五虎汤对呼吸道合胞病毒感染细胞外泌体致哮喘小鼠自噬及IL-8、IL-23、muc5ac表达的影响

目的观察五虎汤对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的骨髓间充质干细胞外泌体(BMSCs-ExoRSV)致哮喘小鼠肺组织自噬及白细胞介素(IL)-8、IL-23、muc5ac表达的影响,探讨其治疗哮喘的作用机制。方法40只SPF级雄性C57小鼠随机分为空白组、模型组、五虎汤组和利巴韦林组,每组10只。空白组予PBS滴鼻,其余组予BMSCs-Exo-RSV滴鼻,隔日1次,共7次。造模结束后24 h,五虎汤组灌胃五虎汤药液,利巴韦林组灌胃利巴韦林溶液,空白组和模型组灌胃蒸馏水,每日1次,连续7 d。观察小鼠一般状况,检测小鼠呼气峰流速(PEF)和用力肺活量(FVC),HE和Masson染色观察肺组织炎性浸润和胶原沉积情况,RT-qPCR检测肺组织LC3A/B、beclin-1、p62、IL-8、IL-23、muc5ac mRNA表达,Western blot检测肺组织LC3B、beclin-1、p62蛋白表达,免疫组化检测肺组织IL-8、IL-23、muc5ac蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量下降,出现呼吸急促、点头样喘息、上肢缩抬、耸肩、竖毛、搔鼻等改变,PEF和FVC降低(P<0.01),肺组织炎性浸润和胶原沉积增多,肺组织LC3A/B、beclin-1、IL-8、IL-23、muc5ac mRNA表达升高(P<0.01),p62 mRNA表达下降(P<0.01),LC3BⅡ、beclin-1、IL-8、IL-23、muc5ac蛋白表达及LC3BⅡ/Ⅰ比值升高(P<0.01),LC3BⅠ、p62蛋白表达下降(P<0.01)。与模型组比较,五虎汤组和利巴韦林组小鼠哮喘症状有所改善,PEF和FVC升高(P<0.01,P<0.05),肺组织炎性浸润和胶原沉积减少,肺组织LC3A/B、beclin-1、IL-8、IL-23、muc5ac mRNA表达下降(P<0.01),p62 mRNA表达升高(P<0.01),LC3BⅡ、beclin-1、IL-8、IL-23、muc5ac蛋白表达及LC3BⅡ/Ⅰ比值下降(P<0.05,P<0.01),LC3BⅠ、p62蛋白表达升高(P<0.01)。结论BMSCs-Exo-RSV能通过促进小鼠肺组织自噬及IL-8、IL-23、muc5ac表达诱发哮喘改变,五虎汤能通过抑制自噬并降低IL-8、IL-23、muc5ac表达对哮喘小鼠发挥治疗作用。

ICU护士隐性缺勤现状及影响因素

目的 调查宁夏回族自治区各级医院ICU护士隐性缺勤现状并分析其影响因素。方法 2023年2月选取宁夏回族自治区40所医院的ICU护士为调查对象,通过一般资料调查表、中国护士工作压力源量表和中文版斯坦福隐性缺勤量表进行问卷调查。结果 本研究共纳入390名ICU护士。ICU护士工作压力得分为99.17±19.01分,中度及重度压力各占59.49%、33.59%,隐性缺勤得分为17.33±4.50分,高隐性缺勤者达57.69%;Pearson相关分析结果显示,工作压力与隐性缺勤呈正相关(r=0.480,P<0.001);多元线性回归结果显示,健康状况感知、工作满意度、工作环境及仪器设备、管理及人际关系是ICU护士隐性缺勤的影响因素(P<0.05)。结论 宁夏回族自治区各级医院ICU护士工作压力及隐性缺勤处于中等偏上水平,健康状况感知、工作满意度、工作环境及仪器设备、管理及人际关系是ICU护士隐性缺勤的影响因素,护理管理者应重视ICU护士的隐性缺勤现状,动态改善科室环境,及时调整管理方式并促进医护沟通协作,关注并增强ICU护士健康状况感知意识,提高护士自身职业认同感及工作满意度,以此降低隐性缺勤的发生。

