IVIG不敏感型川崎病循环内皮细胞、内皮细胞微粒检测的临床意义

目的探讨静脉注射免疫球蛋白(Intravenous immunoglobulin,IVIG)不敏感型川崎病中循环内皮细胞(Circulating endothelial cells,CECs)、内皮细胞微粒(Endothelial microparticles,EMPs)检测的临床意义。方法选取小儿川崎病患者55例为研究对象,分别在急性期、亚急性期和恢复期检测外周静脉血中CECs、EMPs及IL-6、TNF-α的水平,同时在疾病各个时期行心脏彩超检查,动态监测冠状动脉病变(Coronary artery lesions,CALs)情况。根据研究对象对IVIG敏感程度,选取IVIG不敏感型川崎病9例为观察组,随机选取18例IVIG敏感型川崎病为对照组,其中观察组根据病程中出现CALs与否分为CALs组5例、NCALs组4例,总结临床资料并统计分析。结果(1)观察组急性期、亚急性期CECs、EMPs水平高于同期对照组,差异有统计学意义(P<0.05);恢复期观察组与对照组CECs、EMPs水平差异无统计学意义(P>0.05)。(2)观察组在亚急性期CECs、EMPs、IL-6、TNF-α水平略低于急性期,但差异无统计学意义(P>0.05);其急性期及亚急性期以上指标明显高于恢复期,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)采用Spearman相关系数分析,观察组CECs与IL-6、TNF-α呈正相关(r=0.691,P<0.01;r=0.584,P<0.01);观察组EMPs与IL-6、TNF-α呈正相关(r=0.714,P<0.01;r=0.799,P<0.01)。(4)观察组中CALs组急性期及亚急性期CECs、EMPs、IL-6、TNF-α水平均高于同期NCALs组,差异有统计学意义(P<0.05);恢复期两组指标差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论IVIG不敏感型川崎病患者CECs、EMPs水平变化与全身中小血管炎密切相关,考虑外周静脉血CECs、EMPs检测可能有助于对川崎病患者出现IVIG不敏感的早期预测,有助于对IVIG不敏感型川崎病患者疗效评估及出现冠状动脉病变的早期判断。

L-NAME对围生期子鼠十二指肠球部肌层的影响

目的探讨N-硝基-左旋精氨酸甲酯(L-NAME)对围生期子鼠十二指肠球部肌层厚度及神经元型一氧化氮合酶(n NOS)表达的影响。方法选购成年Wistar大鼠按雌∶雄2∶1合笼,次日将其分开并取雌鼠阴道分泌物涂片镜检,发现精子的时间定义为妊娠第1天。将受孕的大鼠随机分成用药组和对照组,其中用药组给予L-NAME,并设定为3个剂量组(低剂量组、中剂量组和高剂量组),用药组孕鼠和围生期子鼠分别通过灌胃和注射给药,对照组选用等剂量的生理盐水,以同样的给药方式处理。围生期子鼠每天称重,记录数据,在出生第1、7和14天处死,留取标本,免疫组化法检测十二指肠球部n NOS的分布密度,HE染色后在显微镜下测量十二指肠球部肌层厚度。结果出生体重在各组间差异无统计学意义(P>0.05);在出生后第1周,用药组子鼠体重增加量较对照组降低(P<0.05);在出生后第2周,用药组子鼠体重增加量与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。子鼠7日龄各组间n NOS表达量差异无统计学意义(P>0.05),子鼠14日龄n NOS的表达量用药组明显高于对照组,但各用药组组间差异无统计学意义(P>0.05)。子鼠十二指肠球部肌层的厚度,7日龄或14日龄用药组与对照组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 L-NAME可诱导围生期子鼠十二指肠球部肌层n NOS活性增高及表达量增加,保持十二指肠球部的肌层厚度不受影响。

