鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感(H9亚型)-鸡滑液囊支原体四联灭活疫苗免疫效果研究

为探讨制备的鸡新城疫-传染性支气管炎-禽流感(H9亚型)-鸡滑液囊支原体四联灭活疫苗(以下简称新支流滑四联灭活疫苗)免疫效果,试验采用新城疫病毒(NDV)La Sota株接种BHK-21-sc悬浮细胞,用易感鸡胚增殖传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,H9亚型禽流感病毒(AIV)ML01株接种MDCK-sc悬浮细胞,用改良Frey氏培养基发酵培养鸡滑液囊支原体(MS)ML-MS1株,收获抗原液,制备新支流滑四联灭活疫苗,并对疫苗进行安全性和效力测定;以0.05、0.1、0.3 mL/只的剂量接种30日龄SPF鸡,免疫后7、14、21 d采血测定NDV HI和AIV(H9亚型)HI抗体,并于免疫后21 d进行NDV和AIV攻毒;30日龄SPF鸡首免H120株,免疫后21 d采血测定IBV HI抗体效价,并以0.05、0.1、0.3 mL/只的剂量进行二免,免疫后7、14、21、28 d采血测定IBV HI抗体;以0.05、0.1、0.3 mL/只的剂量接种30日龄SPF鸡,免疫后7、14、21、30 d采血测定MS ELISA抗体,并于免疫后30 d进行MS攻毒。结果显示:制备的新支流滑四联灭活疫苗安全性良好、效力合格;免疫后21 d NDV HI效价为6.6~8.8 log2,AIV HI效价为7.0~9.7 log2;免疫后28 d IBV HI效价为5.6~7.8 log2,且二免是首免的3.2~14.9倍;免疫后30 d MS ELISA效价为3 164~6 847;攻毒试验结果显示,0.05 mL/只剂量组对ML-MS1攻毒保护率为80%(8/10),其余组均为100%(10/10)保护。研究表明,新支流滑四联灭活疫苗对SPF鸡安全、有效,以0.1 mL/只剂量免疫SPF鸡可获得较好的免疫效果。

集约化猪场仔猪腹泻原因分析

仔猪腹泻会使仔猪出现生长停止、生长缓慢、严重消瘦,病情严重的甚至会引起仔猪死亡,是令养猪业很头疼的问题,对于养猪业的发展也有一定的制约,引起仔猪腹泻的因素非常的多,比如生理、病理、饲料、环境、应激、抗原抗体等,都会引起仔猪腹泻,造成医药成本提高,或者直接造成经济损失。

不同产地鱼腥草中4种活性成分分析评价

研究旨在建立一种鲜鱼腥草蒸馏液中4种活性成分4-萜品醇、α-松油醇、乙酸龙脑酯、甲基正壬酮的含量测定的气相色谱法,应用该方法测定不同产地鱼腥草的4种活性成分含量。参照鱼腥草注射液质量标准,建立4种活性成分含量测定的前处理和气相色谱检测法,并对其进行方法学验证;应用所建方法对湖北省、四川省、贵州省、广东省广州市4个地区的鲜鱼腥草中活性成分进行测定分析。结果表明,所建立的方法专属性强,4种活性成分在0.1~1.5 mg/mL的范围内,相关系数均大于0.999,线性关系优良,方法重复性试验样品中4种成分平均RSD≤1.2%,中间精密度试验样品中4种成分平均RSD≤1.3%,精密度好,回收率在80%~120%之间,准确度高。测得湖北省、四川省、贵州省的4种成分含量均符合规定,其中以湖北和四川地区含量相对较高。上述研究可为鱼腥草的药材选择、鱼腥草药材内在质量的综合评价和全面控制提供新的参考依据。