五虎汤抑制STAT3通路并调节哮喘小鼠Th2/Th17免疫平衡

目的:探讨信号转导及转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)诱发哮喘小鼠Th2/Th17的免疫调节及五虎汤的干预作用。方法:60只SPF级雌性BALB/c小鼠,用RSV复合鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)雾化吸入诱发哮喘小鼠模型,造模成功后随机分为正常组、模型组、五虎汤组和STAT3抑制剂(Stattic)组。使用动物呼吸机检测小鼠气道反应性;HE染色观察肺组织病理学改变;ELISA法检测血清中白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)、IL-5、IL-17A和IL-23的含量;Western blot及免疫组化法观察肺组织中STAT3和p-STAT3的蛋白水平。结果:气道反应性结果提示造模成功。与正常组比较,模型组小鼠的气道反应性显著上升(P<0.01),肺组织周围炎症细胞浸润明显,血清中IL-4、IL-5、IL-17A和IL-23含量上升(P<0.01),肺组织中STAT3及p-STAT3蛋白水平升高(P<0.01);与模型组比较,五虎汤组及Stattic组小鼠的气道反应性显著下降(P<0.01),肺组织周围炎症损伤减轻,血清中IL-4、IL-5、IL-17A和IL-23含量下降(P<0.01),肺组织中STAT3及p-STAT3的蛋白水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论:抑制STAT3通路可减少炎症因子的产生从而调节Th2/Th17免疫平衡;五虎汤可能通过干预STAT3通路减轻RSV诱发的哮喘小鼠免疫炎症,从而治疗哮喘。

银黄清肺胶囊治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的临床观察

目的观察银黄清肺胶囊治疗小儿病毒性肺炎痰热闭肺证的疗效及安全性。方法选取2019年2月至2019年12月在湖南中医药大学第一附属医院儿科住院的85例病毒性肺炎痰热闭肺证患儿,将其随机分为观察组(45例)和对照组(40例)。对照组采用利巴韦林治疗,观察组采用银黄清肺胶囊治疗,两组均治疗10 d。治疗前后记录两组症状体征消失时间、炎性因子(TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、TGF-β1)水平、免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)水平、T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)水平,比较两组临床疗效,并记录不良事件。结果治疗后,观察组临床疗效优于对照组(P<0.05),且观察组退热时间、咳嗽及喘息消失时间较对照组短(P<0.05);治疗后,两组TNF-α、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、TGF-β1水平较治疗前降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05);两组治疗后CD4+、CD4+/CD8+水平较治疗前均降低(P<0.05),两组治疗后CD8+水平较治疗前均升高(P<0.05),观察组治疗后CD3+水平较治疗前升高(P<0.05);治疗后,观察组CD3+、CD8+水平较对照组均升高(P<0.05),观察组CD4+、CD4+/CD8+水平较对照组均降低(P<0.05);两组治疗后IgG、IgM水平较治疗前升高(P<0.05);治疗后,观察组IgG、IgM水平较对照组升高(P<0.05);两组在治疗期间未发现不良反应。结论银黄清肺胶囊治疗小儿病毒性肺炎有很好的临床疗效,可缩短肺炎症状体征消失的时间,使患儿各项炎症指标恢复正常,并且促进免疫球蛋白上升,提高免疫力。

