转基因动物乳腺生物反应器研究进展

文章综述了转基因动物乳腺生物反应器的原理、应用、优点、存在问题及国内外研究进展,并对其发展方向进行了小结及展望。

鸡传染性法氏囊病灭活疫苗接毒方法改进试验

利用鸡胚成纤维细胞生产鸡传染性法氏囊病(X株)灭活疫苗的过程中,生产规程要求在接毒时一般采用弃去原生长液,接种病毒后37℃吸附1 h,再加入维持液进行病毒增殖的方法。本试验通过直接接毒的方法进行病毒繁殖,并与吸附接毒法对比。结果表明,直接接毒法不论是抗原收获的时间还是病毒含量(TCID50),与传统吸附接毒法都无显著差异,且按直接接毒法生产的疫苗安全性检验全部合格,说明可用不换液直接接毒来进行(X株)灭活苗的生产。

不同接毒方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖效果比较

通过对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染Marc-145细胞4种不同接毒方法的比较研究,筛选出一种在规模化生产中既能保证毒价,又能减少工艺流程,提高工作效率,降低污染几率及生产成本的接种方法。结果表明,与其他方法相比,同步接毒法效果最佳,不仅毒价最高,而且繁殖毒液时间缩短,减轻了工作量,节省生产成本。

2种佐剂在猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗中的效果比较

为给猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗选择一种理想的佐剂,以增强机体对抗原的适应性免疫应答,协同提高动物免疫力。实验用水包油Merckinade SDA 25佐剂和双向Montanide ISA 206佐剂,分别按各自说明制备猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗,再对两种佐剂的疫苗进行稳定性、黏度、安全及效力检验,比较评价出猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗的理想佐剂。结果表明,两种佐剂疫苗的稳定性、黏度、安全均合格,无明显差异;但Montanide ISA 206佐剂疫苗较Merckinade SDA 25佐剂疫苗诱导抗体效价更高。据此,笔者认为,Montanide ISA 206佐剂是猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗比较理想的佐剂。

鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗冻干工艺探索

为筛选出理想的鸡传染性喉气管炎重组鸡痘病毒基因工程疫苗的冻干工艺,保证疫苗产品质量及免疫效果,更好地服务于畜牧业。本试验从冻干保护剂配方与冻干曲线入手,将含有0.8%、1.0%、1.2%、1.5%的明胶5%蔗糖保护剂分别与表达鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的重组鸡痘病毒(rFPV_ILTVgB)抗原按规定配比,分别在21、24.5、28 h的冻干曲线下完成冻干,并对冻干后的制品检测其效价、真空度、剩余水分及物理性状。结果表明,有1.0%明胶5%蔗糖保护剂24.5 h或28 h冻干曲线和1.2%明胶5%蔗糖保护剂28 h的冻干曲线三种冻干工艺,其制品效价、真空度、剩余水分、物理性状均符合标准。因而采用1.0%明胶5%蔗糖的保护剂配方及24.5 h的冻干曲线是该制品较为理想的冻干工艺。

甲醛灭活猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液的最佳条件研究

为探究甲醛对猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液最佳的灭活条件,本试验采用10%的甲醛溶液与猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液混匀,使甲醛终浓度分别达到0.05%、0.07%、0.10%、0.15%、0.20%,在4~8℃下经过不同时间的灭活,通过对灭活液不同时间点的无菌检验及灭活检验,综合判定灭活效果。结果显示:猪圆环病毒2型基因工程亚单位疫苗抗原液在甲醛终浓度为0.07%时灭活72h,或甲醛终浓度为0.10%和0.15%时灭活60h,或甲醛终浓度为0.20%时灭活48h,均取得可靠的灭活效果。考虑到甲醛的毒副作用,笔者认为4~8℃下用0.07%甲醛终浓度灭活72h是比较理想的灭活条件。

陕西省PRRSV与CSFV、PCV2、PRV混合感染的检测

运用RT-PCR和PCR技术对高热病期间陕西西安、宝鸡、渭南、榆林、汉中、商洛等地区猪场送检的146份样品进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪伪狂犬病毒(PRV)检测。结果显示:被检样品中PRRSV的阳性率达46.6%(68/146);PRRSV与CSFV、PCV2和PRV 3种病毒均有混合感染现象,PRRSV+CSFV混合感染率为25%(17/68),PRRSV+PCV2为19.1%(13/68),PRRSV+PRV为4.4%(3/68),PRRSV+PCV2+CSFV为14.7%(10/68),PRRSV+PCV2+CSFV+PRV为2.9%(2/68)。结果表明以PRRSV为主要病原的混合感染在所检测的高热病发病猪群的存在是非常普遍的。

