银杏二萜内酯葡胺注射液通过激活Akt/Nrf2通路抑制缺糖缺氧诱导的SH-SY5Y细胞的氧化应激损伤

目的探讨银杏二萜内酯葡胺注射液(DGMI)抑制缺糖缺氧(OGD)诱导人源性神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的氧化应激损伤及其机制。方法 SH-SY5Y细胞随机分为正常细胞对照组,OGD模型组,OGD 4 h+DGMI 25 mg·L^(-1)组,OGD 4 h+银杏叶提取物注射液(EGBLI)25 mg·L^(-1)组,OGD 4 h+银杏内酯注射液(LGBI)25 mg·L^(-1)组。药物作用6 h后,CCK-8法检测细胞存活,水溶性四唑盐1(WST-1)显色法法检测SOD活性,荧光探针法(DCFH-DA)检测ROS生成,Western蛋白印迹法检测细胞内血红素加氧酶(HO-1)、醌氧化还原酶(Nqo1)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、细胞内核因子E2相关因子2(Nrf2)、磷酸化Nrf2(p-Nrf2)的表达;OGD 4 h+DGMI 25 mg·L^(-1)组加入PI3K抑制剂LY294002(终浓度为0,12.5,25和50μmol·L^(-1)),检测1 h后Akt,p-Akt,Nrf2和p-Nrf2的蛋白表达。结果与正常细胞对照组相比,OGD模型组SH-SY5Y细胞存活和SOD活性降低(P<0.01),ROS含量升高(P<0.01),降低p-Akt,Nrf2,p-Nrf2,HO-1和Nqo1的表达(P<0.01);与OGD模型组相比,OGD 4 h+药物组作用6 h,细胞存活率和SOD活性显著提高(P<0.01),ROS含量降低(P<0.05,P<0.01),p-Akt,Nrf2,p-Nrf2,HO-1和Nqo1蛋白表达水平提高(P<0.01),且DGMI 25 mg·L^(-1)效果优于EGBLI 25 mg·L^(-1)和LGBI 25 mg·L^(-1)(P<0.05,P<0.01);相较DGMI组,DGMI和LY294002作用1 h后p-Akt和p-Nrf2的表达被显著抑制(P<0.01),抑制效果呈浓度依赖性。结论 DGMI 25 mg·L^(-1)对OGD诱导的SH-SY5Y细胞具有抗氧化保护作用,其机制可能与激活Akt/Nrf2通路有关。

电刺激大鼠上矢状窦区硬脑膜后血浆与脑组织中降钙素基因相关肽、P物质和前列腺素E_2释放差异

目的探讨电刺激大鼠上矢状窦区硬脑膜制备偏头痛模型的可行性。方法雄性SD大鼠,脑部电极植入术后行电压3 V、频率6 Hz、脉宽0.25 ms、时间1 h电刺激,并于刺激0,15和30 min和1 h进行眼眶采血,采血后取脑组织。采用放射免疫法检测血浆和脑组织中降钙素基因相关肽(CGRP)、P物质和前列腺素E2(PGE2)含量。结果手术对照组与正常对照组大鼠脑组织中CGRP含量、P物质含量和PGE2含量为均无显著性差异;模型组大鼠脑组织中CGRP、P物质和PGE2分别为3.41±0.93,1.80±0.64和(5.17±0.69)ng·g-1,与手术对照组大鼠相比均有显著性差异(P<0.05)。各时间点手术对照组与模型组大鼠外周静脉血浆中CGRP、P物质和PGE2含量无显著性差异。结论电刺激大鼠上矢状窦区硬脑膜后,脑组织中CGRP、PGE2和P物质水平与外周静脉血中显著不同,表明可采用本方法制备偏头痛模型。

热毒宁注射液解热镇痛作用研究

目的:探讨热毒宁注射液解热镇痛作用。方法:SD大鼠背部皮下注射酵母复制发热模型,尾静脉注射热毒宁注射液,剂量分别为10.16 g·kg-1、5.08 g·kg-1、2.54 g·kg-1,观察不同时间动物体温变化;ICR小鼠连续7日尾静脉注射热毒宁注射液,剂量分别为20.30 g·kg-1、10.15 g·kg-1、5.08 g·kg-1,采用扭体法、热板法和小鼠爪痛测试进行镇痛实验。结果:热毒宁注射液高剂量和中剂量可以明显降低发热动物的体温(P<0.05或P<0.01),同时均可明显降低醋酸所致小鼠的扭体次数(P<0.05或P<0.01),明显提高小鼠热板和爪痛的痛阈值(P<0.05或P<0.01)。结论:热毒宁注射液具有较好的解热镇痛作用。

