乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞体外分离培养方法的优化

目的优化SD乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的体外分离培养的条件和方法。方法分别用胰酶、Ⅱ型胶原酶依次消化分离心肌组织,再通过两次差速贴壁分离法分别收集、培养乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞。光学显微镜下分别观察心肌细胞和心肌成纤维细胞的基本形态特征的变化,原代心肌细胞行心肌肌钙蛋白免疫荧光鉴定,而心肌成纤维细胞则用第2代行波形蛋白免疫荧光鉴定。结果心肌细胞在2~4 h开始贴壁生长,12~24 h贴壁速率大幅增加,并出现自发性搏动,48~72 h心肌细胞粘合成簇,细胞成活率,纯度均达95%以上;心肌成纤维细胞第2~4代细胞生长良好,纯度高达98%以上。结论此种方法可得到产量大,纯度高,活力好的心肌细胞和心肌成纤维细胞,为心血管疾病的基础与临床研究提供了理想的实验模型。

冠心病患者冠状动脉病变程度与胰岛素抵抗的相关性研究

目的:探讨冠心病(CHD)患者不同冠状动脉(冠脉)病变程度与胰岛素抵抗(IR)的关系。方法:128例冠脉造影检查者,根据冠脉病变支数,分为单支病变组、双支病变组、多支病变组和正常对照组。测量血压、身高、体重、腰围(WC)和臀围。抽取空腹静脉血,测定血浆胰岛素(FINS)、血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A1(Apo-A1)和载脂蛋白B(Apo-B)。计算体重指数(BMI)、腰臀比(WHR)、HOMA-胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和Gensini积分。结果:CHD各组HOMA-IR和FINS均显著高于对照组(P<0.05)。在CHD各组,随冠脉病变支数和Gensini积分增加,HOMA-IR和FINS也增加。HOMA-IR与SBP、DBP、WC、BMI、WHR、TC、LDL-C、Apo-B、FPG、FINS、Gensini积分均呈显著正相关(P<0.05)。校正年龄、血压、血糖、血脂、肥胖等影响后,HOMA-IR仍与Gensini积分呈显著正相关(P<0.01)。线性回归分析显示Gensini积分、BMI、FPG是影响HOMA-IR的独立因素;FINS、BMI、HOMA-IR、年龄、DBP是影响Gensini积分的独立因素。结论:CHD患者存在IR,CHD患者的IR状态与冠脉病变程度密切相关。

冠心病患者冠状动脉病变程度与抵抗素的相关性研究

目的探讨冠心病患者冠状动脉病变程度与抵抗素水平及其与胰岛素抵抗的关系。方法冠状动脉造影检查者共84例作为研究对象,根据冠状动脉病变支数,分为单支病变组、双支病变组、多支病变组和冠状动脉造影正常组(对照组)。测量血压、身高、体质量、腰围和臀围。抽取空腹静脉血,测定空腹血清抵抗素(FSR)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A1(Apo-A1)和载脂蛋白B(Apo-B)。计算体质量指数(BMI)、腰臀比(WHR)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)和Gensini积分。结果冠心病单支、双支、多支病变组各组FSR水平分别为(11.25±2.45)mg/L、(10.36±1.99)mg/L、(12.54±2.62)mg/L,均高于对照组(9.56±2.02)mg/L(P<0.01)。冠心病单支、双支、多支病变组各组HOMA-IR分别为4.72±2.25、6.00±3.43、8.78±4.54,亦均高于正常对照组,3.35±1.39(P<0.01)。均衡年龄、血压(收缩压、舒张压)、FPG、血脂(TG、TC、HDL-C、LDL-C、Apo-A1、Apo-B)、肥胖白细胞[(WC、BMI、WHR)]影响因素后进行偏相关分析,FSR仍与Gensini积分呈显著正相关(P<0.01)。多元逐步线性回归分析显示:病变支数、HOMA-IR是影响FSR的独立因素,病变支数、FSR是影响Gensini积分的独立因素。结论冠心病各组FSR水平高于正常对照组;FSR与冠状动脉病变程度密切正相关,HOMA-IR是影响FSR的独立因素。

