陕西省泾阳县药用植物资源调查研究

调查陕西省咸阳市泾阳县中药资源物种分布及数量状况,提供必要的分析数据来保障当地中药资源市场的可持续发展。参考《第四次全国中药资源普查(试点)施行方案》,经由对三类代表区域、样地、样方调查以及标本采集,图像和书面记录,并结合历史文献考证等方法研究泾阳县中药资源的多样性。泾阳县现有中药资源77科、187属、226种,依样方统计重点品种含有42种,其中有6种在国家Ⅲ级重点保护的野生药材名录范畴内。泾阳县中药资源的物种分布状况已基本查清,对下阶段普查工作的延伸具备良好的引领意义,普查结果也支持着县域中药文化知识的普及和中药资源市场的可持续发展战略。

陕西省三原县中药资源普查初报

[目的]系统调查和统计陕西省三原县中药资源品种、分布,厘清本县中药资源总量。[方法]依照三原县中药资源普查方案要求,对V2系统随机生成的20个样地进行野外实地调查,通过采集实物制作腊叶标本等进行药用植物一般品种和重点品种调查,同时进行栽培药材品种和传统知识调查统计。[结果]共调查样地20个,100个套方,600个样方,中药资源包含恩格勒系统中61个科,149个属,183种,涉及陕西省中药资源重点品种调查名录有43个。三原县栽培品种有皂荚、杜仲、国槐、丹参、月季等。明善堂第五代传人李朝阳在治疗脾胃病、风湿病方面常用方面四神汤加二花炭、独活汤加黑木耳等,效果较好。[结论]已基本摸清三原县中药资源总体情况,为该县中药材资源产业发展提供基础数据。

陕西彬州市中药资源普查分析研究

目的通过对彬州市现有中药资源的实地普查,摸清家底,为彬州市中药资源的合理开发利用和保护提供依据。方法以全国中药资源普查技术规范为指导,通过野外样地调查、标本采集与制作、普查数据整理以及民间走访,并对彬州市现有中药资源从重点品种、入药部位、生活型、采集地不同方面进行统计分析。结果普查共完成了37个样地,185个套方,1110个样方的调查。调查的药用植物种类涉及82个科,共288种,其中普查重点品种71种。结论彬州市中药资源海拔分布差异较小,各乡镇分布种数差异不大。野生草本药用植物占主要位置,全草类、根及根茎类、果实和种子类的药用植物种类繁多。普查结果为彬州市中医药产业发展规划的制订以及中药材合理利用、栽培与开发提供了参考依据。

陕产七叶一枝花的生药学研究

目的:对陕产七叶一枝花Paris polyphylla Sm.进行系统的生药学研究。方法:用形态组织学方法研究原植物形态、生药性状和显微特征,并用高效液相色谱法(HPLC)测定重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的总含量。结果:陕产七叶一枝花生药为其根茎,显微特征为横切面有栓化表皮、外皮层、皮层和内皮层,中柱为薄壁组织中散布周木式维管束等结构;生药粉末中含极多单粒淀粉,常见草酸钙针晶、螺纹、梯纹、网纹和梯-网纹导管。重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ总质量分数达到2%以上。结论:陕产七叶一枝花药用植物分类特征明显,药材性状稳定,显微结构显著;重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ和Ⅶ的总含量达到了《中华人民共和国药典》2015年版一部标准,为陕产重楼药材质量标准制订及资源合理开发利用提供参考。

不同产地款冬花中主要活性成分的研究现状与分析

款冬花为菊科植物款冬Tussilago farfara L.的干燥花蕾,系中国常用大宗中药材之一,具有润肺下气、化痰止咳之功效。款冬花化学成分丰富,药用价值高,临床疗效好。然而,不同产地款冬花受环境、栽培条件等因素的影响,它们在生长状态、理化性质、药材性状及次生代谢产物积累等方面均存在不同程度的差异,尤其是各地款冬花药材中主要化学成分参差不齐,导致药材品质参差不齐。基于此,通过本草考证探明款冬花历代产区沿革,结合课题组多年对中国主产区款冬花的研究成果,并整理款冬花中主要化学成分的研究文献资料,对倍半萜类、酚酸类、黄酮类、生物碱类化学成分进行数据收集和横向归纳比较,总结不同产地款冬花成分的研究现状,从款冬花标志性成分角度窥视其成分差异,为开展不同产地款冬花的共性和个性特征研究提供数据支撑。