犬细小病毒病研究进展

犬细小病毒病是由犬细小病毒感染幼犬所引起的一种急性传染病。临床上有两种表现型,出血性肠炎型以剧烈的呕吐、出血性肠炎和白细胞显著减少为主要特征;心肌炎型则以突然死亡为特征。无论那种类型的临床表现,均以发病率高、死亡率高和传染性强为特点,是危害养犬业最为严重的传染病之一,可造成严重的经济损失。论文从病毒生物学特性、基因组结构、病原的检测方法,流行病学、发病机理及病理变化、临床症状以及疫苗研制等角度对犬细小病毒病近年来的研究进展做以概述。

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活疫苗免疫效力试验

为评价鸡新城疫和禽流感(H9亚型,SY株)二联灭活疫苗(以下简称"二联苗")对SPF鸡的免疫保护效力,进行了血清学效力检验与靶动物免疫攻毒保护相关性的研究及免疫持续期试验。不同抗体水平的SPF鸡攻毒试验结果表明,当NDV HI≥5.0log2,AIV HI≥6.0log2时,分别攻击NDV、AIV,试验鸡的保护率均达到100%;免疫期试验结果表明,二联苗以0.3mL和0.5mL的剂量分别免疫SPF鸡,免疫接种后各试验组鸡均产生较高的HI抗体,其免疫期分别能持续18周和36周。表明二联苗对试验鸡有较好的保护效果。

H9N2亚型禽流感病毒NS1基因的原核与真核表达

【目的】构建H9N2亚型禽流感病毒(AIV)NS1基因的原核和真核表达载体,将其分别在大肠杆菌和293细胞中进行表达,为进一步研究NS1蛋白的功能及其与宿主的相互作用,以及鉴定禽流感疫苗免疫禽和野毒感染禽ELISA诊断试剂盒的制备提供理论依据。【方法】用RT-PCR方法扩增H9N2亚型AIV的NS1基因,将其定向克隆到原核表达载体pET-32a(+)中构建NS1基因的原核重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)后,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;同时,将NS1基因克隆到真核表达载体pEGFP-C1中,构建NS1基因真核重组质粒,将其瞬时转染293细胞,48h后收集感染细胞,对大肠杆菌表达产物和293细胞表达产物进行Western-blotting分析。【结果】成功构建了NS1基因的原核表达载体pET-32a-NS1和真核表达载体pEGFP-C1-NS1。Western-blotting结果表明,大肠杆菌和293细胞的表达产物均能检测到特异性条带(大肠杆菌的表达产物在约44ku处出现阳性条带,293细胞表达产物在约55ku处出现特异条带)。【结论】NS1基因在大肠杆菌和293细胞中得到成功表达,获得的NS1蛋白具有良好的抗原活性。

牛传染性鼻气管炎病毒XA株的分离与鉴定

【目的】利用MDBK细胞进行牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)XA株的分离与鉴定。【方法】用MD-BK细胞从陕西发病奶牛鼻拭子中分离IBRV;使用IBR标准阳性血清对该病毒分离物进行中和试验;根据GenBank公布的IBRV基因组序列,利用gB保守序列设计1对引物,对分离病毒进行PCR扩增并测序。【结果】分离病毒在MDBK细胞上产生了明显的特征性细胞病变(CPE):细胞圆缩,聚集成葡萄串样群落,在单层细胞上形成空洞,偶见含有几个细胞核的巨大细胞;用标准抗IBRV特异性抗血清能完全中和分离株;用IBRV gB特异性引物进行PCR,可扩增出1 182 bp的特异性条带,目的序列与已发表的IBRV基因组序列一致。【结论】该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒,将其命名为IBRV XA株。

鸡传染性支气管炎病毒N蛋白研究进展

鸡传染性支气管炎病毒(IBV)是严重危害养鸡业的重要病原之一。近年来国内外学者在分子生物学领域方面的研究不断深入,在病毒基因组的结构与功能及其N蛋白的研究方面取得了重要进展。对N蛋白如何特异性地识别病毒基因组RNA、参与病毒RNA的复制和包装、诱导IBV体液和细胞免疫应答的机制I、BV新型基因工程疫苗研制以及IBV的抗体水平监测等方面的研究,为IBV基因工程疫苗设计及其免疫防控提供了科学依据。

那西肽对生长肥育猪作用效果的研究

选择32头30 kg左右健康的二元杂交生长猪,随机分为4组,每组8头,个体饲喂,对照组只喂基础饲粮,3个试验组分别在基础饲粮中添加10,50 mg/kg那西肽和30 mg/kg盐霉素。试验中每天记录个体采食量和健康状况,每周称量个体体重。在猪体重达90 kg时屠宰,测定屠宰率、背膘厚、眼肌面积、肉色、pH值、滴水损失、嫩度及肌内脂肪。结果表明:那西肽显著地提高了生长肥育猪的采食量和日增重(P<0.05),但是,对饲料转化率的改善作用不明显;饲粮中分别添加10,50 mg/kg的那西肽对猪的胴体品质和猪肉品质没有不良影响。