40例婴儿巨细胞病毒性肺炎的临床分析

目的通过回顾婴儿巨细胞病毒(CMV)性肺炎的临床症状、实验室结果、影像学检查及治疗效果等,探讨婴儿CMV肺炎的临床与诊治特点、提高临床儿科医师对该病的认识。方法分析2015年10月至2020年1月本院南沙分院儿科及新生儿科收治的40例婴儿CMV肺炎。并分别对其治疗前后临床资料、临床症状、实验室、影像学等结果及治疗效果进行汇总分析。临床资料包括患儿的性别、年龄及发病季节等;实验室检查包括血常规、肝功能、血CMV-免疫球蛋白M(IgM)抗体及血CMV-DNA;影像学资料包括胸部平片、肺部CT和头颅核磁共振、脑干听觉诱发电位、视网膜病变筛查等;并在肺炎的基础治疗下均给予更昔洛韦注射液抗病毒治疗,并进行临床疗效分析。结果40例患儿中,男性20例(50.0%),女性20例(50.0%);年龄1~6个月有37例(92.5%);春季发病5例(12.5%)、夏季12例(30.0%)、秋季13例(32.5%)、冬季10例(25.0%)。临床表现为咳嗽38例(95.0%)、发热6例(15.0%)、喘息10例(25.0%)、呼吸困难5例(12.5%),肺部听诊可闻及啰音有17例(42.5%)。所有患儿均接受更昔洛韦抗病毒治疗,治疗后血常规、肝功能等生化指标明显改善,血CMV-DNA定量治疗后显著降低[(0.058±0.021)×10^(3)拷贝/ml比(12.400±7.030)×10^(3)拷贝/ml](P<0.05),血CMV-IgM抗体转阴率为95.0%(38/40),治疗总有效率为92.5%(37/40)。治疗期间未见明显药物不良反应。结论本研究发现婴儿CMV肺炎主要发病年龄为6个月以内,主要发病季节为夏秋冬季;主要症状为咳嗽、喘息和发热;合并肺外器官损害最常见的有肝脏和血液系统,少数有听力、视力和脑发育的损害;CMV感染的治疗首选更昔洛韦抗病毒治疗,疗效好,安全有效,不良反应少,值得临床推广使用。

儿童川崎病合并肺炎支原体感染48例临床分析

目的分析48例川崎病(KD)合并肺炎支原体(MP)感染患儿的临床特征、实验室检测指标水平的变化。方法回顾性分析2012年1月至2018年12月在广州市越秀区儿童医院住院的108例KD患儿资料,其中KD合并MP感染者48例(感染组),KD未合并MP感染者60例(非感染组),对其性别、年龄、发热体温、发热时间、球结膜充血、口唇干裂、杨梅舌、口腔粘膜充血、躯干皮疹、四肢红斑、四肢水肿、肛周脱皮、颈部淋巴结肿大等临床特征以及白细胞计数(white blood cell,WBC)、中性粒细胞(neutrophils,N)、淋巴细胞(lymphocyte,L)、中性粒细胞与淋巴细胞比(neutrophils/lymphocyte,N/L)、血红蛋白(hemoglobin,Hb)、血小板(platelet,PLT)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、血清淀粉样蛋白(serum amyloid protein,SAA)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、肌酸激酶(creatinekinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CKMB)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-hydroxybutyrate dehydrogenase,HBDH)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、白蛋白(albumin,ALB)、总蛋白(total protein,TP)、免疫球蛋白A(immunoglobulin A,IgA)、免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)、免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)等实验室指标水平进行比较。结果(1)两组患儿之间年龄和性别比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。(2)两组患儿临床特征(体温、发热时间、球结膜充血、口唇干裂、杨梅舌、口腔黏膜充血、躯干皮疹、四肢红斑、四肢水肿、肛周脱皮、颈部淋巴结肿大)比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。(3)两组患儿血常规中WBC、N、L、N/L、Hb、PLT水平以及CRP、SAA、PCT、ESR、CK、LDH、HBDH、AST、ALT、ALB、TP水平之间比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。感染组患儿CKMB为(42.92±5.71)U/L、IgA为(1.02±0.84)g/L、IgG为(7.87±3.05)g/L、IgM为(1.34±0.63)g/L,未感染组分别为(30.84±7.23)U/L、(0.82±0.80)g/L、(6.87±3.79)g/L、(1.02±0.55)g/L,两组患儿的CKMB、IgA、IgG、IgM比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),且均表现为感染组较非感染组高。是否合并MP感染与IgA、IgG、IgM水平有关联(均P<0.05),而且IgM的相关性最高(β=0.23,P=0.005)。结论川崎病合并肺炎支原体感染容易引起心肌酶升高以及免疫功能紊乱,临床治疗中需要监测患儿心功能及免疫功能。