基于Apriori算法与网络关联的含桃仁方剂应用规律探析

目的 运用Apriori算法挖掘含桃仁方剂的配伍规律及桃仁炮制品、每日用量与主治病证及病证类型的关联性,为桃仁的临床实践及现代应用提供参考。方法 检索《中医方剂大辞典》中含桃仁的方剂,运用Excel 2017、IBMSPSSModeler 18.0、Cytoscape 3.9.1软件、Chiplot网站进行频次统计及关联规则分析。结果 共收集含桃仁方剂1563首,多来源于宋朝,涉及486味中药,以补血药、理气药、温里药为主;主治病证366种,可归为30种病证类型,高频病证为闭经、跌打损伤、癥瘕积聚等,高频病证类型为气血津液病证、产后病证、月经病证等;桃仁炮制品以桃仁为主,其次为麸炒桃仁、燀桃仁,其中桃仁关联病证和病证类型最多,麸炒桃仁与气血津液病证关联性最好;桃仁每日用量主要分布于<3 g、5~10 g、3~4.9 g,其中桃仁<3 g与主治病证跌打损伤、产后腹痛、产后便秘等相关联,与病证类型产后病证关联性最好;3~4.9 g、5~10 g与主治病证跌打损伤关联性最好,与病证类型产后病证、气血津液病证等相关联。通过关联规则分析得到桃仁治疗闭经的核心配伍为当归、大黄、肉桂、川芎,治疗跌打损伤的核心配伍为当归、红花、大黄、赤芍,治疗气血津液病证的核心配伍为当归、肉桂、木香、大黄,治疗产后病证的核心配伍与同气血津液病证相同,仅有主次之分。结论 通过关联规则分析桃仁炮制品、每日用量与主治病证及病证类型间的关系,揭示了桃仁在具体病证中的应用特点,结果可为桃仁的临床合理应用及后续新方的研发提供参考与新思路。

山茱萸果核提取物不同洗脱部位对急性药物性肝损伤的作用研究

目的研究山茱萸果核提取物大孔树脂不同洗脱部位对对乙酰氨基酚(APAP)所致小鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用。方法通过大孔吸附树脂将山茱萸果核提取物分别用0%、30%、60%和90%乙醇进行洗脱,得到4个洗脱部位(ESCOA、ESCOB、ESCOC、ESCOD)。再以生化检测和组织病理学结果,评价山茱萸果核不同洗脱部位的低、高剂量组(以生药量计为4.68 g·kg^(-1)、12.48 g·kg^(-1))对APAP所致小鼠ALI的保护作用。结果组织病理学观察结果表明,模型组小鼠的肝组织可见炎性细胞浸润,伴有肝细胞变性、片状坏死,而山茱萸果核ESCOA高剂量组、ESCOB低剂量组及ESCOC各剂量组对这些病变均有不同程度的改善;生化检测结果表明,与模型组相比,各组小鼠血清中谷丙转氨酶水平均显著降低,ESCOA低剂量组和ESCOC各剂量组小鼠血清中谷草转氨酶水平显著降低,各组小鼠肝脏组织中SOD水平均显著升高,ESCOA低剂量组、ESCOB高剂量组、ESCOC各剂量组小鼠肝脏组织中GSH-Px显著升高,ESCOA低剂量组及ESCOC、ESCOD各剂量组小鼠血清中MDA水平显著降低。结论山茱萸果核提取物的不同洗脱部位均对APAP所致小鼠ALI有一定的保护作用,其机制可能与抗氧化应激反应有关。