天舒胶囊效应部位组对硝酸甘油致大鼠偏头痛的影响

目的:研究天舒胶囊效应部位组对偏头痛动物模型的镇痛作用,并从神经生化代谢紊乱方面探讨其作用机制。方法:将健康SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、西比灵组、天舒胶囊组、天舒胶囊效应部位3个剂量组,每组10只。皮下注射硝酸甘油(NTG)注射剂复制实验性偏头痛动物模型,观察注射硝酸甘油后60 min内大鼠行为反应,6 h后取血及脑组织检测一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)、β-内啡肽(β-EP)、降钙素基因相关肽(CGRP)。结果:天舒胶囊组、天舒胶囊效应部位高、中剂量组动物挠头次数显著减少,血浆和脑组织中NOS、NO含量显著降低,脑组织中β-EP含量显著升高,CGRP含量显著降低,使之始终趋于生理状态下的平衡水平。结论:天舒胶囊效应部位组具有缓解偏头痛症状,可通过有效调节NOS、NO、β-EP和CGRP的含量来达到治疗偏头痛的作用。

白香丹胶囊对经前期综合征肝气逆证模型大鼠学习记忆功能的影响

目的以经前期综合征(premenstrual syndrome,PMS)肝气逆证大鼠模型为载体考察白香丹胶囊对模型大鼠学习记忆功能的影响,探讨行为学表现下病证对学习记忆功能的损伤及白香丹胶囊的干预效应。方法应用情志刺激为主,多因素分段刺激法制备PMS肝气逆证大鼠模型并进行药物干预,采用旷场实验评价模型。采用Morris水迷宫、Y迷宫、新物体识别实验对PMS肝气逆证模型大鼠空间学习记忆能力和非空间学习记忆能力进行检测。结果与正常组大鼠相比,模型组大鼠总路程明显增加,进入中央区次数及中央区停留时间均明显降低;与模型组相比,白香丹组大鼠总路程明显下降,中央区停留时间及进入中央区次数均明显升高,氟西汀组大鼠总路程明显下降。与正常组相比,模型组大鼠分辨指数(distinguish index,DI)明显下降,白香丹组大鼠DI明显升高;定位航行阶段,与正常组大鼠相比,模型组大鼠在d 2、4逃避潜伏期明显上升;与模型组相比,白香丹和氟西汀组大鼠在d 2、4的逃避潜伏期明显降低;空间探索阶段,与正常组相比,模型组大鼠逃避潜伏期明显上升,而平台穿越次数明显减少,与模型组相比,白香丹组大鼠平台穿越次数明显增多。结论 PMS肝气逆证模型大鼠伴有学习记忆功能损伤,白香丹胶囊能够纠正模型大鼠的学习记忆功能缺陷,且治疗效果可能优于氟西汀。

正交试验优选胆木中异长春花苷内酰胺提取工艺

目的:优选胆木心材中异长春花苷内酰胺的提取工艺。方法:以异长春花苷内酰胺提取得率为评价指标,以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数为考察因素,通过正交试验选取最佳提取工艺。结果:最佳提取工艺为提取所用乙醇浓度为70%,乙醇加入量为药材的22倍,提取时间为4 h,提取次数为3次。结论:该工艺稳定、合理、可行,可为工业化提取胆木中异长春花苷内酰胺提供理论依据。

pH梯度法制备澳洲茄边碱脂质体

目的:研究制备澳洲茄边碱脂质体的最佳工艺,并建立起包封率的测定方法。方法:采用pH梯度法制备澳洲茄边碱脂质体,以包封率为指标进行工艺优化,通过SephadexG-50葡聚糖凝胶柱分离脂质体,高效液相色谱法测定澳洲茄边碱的包封率。结果:制备澳洲茄边碱脂质体的最佳条件,药物与卵磷脂的质量比为1∶30,胆固醇与卵磷脂质量比为1∶4,脂质体外水相pH值最终调至6.5,孵育温度为55℃,此时的包封率可以达到70%以上。结论:用pH梯度法能制备包封率较高的澳洲茄边碱脂质体。

抗热毒宁注射液栀子蛋白单克隆抗体的研制与鉴定

利用栀子脂溶性蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞进行融合,通过间接ELISA方法筛选获得1株抗栀子蛋白的单克隆抗体2H8。该单克隆抗体亚类鉴定为IgG2b,轻链为Kappa链。2H8腹水效价为1∶204 800。Western blot试验证实,2H8能与栀子蛋白反应,识别相对分子质量为58.5 kDa左右的特异性蛋白质条带。以2H8腹水作为一抗建立了斑点酶联免疫吸附试验方法(Dot-ELISA),最小检出量为19.5 ng。本研究为快速检测热毒宁注射液蛋白的试剂盒的研制奠定了基础。