BHK-21细胞规模化培养鸡新城疫病毒工艺的研究和初步应用

为了实现鸡新城疫病毒HN2018株(基因Ⅶ型)在乳仓鼠肾(BHK-21)细胞上的无血清规模化培养,本试验采用悬浮培养技术驯化和筛选了1株能够稳定传代的BHK-21-xh悬浮细胞株;使用该细胞以初始密度为100×10^(4)个/mL接种摇瓶进行培养,并对摇瓶培养鸡新城疫病毒HN2018株的接毒细胞密度、培养温度、接毒量、收毒时间等工艺参数进行摸索和优化;利用摇瓶优化的病毒培养工艺,在10和100 L生物反应器中逐级放大培养BHK-21-xh悬浮细胞,接种鸡新城疫病毒;采用生物反应器悬浮培养的鸡新城疫病毒HN2018株细胞毒与鸡胚毒分别制备成灭活疫苗,免疫SPF鸡进行免疫效力的比较。结果显示,在摇瓶中培养72 h细胞密度均不低于800×10^(4)个/mL,细胞活率均不低于96%;按照BHK-21-xh细胞密度不低于800×10^(4)个/mL,病毒感染复数(MOI)为0.216进行接毒,同时添加终浓度为20μg/mL的胰蛋白酶,于35℃温度条件下培养64~72 h收获病毒液,鸡新城疫悬浮培养细胞毒红细胞凝集(HA)效价最高能够达到10log 2。在生物反应器中接种鸡新城疫病毒,其HA效价均能达到10log 2。细胞苗与鸡胚苗免疫效力相当,攻毒后均能获得100%保护,且免疫血清红细胞凝集抑制(HI)抗体效价均远高于新城疫国家标准。结果表明,应用细胞无血清全悬浮培养技术规模化培养鸡新城疫病毒HN2018株,生产工艺稳定,获得的抗原效价和纯度高,制备的灭活疫苗免疫效力良好,能够应用于新城疫疫苗的规模化生产。

鸡传染性法氏囊病的临床鉴定方法及防控

鸡传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)首次发生于美国甘布洛镇的60年代,如今已遍及世界,它是一种双链RNA病毒,属于双RNA病毒科,无囊膜,即传染性法氏囊病病毒(IBDV)主要引起以法氏囊内淋巴组织损伤为主的一种疾病,主要侵害雏鸡,以法氏囊肿胀、出血坏死为主要特征,引起被感染鸡的免疫抑制和死亡,部分鸡在发病初期出现自啄肛门羽毛的现象。该病毒在一般环境中比较稳定,能在鸡舍内存活122天。对物理和化学因素具有较强的抵抗力,75℃高温30分钟、0.5%氯化铵作用10分钟即可杀灭病毒。

鸡安卡拉病毒病的诊断与防控

安卡拉病是由血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的以心包积液和肝炎多灶性坏死为主要特征的一种高度传染性疾病,该病还有许多其他名字,例如心包积液-肝炎综合征、包涵体肝炎-心包积液综合征、心包积液综合征等。该病自2015年以来,在我国河南、江苏、安徽、山西和山东等多个省份养鸡场暴发,给我国养禽业造成较大的经济损失。因此,在养殖过程中,需要对该病病原特征、流行性特点进行深入的了解。

复方中药制剂中连翘苷提取工艺的比较研究

目的:探讨不同提取方法对含连翘的复方中药制剂中连翘苷提取率的影响。方法:以连翘苷含量为考察指标,比较研究分煎、合煎、醇提和超声提等提取方式所得中药复方制剂中连翘苷提取率。结果:采用整体投料,传统水提工艺提取所得连翘苷提取率最高,提取率达66.6%。结论:传统合煎法是复方中药制剂连翘苷提取的最佳工艺。

集团规模化猪场生物管制详解

非洲猪瘟进入中国以来,猪场对于生物安全的重视被提升到了前所未有的高度。猪场生物管制是生物安全的重要部分之一,需要了解详细、执行到位,以全面保障猪场的生物安全体系。

猪圆环病毒3型研究进展

猪圆环病毒3型(PCV3)作为一种新发现的猪圆环病毒血清型,自2016年首次报道后,陆续在巴西、中国等多个国家被发现。该病毒不仅流行广泛,且可引起猪的多种疾病,严重威胁着养猪业的健康发展。为此,重点介绍PCV3的病原学、流行情况、防控措施及疫苗研究情况,以期为临床防控PCV3提供指导和帮助。