RSV诱导哮喘小鼠树突细胞自噬机制及五虎汤的干预作用

目的研究PI3K/Akt/mTOR信号通路对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)诱导哮喘小鼠树突细胞(dendritic cells,DC)自噬的调控机制及五虎汤的干预作用。方法用RSV滴鼻联合雾化鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)激发的方法制备哮喘小鼠模型,造模后的小鼠分为模型组、五虎汤低剂量组、五虎汤中剂量组、五虎汤高剂量组、地塞米松组、雷帕霉素组、氯喹组,每组10只,并设空白组(10只)对照。实验结束后PAS、Masson染色观察评价肺组织病变情况,并计算气道黏液储备指数与胶原沉积指数;电镜观察自噬小体;Western blot检测DC自噬相关蛋白及对PI3K/Akt/mTOR信号通路中关键蛋白PI3K、p-Akt、p-mTOR表达的影响。结果气道反应性结果显示造模成功。病理染色显示模型组小鼠气道黏液储备指数与胶原沉积指数较空白组显著增高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组相比,五虎汤各剂量组及其他药物组哮喘小鼠气道黏液储备指数与胶原沉积指数降低,差异有统计学意义(P<0.01)。电镜下观察小鼠肺组织自噬小体显示模型组相较于空白组中自噬小体数量明显增加,各治疗组的自噬小体较模型组增加。Western blot显示,自噬蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ在五虎汤各剂量组以及雷帕霉素组中的表达显著增高,与模型组相比差异有统计学意义(P<0.01);氯喹组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平较模型组降低(P<0.01);地塞米松组与模型组比较,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平相对表达无统计学差异(P>0.05);通路关键蛋白表达水平显示,五虎汤各剂量组及雷帕霉素组中PI3K、p-Akt和p-mTOR的蛋白表达水平与模型组相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论RSV诱导哮喘小鼠树突细胞自噬水平上升,PI3K/Akt/mTOR信号通路被活化,五虎汤通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路,进一步上调树突细胞的自噬,减轻气道重塑。

加味五虎汤对痰热壅肺型咳嗽变异性哮喘患儿血清炎性因子和免疫球蛋白的影响

目的:探讨加味五虎汤治疗儿童咳嗽变异性哮喘的疗效和机制。方法:将2019年5月至2020年5月收治的120例咳嗽变异性哮喘患儿根据治疗方法不同分为治疗组、对照组,每组60例。对照组患儿予孟鲁司特钠片口服,连服7 d。治疗组患儿在对照组治疗基础上予加味五虎汤口服。两组患儿均在治疗7 d后统计中医证候积分、评价疗效,检测血清免疫球蛋白E(IgE)、白介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-2(IL-2)水平。结果:两组临床疗效比较,治疗组临床总有效率明显高于对照组(P<0.05)。治疗后,治疗组患儿中医证候积分明显低于对照组(P<0.05),治疗组患儿IgE、IL-4、TNF-α水平明显低于对照组(P<0.05),IL-2水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:加味五虎汤对痰热壅肺型儿童咳嗽变异性哮喘有良好的治疗效果,能够明显缓解临床症状,抑制气道炎症,纠正Th1/Th2细胞亚群失衡。

《禁止核武器条约》之困境及出路

2021年1月22日起生效的《禁止核武器条约》致力于在全球范围内禁止核武器的拥有、研发、储存、转移、试验、使用或是威胁使用等行为,从而将核武器完全非法化。尽管《禁止核武器条约》反映了人道主义的关怀和无核世界的愿景,但该条约无论是在理论层面还是在现实层面都面临着不小的困境。从理论上看,《禁止核武器条约》以确立禁核规范来推动国际社会所有成员国弃核的逻辑基础并不牢固,因为规范可能退化甚至被颠覆,未必能够对国家产生强有力的约束。在现实层面,《禁止核武器条约》则因为全盘否定核威慑的重要性而遭到拥有核武器国家及其盟国的联合抵制,并暴露出该条约忽视部分国家的安全关切、损害国家自卫权利以及忽略裁军核查机制等不足。鉴于国际社会围绕《禁止核武器条约》产生了诸多争议,未来,该条约还是应当落脚到分步骤、渐进式的核裁军路线上来,需要在提供安全保证、区分禁核情形、建立核查机构,以及加强与不扩散国际机制兼容等方面进行完善,以促进当前核不扩散国际机制的改革和推动陷入停滞的核裁军进程的持续进行。