经鼻加温加湿高流量氧疗在重症毛细支气管炎 患儿辅助通气治疗中的应用

目的研究探讨经鼻加温加湿高流量氧疗在重症毛细支气管炎患儿辅助通气治疗中的应用效果。方法选取于2019年1月—2020年1月间收治住院的重症毛细支气管炎患儿40例为研究对象,按随机分配原则分为观察组和对照组,每组各20例。所有患儿均根据病情给予常规的药物治疗,其中观察组给予经鼻加温加湿高流量氧疗,对照组给予传统吸氧治疗。评估对比两组患儿的临床疗效,并对两组患儿治疗前、治疗6 h、治疗24 h及停氧前的心率(HR)、呼吸(RR)、经皮血氧饱和度(TcSO2)、动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、pH值、氧合指数(OI)变化进行比较,以及对两组患儿肺部啰音吸收时间、无创通气时间、有创通气比例、并发症发生率等进行统计对比。结果观察组总有效率为95.00%高于对照组的70.00%,(P<0.05)。在治疗6 h、治疗24 h及停氧前观察组HR、RR、PaCO2均低于对照组,而TcSO2、PaO2、OI、pH值均高于对照组,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组肺部啰音吸收时间、无创通气时间、有创通气比例均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组、对照组并发症发生率分别为10.00%、25.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论经鼻加温加湿高流量氧疗在重症毛细支气管炎患儿辅助通气治疗中的效果良好,能够改善患儿的通气功能,治疗安全性良好,值得临床推广应用。

嘌呤霉素诱导足细胞凋亡与CD2相关蛋白和磷脂酰肌醇3-激酶p85异常表达的意义

目的观察嘌呤霉素（PAN）对足细胞凋亡率、足细胞分子CD2相关蛋白（CD2AP）和磷脂酰肌醇3-激酶（P13K）p85表达的影响，探讨CD2AP异常表达在足细胞凋亡中的意义。方法体外培养小鼠肾小球足细胞系，设立对照组及PAN刺激组，处理后8h、24h和48h观察细胞形态并摄像，采用流式细胞仪检测足细胞凋亡率，实时荧光定量PCR检测CD2APmRNA的表达，Westernblot法检测CD2AP和P13Kp85蛋白的表达，间接免疫荧光标记在共聚焦显微镜下观察CD2AP与P13Kp85的共定位分布。结果PAN刺激后足细胞胞体缩小，出现足突回缩至逐渐消失，失去细胞间连接；与对照组比较，PAN组足细胞24h和48h凋亡率[（7．52±1．35）％、（17．09±2．53）％比（4．32±0．81）％、（6．81±1．34）％]均明显升高，差异均有统计学意义（t=4．98、8．79，P均〈0．05）；PAN刺激组CD2APmRNA表达各时间点均较对照组明显降低（0．34±0．12、0．46±0．21、0．47±0．10比0．62±0．23、0．97±0．14、0．96±0．23），差异均有统计学意义（t=2．64、4．95、4．79，P均〈0．05）；24h和48hCD2AP（0．36±0．12、0．27±0．15比0．64±0．23、0．51±0．20）与P13Kp85（0．61±0．20、0．48±0．20比0．97±0．31、0．84±0．35）蛋白表达均显著降低，差异均有统计学意义（t=2．64、2．35、2．31、2．40，P均〈0．05）；CD2AP在足细胞的分布由均匀细丝状分布于胞质足突及核内转为不连续粗颗粒状集中分布于核周，CD2AP与P13Kp85的共定位关系也明显异常。结论PAN诱导足细胞凋亡过程中CD2AP和P13Kp85表达及分布异常，说明CD2AP可能通过P13K通路在足细胞的凋亡中起重要作用。

