染料木黄酮对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞生长的影响

目的 研究酪氨酸激酶 (PTK)在类风湿关节炎 (rheumatoidarthritis,RA)成纤维样滑膜细胞 (fibroblast likesynoviocyte ,FLS)异常增生与转化特性中的作用。 方法 原代培养类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞。应用形态观察、细胞计数、3H TdR掺入、流式细胞仪检测和双层琼脂培养法探讨染料木黄酮 ,特异性PTK抑制剂对于RAFLS细胞生长状态、数目、DNA合成、细胞周期及其非贴壁生长情况下细胞克隆形成数目的影响。结果 Genistein呈剂量依赖性抑制RAFLS的数目增长、3H TdR掺入和非贴壁生长的克隆形成数目 ;其生长抑制作用在细胞周期中G1期限制点。结论 酪氨酸激酶在RAFLS细胞异常增生与转化表现中发挥关键作用。

TNF-α对类风湿关节炎滑膜细胞中MAPK的作用

目的 观察 Ｔ Ｎ Ｆα作用于类风湿关节炎（ Ｒ Ａ） 滑膜细胞后滑膜细胞中 Ｍ Ａ Ｐ Ｋ 的激活。方法 ３ ～５ 代体外培养的 Ｒ Ａ 滑膜细胞加外源性 Ｔ Ｎ Ｆα刺激后，裂解细胞，收获蛋白，进行 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 分析。结果 Ｔ Ｎ Ｆα刺激后滑膜细胞中有多种蛋白发生酪氨酸磷酸化，其中以 Ｍ Ａ Ｐ Ｋ最明显， Ｍ Ａ Ｐ Ｋ 的激活呈时间和剂量相关。结论 Ｔ Ｎ Ｆα作用于 Ｒ Ａ 滑膜细胞伴有明显的 Ｍ Ａ Ｐ Ｋ 激活， Ｍ Ａ Ｐ Ｋ 可能是 Ｔ Ｎ Ｆα作用于 Ｒ Ａ 滑膜细胞后信号传导中的重要介质。

类风湿关节炎滑膜细胞酪氨酸激酶信号传导系统

多细胞生物中，细胞的生长分裂受到相邻组织甚至生物整体的调节控制。细胞怎样将外界刺激信号传递到细胞核内，一直是人们十分关心并不断探索的问题．生长因子则是实现这种调节的生物信号之一，其受体则是把信号介导到细胞内，引起细胞内酪氨酸激酶磷酸化，使信号向下游传...

表皮生长因子对类风湿关节炎滑膜细胞的作用

目的 观察表皮生长因子 (EGF)对类风湿关节炎 (RA)滑膜细胞的作用和细胞中有丝分裂素激活的蛋白激酶 (MAPK)的激活情况。方法 3～ 5代体外培养的RA滑膜细胞 ,3H TdR掺入检测EGF对细胞DNA合成的影响 ;EGF刺激后裂解细胞 ,收获蛋白 ,Westernblot检测MAPK的活化。结果 EGF刺激组和对照组每分钟计数值差异有显著性 (P <0 0 0 1)。EGF能引起细胞内明显MAPK活化。结论 MAPK可能是EGF刺激RA滑膜细胞增生的信号传导通路中的重要介质。

一步反转录PCR法从组织及细胞中扩增HEK5

聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术诞生后不久即用于ＲＮＡ的扩增［１］。这种方法需要首先将ＲＮＡ逆转录（ＲＴ）为ｃＤＮＡ链后再进行常规ＰＣＲ扩增，程序较繁琐，且需逆转录酶及ＲＮＡ酶抑制剂等成本较高试剂。有研究表明Ｔａｑ聚合酶及ＴｔｈＤＮＡ聚合酶有逆转录功能，且...

c-erbB-2癌基因特异性核酶的体外切割作用

目的构建ｃｅｒｂＢ２特异性核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）基因及其底物基因的体外转录载体并探讨其体外切割作用。方法在计算机设计的核酶ＲＺ１基因的３′端加上新的限制性酶切位点ＥｃｏＲＶ，先合成ＲＺ１基因并将之与其底物分别克隆入体外转录载体ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－），经用ＥｃｏＲＶ快速初选出含有ＲＥ１基因重组子并测序鉴定。体外转录物用３２Ｐ标记。体外切割作用在Ｍｇ＋＋的存在下，３７℃反应１小时，进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影后经图像分析计算出切割率。结果用ＥｃｏＲＶ筛选很快鉴定出了含有ＲＥ基因的重组子并命名为ｐＧＥＭ３ＺＲＺ１，自动测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）的Ｔ７启动子。ＲＺ１的靶基因片段也被插入ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）的ＳＰ６启动子下。经体外转录出核酶ＲＺ１及靶ＲＮＡ后，体外切割反应１小时，７９．３％的靶ＲＮＡ即被切开。结论ｃｅｒｂＢ２特异性核酶ＲＺ１在体外有良好的切割活性，该实验为进一步研究其在肿瘤基因治疗中的作用奠定了基础。