锁核酸研究进展

锁核酸 (lockednucleicacid ,LNA)是一种新型的寡核酸衍生物 ,结构中 β D 呋喃核糖的 2’ O ,4’ C位通过缩水作用形成环形的氧亚甲基桥、硫亚甲基桥或胺亚甲基桥 ,呋喃糖的结构锁定在C3’内型的N构型 ,形成了刚性的缩合结构。LNA作为一种新的反义核酸 ,具有与DNA/RNA强大的杂交亲和力、反义活性、抗核酸酶能力、水溶性好及体内无毒性等优点。LNA在基因诊断和基因治疗上有很多优势 ,如 :单链核酸的多态性基因分型、LNA寡聚体具有高效抑制端粒酶活性及LNA修饰的DNA核酶 (LNAzymes)高效清除高级结构的RNA等 。

伤口微环境对修复细胞生长调控规律的研究

伤口渗出液在很大程度上反映了伤口微环境状况。本研究通过比较伤后不同时间伤口渗出液对修复细胞增殖的影响，探讨了伤口微环境在调控修复细胞增殖方面的变化规律。结果显示：伤后第１，３，７天，伤口渗出液可刺激修复细胞生长。而伤后第９，１１，１５天，伤口渗出液在高浓度胎牛血清存在时，对修复细胞生长呈抑制作用；在低浓度胎牛血清存在时，后期伤口渗出液可诱导细胞死亡。提示在伤口愈合过程的后期。

血小板源伤口愈合因子促糖尿病大鼠伤口组织胶原合成机制的研究

目的 探讨外源性血小板源伤口愈合因子 (PDWHF)促糖尿病大鼠伤口合成胶原与内源性转化生长因子 -β1 (TGF-β1 )基因表达的关系。方法 33只雄性 SD大鼠 ,分为正常组 (A组 n=9)、糖尿病组 (n=2 4)。四氧嘧啶诱导糖尿病组大鼠血糖值大于 1.8g/L 1、2天后 ,在每组大鼠背部造成两块直径为 1.8cm的全层皮肤伤口。术后当天及以后连续 6天 ,每天一次 ,糖尿病组大鼠一侧伤口局部应用 PDWHF(10 0μg/伤口 )作为治疗组 (B组 ) ,另一侧伤口作为对照组 (C组 )。斑点杂交法测定伤后不同天数伤口组织中 TGF-β1 、 型 (α1)前胶原m RNA水平量。结果 伤后 5、7天 ,B组伤口组织 TGF-β1 m RNA水平量是 C组的 4倍和 5 .6倍 ,经统计学处理有非常显著性差异 (P<0 .0 1) ,但低于 A组 (P<0 .0 5 ) ;伤后 10天 ,三组间 TGF-β1 m RNA水平量无明显差异。伤后5、7及 10天 ,B组 型 (α1)前胶原 m RNA水平量明显高于 C组 ,分别为 2 .1、1.8和 2 .3倍有非常显著性差异 (P<0 .0 1) ;但伤后 5、7天仍明显低于 A组 (P<0 .0 5 ) ,伤后 10天 ,两组间差异消失。结论 PDWHF促进糖尿病大鼠伤口内源性 TGF-β1 基因表达是其增强 型 (α1)

肝部分切除术后Tmub1蛋白与securin蛋白的相互作用研究

目的探讨肝部分切除术后Tmub1蛋白与securin蛋白的相互作用。方法 SD大鼠30只,随机分为肝切除术后0、24、48h组,每组10只。0h组行肝切除术后直接灌注肝脏并取原代肝细胞,后两组分别于术后24、48h灌注肝脏提取原代肝细胞。每组肝细胞中一部分行原代肝细胞培养,并通过免疫荧光及激光共聚焦实验检测Tmub1蛋白与securin蛋白的共定位情况;另外一部分肝细胞经裂解后提取蛋白,行免疫共沉淀及Western blotting检测Tmub1/securin共沉淀蛋白的表达。结果激光共聚焦实验结果显示,肝切除术后0h细胞核内几乎没有Tmub1和securin蛋白表达,术后24h及48h Tmub1与securin蛋白大量共定位于细胞核内;免疫共沉淀及Western blotting检测结果显示,术后0h Tmub1/securin蛋白条带较弱,术后24-48h明显增强（P〈0.01）,但24h与48h之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 Tmub1在正常肝细胞中几乎不与securin结合,但在肝切除术后从胞质进入细胞核,与securin蛋白相互结合,从而抑制肝细胞的增殖。