怀牛膝可培养内生真菌的多样性研究

[目的]探讨道地药材怀牛膝(Achyranthes bidentata Blume)内生真菌的多样性组成及定殖情况。[方法]通过组织块分离法,选取二年生怀牛膝茎部和根部作为分离对象,进行内生真菌分离,并采用形态学和分子生物学2种方法对分离得到的真菌进行鉴定。[结果]从怀牛膝材料中共分离纯化获得136株内生真菌,其中根部分离得到86株,茎部分离得到50株,根据形态和分子生物学特征,它们属于8目11科11属;其中,怀牛膝根部内生真菌定殖率较高(65.0%),茎部内生真菌定殖率较低(37.5%)。茎部分离的内生真菌只有8种,根部分离得到11种。[结论]怀牛膝根部内生真菌表现出了较高的种属多样性。在怀牛膝根部分离的内生真菌中,优势菌属是镰孢属和Moesziomyces。

分子生药学课程双语教学模式探索

为探求适合中医药大学的双语教学模式,在运用问卷调查法对在校本科生进行双语教学期望值、接受度和学习效果调研。在此基础上,教学团队采用过渡式双语教学方法,运用线上线下混合式教学手段,将思政元素和科研元素融入其中,结合形成性评价分析双语教学成效。教学实践显示侧重专业术语的过渡式双语教学方法,可有效提高学生理论知识学习的深度和广度,培养学生自主学习的能力。

黄芩根中木间木栓的形成与发育特性研究

应用光学显微镜和电子显微镜对3年生黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)根中木间木栓的形成及其发育过程进行了细致观察,以揭示黄芩木间木栓形成的特征以及发育过程中导管及周围薄壁细胞的变化,旨在为中药枯芩的形成提供理论依据和实验证据。结果表明:(1)黄芩根的次生结构由周皮、皮层和次生维管组织组成;木间木栓发生在木质部异常导管的周围,先是导管内出现侵填体或其他物质,接着这些导管邻近的部分薄壁细胞内也出现一些物质,随后导管外围的正常薄壁细胞恢复分生能力,产生木栓形成层,进而形成木间木栓。(2)木间木栓将健康组织与这些异常的导管和薄壁细胞隔离,隔离在内的组织会逐渐成为死亡组织。(3)横切面观,小木间木栓可同时或先后发生在木质部的不同位置,由内向外逐渐扩大,与周围的木间木栓相连,最终形成大的木间木栓。(4)纵切面观,木间木栓以管状形式由根头部向下延伸,部分根中距根头部以下3 cm内有木间木栓存在。

基于化学模式识别分析的黄芩HPLC指纹图谱研究

目的建立黄芩野生和栽培药材的HPLC指纹图谱,并以指纹图谱共有峰数据构建化学模式识别模型,评价不同来源黄芩药材的差异性机制。方法采用高效液相色谱法建立20批不同来源黄芩药材的指纹图谱,构建HPLC-指纹图谱共有模式,整合相似度评价、主成分分析(PCA)和最小偏二乘法-判别分析(PLS-DA)对不同来源黄芩药材进行评价。结果建立了黄芩药材的HPLC指纹图谱,标定了19个共有峰,20批黄芩样品的指纹图谱与对照指纹图谱相似度>0.9。最小偏二乘法-判别分析能对野生与栽培黄芩进行明确的区分,表明导致差异的主要化学标记物为黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素等6个成分。结论建立的黄芩HPLC指纹图谱,与模式识别方法相结合可为黄芩药材质量评价提供参考。

不同年限黄芩根结构及黄酮类物质变化特征研究

目的建立快速鉴定黄芩生长轮数目的方法,探明其黄酮类物质的含量变化特征,为中药黄芩质量控制奠定基础。方法采用石蜡切片法、徒手切片法对1~3年生黄芩根中的生长轮现象观察研究,高效液相色谱法对2~4年黄芩根中不同组织部位7种黄酮类成分黄芩苷、野黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A进行含量测定。结果不同年限黄芩根、同一年限黄芩主根从上至下生长轮数目与黄芩实际种植年限一致;枯芩的年限鉴别中,由于上部有木间木栓,可以取根中部或下部的材料。4种黄酮类成分黄芩素、汉黄芩素、白杨素、千层纸素A的含量随年限的延长而增加,7种黄酮类成分的总含量为4年生>2年生>3年生。结论徒手切片法结合间苯三酚-浓盐酸染色简单、快速,可用于实际生产中黄芩实际生长年限的鉴别,其木间木栓的形成对根中黄酮类物质的积累具有一定的影响,4年生黄芩的木间木栓中含有丰富的黄酮类物质,在使用过程中建议保留使用。

