猪源结肠小袋纤毛虫培养、分子鉴定和显微观察

小袋纤毛虫病是一种人畜共患寄生虫病。本研究从浙江地区病猪盲肠内分离到了一株结肠小袋纤毛虫,通过RPMI1640培养基对其进行了体外培养,结肠小袋纤毛虫在28℃和37℃均能良好生长,在培养后第5天和第4天分别达到高峰值,虫体密度分别为1.60×104和2.31×104个·m L-1。显微镜下滋养体胞口、胞肛和食物泡结构明显,DAPI染色后大核明显呈哑铃型,且滋养体有大小差别明显的2种类型。18S r RNA基因PCR扩增、测序和聚类分析结果显示,猪源结肠小袋纤毛虫分离株存在2条明显不同的18S r RNA基因序列,序列间趋异性为0.6%,且该分离株序列与国外分离株间存在显著差异,在进化树上形成一独立的亚枝。在高倍显微镜下,滋养体内常见有许多生物活动,种类不明,16S r RNA基因PCR扩增到3条未知细菌序列,未知细菌16S r RNA基因序列与结肠小袋纤毛虫内微生物间的确切关系有待研究。

五指山猪生长激素基因全序列克隆及序列分析

通过筛选一对引物,PCR扩增五指山小型猪GH基因全序列,并进行克隆测序分析、序列分析及氨基酸分析．结果表明,有98个位点不同,同源性为95．026%,外显子有2个碱基发生了突变,其中外显子2有1个位点的碱基突变导致了氨基酸异义取代．

2种常用药物对麦穗鱼的急性毒性和SDS对麦穗鱼的遗传毒性

为水产养殖业的水质科学管理提供理论依据,以麦穗鱼仔鱼为材料,研究了硫酸铜、重铬酸钾对麦穗鱼的急性毒性以及十二烷基硫酸钠(SDS)对其的遗传毒性。结果表明:24h、48h、72h和96h的LC50,CuSO4分别为8.587mg/L、5.462mg/L、4.416mg/L和3.270mg/L,K2Cr2O7的分别为366.367mg/L、319.530mg/L、284.205mg/L和190.757mg/L,CuSO4、K2Cr2O7对麦穗鱼仔鱼的安全质量浓度分别为0.032 7mg/L和1.907 57mg/L。在SDS染毒96h后,0～7.5mg/L的浓度范围内,SDS对麦穗鱼仔鱼微核的产生具有明显的影响,且随着浓度的升高微核率显著增加;在4.3～5.6mg/L的浓度范围内,随着浓度的增加微核率的增加缓慢。结论:对麦穗鱼CuSO4属于中等毒性物质,应避免使用;K2Cr2O7属于低毒物质,建议谨慎使用。

穿孔艾美耳球虫、点滴复膜酵母与兔腹泻的关系

为探讨穿孔艾美耳球虫、点滴复膜酵母与兔腹泻病的关系，用实验室分离到的穿孔艾美耳球虫和点滴复膜酵母分别进行了动物感染试验。试验兔在接种穿孔艾美耳球虫后第4～6天，明显出现饮水、食料和排粪量减少，其中第3组在接种后第12～14天出现了腹泻和死亡，腹泻率为50％，死亡率为25％；而试验兔在接种点滴复膜酵母后表现正常，无腹泻和死亡现象。试验结果表明，穿孔艾美耳球虫具有致病性，是导致兔腹泻的重要病原之一，而点滴复膜酵母不具有致病性，非兔腹泻病原。

DSF对急性心肌缺血大鼠模型NO系统的影响

目的:探讨中药复方制剂DSF对于心肌缺血大鼠血液及组织中NO系统的影响。方法:将40只大鼠随机分为对照组,模型组,DSF组和丹参片组。用大鼠冠状动脉左前降支结扎的手术方法制备急性心肌缺血缺氧模型,以试剂盒法测试血清及心肌组织中的NO、NOS、iNOS、cNOS的含量;用免疫组化的方法测定DSF对心肌组织中的cNOS mRNA表达的影响。结果:与模型组比较,DSF组血清NO及缺血区心肌组织NO含量均有明显升高(P<0.05或P<0.01),DSF组血清及缺血区心肌组织NO,cNOS含量有明显升高,iNOS含量没有明显差异但其与NOS之比明显降低,说明其相对含量比模型对照组有所下降,并且缺血区心肌组织cNOS mRNA表达对与模型对照组比较也有显著增高(P<0.05)。结论:DSF能明显提高NO水平,升高cNOS含量,降低iNOS/NOS比例,其抗心肌缺血作用机制可能是通过提高机体NO含量及NOS活性,提高cNOS mRNA的表达来实现的。同时DSF也可能通过其降低iNOS作用对心肌起保护作用。