银杏苦内酯B对家兔内毒素休克心功能抑制的防治作用研究

家兔内毒素休克时 MAP、LVSP、dp/dtmax、IP 和 Lo 等显著降低,此变化与血中PAF 水平呈显著的负相关。PAF 受体拮抗剂银杏苦内酯 B 预处理后能有效逆转内毒素引起的心血管功能紊乱的表现,表明 PAF 可能在内毒素休克早期的心血管功能紊乱中具有重要作用,PAF受体拮抗剂银杏苦内酯 B 具有明显的预防保护作用。

大鼠不同部位的单核/巨噬细胞功能异质性的实验研究

目的:了解生理状态下不同部位单核/巨噬细胞功能的异质性。方法:健康Wistar大鼠以灌洗法分离肺泡巨噬细胞(AM)和腹腔巨噬细胞(PM),以密度梯度离心法分离外周血单核细胞(Mo)。采用无色孔雀绿比色法、流式细胞仪及放免法,分别测定不同部位单核/巨噬细胞的非特异性吞噬功能,IA抗原的表达及IL6、IL10的分泌水平。结果:AM的吞噬功能最强,Mo最弱。PM可高表达IA,而AM及Mo的表达量较低。PM分泌IL10的水平最高,Mo分泌IL6的水平最高。结论:生理状态下单核/巨噬细胞的功能及表型存在异质性。AM在天然免疫中有重要作用。PM可能在获得性免疫及拮抗炎症反应中有重要作用。

光学生物传感器在研究正、反义肽间选择性相互作用中的应用

目的 观察生物分子间相互作用动力学、亲和力及特异性 ,研究C5a与其反义肽的相互作用规律。方法 应用生物分子相互作用实时分析系统IAsysPlus,以反义肽R4为固定相 ,L2和rhC5a为流动相 ,采用FASTplot软件对选择结果优化的反应模式 ,计算各动力学参数值。结果 反义肽R4与配体rhC5a相互结合的KD=6 .6 2× 1 0 -6mol,直线在Y轴上的截距(解离常数 )Kdiss为 0 .0 2 2 5s-1 ;与L2的KD=4 .5 0 8× 1 0 -6mol。结论 生物传感器技术可以用于正义 反义肽之间相互作用的研究中 ,且反义肽R4可与其正义肽。

LTA分子识别机制与生物学效应的研究进展

膜磷壁酸 (Lipoteichoicacid ,LTA)是革兰阳性菌胞壁的共有成分 ,通过D 丙氨酸这一关键位点发挥黏附机体细胞和免疫刺激作用。机体对LTA的应答和清除涉及到LBP ,CD14等蛋白和单核细胞 ,中性粒细胞等免疫细胞 ,是一个多步骤的复杂过程。血浆脂蛋白 (HDL、LDL、VLDL)有结合LTA的巨大容量。除了引发炎症外 ,LTA还具有抗肿瘤 ,防止组织缺血再灌注损伤等生物学效应。

