人类端粒酶基因反义核酸对恶性肿瘤细胞端粒酶抑制的实验研究

目的 :研究人类端粒酶 (hTR)基因的反义核酸对K5 62细胞、Hep 2细胞端粒酶活性和K5 62细胞凋亡的影响。方法 :采用TRAP法检测K5 62细胞、Hep 2细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化以及采用TUNEL法观察反义核酸处理前后K5 62细胞凋亡的变化。结果 :hTR基因反义核酸能有效抑制K5 62细胞和Hep 2细胞的端粒酶活性 ,并且诱导K5 62细胞发生凋亡。结论 :hTR基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 。

自体外周血树突状细胞诱导LAK细胞抗原代肝癌细胞的初步研究

目的 :观察自体外周血树突状细胞(DC)诱导的淋巴因子激活杀伤 (LAK )细胞对原代肝癌细胞的杀伤活性。方法 :从肝癌患者外周血分离单个核细胞 ,以人粒 /巨噬细胞集落刺激因子 (GM CSF)和白细胞介素(IL ) 4诱导扩增DC ,以四甲基噻唑蓝(MTT )方法观察单独应用IL 2诱导的LAK细胞组和联合应用DC组对肝癌细胞的杀伤活性。结果 :联合应用DC组对肝癌细胞杀伤活性 [( 3 0 76± 1 44 ) % ]明显比单独应用LAK细胞组的活性 [( 18 2±1 2 9) % ]高 ,P <0 0 1。结论 :DC可以提高效应细胞对靶细胞的杀伤活性 。

Survivin基因在食管小细胞癌中的表达及与caspase-3和p53蛋白表达的关系

探讨Survivin在食管小细胞癌中表达与细胞凋亡的意义以及与caspase-3和p53凋亡相关基因表达的相关性。方法:采用免疫组织化学SP法检测凋亡抑制基因Survivin、凋亡关键蛋白酶caspase-3和p53蛋白在食管小细胞癌中的表达。结果:Survivin在食管小细胞癌中阳性表达率为25.6%,caspase-3和p53阳性表达率为61.5%和53.8%。其中Survivin和caspase-3表达呈负相关,P<0.05,Survivin和p53表达以及与年龄、性别、浸润程度、淋巴结转移等无相关性。结论:1)在食管小细胞癌中凋亡抑制基因Survivin表达下调,凋亡蛋白酶caspase-3活性相对较高。2)p53表达和Survivin、caspase-3无相关性。

食管小细胞癌凋亡蛋白酶Caspase-3的表达与Survivin Ki67的相关性

目的:探讨凋亡关键蛋白酶Caspase-3在食管小细胞癌中细胞凋亡的病理过程及与凋亡抑制基因Survivin、细胞增殖核抗原Ki67之间的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测Caspase-3、Survivin、Ki67蛋白在食管小细胞癌中的表达。结果:39例食管小细胞癌中Caspase-3蛋白阳性表达率为61.50%,Survivin和Ki67分别为25.60%和46.20%。Caspase-3阳性表达与Survivin呈负相关,P<0.05;与Ki67呈显著负相关,P<0.001。Survivin阳性表达与Ki67呈正相关,P<0.001。结论:1)Caspase-3、Surivivin和Ki67共同参与了食管小细胞癌的凋亡调控过程,可能在食管小细胞癌发生、发展中起重要作用;2)在食管小细胞癌中,凋亡关键蛋白酶表达水平较高,凋亡抑制基因Survivin表达下调,细胞增殖水平相对不高。

酶反应比色法检测NK细胞介导的细胞毒作用问题的初步探讨

〔目的与方法〕采用 5 1 Cr释放法对 MTT比色法及 NAG释放法测定恶性肿瘤患者 NK细胞介导的细胞毒活性的价值进行初步探讨。结果 :(1)两种非同位素方法所测外周血 NK细胞活性与5 1 Cr释放法之间均无相关性 (P均 >0 .0 5 ) ;(2 )正常对照组效应细胞 5 1 Cr释放水平低于靶细胞 (P<0 .0 1) ,肿瘤化疗组效应细胞5 1 Cr释放水平则高于靶细胞(P<0 .0 1) ,且靶细胞与效应细胞的结果无相关性 (P>0 .0 5 )。〔结论〕我们认为酶反应比色法不宜用于 NK细胞介导的细胞毒活性测定。

hTR基因反义核酸对K562细胞端粒酶活性和凋亡的影响

目的 :研究人类端粒酶 (hTR)基因的反义核酸对K5 6 2细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响。方法 :采用TRAP法检测K5 6 2细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化 ,以及采用TUNEL法观察反义核酸处理前后细胞凋亡的变化。结果 :hTR基因反义核酸能有效抑制K5 6 2细胞的端粒酶活性 ,并且诱导K5 6 2细胞发生凋亡。结论 :hTR基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性 ,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径。

细胞因子诱导杀伤细胞联合阿霉素逆转人红白血病耐药细胞株K562／ADR的研究

目的探讨细胞因子诱导杀伤（CIK）细胞与阿霉素对肿瘤多药耐药逆转作用的影响。方法体外诱导、扩增人外周血单个核细胞（PBMC）作为效应细胞，联合不同浓度的阿霉素与其耐药靶细胞K562／ADR进行共培养，经四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法计算半数抑制浓度（IC50）、耐药倍数和逆转倍数；流式细胞仪检测细胞内阿霉素相对含量和P糖蛋白（PgP）表达水平；RT—PCR检测mdr-1基因mRNA表达。结果阿霉素对K562和K562／ADR的IC50分别为（0．68±0．04）μmol／L和（66．23±4．38）μmol／L；K562／ADR对阿霉素的耐药倍数为97．43倍；经CIK细胞联合阿霉素处理48h（效靶比1：5、ADR1．1μmol／L）后，IC50为（32．15±0．79）μmol/L，联合逆转倍数为2．06倍。细胞内的阿霉素相对含量增加的同时PgP表达降低。mdr-1基因mRNA相对表达值也呈下调趋势。结论CIK细胞联合阿霉素可增加化疗药物阿霉素对耐药靶细胞K562／ADR的敏感性，提高耐药靶细胞内的阿霉素浓度，有效下调mdr-1基因及PgP的表达，使CIK联合阿霉素对多药耐药的逆转效果得以显现。