地塞米松对肾小球足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6表达和分布的影响

目的以嘌呤霉素（PAN）损伤足细胞，以地塞米松（DEX）干预，观察不同时间点瞬时受体电位阳离子通道蛋白6（TRPC6）表达和分布的变化，探讨在足细胞损伤过程中，DEX对TRPC6表达与分布的影响及与足细胞损伤的关系。方法体外培养足细胞，设立对照组、PAN刺激组和DEX干预组。对照组用含0．02％二甲亚砜（DMSO）的RPM11640培养液培养，PAN刺激组加入PAN（50μg／m1），DEX干预组同时加入PAN（50μg/m1）和溶解于0．02％DMSO的DEX（1μmol/L），处理8h、24h、48h后观察细胞形态并拍摄，采用图像处理软件分析各组细胞形态及胞体面积的差别。采用流式细胞仪检测足细胞凋亡率，采用实时荧光定量PCR、Western印迹和间接免疫荧光染色检测各时间点TRPC6的mRNA、蛋白表达及分布变化。结果经PAN刺激后细胞体显著缩小（P〈0．05），足突回缩、消失，细胞间失去相互连接，刺激后48h足细胞凋亡率显著升高（P〈0．05）。PAN刺激组在刺激24h和48h后TRPC6mRNA及蛋白表达量显著上升（P〈0．05），TRPC6在足细胞上的分布亦出现异常。DEX干预后细胞胞体显著大于PAN刺激组（P〈0．05），可维持正常的足突形态；干预48h后足细胞凋亡率显著低于PAN刺激组，TRPC6mRNA及蛋白的表达、分布均趋于正常水平。结论DEX通过稳定重要的足细胞分子TRPC6的表达及分布来抑制足细胞损伤，从而发挥保护足细胞和抗蛋白尿的作用。

嘌呤霉素损伤小鼠肾小球足细胞系中足细胞α-辅肌动蛋白4的表达与分布

目的观察嘌呤霉素（PAN）对足细胞α-辅肌动蛋白4（α-actin-4）mRNA表达和分布的影响，探讨α-actin-4与足细胞损伤的关系。方法将体外培养肾小球足细胞系（MPC5）随机分为实验组与对照组。实验组采用PAN刺激（剂量为50mg／L），分别于8h、24h和48h观察细胞形态，提取总RNA和细胞免疫组织化学观察α-actin-4的分布。对照组用100mL／LFBS的RPMI1640培养液培养。应用Image J图像软件处理细胞图像，计算2组随机选择的30个细胞在上述3个时间点200倍镜下的细胞相对面积，实时定量荧光聚合酶链反应（RT—PCR）和间接免疫荧光法检测α-actin-4mRNA表达和分布变化。结果对照组足细胞生长情况良好，胞体呈不规则星形，与增殖状态足细胞比较，细胞体和细胞核均显著增大，自胞体伸出树枝样突起，相邻细胞问足突相互连接。实验组细胞胞体缩小，足突回缩、消失，细胞间失去相互连接。2组间α-ctin-4mRNA各时间点表达比较，8h差异无统计学意义（P＞0．05），24h、48h差异有统计学意义（P均＜0．01），实验组在24h、48h后α-actin-4mRNA表达升高。对照组α-actin-4在胞质内呈细丝状均匀分布，在足突中呈放射状分布；8h后在实验组α-actin-4压力丝纤维变短，排列紊乱，PAN刺激24h后细胞质中α-actin-4分布明显减少，刺激48h后出现细胞质分布缺失。结论α-actin-4表达分布的异常与PAN损伤足细胞的时间呈正相关，α-actin-4是足细胞损伤机制中的一个重要分子。