血小板源性伤口愈合因子对伤口组织细胞增殖作用的实验研究

为了观察不同浓度的血小板源性伤口愈合因子（ＰＤＷＨＦ）对伤口成纤维细胞及表皮细胞增殖能力的影响，并探讨其可能的机理，利用离体培养的鼠伤口成纤维细胞及人伤口表皮细胞为模型，将培养细胞分为三组，空白对照组：基质处理组（ＢＭ，成分为１６４０＋０．５％ＦＣＳ）；阳性对照组：１６４０＋１０％ＦＣＳ；ＰＤＷＨＦ组：ＢＭ＋１％ＰＤＷＨＦ、ＢＭ＋３％ＰＤＷＨＦ、ＢＭ＋５％ＰＤＷＨＦ、ＢＭ＋７％ＰＤＷＨＦ、ＢＭ＋１０％ＰＤＷＨＦ及ＢＭ＋１２％ＰＤＷＨＦ。待测样本与细胞共孵育４８小时后，ＭＴＴ法测定细胞的增殖情况。结果表明，ＰＤＷＨＦ的浓度为１％～７％时，可显著促进伤口成纤维细胞及表皮细胞的增殖，明显高于０．５％ＦＣＳ组（Ｐ＜０．０１）；ＰＤＷＨＦ的浓度为１０％时，其促增殖作用已不再明显，与０．５％ＦＣＳ组无显著差异（Ｐ＞０．０５）；ＰＤＷＨＦ的浓度为１２％时，其只对伤口成纤维细胞的增殖呈现出明显抑制作用。认为，ＰＤＷＨＦ是多种生长因子的混合物，在一定的浓度范围内对伤口成纤维细胞及表皮细胞有明显的促增殖作用，但当其浓度过高时促增殖作用不明显。

壳聚糖纳米微粒对靶向转化生子因子-βⅡ型受体核酸适配子的缓释作用及其安全性研究

背景本课题组前期已筛选得到了靶向转化生长因子-β（TGF-β）Ⅱ型受体（TpRⅡ）的核酸适配子S58，并证明S58可抑制TGF-β介导的人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）转分化作用。壳聚糖纳米微粒（ CS-NP）已被证实可作为药物载体，但其包埋S58后抑制HTFs增生的有效性和安全性值得关注。目的制备CS（S58）-NP，研究其生物学特性，并观察CS～NP对S58的保护及缓释作用。方法本研究所用细胞由本课题组前期原代培养的HTFs传代而来，取第4-10代对数生长期的细胞用于实验。以S58为实验对象，通过离子交联法制备出不同浓度CS-NP与S58表面电荷比（N／P比）的CS（S58）-NP。应用Zeta粒径分析仪检测CS（S58）-NP粒径及其Zeta电位；用扫描电子显微镜观察粒径的大小、形态及分布情况；采用琼脂糖凝胶电泳法检测CS-NP与S58的结合情况，并评估CS（S58）-NP对核酸酶的抵抗能力；用紫外分光光度计检测不同时间点缓释液PBS中S58的含量，以判断CS（S58）-NP缓释S58的情况；利用乳酸脱氢酶（LDH）释放实验检测CS（S58）-NP对HTFs的细胞毒性。结果制备的CS（S58）-NP粒径分布于130～270nnl之间，其Zeta电位分布范围为＋16-＋28mV；扫描电子显微镜下可观察到CS（S58）-NP呈球形，分布均匀，粒径在300nm以内。当CS-NP与S58N／P比例为10、20、30、40时，CS（S58）．NP平均包封率分别为88．9％、89．3％、91．7％、90．5％；加入DNaseI组与无DNaseI组比较，S58经CS-NP包裹后能够明显抵御DNaseI的酶解作用；体外缓释实验发现，CS-NP在PBS中持续缓慢释放S58，随着时间的延长，S58累计释放量增加，以24～36h释放速率最高，96hS58累计释放量为100％。随着CS（S58）-NP浓度的增加，HTFs上清液中LDH相对释放率逐渐增加，差异有统计学意义（F=588．018，P=0．000）。50nmol／LCS（S58）-NP处理HTFs48h时LDH相对释放率最大，为（12．853±0．375）％。结论CS-NP对S58具有保护及缓释作用，其浓度在50nmol／L以下时对HTFs的毒性作用小，具有良好的生物相容性，可用于核酸适配子的载体研究。CS（S58）-NP可用于抑制TGF-β介导的HTFs转分化研究。