掌叶大黄(RheumpalmatumL.)WRKY基因家族鉴定与分析

【目的】本研究为开展WRKY基因功能验证提供基础,进而为大黄药材品质形成的转录调控机制研究提供科学依据。【方法】基于掌叶大黄(R.palmatum L.)的全长转录组数据,通过生物信息学方法鉴定掌叶大黄WRKY基因家族成员,分析其蛋白理化性质、结构域、系统发育关系、蛋白互作,结合转录组数据进行不同组织和茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)处理的表达谱分析。【结果】掌叶大黄WRKY基因家族包含53个成员,编码蛋白氨基酸数量为192-748,均为亲水性蛋白,预测定位均在细胞核。掌叶大黄WRKY基因家族与拟南芥WRKY基因家族成员进化树可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个亚族,其中Ⅱ亚族WRKY占比最高(58.49%)。转录组数据分析显示掌叶大黄WRKY基因家族成员在掌叶大黄根、根茎和叶中差异表达,其中7个基因在根和根茎中表达量较高,12个基因响应MeJA处理呈差异表达,其中10个被MeJA显著诱导,4个候选基因RpWRKY5/6/9/33的qPCR分析与其转录组结果基本一致。蛋白互作网络显示RpWRKY2/16/20/22/23与查尔酮合酶(chalconesynthase,CHS)发生相互作用。【结论】获得53个掌叶大黄WRKY基因、生物信息、组织及响应MeJA的表达特征,其中5个可能与大黄蒽醌类物质的合成有关。

基于全长转录组测序的掌叶大黄bZIP基因家族鉴定分析

bZIP转录因子在调控植物生长发育、次生代谢产物合成以及胁迫响应中发挥着重要作用。本研究基于全长转录组测序分析,系统筛选掌叶大黄(Rheum palmatum)bZIP基因家族,分析其编码蛋白的理化性质、保守基序及系统进化等特性,利用RNA-seq进行基因组织表达分析和茉莉酸甲酯(MeJA)处理基因表达分析。结果表明,掌叶大黄bZIP基因家族有63个成员(RpbZIP1~RpbZIP63);根据其与拟南芥(Arabidopsis thaliana)bZIP系统发育关系被分为A~I和K、S等11个亚族;RpbZIPs基因主要编码不稳定的亲水蛋白,均定位于细胞核;RpbZIPs蛋白二级结构主要为α螺旋和无规卷曲。基于RNA-seq数据,筛选出掌叶大黄根及根茎中高表达且响应MeJA的RbZIP16、RpbZIP17、RpbZIP61等6个基因,qPCR验证了其中4个与转录组测序表达结果一致。本研究系统分析掌叶大黄bZIP基因家族,为后续进一步研究基因功能及大黄次生代谢转录调控机制提供了科学依据。

南五味子二氯甲烷部位化学成分结构鉴定及对HepG2和INS-1细胞的影响

目的探讨南五味子二氯甲烷部位(SDP)对HepG2细胞胰岛素抵抗和INS-1细胞高糖损伤的影响。方法采用1×10^(-6) mol·L^(-1)胰岛素建立HepG2细胞胰岛素抵抗和30 mmol·L^(-1)葡萄糖建立INS-1细胞高糖损伤模型,并使用不同浓度的南五味子二氯甲烷部位进行干预。检测HepG2细胞中三酰甘油(TG)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、细胞内活性氧(ROS)、腺苷三磷酸水平(ATP)、葡萄糖水平;检测INS-1细胞中MDA、SOD、过氧化物歧化酶(GSH)、ROS、基础葡萄糖(BIS)和高糖(GSIS)水平;并采用UPLC-MS/MS法分析SDP中的化学成分。结果经胰岛素诱导48 h的HepG2细胞,模型组TG、MDA、ROS葡萄糖升高(P<0.01),SOD、ATP降低,经SDP干预后,TG、MDA、ROS均有所回调,SOD、ATP显著升高;经高糖诱导48 h的INS-1细胞,模型组MDA、ROS升高(P<0.01),SOD、GSH-Px、BIS、GSIS降低(P<0.01),SDP干预后MDA、ROS回调(P<0.01),SOD、GSH-Px、BIS、GSIS上升(P<0.01)。从SDP样品中共成功鉴定出1824个化学成分,其中134个木脂素类、283个酚酸类、283个香豆素等其他类化合物,而木脂素类化合物相对含量最高。结论SDP能改善HepG2细胞胰岛素抵抗和INS-1细胞高糖损伤,分析了SDP化学成分,为防治T2DM提供实验依据。