心肌细胞的培养鉴定及β3-AR蛋白提取方法的比较

目的优化培养乳鼠心肌细胞的技术,筛选出简便、准确、特异的提取心肌细胞β3-肾上腺素能受体(β3-AR)膜蛋白的方法。方法使用Ⅱ型胶原酶和差速贴壁法收集心肌细胞,分别用总蛋白法、超速离心法、试剂盒法提取心肌细胞β3-AR膜蛋白;BCA法进行蛋白定量;Western blot法检测蛋白样品中β3-AR和GAPDH相对含量及提取蛋白的特异性。结果优化心肌细胞的培养方法可以使所得细胞产量大、浓度高,满足后续实验。试剂盒法提取蛋白的浓度(8.26±0.29)g/L>总蛋白法提取法的(5.12±0.47)g/L>超速离心法的(3.20±0.37)g/L,差异均有统计学意义。Western blot检测结果示,试剂盒提取法所得β3-AR膜蛋白含量(0.22±0.05)>超速离心法(0.09±0.03)>总蛋白提取法(0.01±0.01),差异均有统计学意义。结论优化培养心肌细胞的方法可获得高产量、高纯度的细胞。试剂盒提取法可有效提高β3-AR膜蛋白的浓度和特异性。

慢性心力衰竭合并肾功能不全相关危险因素分析

目的分析慢性心力衰竭(CHF)患者合并肾功能不全的临床特点,探讨CHF患者伴发肾功能不全的危险因素。方法收集就诊于本院心内科的CHF患者385例,其中男性211例,女性174例,平均年龄69.62±8.59岁。采用回顾性对照研究的方法,按照肾小球滤过率估计值(eGFR)将CHF患者分为肾功能不全组[eGFR<60 mL/(min·1.73 m^2)]和非肾功能不全组[eGFR≥60 mL/(min·1.73 m2)]。分析比较两组患者的一般资料、心脏基础疾病、伴随疾病、对比剂应用史、心脏超声参数、肾功能指标、血脂、N末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)、D-二聚体、血红蛋白、尿微量白蛋白等实验室检查结果。多因素Logistic回归分析CHF患者合并肾功能不全的危险因素。结果385例CHF患者中合并肾功能不全的发生率约为42.1%。单因素分析结果显示,年龄、NYHA心功能分级、高血压病、贫血、糖尿病、心房颤动在肾功能不全组和非肾功能不全组之间的差异有统计学意义(P<0.05);肾功能不全组血清肌酐、尿素氮、尿酸、胱抑素C和NT-proBNP水平较非肾功能不全组升高;左心室射血分数和血红蛋白水平较非肾功能不全组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄(OR 1.543,95%CI1.067~2.231)、NYHA心功能分级(OR 1.840,95%CI 1.054~3.212)、高血压病史(OR 1.967,95%CI 1.175~3.292)以及胱抑素C(OR 1.989,95%CI 1.027~3.851)与肾功能不全的发生独立相关。结论 CHF患者合并肾功能不全的发生率较高,高龄、NYHA心功能Ⅳ级、高血压病史以及血清高胱抑素C水平是CHF患者合并肾功能不全的独立危险因素。

苯肾上腺素对腹主动脉缩窄诱导心肌间质纤维化的影响

目的观察苯肾上腺素对腹主动脉缩窄导致心肌纤维化的作用及可能机制。方法雄性昆明（KM）小鼠42只,体重24-30 g,其中28只采用腹主动脉缩窄术（AAC）建立压力超负荷诱导心肌反应性纤维化的动物模型,8周后将模型小鼠随机分为4组,AAC组、苯肾上腺素（PE）组（AAC＋PE组）、哌唑嗪（Praz）组（AAC＋Praz组）和普萘洛尔（Prop）组（AAC＋Prop组）,每组7只,其中AAC＋PE组给予PE 0.65 mg/（kg·d）腹腔注射,AAC＋Praz组予Praz 5 mg/（kg·d）灌胃,AAC＋Prop组给予Prop 10 mg/（kg·d）灌胃,AAC组给等量生理盐水灌胃,连续4周;另设空白对照组及假手术组各7只,其中假手术组只分离腹主动脉而不结扎,二组均给予等量生理盐水持续灌胃。给药4周后处死动物,取左心室游离壁组织,HE染色观察组织细胞形态学变化,胶原容积分数（CVF）、羟脯氨酸（Hyp）含量测定及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白免疫组化染色观察心肌胶原,Western blot方法测定α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1（TGF-β1）、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达。结果 ACC术后12周小鼠心脏均发生明显纤维化,与空白对照组相比,CVF、Hyp含量显著升高（P〈0.01）,Ⅰ、Ⅲ型胶原表达增多（P〈0.01）,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2及p-Smad3蛋白表达增加（P〈0.01）,假手术组CVF、Hyp含量以及α-SMA、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3蛋白表达和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量变化不明显。与AAC组比较,AAC＋PE组和AAC＋Prop组左心室CVF、Hyp含量及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达均明显减少（P〈0.01）,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3的蛋白表达水平降低（P〈0.05）,而AAC＋Praz组上述各指标无明显变化（P〉0.05）;AAC＋PE组与AAC＋Prop组相比,上述指标均无统计学差异（P〉0.05）。结论苯肾上腺素可能通过TGF-β1/Smads信号通路改善压力超负荷介导的小鼠心肌间质纤维化,其作用与普萘洛尔相似。