山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因的克隆及酵母表达载体的构建

为了构建山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因酵母表达载体,试验根据GenBank中鸡β防御素Gal-2基因序列设计引物,采用RT-PCR技术从山地乌骨鸡骨髓细胞中扩增出Gal-2基因,经PCR和酶切鉴定后测序,并采用DNAStar软件进行生物信息学分析;再根据毕赤酵母偏爱密码子和山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因序列设计并合成1对引物,采用PCR技术从重组质粒pMD18-T-Gal-2扩增出其成熟肽编码基因,并将其插入载体pPICZaA,构建重组质粒pPICZaA-Gal-2,将pPICZaA-Gal-2线性化,通过电击转入毕赤酵母菌株GS115,用1%甲醇诱导表达120 h,表达产物纯化后进行Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定。结果表明:山地乌骨鸡β防御素Gal-2基因克隆成功;山地乌骨鸡β-防御素Gal-2成熟肽编码基因重组真核表达载体构建成功;山地乌骨鸡Gal-2基因在酵母中得到表达。

RNAi导致基因沉默的机制和应用进展

RNAi主要通过双链RNA(dsRNA)被核酸酶切割成21～23nt的干涉性小的RNA,即siRNA,由siRNA介导识别并靶向切割同源性靶mRNA分子而实现的;RNAi需要多种蛋白质因子以及ATP参与,而且具有生物催化反应特征;RNAi具有高效性和高度特异性,作为一种关闭特定基因的新技术,为基因功能研究提供了一个快速、简便的方法,在后基因组时代应用前景广阔。

规模化猪场疫病流行特点及防控策略

分析当前疫病发生特点、流行态势,提出防控策略,为有效地防止和控制猪疫病的发生和流行提供参考资料。

川西北高原野生垂穗披碱草RAPD变异研究

采用随机扩增多态性标记(Random Amplified Polymorphic DNA,RAPD)对来自川西北高原的28份垂穗披碱草遗传多样性和遗传关系进行了分析。结果表明:试验选用13条引物共扩增出150条条带,其中多态性条带107条,多态性条带比率为71.3%,每个引物扩增的多态条带数为8.23条,遗传相似系数(GS值)为0.703～0.982,平均值为0.851,表明了川西北高原的野生垂穗披碱草材料具有丰富的遗传多样性。聚类分析和主成分分析结果都表明大部分来自相同或相似生态地理环境的材料能聚在一起,具有较近的亲缘关系,表明供试材料的聚类和其生态地理环境间有一定的相关性,与其他的研究结论具有一定的相似性。最后,本研究还探讨了川西北地区野生垂穗披碱草资源的保护及其利用。

纯中药制剂肾病灵的研制及推广应用技术研究报告

根据中兽医的基本理论和多年临床实践,筛选出一种防治鸡肾肿及尿酸沉积症的纯中药制剂——肾病灵,对人工感染传染性支气管炎肾型毒株雏鸡的保护率为97%,对临床所见各种原因所致肾肿及尿酸盐沉积症平均治愈率达95%以上,实验表明肾病灵不仅能缩短疗程,降低死亡率,而且还有明显恢复增重的作用,近年来,在四川主要养鸡区进行了大量的推广应用,取得了巨大的经济效益和社会效益。

我国生物制品的研究进展

综合论述近年来我国对传统疫苗的改良以及新病疫苗、基因工程疫苗、新型佐剂、免疫增强剂等兽用基因工程生物制品研究与开发的进展情况及发展趋势。

鸡新城疫地方强毒SC01株HN基因片段的克隆与分析

用设计的1对特异性引物,对一株从成都地区分离的鸡源性NDV强毒SC01株的HN基因的526bp片段进行克隆与分析。分析结果表明,SC01株HN基因与相比较的12株鸡源性毒株的HN基因的核苷酸同源性为81.4%～94.6%,核苷酸所推导的氨基酸同源性为88.0%～94.8%。对SC01株和CHI85、F02、GD/1/98/goose、YG97、JS/3/98/goose、JS/5/01/goose、JS/2/98/goose等毒株的HN基因进行聚类分析,证明它们属同一亚群,SC01株属于NDV基因Ⅶ型毒株,证明了基因Ⅶ型NDV毒株在四川地区存在。