掌叶大黄4个MYB转录因子的分子克隆及胁迫表达

旨在克隆获得 RpMYB2、 RpMYB3、 RpMYB5、 RpMYB6基因ORF,并对其理化特性、系统进化关系、不同组织表达、激素与非生物胁迫下的表达等展开分析。研究结果表明, RpMYB2、 RpMYB3、 RpMYB5、 RpMYB6依次编码333、275、293、291个氨基酸,分子质量分别为34.781、30.525、31.243、33.313 ku, 4个RpMYBs蛋白均为亲水性蛋白并具有较高的热稳定性,除 RpMYB2外其余3个基因结构主要为α-螺旋和无规则卷曲,且均定位于细胞核。由蛋白结构域和保守基序分析发现, RpMYB2、 RpMYB5含有1个HTH-MYB结构域, RpMYB3、 RpMYB6含有2个HTH-MYB结构域,且不同MYB转录因子包含的保守元件数量及种类存在差异,系统进化分析显示 RpMYB2、 RpMYB5属于R1-MYB亚家族, RpMYB3、 RpMYB6属于R2R3-MYB亚家族,与其结构域分类一致。实时荧光定量结果显示,根中 RpMYB2、 RpMYB6转录本丰度最高, RpMYB3、 RpMYB5基因分别在叶片、叶柄中高表达。经200μmol·L^(-1)脱落酸(abscisic acid, ABA)处理, RpMYB5于24 h达峰值;200μmol·L^(-1)茉莉酸甲酯(methyl jasmonate, MeJA)诱导 RpMYB6表达,表达量随时间推移呈逐渐上升趋势且于24 h最高(为0 h的10.30倍),抑制 RpMYB3表达;200μmol·L^(-1)水杨酸(salicylic acid, SA)诱导 RpMYB6表达最为明显,3 h表达量上调至0 h的21.84倍。RpMYBs在非生物胁迫处理下表达也各有差异, RpMYB2受高温胁迫诱导表达, RpMYB3在损伤、高温胁迫下表达下调, RpMYB5在损伤胁迫下表达受抑制, RpMYB6响应高温、盐胁迫。

南五味子多糖对高糖损伤INS-1细胞及糖尿病小鼠的改善作用

目的结合体内外实验研究南五味子多糖(SSP)对高糖损伤大鼠胰岛细胞瘤细胞系INS-1细胞及糖尿病小鼠的影响,以期为防治糖尿病提供理论支持。方法SSP干预高糖损伤INS-1细胞,采用CCK8法检测各组细胞活力,ELISA法测定细胞上清液胰岛素含量,比色法检测SOD及GSH-Px活性与MDA含量,DCFH-DA荧光探针法检测ROS水平。建立糖尿病小鼠模型,随机分为NC组、Mod组、Met组、SSP-Low组、SSP-Hig组。给药21 d,记录小鼠体重变化。给药结束后,检测小鼠口服葡萄糖耐量、SOD活性和胰岛素水平以及胰腺组织病理变化。结果对于高糖损伤的INS-1细胞,SSP能够提高胰岛素分泌水平(P<0.01),使SOD及GSH-Px活性显著上升(P<0.01),MDA含量和ROS水平显著下降(P<0.01);对于糖尿病小鼠,SSP能够升高体重,改善糖耐量异常,使胰岛素水平和SOD活性增加(P<0.05),胰岛内细胞数量增多,改善胰岛形态。结论南五味子多糖对高糖损伤的INS-1细胞和糖尿病小鼠具有改善作用,值得进一步深入研究。