酚妥拉明对心肌重构大鼠心肌细胞外基质的影响

目的探讨酚妥拉明对去甲肾上腺素诱导大鼠心肌肥厚心肌细胞外基质(ECM)重塑的影响及可能机制。方法 24只雄性SD大鼠随机分为对照组、去甲肾上腺素造模组(模型组)和去甲肾上腺素+酚妥拉明组(治疗组)。采用超声心动图观察心脏结构及功能变化,测定胶原容积积分(CVF)、羟脯氨酸、心肌胶原含量,用免疫组织化学法检测心肌组织基质金属蛋白酶2和胶原蛋白Ⅰ的蛋白表达。结果模型组大鼠发生左心室肥厚,其羟脯氨酸含量、CVF值显著高于对照组(P<0.01),基质金属蛋白酶2和胶原蛋白Ⅰ蛋白表达上调(P<0.01)。治疗组心肌肥大明显改善,羟脯氨酸、CVF降低,基质金属蛋白酶2和胶原蛋白Ⅰ蛋白表达下降(P<0.05)。结论酚妥拉明可有效减轻SD大鼠心肌肥厚的发生及ECM重塑;酚妥拉明缓解ECM重塑可能与其降低心肌组织中基质金属蛋白酶2和胶原蛋白Ⅰ的表达有关。

CD20^+细胞的含量和HMGB1与心肌缺血的相关性

目的探讨脾脏组织CD20^+细胞的含量和心肌高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)与小鼠心肌缺血的相关性。方法 50只成年雄性C57BL/6小鼠,随机分为正常组(NC组)、正常+抗HMGB1抗体组(NC+抗HMGB1抗体组)、心肌缺血组(MI组)、心肌缺血+IgG抗体组(MI+IgG抗体组)、心肌缺血+抗HMGB1抗体组(MI+抗HMGB1抗体组),每组各10只。采用腹腔注射高剂量异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)法,建立小鼠急性心肌缺血模型。于第7天腹腔注射ISO 12h后,分别予以IgG抗体、抗HMGB1抗体腹腔注射。心脏超声检测小鼠心功能;苏木精-伊红染色、天狼星红染色观察心肌组织病理学变化;免疫组化测定心肌HMGB1表达;原位末端标记法检测心肌细胞凋亡指数;流式细胞术检测各组小鼠脾脏组织中CD20^+细胞含量。结果与NC组相比,MI组心肌组织明显损伤、纤维化加重,凋亡指数升高,射血分数和左室短轴缩短率降低,脾脏组织中CD20^+细胞含量升高(均P<0.05);与MI组相比,MI+IgG抗体组心肌组织损伤减轻不明显、纤维化无减少,凋亡指数、射血分数和左室短轴缩短率、脾脏组织中CD20^+细胞含量等均无明显变化(均P>0.05);与MI组相比,MI+抗HMGB1抗体组心肌组织损伤减轻、纤维化减少,射血分数和左室短轴缩短率升高,凋亡指数、脾脏组织中CD20^+细胞含量均降低(均P<0.05)。结论 CD20^+细胞含量的变化在心肌缺血的发展中起着重要作用,抗HMGB1抗体对心肌缺血具有保护作用,其保护机制可能与抗HMGB1抗体抑制了CD20^+细胞活化,减轻心肌缺血过程中的免疫反应有关。

miRNA在缺血性心脏病的诊断和治疗新进展

微小RNA(microRNA,miRNA)是一类约含22个核苷酸的非编码小分子单链RNA分子,可通过与靶基因的3′端非翻译区上的相应靶位点结合,抑制或降解特定的靶基因,从而发挥调节蛋白质合成的作用,参与炎症、发育、凋亡、肿瘤等多种生理病理过程。近年来研究发现,miRNA对缺血性心脏病的诊断及治疗有着重要作用。现就miRNA在缺血性心脏病的诊断及治疗的新进展作一综述。

哺乳期急性心肌梗死一例

1临床资料 患者女,39岁,维吾尔族。主诉＂反复胸闷、胸痛1年,加重10 d＂入院。患者自诉2013年8月9日因生产完第10个小孩后（哺乳期1个月时）突然出现胸闷、胸痛不适,位于胸骨后,呈闷胀样痛,持续不缓解,伴有心悸、气短不适症状,

心血管内科引入循证医学教学应用及实施措施

本文作者主要介绍了什么是循证医学、验证此教学模式有异性的方法、并对此种方法进行了探讨,最后得出了相关结论。循证医学为一种新型的教学模式,有利于学生的学习,作者希望通过自己的介绍,让大家更为了解,使其得到推广。

