LC-MS法及微生物效应法研究金银花提取物抗菌成分在SD大鼠体内药代动力学

目的:金银花提取物抗菌成分在SD大鼠体内的药代动力学研究。方法:建立一种液质联用方法(LC-MS)定量测定大鼠血浆中的绿原酸。结果:此方法快速、灵敏、准确,并且与以抗菌活性为指标的微生物效应法有相关性。结论:此方法成功应用金银花主要抗菌成分药代动力学研究,为合理阐述金银花抗菌成分的体内药效物质基础提供一条新的思路。

龙胆和黄芩对脾胃虚寒模型大鼠的影响

目的观察2种常见的苦寒药物龙胆、黄芩不同剂量水煎液对脾胃虚寒模型大鼠的影响。方法采用灌胃给药冷白醋和精炼猪油制造脾胃虚寒实验大鼠模型,以龙胆、黄芩2种苦寒药物不同剂量的水煎液为受试药物,通过检测胃酚红排空率、胃重指数以及血清胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)、前列腺素E2(PGE2)指标情况观察2种苦寒药物对脾胃虚寒模型大鼠的影响。结果龙胆中、低剂量及黄芩低剂量能显著提高胃酚红排空率(P<0.05),龙胆中剂量能显著降低胃重指数(P<0.05);龙胆中剂量能显著升高血清GAS含量(P<0.05),龙胆中、低剂量能显著升高血清MTL含量(P<0.05),龙胆中剂量、黄芩低剂量能显著提高血清PGE2含量(P<0.05)。结论龙胆中、低剂量及黄芩低剂量对脾胃虚寒模型大鼠具有一定的治疗作用,能改善胃相关指标;龙胆高剂量及黄芩高、中剂量无显著作用。

3株拮抗内生放线菌的鉴定及其抑菌活性初步研究

对分离自江西东乡野生稻根部的3株内生放线菌进行鉴定和抑菌活性研究,根据菌株的形态与培养特征、生理生化特性及16S rRNA基因序列系统发育分析,将菌株FRo1、FRo2和FRo3分别鉴定为委内瑞拉链霉菌、娄彻氏链霉菌和肉质链霉菌.采用管碟法和菌丝生长速率法分析菌株拮抗病原细菌与病原真菌的活性.结果表明:菌株FRo1发酵液对所有测试细菌均有抑制作用,显示较广谱抑细菌活性;菌株FRo2显示出较强抑制金黄色葡萄球菌和7种病原真菌的活性,其中对金黄色葡萄球菌抑菌直径为22.33 mm,对小麦赤霉、水稻纹枯病菌、车前草核盘菌及胶胞炭疽菌的抑制率分别为70%、45%、58%和65%;而菌株FRo3发酵液对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌及伤寒杆菌表现出不同程度的抑制,除车前草核盘菌外对所测试的病原真菌均有抑制活性,但抑制率均低于50%,这些菌株抑菌效果良好,显示出较好的生防潜力.

人凝血酶原复合物冻干保护剂及冻干工艺的研究

目的对人凝血酶原复合物冻干保护剂及冻干工艺进行研究,生产出符合中国药典要求的产品,提高人凝血因子Ⅸ回收率。方法通过对冻干保护剂甘氨酸不同添加浓度的研究比较,得到最佳的甘氨酸添加浓度;探讨不同冻干工艺对人凝血酶原复合物的影响,优化得到最佳冻干工艺。结果冻干保护剂甘氨酸的最佳添加浓度为20 g·L^(-1);最佳冻干工艺为:制品快速降温到-45.0℃保持3 h冻结,退火到^(-1)5℃,再冻结,保持3 h后,抽真空,真空度保持在10 Pa左右后,开始加热,升温至0℃升华;升华完毕,梯度升温(每小时升高10~20℃);制品温度升至30℃后,制品进入干燥最后阶段,保持数个小时,温度不超过35℃。结论通过对人凝血酶原复合物处方及冻干工艺进行优化,制备出了符合中国药典要求的冻干产品,人凝血因子Ⅸ收率提高了约18%。