陕西关中野生商陆资源的ITS2和psbA-trnH条形码序列研究

为探讨DNA条形码在陕西关中野生商陆资源中的鉴定作用,本研究采用通用引物ITS2和psbA-trnH对29份商陆样品DNA进行PCR扩增和测序,用Codon CodeA-ligner V3.0进行序列拼接和校对,随后进行BLAST比对鉴定分析;同时运用MEGA 6.0分析序列特征、K2P遗传距离及种内或种间变异,并构建系统进化树,评价两对引物对该区域商陆及其混伪品的鉴别能力。研究结果表明,ITS2和psbA-trnH序列的PCR扩增和测序成功率均为100%;NJ系统进化树显示ITS2和psbA-trnH序列均可明显将所有样本分别聚为商陆、垂序商陆并与其同属近源种鄂西商陆、日本商陆及两种混伪品各自聚为不同分支;ITS2序列在种间遗传距离上较psbA-trnH有一定优势。ITS2和psbA-trnH序列均可作为DNA条形码对商陆及其混伪品进行识别和鉴定,为商陆资源品种现状与分布研究及合理开发利用提供理论依据。

桔梗质量标志物筛选

目的筛选桔梗质量标志物。方法建立HPLC-ELSD指纹图谱,获取化学成分信息。采用网络药理学建立成分-靶点、蛋白互作网络,筛选核心靶点与潜在质量标志物,并进行细胞实验验证。结果19批药材指纹图谱中有12个共有峰,相似度0.933~0.997。共得15种活性成分、5个核心靶点、5个质量标志物。各质量标志物干预后,A549细胞上清IL-17、TNF水平降低(P<0.01),EGFR、JUN、RXRA、STAT3、TNF、PTGS2 mRNA表达升高(P<0.01)。结论桔梗皂苷D 3、桔梗皂苷D 2、桔梗皂苷A、远志皂苷D 2、桔梗酸A可作为桔梗质量标志物,该药材能通过免疫调节、抑制炎症因子分泌、调控细胞分化与增殖等途径达到宣肺、利咽功效。

基于LC/GC-MS和网络药理学探讨大黄-桃仁药对逐瘀泻热的作用机制

目的 分析大黄-桃仁药对水煎液的化学成分,探讨其逐瘀泻热的药效物质及作用机制。方法 采用UPLC-TOF-MS、GC-MS对大黄-桃仁药对水煎液进行成分分析,结合网络药理学方法构建大黄-桃仁药对逐瘀泻热的“疾病-成分-靶点”网络,筛选目标信号通路。采用间隔24 h两次大鼠尾静脉注射内毒素脂多糖复制“瘀热”大鼠模型,通过大鼠体温变化,血液流变、凝血四项(TT、PT、APTT、FIB)、炎症因子水平、氧化应激水平等的测定对大黄-桃仁药对逐瘀泻热进行药效评价。通过分子对接技术、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)对预测的核心靶点进行验证。结果 从大黄-桃仁药对水煎液中鉴定得到化合物64个,网络药理学分析结果表明大黄-桃仁药对中芦荟大黄素、圣草酚、表没食子儿茶素没食子酸酯、原花青素等核心成分,通过作用于AKT1、PTGS2、SRC、IL1B、TNF等核心靶点,调控VEGF、MAPK、IL-17、TNF等通路达到逐瘀泻热的目的。动物实验结果表明,大黄-桃仁药对给药后,模型大鼠的氧化应激(NO、SOD、MDA)、凝血四项、血液流变、体温等指标均向正常回调,大黄-桃仁药对能够降低炎症因子IL-1β、IL-17、TNF-α含量以及核心靶点AKT1、SRC、MYC、EGFR、PTGS2、TP53 mRNA表达。结论 圣草酚、芦荟大黄素、原花青素、没食子酸儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯等化合物为大黄-桃仁药对逐瘀泻热的药效物质。大黄-桃仁药对通过多靶点,多通路调控机体炎症、氧化应激、血管生成、血管内皮等方面发挥逐瘀泻热作用。