印度视角下的“印太战略”

为制衡中国在印度洋与太平洋两洋及其周边地区不断扩展的影响力,并巩固其在全球范围内的霸权地位,美国推出所谓“印太战略”以期达到遏制中国的目的。而印度则由于在印太地区的重要影响力以及同样将中国作为其潜在竞争对手而被美国视为推行“印太战略”的重要合作伙伴之一。然而,尽管印度似乎与美国及其印太地区盟国在遏制中国这一目的上一拍即合,并由此达成了在多个领域的深层次的战略合作,但是印度对于“印太战略”却存在顾虑,这主要是由于印度国家战略与美国“印太战略”在安全、外交和经贸等领域的分歧所导致的。因此,印度将始终是美国推行“印太战略”的重要变数。

咳喘宁对病毒诱发哮喘大鼠气道重塑及肺组织p-ERK1/2蛋白表达的影响

目的:探讨咳喘宁对病毒诱发哮喘大鼠气道重塑及肺组织p-ERK1/2蛋白表达的影响。方法:构建呼吸道合胞病毒感染诱发哮喘建立大鼠哮喘模型,实验分为正常组、哮喘模型组、咳喘宁低剂量(0.33 mL/kg)组、咳喘宁中剂量(3 mL/kg)组、咳喘宁高剂量(10 mL/kg)组及PD98059(3 mg/kg)组;采用动物呼吸机测量大鼠气道反应性;HE染色法观察肺组织的病理形态学改变;PAS染色法和Masson染色法观察杯状上皮化生和气道胶原沉积情况。免疫组织化学染色法检测大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)的表达;Western blot法检测大鼠肺组织中的ERK1/2和p-ERK1/2表达。结果:与模型组相比,咳喘宁中、高剂量组大鼠气道反应性显著降低(P<0.01),肺组织损伤显著减轻,杯状上皮化生和气道胶原沉积显著减少(P<0.01),肺组织中MMP-9和TIMP-1表达显著减少(P<0.01);此外,咳喘宁高剂量组肺组织p-ERK1/2蛋白表达较模型组显著减少(P<0.01)。结论:咳喘宁可能是通过调节肺组织p-ERK1/2蛋白的表达,改善病毒诱发哮喘大鼠的气道重塑症状而治疗哮喘的。

ICU医护人员对谵妄的认知状况调查和培训需求分析

目的了解宁夏地区三甲医院ICU医护人员对谵妄的认知状况,为制订谵妄培训计划和管理提供建议。方法于2018年2月—8月采用ICU医护人员认知调查问卷对本地区3所三级甲等医院ICU 149名医护人员进行调查,了解其对谵妄相关知识的掌握情况。结果医生和护士谵妄知识掌握得分情况相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。44.90%的医生和73.00%的护士没有接受过谵妄相关知识培训,75.51%的医生和80.00%的护士谵妄知识主要来源于工作经验,医生需要接受谵妄监测与诊断培训需求占比为91.84%,护士需要接受谵妄监测与诊断培训需求占比为86.00%,医生需要培训谵妄处理方式需求占比为77.55%,护士谵妄处理方式培训需求占比为85.00%。结论ICU护士谵妄知识掌握得分低于医生,大部医护人员未接受过关于谵妄识别及处理的规范培训,医生对谵妄的诊断和监测需求较大,护士对谵妄的处理方法需求较大,建议倡导医护合作,通过多种形式的培训学习来提高医护人员谵妄知识水平。