PTEN对巨噬细胞炎性细胞因子分泌的影响及其机制研究

目的:PTEN/PI-3K/Akt通路在LPS介导的炎症和内毒素血症中可能具有重要的调控作用,PTEN与LPS刺激引起的炎性介质增多之间的关系尚不明确。文中观察PTEN对LPS攻击所致RAW 264.7细胞TNF-α分泌水平的影响并探讨其可能的机制。方法:①以RAW 264.7细胞为研究对象,第1组为对照组,第2组和第3组为PTEN抑制剂组,分别提前1 h加入PTEN抑制剂200、100 nmol/L,以LPS刺激6 h后收集细胞培养上清,用ELISA法检测上清中TNF-α的水平。②将NF-κB-LUC质粒与pRL-CMV质粒共转染RAW 264.7细胞,以LPS处理细胞6 h后通过检测NF-κB反应性荧光素酶报告基因表达,观察PTEN在LPS攻击巨噬细胞时对NF-κB转录激活的影响。结果:与正常细胞相比,抑制PTEN可使LPS诱导的TNF-α分泌减少,NF-κB活性减弱。结论:PTEN可上调LPS诱导的巨噬细胞TNF-α分泌水平,可能是通过激活NF-κB的转录活性增加TNF-α的分泌水平,从而在内毒素所诱导的炎症反应中发挥重要的调控作用。

炎症调控与脓毒症研究进展

脓毒症的本质是机体炎症反应不断加剧、持续恶化的结果。目前针对脓毒症切实有效的治疗措施不多,抗炎治疗效果极不理想。胆碱能抗炎通路通过内源性的神经反馈调节机制来达到调控炎症反应、减轻炎症性损害的作用,且具有更快速和更易控制的特点,因而在炎症反应调控中更有优势。本文就脓毒症与炎症调控相关,特别是胆碱能抗炎通路的研究进展进行了综述。

创伤后瘦素及其受体的变化及临床意义研究

目的观察创伤后瘦素(leptin)及其受体(ob-R)的变化,初步探讨二者在创伤恢复过程中的临床意义。方法2007年7月-2008年3月收治的52位创伤患者依据AIS-ISS评分分为3组:①轻伤组(ISS<16或AIS≤2,n=21);②重伤组(16≤ISS<25或AIS=3,n=17);③严重伤组(ISS≥25或AIS>3,n=14)。以1个月来无感染病史的7位健康人作为对照。采集患者入院第1天(D1)、第3天(D2)、第6天(D3)以及对照组成员(D0)血清,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清瘦素及ob-R水平。结果严重伤组SIRS、MODS、脓毒症发生率均高于重伤组及轻伤组(P<0.05)。随创伤程度的加重,各时相点瘦素与ob-R水平也随之增高。D1时,重伤组、轻伤组、对照组间瘦素水平无显著差异(P>0.05),但3组均显著低于严重伤组(P<0.05)。D2时,重伤组和轻伤组瘦素水平均显著高于对照组(P<0.05),且3组均显著低于严重伤组(P<0.05)。D3时各组间比较结果与D1相同。ob-R水平D1、D2、D3时4组间比较均有显著性差异(P<0.05)。结论创伤后瘦素及ob-R水平均随创伤程度的加重而增加,测定创伤后瘦素水平的变化在一定程度上可判断创伤程度及预后。与瘦素相比,ob-R的变化持续时间更长,对损伤更为敏感。

人乳头瘤病毒-6L1蛋白B-细胞优势表位作为多肽疫苗的研究

本研究分析了人乳头瘤病毒-6 型 L1 外壳蛋白之 B-细胞优势表位,并拟以此为基础制作表位多肽疫苗。研究中采用 Goldkey 和 PC/Gene 软件系统综合分析 HPV6 之 L1 蛋白 B-细胞优势表位后,Fmoc 固相合成表位多肽,通过 HPLC 纯化和毛细管电泳分析其纯度。与佐剂完全乳化后,免疫小鼠,进行动物水平的免疫效果评价。取免疫小鼠血清,与 HPV-6 DNA 阳性的尖锐湿疣患者疣体组织上清液结合,以鉴定免疫小鼠所产生抗体的特异性。发现 L1 蛋白第 425-439 位和第 486-500 位具有较高的免疫原性,可明显诱导小鼠血清抗体滴度升高,且该抗体与人尖锐湿疣疣体组织上清液呈阳性反应。说明所选这两个肽段为 HPV6 之 L1 蛋白的 B-细胞优势表位,但诱导产生的抗体是否具有功能特异性,正在做进一步研究。