猪蓝耳病卵黄抗体的制备与初步应用试验

为了制备猪蓝耳病(PRRS)高免卵黄抗体,并对其治疗效果进行研究,采用高致病性猪蓝耳病灭活疫苗(NVDC-JXA1株)免疫产蛋鸡,收集高免蛋,通过水稀释提取法制备PRRS高免卵黄抗体,对其进行无菌检验、安全性检测、效力检验及动物保护性试验,并将其应用于临床实践,观察其治疗效果。结果发现,该方法制备的PRRS高免卵黄抗体琼脂扩散效价达到1:32,保护率达100%,临床试验治愈率为84.5%。研究表明,PRRS特异性卵黄抗体的制备具有操作简便、成本低廉等特点,可以用于PRRS临床治疗。

犊牛腹泻的病因及防治措施

犊牛腹泻的病因比较复杂,严重程度各异。通过临床实践和相关资料的收集,全面地分析了犊牛腹泻的发病原因,并针对病因总结出几种预防和治疗措施。

猪圆环病毒2型培养工艺比较研究

猪圆环病毒2型(PCV2)细胞内增殖滴度的提高是开发PCV2全病毒灭活苗的瓶颈问题。为克服该困难,探究高病毒滴度PCV-2规模化增殖工艺,采用PK-15细胞单层接毒、同步接毒与带毒传代3种增殖工艺对PCV2进行增殖,并应用细胞孵育剂D-氨基葡萄糖对各增殖工艺进行优化,最后通过间接免疫荧光试验对比分析不同的增殖工艺组病毒增殖滴度。结果表明,单层接毒、同步接毒以及带毒传代工艺生产的PCV2病毒滴度均符合规程要求(TCID50/mL>105.5),带毒传代(第5代)生产效果显著优于前两种工艺(P<0.01);D-氨基葡萄糖的添加可将同类工艺下PCV2的病毒滴度提高1.6~3.16倍。

猪流行性腹泻病毒分离鉴定及其灭活疫苗的研制

旨在对疑似猪流行性腹泻(PED)患猪的病料进行病毒分离,并制备灭活疫苗。从因腹泻病死的7日龄内仔猪的小肠组织及内容物中,分离出1株猪流行性腹泻病毒(PEDV),命名为PEDV-GS。用Vero细胞对病毒进行扩增,病毒液中加入终浓度为0.7 mg/mL甲醛,28℃灭活48 h,加入ISA 61 VG佐剂进行乳化,经稳定性、安全性和效力试验,初步研制出猪流行性腹泻的流行毒株灭活疫苗。疫苗免疫妊娠母猪后对仔猪进行母源中和抗体检测、安全性和有效性试验。结果表明,制备的猪流行性腹泻灭活疫苗稳定性和黏度检测都合格,且对仔猪安全有效,对妊娠母猪产仔数量及质量无影响,其被动免疫抗体至少持续到仔猪产后28 d。试验成功制备了具有安全性和高保护率的猪流行性腹泻灭活疫苗。

五角枫翅果中单宁的提取及其改性研究

研究五角枫翅果中单宁的提取和改性方法,以制备新型水处理剂。采用丙酮-水的混合液提取五角枫翅果中单宁,并找出最优方案,得到较高的提出率;进而用甲醛、二甲胺等试剂对该单宁提出物进行了阳离子改性。结果表明,用丙酮–水的混合液提取出五角枫翅果中单宁的提出率较高,其阳离子化产物(简称为PIT)对污水的絮凝效果良好、对工业废水带来的结垢、腐蚀等负面效应均有一定的抑制作用,具有较好的应用前景。

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗的安全性和免疫效力试验

将鸡新城疫、禽流感(H9亚型,SY株)二联灭活疫苗分别以肌肉注射和皮下注射的方式单剂量、单剂量重复、超剂量分别接种28日龄SPF鸡和6月龄产蛋鸡进行安全性试验。同时,将不同剂量疫苗分别接种30日龄SPF鸡,接种后定期采血,分离血清测定HI抗体水平,并于免疫后1、2周从每组试验鸡中抽取10只攻击AIV SY株病毒。结果显示,疫苗以不同剂量接种试验鸡后未见任何不良反应,对产蛋鸡的生产性能基本无影响;试验鸡在免疫后2周即可产生较高水平的HI抗体,其中ND HI抗体几何平均值不低于1∶128,AI HI抗体几何平均值不低于1∶74,攻击AIV SY株病毒后病毒分离率为0,在免疫后20周其HI抗体仍在保护水平以上。表明鸡新城疫、禽流感(H9亚型,SY株)二联灭活疫苗安全性良好,免疫效果确实。