五虎汤通过干预炎症记忆对咳嗽变异性哮喘小鼠的治疗作用

目的探讨五虎汤对咳嗽变异性哮喘(cough variant asthma, CVA)小鼠可能的作用机制。方法将70只BALB/c小鼠分为空白组、CVA组、CVA再激发组、地塞米松组和五虎汤低、中、高剂量组,每组10只。除空白组外,其余各组采用鸡卵蛋白(ovalbumin, OVA)致敏法激发建立CVA模型。休息30 d后,空白组与CVA组用生理盐水进行新一轮雾化,其余组用OVA进行新一轮雾化激发。五虎汤低、中、高剂量组分别灌胃1.6、3.2、6.4 g/kg五虎汤,地塞米松组腹腔注射1.82 mg/kg地塞米松,空白组、CVA组、CVA再激发组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续10 d后处理小鼠。分离肺组织制作病理切片,行HE及PAS染色;采集肺泡灌洗液进行细胞计数;并用ELISA法检测血清IgE、IFN-γ及IL-4、IL-5、IL-23的含量;流式细胞术检测肺组织中记忆T细胞CD4+Tm亚群的比例。结果肺组织HE及PAS病理染色显示:空白组小鼠肺部无炎性细胞浸润;CVA组小鼠肺部有少许的炎性细胞浸润;CVA再激发组小鼠气道炎症、官腔狭窄表现更为明显;五虎汤各剂量组及地塞米松组小鼠的气道炎症均有不同程度的缓解。肺泡灌洗中细胞计数结果显示:CVA组较空白组升高;CVA再激发组较CVA组升高;五虎汤各剂量组及地塞米松组降低,差异均有统计学意义(P<0.05);五虎汤各剂量组与地塞米松组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测结果显示:CVA组的IL-4、IL-5、IL-23、IgE水平较空白组上升(P<0.05),IFN-γ水平较空白组下降(P<0.05);CVA再激发组的IL-4、IL-5、IL-23、IgE水平较CVA组上升(P<0.05),IFN-γ水平较CVA组下降(P>0.05);五虎汤各剂量组及地塞米松组与CVA再激发组比较,出现各细胞因子水平的回调,差异均有统计学意义(P<0.05);五虎汤各剂量组与地塞米松组相比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。流式细胞术检测肺部组织CD4+Tm亚群结果显示:记忆性T细胞的占比情况,CVA组与空白组比较,差异无统计学意义(P>0.05);CVA再激发组与CVA组相比则明显上升,差异有统计学意义(P<0.05);五虎汤各剂量组及地塞米松组均减低,与CVA再激发组相比,差异有统计学意义(P<0.05);五虎汤各剂量组与地塞米松组相比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论五虎汤可通过降低记忆性T细胞、减少IgE和炎性细胞因子的分泌、纠正细胞因子失衡,从而调控炎症记忆而发挥治疗CVA的作用。

ICU护士心理资本对岗位胜任力的影响研究

目的了解ICU护士心理资本和岗位胜任力现状,探讨心理资本对岗位胜任力的影响。方法采用护士心理资本问卷和自设ICU护士岗位胜任力问卷,对254名ICU护士进行调查。结果ICU护士心理资本得分为(90.50±17.75)分,岗位胜任力得分为(140.92±42.28)分,ICU护士心理资本与岗位胜任力呈正相关(P<0.01);心理资本中的自我效能维度和乐观维度对ICU护士岗位胜任力具有显著影响(均P<0.01)。结论ICU护士的心理资本和岗位胜任力呈中等偏上水平,护理管理者应充分关注ICU护士心理资本,尤其是自我效能感和乐观心理品质的培养和开发。

循环经济背景下“小鹏汽车”的推广策略研究

以循环经济为研究背景,在分析小鹏汽车推广策略现状的基础上,梳理出其推广策略在广告宣传、推广力度、渠道模式等方面存在的问题,运用相关分析工具,有针对性地提出小鹏汽车应在广告投放、市场开发、营销渠道、用户体验、公共关系等方面进行优化改进建议。