一种新的静注人免疫球蛋白制剂制备工艺的研究

目的初步探讨一种新的静注人免疫球蛋白的制备工艺对制品得率和主要质量指标的影响。方法以组分Ⅱ+Ⅲ经过溶解、辛酸沉淀、Capto-Q层析、Macrocap-Q层析、收集流穿液,经超滤、浓缩,制备静注人免疫球蛋白,检测蛋白液中Ig A、Ig M、白蛋白、PKA、ACA含量、纯度、收率,并与低温乙醇法比较。结果与低温乙醇法比较,辛酸沉淀法可显著降低制品中Ig A、Ig M、白蛋白、PKA含量,提高产品得率。结论采用辛酸沉淀工艺制备静注人免疫球蛋白可提高制品的质量和产量。

人凝血因子Ⅷ制备工艺的优化

目的优化人凝血因子Ⅷ(FⅧ)原液制备工艺,提高FⅧ收得率及纯度。方法采用正交设计优化冷沉淀溶解工艺参数;探讨不同p H对冷沉淀溶解液酸性沉淀的影响,优化得到最佳酸性沉淀条件;通过对离子交换层析工艺的研究,得到离子交换层析的最佳上样流速及柱载量。结果冷沉淀溶解的最佳溶解工艺条件是溶解倍数为4倍、溶解温度为10℃、溶解时间为2 h;溶解液最佳酸性沉淀p H为7.2;离子交换层析的最佳上样流速为1.2 cm·min-1,每毫升凝胶对凝血因子Ⅷ的载量为80.1 IU·m L-1。结论通过对FⅧ原液制备工艺的优化,FⅧ收得率提高了约13%,比活性约提高了30 IU·mg-1。

放射免疫法和酶联免疫法检测人血浆乙肝表面抗体效价比较

目的比较放射免疫法和酶联免疫法检测人血浆中乙型肝炎病毒表面抗体效价的效果。方法 选取中国生物制品检定所提供的国家参比品3份,国家临检中心质控品2份,单采血浆公司血浆1000份,分别用北京北方生物技术研究所放射免疫试剂盒、北京万泰公司酶联免疫定量检测试剂盒,放免仪和酶标仪测定乙型肝炎病毒表面抗体效价。结果酶联免疫法和放射免疫法试剂盒检测表面抗体效价无明显的偏差,两种方法检测结果相关性良好(相关系数r=0.95)。结论酶联免疫法检测血浆乙肝表面抗体效价,具有准确度高、特异性强、方法简单快捷、检验成本低等特点,对血液制品行业乙型肝炎人免疫球蛋白生产用原料血浆乙肝表面抗体效价的筛查具有广泛应用的意义。

人凝血因子Ⅷ的提取工艺研究

[目的]考察制备过程中工艺优化对人凝血因子Ⅷ制备的影响.[方法]以人冰冻血浆经过融解,0～4℃离心,收集的冷沉淀为原始材料,通过调整不同倍数的溶解液、选择不同的抗凝剂、调节不同的酸沉pH,观察蛋白液的稳定性,检测蛋白液中蛋白质含量及凝血因子Ⅷ的活性.结果：加入冷沉淀重量5倍的溶解液,用4 IU/ml肝素钠抗凝,调节酸沉的pH在6.2 ～6.4范围内,蛋白液的稳定性最佳,人凝血因子Ⅷ的活性最高.[结论]通过优化人凝血因子Ⅷ提取过程的参数,可以显著提高人凝血因子Ⅷ的稳定性,降低杂蛋白浓度,保护Ⅷ因子的活性.

人凝血因子Ⅷ提取工艺优化研究

目的优化血浆中人凝血因子Ⅷ提取工艺条件。方法以人血浆冷沉淀为原料,人凝血因子Ⅷ的比活性回收率作为评价指标,采用单因素试验,对铝胶的加量,铝胶吸附时的pH值、酸沉淀时的pH值等进行研究,优选提取工艺。结果加入冷沉淀重量12%的铝胶,并将pH值调节至7.1进行吸附,上清液中人凝血因子Ⅷ比活性可达9.50IU/mg,酸沉淀时将pH值调节至6.3,离心上清夜中人凝血因子Ⅷ比活性为11.50 IU/mg。经过以上两步处理,可将人凝血因子Ⅷ比活性提高近2倍。结论人凝血因子Ⅷ提取工艺优化研究工艺合理、可行,能有效达到纯化提取人凝血因子Ⅷ的效果。