基于siRNA技术的TRPC6基因沉默对血管紧张素Ⅱ诱导的足细胞自噬和凋亡的影响

目的采用小分子干扰RNA(siRNA)干扰技术沉默足细胞相关分子瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的自噬和凋亡的影响。方法设计、构建siRNA,转染足细胞,使TRPC6基因沉默,采用流式细胞术、激光共聚焦、透射电镜及Western Blot技术检测不同浓度siRNA转染后TRPC6基因表达,优化获得TRPC6基因沉默最佳效果的条件。体外培养小鼠肾小球足细胞,设立对照组、AngⅡ组、空载体组、沉默TRPC6基因组和AngⅡ+沉默TRPC6基因组。对照组用含0.02%DMSO的RPMI 1640培养液培养;AngⅡ组加入AngⅡ(10^(-8)M)刺激足细胞;空载体组加入空载体至足细胞;沉默TRPC6基因组运用siRNA干扰技术沉默TRPC6基因;AngⅡ+沉默TRPC6基因组同时加入AngⅡ(10^(-8)M)及沉默TRPC6基因。处理12、24 h和48 h后分别收集细胞,采用流式细胞仪检测足细胞凋亡率,Western Blot检测TRPC6及自噬相关蛋白的表达,透射电镜及激光共聚焦电子显微镜观察自噬相关蛋白的分布。结果自噬在正常足细胞的表达量很微弱,AngⅡ组足细胞凋亡率明显升高,沉默TRPC6使足细胞凋亡率明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。透射电镜下AngⅡ组示足细胞超微结构发生改变,自噬表达增加,胞质中出现独立双层膜结构,胞质成分及溶酶体等细胞器形成双层及多层膜结构的自噬体。沉默TRPC6使自噬表达下降,与AngⅡ组比较差异有统计学意义(P<0.05)。激光共聚焦检测AngⅡ组LC3-Ⅱ的表达增加,沉默TRPC6使LC3-Ⅱ表达趋于稳定,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论AngⅡ促进足细胞的凋亡,沉默TRPC6基因能有效保护AngⅡ诱导的肾小球足细胞损伤,发挥保护足细胞的作用。

足细胞相关分子在多柔比星肾病大鼠模型中mRNA的表达及意义

目的探讨。肾小球足细胞相关分子podocin、nephrin、CD2AP和α-actin-4在多柔比星肾病（ADN）大鼠模型肾皮质部的mRNA表达及意义。方法建立ADN大鼠模型，实验分为模型组（ADN组，24只）和对照组（正常大鼠组，24只），模型组经尾静脉注射多柔比星6．5mg／kg，对照组注射等量9g／L盐水，分别在1、2、4和6周各处死6只大鼠，并观察各项指标的变化：（1）24h尿蛋白定量、血浆清蛋白（Alb）和总胆固醇（TC）；（2）采用荧光定量PCR检测肾皮质部podocin、nephrin、CD2AP和α-actin-4的mRNA表达。结果模型组出现高蛋白尿，在1、2、4、6周时分别为（15．66±1．50）mg／24h、（45．98±1．45）mg／24h、（65．58±4．68）mg／24h、（82．83±8．43）mg／24h；低清蛋白血症，在1、2、4、6周时分别为（27．4±2．5）g／L、（23．6±2．9）g／L、（20．6±1．5）g／L、（6．9±2．3）g／L；高脂血症，在1、2、4、6周时分别为（2．00±0．25）mmol／L、（2．16±0．44）mmol／L、（4．02±0．81）mmol／L、（7．54±1．12）mmol／L，各时间点蛋白尿、血浆清蛋白及总胆固醇与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）。表现为典型的肾病综合征。模型组podocin在肾皮质部的mRNA表达1周（10．56±3．62）时开始下降，2周（20．44±9．03）时明显下降，4周（2．19±0．18）后较对照组下降；模型组neph—rin的mRNA表达1周（2．41±1．10）时下降达峰值，4周（0．52±0．18）后下降；模型组CD2AP的mRNA表达1周（4．17±0．79）时无明显改变，2周（6．74±1．53）时下降，4周（6．91±1．13）时下降达峰值，6周（4．04±0．82）时无明显改变；模型组α-actin-4的mRNA表达1周（1．75±0．48）时无明显改变，2周（2．01±0．55）时下降，4周（2．24±0．81）时下降达峰值，6周（1．39±0．18）时无明显改变，与对照组比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论足细胞相关分子在ADN大鼠模型中mRNA表达异常，可能是蛋白尿发生发展的关键因素之一。