波长切换高效液相色谱法同时测定抗感颗粒中绿原酸和芍药苷含量

目的建立波长切换高效液相色谱法(HPLC)同时测定抗感颗粒中金银花和赤芍中主要成分的含量。方法采用高效液相色谱检测,色谱柱为Amethyst C18(4.6 mm×250 mm,5μm);以乙腈-0.4%磷酸溶液(17∶83)为流动相;柱温30℃;流速1.0 ml/min;进样体积10μl;起始检测波长327 nm,9 min后检测波长为230 nm。结果该方法专属性强(在主成分保留时间无其他成分干扰);在一定范围内(绿原酸3.2~102.4μg/ml,芍药苷3.78~121.02μg/ml)线性关系好(绿原酸R=0.99906;芍药苷R=1.0);绿原酸平均加样回收率为99.7%(RSD=0.07%,n=9),芍药苷平均加样回收率为98.8%(RSD=0.30%,n=9)。结论建立了一种波长切换高效液相色谱法可同时检测抗感颗粒中绿原酸和芍药苷,且该方法灵敏度高、简便快捷,为抗感颗粒的后续研究及定性定量分析奠定了基础。

鸭2型腺病毒和鸭圆环病毒双重PCR方法的建立

鸭2型腺病毒(Ducka denovirus2,DAdV-2)病和鸭圆环病毒(Duck circovirus,DuCV)病是严重影响我国水禽养殖的两种病毒性疾病。雏鸭阶段两种疾病的发病路和死亡率高。鸭腺病毒感染主要表现为精神萎靡、沉郁和消瘦,排浅黄白色的粪便。病理变化为肝脏肿大并有白色针尖状坏死点灶,肾脏及脾脏肿大充血,胰腺有白色点状坏死。而鸭圆环病毒常呈潜伏感染,并入侵鸭的免疫系统,导致机体的免疫功能下降,对多种条件性病原抵抗力减弱,使其更易遭受其他致病因素的侵袭。

滑液支原体的临床鉴定方法及防控

鸡滑液支原体病是由滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)引起的一种急性或慢性传染病,该病常见于鸡或火鸡。能引起家禽传染性滑膜炎、呼吸道疾病、蛋壳顶端异常及生长迟缓等,MS主要侵害鸡关节滑液囊膜及腱鞘,引起渗出性滑膜炎、腱鞘炎,主要表现为关节及脚掌肿胀。MS也可引起以气囊炎为主的呼吸道疾病。MS不仅可以通过直接接触横向传播,也可以通过种蛋垂直传播,为MS的清除加大难度。

副鸡禽杆菌的临床鉴定方法及防控

2022年6月从河南省新郑市规模化养鸡场疑似感染鸡传染性鼻炎的养鸡场,采集发病鸡的眶下窦中分离到了1株细菌,经过发病鸡群的临床症状、细菌的培养、形态观察、菌体染色镜检对其进行鉴定,确定感染细菌为副鸡禽杆菌。

规模化猪场猪只销售车辆的规范操作详解

1车辆进出生产区规定1.1场内转群车按照中转站使用和中转猪场的规定,采用公司自备的车辆进行中转,不得使用公司外的车辆前往猪场进行装猪。用于猪场到中转点的转运,转运前采样检测合格方可投入使用,一定要按规定路线行驶,坚持一运一消原则。装卸猪过程人员不交叉。

青蒿中东莨菪内酯的提取工艺研究

为探究青蒿中东莨菪内酯的提取工艺,该研究采用单因素试验比较不同提取方法和不同浓缩工艺的影响,利用正交试验设计优化提取工艺。科学优选出了青蒿中东莨菪内酯的最佳提取工艺参数:70%乙醇、pH值3.0、固液比1∶10、浸渍24 h,提取率为1.234 mg/g。该工艺简单、可行、提取率高,为青蒿药材及东莨菪内酯的开发利用提供参考。

黄芪抗炎作用的研究进展

黄芪作为一种传统中草药,具有多种药理学功能,其抗炎作用备受关注。综合近年来国内外学者的研究,从对趋化因子、细胞因子、黏附分子、信号通道的影响论述了黄芪抗炎的研究进展,希望能够为黄芪的开发与临床应用提供参考。