益生菌对新型冠状病毒感染肺炎患者免疫功能的影响

目的探讨新型冠状病毒感染肺炎(COVID-19)早期免疫功能变化,以及益生菌辅助治疗对患者免疫功能的影响。方法选择宁夏地区确诊的COVID-19患者50例,根据病情严重程度分为轻型(10例)、普通型(32例)和重型+危重型(8例)。测定所有患者入院时外周静脉血白细胞计数(WBC)、淋巴细胞比例(LR)、补体(C3和C4)及T淋巴细胞亚群水平,比较3组患者各免疫指标水平。所有患者入院第1天开始连续服用双歧杆菌乳杆菌三联活菌片7 d,比较第1天与第7天WBC、LR水平,同时从所有研究对象中筛选出入院第7天检测C3、C4和T淋巴细胞亚群水平的COVID-19患者24例,比较第1天与第7天C3、C4、T淋巴细胞亚群水平。结果与轻型COVID-19相比,普通型、重型+危重型WBC水平均降低(P<0.05);与轻型、普通型相比较,重型+危重型LR降低(P<0.05);3组患者间补体C3和C4、T淋巴细胞亚群水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。与第1天相比,双歧杆菌乳杆菌三联活菌片辅助治疗第7天外周血WBC、LR、C3、C4、CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+水平变化差异均无统计学意义(P>0.05)。结论COVID-19患者早期免疫功能以白细胞和淋巴细胞水平下降为主,益生菌辅助治疗能否改善患者免疫功能尚待进一步研究证实。

如何提高小学音乐课堂合唱教学的有效性

小学音乐教学是素质教育的重要内容和要求,主要目的是通过音乐教学培养小学生的音乐美感,通过音乐的艺术形式陶冶情操、提升气质。在音乐教学中合唱是一种重要的教学手法,在合唱中不但能够培养学生的团结协作意识和班级的集体荣誉感,而且在合唱中需要学生理解音乐的基础理论知识,能够提升学生在音乐学习上的专业性水平。合唱教学中需要教师结合小学生的实际情况,以兴趣为前提,引导小学生对合唱的兴趣,发挥他们在合唱中的主观能动性。

日本与菲律宾的海上安全合作(2011—2022)

长期以来,日本对外安全合作政策一直局限在美日同盟之中,与菲律宾等东盟国家的外交关系多以经济为主要内容。但近年来,日本的安保战略出现了大的转型。2011年日本与菲律宾建立“战略伙伴关系”,双方的安全关系特别是海上安全合作进入快速发展时期。近些年来,日本和菲律宾加强双边海上安全合作的愿望不断增强,内容从单纯的会谈转向了具有实质性的军事合作,两国伙伴关系不断升级,海上安全合作机制趋于多样化和制度化。日本对菲律宾的海上安全利益的支持力度不断加大,包括支持菲律宾的海上力量建设,支持菲律宾在南海地区的利益诉求,推动军舰“战略性停靠”和联合军事演习,不断扩展和充实安全合作的内容,形成了某种意义上的“准盟友”关系。日本和菲律宾均从海上安全合作中获益,从日本方面来说,成功助力日本打开对外军事贸易局面,帮助日本建立对东盟国家外交的示范效应。从菲律宾方面来说,日菲海上安全合作有利于菲律宾借助日本先进的技术及装备推动本国的军事现代化进程,有利于菲律宾维护与拓展海洋权益。然而,两国发展海上安全合作仍然受到国内外条件的限制,这使得两国的安全合作难以走向更高的层次。未来日菲双边海上安全合作可能会向内容更丰富的方向发展,但是很难实现重大突破,发展成盟友关系的可能性不大。

日本推动与菲律宾安全合作的动力(2011-2021)

2011年以来,日本和菲律宾加强双边安全合作的愿望都在不断增强,内容从单纯的会谈转向了具有实质性的军事合作,两国安全合作机制趋于多样化和制度化。日本对菲律宾的安全利益的支持力度不断加大,其主要动力来源于日本对东盟的整体外交布局、对中国崛起的反应、谋求海洋大国的战略冲动,以及对美日同盟平衡性与稳定性的考虑。