血清源酸热稳定多肽促伤口愈合的研究

为了研究多肽促进伤口愈合的可能性，从猪血清中分离出一组酸、热稳定的多肽，分子量低于１８ｋｕ，无免疫原性、无毒副作用。用５０μｌ多肽制剂（５ｍｇ／ｍｌ）注入小鼠皮下埋置的聚乙烯醇海绵“死腔伤口”中，从致伤当日起，每日一次共５次；对照“死腔伤口”内注入５０μｌ牛血清白蛋白（５ｍｇ／ｍｌ）。伤后７，１０ｄ治疗组海绵中总ＤＮＡ、蛋白质及羟脯氨酸含量明显高于对照组，有显著差异（Ｐ＜０．０５），伤后１４ｄ两组间无差异（Ｐ＞０．０５）。体外实验发现，与对照基质１％胎牛血清１６４０液相比，含０．２％多肽制剂的对照基质可明显促进伤口修复细胞增殖，经统计学处理有显著差异（Ｐ＜０．０５）。结果证实，猪血清源分子量低于１８ｋｕ的酸、热稳定多肽，具有促伤口愈合的活性，直接促进伤口修复细胞生长是其发挥作用的机理之一。

PQ401的体内外抗炎效应研究

目的研究胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)的选择性抑制剂PQ401在体内外的抗炎效应。方法体外实验:小鼠RAW264.7细胞株经0.1、1、10μmol/L PQ401预作用1 h后,加入10μg/m L脂多糖(LPS)作用12 h,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β、IL-6)的含量。另将小鼠RAW264.7细胞株经10μmol/L PQ401预作用1 h后,加入10μg/m L LPS作用6、12、24 h后再次检测以上指标的变化。体内实验:将50只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和不同剂量PQ401组,每组10只。腹腔注射LPS 10 mg/kg制备急性炎症反应小鼠模型,对照组腹腔注射等量二甲基亚砜(DMSO),PQ401组分别腹腔注射LPS 10 mg/kg和PQ401 25、50、100 mg/kg。于给药12 h后通过ELISA检测血清和肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量;用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及总胆红素(TBil)水平;采用Western blot检测肝细胞核内核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的含量。结果与LPS单独作用组相比,PQ401呈浓度和时间依赖性降低RAW264.7细胞上清中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。在LPS诱导的小鼠急性腹膜炎模型中,小鼠经LPS注射12 h后表现为精神萎靡、活动减少,而PQ401组小鼠的精神状态、活动均好于模型组。PQ401治疗后能有效降低LPS所致急性腹膜炎小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量,降低肝组织TNF-α、IL-1β的水平和NF-κB p65的含量。结论 PQ401在体内外对LPS诱导的炎症因子分泌具有明显的抑制效应。

重组cDNA表达文库血清学分析技术筛选肿瘤抗原的研究进展

1995年Sahin等首先建立了重组cDNA表达文库血清学分析法 (SEREX)以来 ,大量的人类肿瘤抗原被发现和鉴定 ,并建立了SEREX技术合作组及相应的数据库。

创伤家兔血清免疫抑制性研究

创伤家兔血清免疫抑制性研究张玉纯，李磊，胡承香（第三军医大学野战外科研究所一室重庆６３００４２）本研究通过家兔双后肢粉碎性骨折模型，观察了家兔创伤前后不同时相血清对正常小鼠脾淋巴细胞转化及白细胞介素２（ＩＬ－２）诱生的影响。此实验为进一步探讨创伤后机...