80例静脉滴注人免疫球蛋白治疗小儿重症肺炎疗效观察

目的观察静脉滴注人免疫球蛋白(IVIG)治疗小儿重症肺炎疗效。方法 2008年9月至2010年11月临床收治的小儿重症肺炎80例,随机分为对照组40例,治疗组40例,两组均给予抗感染、对症支持治疗,治疗组加用静脉滴注人免疫球蛋白连用3d。结果治疗组在发热、呼吸困难、肺部啰音消失时间及住院天数均明显缩短病程、减少并发症,安全有效。

α1-抗胰蛋白酶缺乏症的诊断与治疗

α1-抗胰蛋白酶(AAT)属于丝氨酸蛋白酶抑制剂家族成员,主要作用是抑制丝氨酸蛋白酶,包括中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、蛋白酶3(Pr3)和组织蛋白酶G等。α-抗胰蛋白酶缺乏症(AATD)主要是基因突变结果,会导致体内正常AAT水平偏低或肝脏异常AAT的蓄积,引起多种疾病,包括肺气肿和肝损害。AATD早期的诊断对提供合理的治疗策略是有益的。目前针对AATD已经提出多种治疗策略。文章对AATD的有关诊断和治疗进展作综述。

人凝血酶原复合物提取及纯化工艺的研究

[目的]确定血浆中人凝血酶原复合物提取及纯化的最佳工艺条件。[方法]以人血浆为原料,凝血酶原复合物的吸附率和回收率为评价指标,采用单因素试验及正交试验对提取和纯化条件进行优选。[结果]最佳工艺为:选用pH值为7.0的DEAE-Sephadex A50凝胶从人血浆中提取人凝血酶原复合物,吸附50 min时,凝胶对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的吸附率可达84.0%、86.5%、85.7%和78.0%;采用NaCl浓度为0.1 mol/L、pH值为7.2的洗涤液洗涤吸附后的凝胶5次,然后用NaCl浓度为2.0 mol/L的洗脱液洗脱3次,对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的回收率可达84.9%、76.4%、82.8%和78.7%。[结论]该工艺合理、可行,适合人凝血酶原复合物的工业化生产。

人凝血酶原复合物的制备及临床应用

人凝血酶原复合物（PCC）来源于健康人血浆，是一种具有凝血作用的血浆蛋白静脉注射制剂。PCC主要由维生素K依赖性的凝血酶原（FⅡ）、凝血酶原转化因子（FⅦ）、抗血友病乙型因子（FⅨ）和自身凝血酶原（FⅩ）等四种凝血因子组成。这些因子都是在肝中合成的糖蛋白。由于这四种凝血因子具有极其相似的相对分子质量和等电点、

肌注手足口病(EV71型)人免疫球蛋白层析工艺研究

[目的]优化手足口病(EV71型)人免疫球蛋白的层析工艺条件,为制备治疗手足口病(EV71型)的人免疫球蛋白提供依据。[方法]采用单因素试验和响应面分析法,研究样品pH值、蛋白质浓度和电导率对层析后流穿液中免疫球蛋白纯度的影响。[结果]影响层析流穿液中免疫球蛋白纯度的主要因素为电导率,其次是蛋白质浓度,pH值对层析流穿液中免疫球蛋白蛋白纯度影响最小。手足口病(EV71型)人免疫球蛋白的最佳层析工艺参数为:pH 5.28、蛋白质浓度41.62 g/L、电导率为0.24 m/s。[结论]层析优化后的流穿液中手足口病(EV71型)人免疫球蛋白纯度可达到99.60%,可用于制备高纯度的手足口病(EV71型)人免疫球蛋白。

萃取法测定人血白蛋白中辛酸钠含量

目的总结萃取法测定人血白蛋白中辛酸钠含量经验。方法采用萃取法测定人血白蛋白中辛酸钠的含量,并对其线性关系、精密度、稳定性和回收率进行研究,且与气相色谱法进行比较。结果萃取法与气相色谱法差异无统计学意义(P>0.05)。结论该方法简单快捷,结果可靠,可用于人血白蛋白的半成品中辛酸钠的含量控制。