病毒诱发哮喘关键miRNA靶基因的预测与验证及潜在中药干预

目的:探究病毒诱发哮喘关键微小RNA(mi RNA)以及差异基因在哮喘发病中的调控作用,并寻找潜在的治疗靶点以及对应中药,为病毒诱发哮喘中医药辨证论治、早期截断哮喘的发生、传变提供诊疗思路。方法:首先通过查阅有关mi RNA与哮喘关系的文献,根据文献的影响因子、报道次数及与呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)、树突细胞、自噬等病毒诱发哮喘发病机制的密切程度进行积分统计,按得分高低筛选出6个候选mi RNA:mi RNA-155、mi RNA-21、Let-7、mi RNA-34a、mi RNA-145、mi RNA-146a。然后通过靶基因数据库分析其功能,并通过生物信息学方法筛选出与关键目标mi RNA相关的信号通路。最后通过Coremine数据库查找核心基因对应中药,使用TCMSP、BATMAN-TCM数据库查找中药有效成分,利用Cytoscape软件进行可视化分析,并进行基因本体论(Gene ontology,GO)富集分析与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)通路富集分析。然后通过RSV联合鸡卵清蛋白诱导病毒诱发哮喘模型,并通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测生物信息学预测的核心mi RNA表达水平。结果:体内实验验证结果显示:RSV诱导哮喘小鼠模型中气道上皮mi RNA-21、Let-7、mi RNA-155、mi RNA-146a表达量显著降低,提示这四种mi RNA可作为病毒诱发哮喘关键生物标志物;结果中共筛选出与病毒诱发哮喘最相关的10个核心靶基因,分别是:STK4、CTH、MRM3、EEF1A1、PDCD6IP、MARCKS、SLC25A5、GNAS、ALDOA、CFL1,也是治疗的关键靶点;一共包含对应中药共160多种,其中理气活血类药物、补虚药出现频次最高,具体的高频中药为:枳实、枳壳、香橼、油柑子、人参、人参叶、姜黄、郁金、丁香、水牛角。结论:Mi RNA能够通过靶向调控多种靶基因的表达,参与病毒疾病的发生、发展过程。RSV诱导哮喘气管组织中的mi RNA-21、Let-7、mi RNA-155、mi RNA-146a均有显著下调,可作为病毒诱发哮喘关键生物标志物,也是治疗的关键靶点,同时能够从mi RNA这一角度明确在病毒诱发哮喘中的中医药作用机制,可通过辨证论治适当使用理气活血类、补虚药等药物,以早期截断哮喘的病理进程。

基于转录组学探讨外泌体诱导病毒性哮喘动物模型的作用机制及潜在的中药干预

目的:基于转录组学探究呼吸道合胞病毒(RSV)干预后的外泌体在哮喘发病中的作用及潜在中医药干预机制。方法:利用呼吸道合胞病毒(RSV)干预骨髓间充质干细胞后提取外泌体,并进行透射电镜、粒径(NTA)及蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定外泌体的形态及标志物等;将24只SPF级雄性C57小鼠随机分为正常对照组、呼吸道合胞病毒组、外泌体组,造模3周后进行肺功能、病理染色验证是否存在哮喘病理改变,并对小鼠气道组织进行RNA-seq高通量转录组测序,明确差异基因;通过中药整合药理学方法对关键靶点潜在中药进行预测并汇总。结果:透射电镜显示外泌体呈典型的双层膜茶托样结构,粒径显示其平均直径为133.1 nm;WB法检测到外泌体膜标志蛋白(CD63、CD9和TSG101)的表达。与正常对照组相比,呼吸道合胞病毒组与外泌体组用力肺活量(FVC)明显下降(P<0.05),动态肺顺应性(CDYN)明显下降(P<0.01),呼吸道合胞病毒组、外泌体组最大呼气流量(PEF)明显下降(P<0.05);而呼吸道合胞病毒组和外泌体组肺阻力(RL)明显升高(P<0.01)。在炎症浸润及气道黏液分泌等方面,外泌体组小鼠有炎症细胞浸润及嗜酸性粒细胞浸润,呼吸道合胞病毒组以中性粒细胞、淋巴细胞浸润为主,杯状细胞黏液分泌较外泌体组明显。气道上皮测序结果提示三组间差异基因多富集在免疫、神经及内分泌系统;差异基因共同富集的通路为过氧化物酶体增殖物激活受体、白介素-17、细胞外基质-受体相互作用信号通路。预测的潜在治疗中药以清热药、补虚药及理气活血药为主,其组分能作用多个靶点及通路调节哮喘神经、内分泌及免疫平衡。结论:病毒干预后的外泌体能够诱导哮喘气道炎症、气道重塑等病理改变;中医药从多环节、多靶点、多系统方面发挥了其整体调节作用。