原发性高血压病患者血压变异性与脑梗死的关系研究

目的分析原发性高血压病患者血压变异性与脑梗死的关系。方法选择2011年1月—2012年7月在新疆石河子大学医学院第一附属医院心内科住院的189例原发性高血压病患者为研究对象,根据有无脑梗死分为原发性高血压病无脑梗死者65例(A组)、原发性高血压病合并无症状脑梗死者67例(B组)和原发性高血压病合并有症状脑梗死者57例(C组),均行24 h动态血压监测,比较3组患者的一般资料、平均血压及血压变异性。结果 B、C两组患者年龄均高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。B、C两组患者的24 h平均收缩压(24 hSBP)、24 h平均舒张压(24 hDBP)、日间平均收缩压(dSBP)、日间平均舒张压(dDBP)、夜间平均收缩压(nSBP)、夜间平均舒张压(nDBP)均高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。B、C两组患者的24 h平均收缩压变异性(24 hSBPV)、日间平均收缩压变异性(dSBPV)均高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论年龄较大的原发性高血压病患者平均血压和24 hSBPV、dSBPV升高是并发脑梗死的危险信号,临床应引起注意。

原发性高血压患者清晨血压升高与血浆内皮素和血管紧张素Ⅱ的相关性研究

目的探讨原发性高血压患者清晨血压升高与血浆内皮素(ET)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的关系。方法选取原发性高血压患者180例根据清晨血压是否升高分为晨峰组(MBPS组,83例)和非晨峰组(Non-MBPS组,97例)。用放射免疫法测定两组的血浆ET和AngⅡ水平,分析两组间的血浆ET和AngⅡ水平差异,并分别分析两组中的血浆ET、AngⅡ水平与24 h动态血压监测结果的相关性。结果 MBPS组血浆ET、AngⅡ水平〔(82.53±12.24),(78.82±32.47)pg/ml〕高于Non-MBPS组〔(75.56±3.74),(59.34±31.72)pg/ml〕,差异有统计学意义(P<0.05)。在MBPS组中,血浆ET与24 h平均舒张压、白昼平均舒张压、夜间平均舒张压、清晨舒张压增高值、清晨(6:00～10:00)平均舒张压呈正相关性;血浆AngⅡ与24 h平均收缩压、白昼平均收缩压、夜间平均收缩压、清晨收缩压增高值、清晨(6:00～10:00)平均收缩压呈正相关性。Non-MBPS组血浆ET、AngⅡ与24 h动态血压监测结果各参数差异无统计学意义。结论原发性高血压患者中MBPS组血浆ET、AngⅡ水平明显高于Non-MBPS组。血浆ET、AngⅡ水平可能与清晨血压升高相关。

哈萨克族与汉族原发性高血压患者血浆脂联素水平的对比

目的:观察新疆哈萨克族、汉族原发性高血压患者血浆脂联素水平及其与胰岛素抵抗、血糖、血脂、血压及肥胖度指标的关系。方法:选取2005-05/10流行病学调查的新疆哈萨克族人127名及2005-09/2006-05在本院体检中心体检的汉族人131名为对象。根据血压水平,分为哈高血压组、哈对照组、汉高血压组、汉对照组。均取空腹静脉血,测定血浆脂联素、胰岛素、血糖、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A1、载脂蛋白B及肥胖度指标等进行比较。结果:纳入的256参与者全部进入结果分析。①哈、汉高血压组的血浆脂联素水平均明显低于相应的健康对照组(P<0.01)。②哈、汉高血压组间比较或哈、汉健康对照组间血浆脂联素水平比较,差异无显著性意义(P>0.05)。③哈、汉女性血浆脂联素水平均高于男性。④在哈族高血压组中,脂联素与收缩压、舒张压、腰围、体质量指数、血糖、腰臀比、胰岛素、稳态模型计算胰岛素抵抗、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B均呈显著负相关。⑤在汉族高血压组中,脂联素与收缩压、舒张压、腰围、体质量指数、腰臀比、血糖、胰岛素、稳态模型计算胰岛素抵抗、三酰甘油亦均呈显著负相关,与载脂蛋白A1呈显著正相关。⑥调整年龄、血糖、血脂、肥胖指标等影响因素后,两民族血浆脂联素水平仍与收缩压、舒张压、胰岛素、稳态模型计算胰岛素抵抗存在显著负相关。结论:哈、汉原发性高血压患者血浆脂联素水平均降低并与胰岛素抵抗、血压、血糖、血脂、肥胖度指标存在一定的相关性。