表达PRRSV GP5(GP5m)、M蛋白与猪IL-18的重组PRV的构建及对小鼠免疫特性分析

为获得有效预防猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)和猪伪狂犬病(PR)的重组活载体疫苗,以rPRV-gE^(-)/TK^(-)/GFP^(+)为载体将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染株ATCC-VR2332的GP5、修饰型GP5(GP5m)和M蛋白基因以及猪IL-18基因以不同组合方式插入至伪狂犬病病毒(PRV)TK基因位点,构建5种重组PRV(rPRV):rPRV-gE^(-)/TK^(-)/GP5m^(+)、rPRV-gE^(-)/TK^(-)/GP5m^(+)/IL-18^(+)、rPRV-gE^(-)/TK^(-)/GP5^(+)/M^(+)、rPRV-gE^(-)/TK^(-)/GP5^(+)/M^(+)/IL-18^(+)和rPRV-gE^(-)/TK^(-)/IL-18^(+)。免疫印迹结果显示rPRV可表达GP5、GP5m、M和IL-18。随后将5种rPRV分别进行小鼠免疫原性试验,rPRV-gE^(-)/TK^(-)/GP5^(+)/M^(+)、rPRV-gE^(-)/T K-/GP5^(+)/M^(+)/IL-18^(+)和rPRV-gE^(-)/TK^(-)/GP5m^(+)/IL-18^(+)可产生抗PRRSV和PRV的特异性中和抗体,并能刺激CD3^(+)、CD4^(+)和CD8^(+)T淋巴细胞增殖及IFN-γ、IL-4和IL-10细胞因子的表达。综上,rPRV-gE^(-)/TK^(-)/GP5^(+)/M^(+)、rPRV-gE^(-)/TK^(-)/GP5^(+)/M^(+)/IL-18^(+)和rPRV-gE^(-)/TK^(-)/GP5m^(+)/IL-18^(+)可有效诱导小鼠产生抗PRRSV和PRV特异性全身免疫反应,为研发有效预防PRRS和PR的重组活载体疫苗奠定了基础。

不同黏膜佐剂对猪丁型冠状病毒诱导小鼠免疫应答的影响

【目的】旨在为猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)灭活疫苗黏膜免疫筛选理想佐剂,降低疫苗副作用。利用小鼠模型评价不同佐剂制备的PDCoV灭活疫苗对体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答的影响。【方法】将甘露聚糖肽(PA)、CpGODN2395、单磷酰脂质A(MPLA)佐剂分别与IMS 1313、GEL02佐剂联合制备PDCoV灭活疫苗,经鼻腔免疫BALB/c小鼠;将ISA201佐剂制备的PDCoV灭活疫苗经皮下免疫BALB/c小鼠,将PDCoV灭活抗原经鼻腔免疫BALB/c小鼠作为对照,间隔14 d加强免疫一次。用ELISA方法检测小鼠血清、支气管肺泡灌洗液(BALF)中的IgG、IgG1、IgG2a、IL-4、IFN-γ及粪便和BALF中sIgA表达水平;用MTT方法检测疫苗免疫后对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响;观察并记录小鼠免疫后的临床表现,HE染色方法观察免疫小鼠主要器官组织的病理学变化,评价疫苗的安全性。【结果】ISA201组小鼠BALF和血清中的抗体(IgG、IgG1)及IL-4表达水平相对较高,但IgG2a、IFN-γ和粪便中sIgA表达水平较低;相较于IMS 1313组、IMS1313+2395组、IMS1313+PA组、IMS1313+MPLA组,GEL02组、GEL02+2395组、GEL02+PA组、GEL02+MPLA组小鼠BALF和血清中的抗体(IgG、IgG1、IgG2a)、IL-4、IFN-γ及粪便中sIgA表达水平均较高;其中GEL02+2395组小鼠BALF和血清中IgG2a抗体、IFN-γ及BALF和粪便中sIgA表达水平显著高于其他组;GEL02+2395疫苗、IMS1313+2395疫苗可促进T淋巴细胞增殖;小鼠主要器官组织未见明显病理变化,GEL02疫苗、GEL02+2395疫苗免疫小鼠的副反应最轻微【。结论】GEL02与CpG ODN2395佐剂联合制备PDCoV灭活疫苗经鼻腔免疫小鼠,不仅可增强小鼠体液免疫水平,也可有效提高细胞免疫和黏膜免疫水平,为黏膜疫苗的研发提供数据支持。