五虎汤抑制STAT3蛋白调控树突细胞自噬治疗RSV诱发哮喘小鼠

目的:探讨五虎汤对呼吸道合胞病毒(RSV)诱发哮喘小鼠模型的治疗作用机制、肺组织信号传导及转录激活因子3(STAT3)蛋白表达的影响。方法:100只SPF级雌性BALB/c小鼠,用RSV复合鸡卵清蛋白(OVA)雾化吸入激发哮喘,造模成功后随机分为正常组、模型组、阳性药组(地塞米松,1.82 mg·kg^(-1)),STAT3抑制剂组(STATTIC,3.75 mg·kg^(-1)),STAT3诱导剂组(colivelin,1.0 mg·kg^(-1))及五虎汤低、中、高剂量组(1.6,3.2,6.4 g·kg^(-1)),并给予相应药物干预2周。使用动物呼吸机检测小鼠气道反应性值;采用苏木素-伊红(HE),过碘酸希夫(PAS)及马松(Masson)染色分别观察小鼠肺组织病理学改变、杯状细胞分泌黏液和气道胶原沉积情况;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清中白细胞介素-6(IL-6),白细胞介素-10(IL-10),白细胞介素-17(IL-17)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定转化生长因子-β1(TGF-β1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA在肺组织中的表达;透射电镜检查肺组织自噬体;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织树突细胞(DC)中自噬相关蛋白5(ATG5),Sequestosome 1(SQSTM1)蛋白表达及肺组织中STAT3,磷酸化(p)-STAT3蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组小鼠气道反应性增高(P<0.01),肺组织周围炎性细胞浸润,杯状上皮细胞过度化生和气道胶原广泛沉积,血清中IL-6和IL-17含量显著升高,IL-10含量显著降低(P<0.01),肺组织中TGF-β1,α-SMA mRNA表达增加(P<0.01),肺组织自噬体数量增加,肺组织DC中ATG5蛋白表达上升,SQSTM1表达降低(P<0.01),肺组织中STAT3,p-STAT蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,五虎汤和STATTIC均可明显降低哮喘小鼠气道高反应性(P<0.05,P<0.01),有效缓解RSV诱发哮喘小鼠肺组织病理情况,降低血清中IL-6和IL-17表达含量(P<0.01),升高哮喘保护细胞因子IL-10含量(P<0.01),降低肺组织中TGF-β1,α-SMA mRNA水平(P<0.01),进一步增加自噬小体数量,显著增强肺组织DC中ATG5水平及下调SQSTM1水平(P<0.05,P<0.01),并可下调肺组织中STAT3及p-STAT3水平(P<0.01)。结论:五虎汤可能通过抑制STAT3蛋白,上调肺组织DC自噬水平,从而有效改善RSV诱发哮喘小鼠气道炎症、气道重塑,降低气道高反应性。