人凝血因子Ⅷ制剂冻干工艺

优选了人凝血因子Ⅷ(FⅧ)制剂的冻干工艺。通过电阻法测定共晶点,再采用正交试验法,对预冻温度、主要干燥温度、主干燥时间、解析温度与真空压力等进行研究以优选冻干工艺,得到最佳的冻干工艺:-40℃预冻1.5 h;主要干燥温度从-40℃升温至-33℃,再从-33℃升温至0℃,总耗时36 h,真空压力为30 Pa;解析温度维持在35℃,真空压力为5 Pa,于终点测试压力无变化时结束。由于该工艺冻干出的人凝血因子Ⅷ制剂符合《中国药典》3部该项下的质量要求,经验证该冻干工艺能够应用于人凝血因子Ⅷ制剂的大规模生产。

人凝血酶原复合物冻干工艺的研究

为建立最优的人凝血酶原复合物(PCC)冻干工艺,先通过实验确定共晶点,再采用正交实验法,对PCC真空冷冻干燥过程的预冻时间、主要干燥温度、主干燥时间、解吸温度和真空压力等关键参数进行研究。获得PCC最优的冻干工艺:-40℃预冻1h;主要干燥温度从-40℃升温至-28℃,再从-28℃升温至5℃,总耗时22 h,真空压力为25 Pa;解析温度维持在33℃,真空压力为5 Pa,终点测试压力无变化时结束。通过该工艺冻干出的PCC符合《中国药典》2010年版三部该项下的质量要求,经验证该冻干曲线能够应用于人凝血酶原复合物的大规模生产。

人输注静注人免疫球蛋白后对TP-ELISA法检测梅毒的干扰因素初探

目的初步探讨当静注人免疫球蛋白(p H=4)注入人体后对梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验(TP-ELISA)检测结果的干扰。方法采用氢氧化钠调节静注人免疫球蛋白p H值;用0.9%氯化钠注射液和阴性血浆(经梅毒检测阴性的健康献浆员新鲜混合血浆)稀释静注人免疫球蛋白成不同浓度后,进行PAEG电泳和TPELISA。结果稀释后静注人免疫球蛋白的分子结构无明显差异;静注人免疫球蛋白浓度为5%,p H值7.0左右时梅毒显阳性、p H值4.0左右时梅毒显阴性;随着稀释倍数增加,蛋白浓度和p H值均有改变,梅毒结果先显阳性后转为阴性。结论静注人免疫球蛋白样品的p H值对TP-ELISA检测梅毒的结果有明显的干扰作用,静注人免疫球蛋白浓度是主要干扰因素。

人纤维蛋白原制剂中蛋白质含量测定方法的探究

目的:探究适宜的人纤维蛋白原制剂中蛋白质含量测定方法。方法:分别应用《中国药典》三部(2010年版)中蛋白质测定法项下三氯醋酸沉淀法和两种改良后的三氯醋酸法测定6批人纤维蛋白原制剂中的蛋白质含量,比较三种方法的稳定性和平行性。结果:改良后的三氯醋酸沉淀2法[用三氯醋酸代替《中国药典》三部(2010年版)钨酸钠沉淀法中钨酸钠和硫酸溶液]的稳定性和平行性明显比《中国药典》三部(2010年版)中蛋白质测定法项下三氯醋酸沉淀法和改良后的三氯醋酸沉淀3法更好,相对标准偏差(RSD)更低。结论:改良后的三氯醋酸沉淀2法更适合人纤维蛋白原制剂中蛋白质含量的测定。

外用人纤维蛋白原的分离纯化

目的:建立一种外用人纤维蛋白原的制备工艺。方法:以血浆冷沉淀为原料,利用铝胶吸附、酸沉淀、离子交换层析、低温乙醇沉淀等方法提取人纤维蛋白原。参考中国药典方法检测外用人纤维蛋白原的复溶时间、凝固活力、纯度、人凝血因子XⅢ效价等主要指标。结果:本研究制备的产品具有复溶时间短、凝固活力强、纯度高等优点,产品质量明显高于国家标准,优于市场上同类产品。结论:本研究建立的外用人纤维蛋白原的制备工艺,能有效提高血浆的综合利用率,具有极高的经济价值和社会价值。