不同有机废弃物载体对Bacillus megaterium有效性的影响

为了给Bacillus megaterium选择理想的吸附载体。测定了草炭、金针菇渣、腐熟鸡粪、牛粪、羊粪的吸菌量及其载体菌剂的有效活菌数、胞外多糖(EPS)含量和发芽指数。草炭的吸菌量最高为1.64 mL/g,但随存放时间延长,草炭载体菌剂的有效活菌数和EPS含量急剧降低,且38 d内的发芽指数均小于80%,表现植物毒性。鸡粪和金针菇渣的吸菌量虽小于草炭,但随存放时间延长,鸡粪载体菌剂的有效活菌数和EPS含量逐渐增大,金针菇渣载体菌剂的EPS含量逐渐增加、有效活菌数降低幅度缓慢,且存放7 d后发芽指数均大于80%,表现植物无毒性。第38天时鸡粪和金针菇渣载体菌剂的有效活菌数分别为1.29×10^(9)CFU/g和6.20×10^(8)CFU/g,EPS含量分别为535.29 mg/kg和559.34 mg/kg,均显著高于其他载体菌剂。鸡粪和金针菇渣是B.megaterium较为理想的吸附载体。

玉米根际细菌中PGPR的筛选及初步鉴定

通过离体拮抗试验和检测菌株产生铁载体的情况从玉米根际细菌中筛选出 8株拮抗菌和2 6株铁载体产生菌 ,其中 DC0 1、DC0 9、DC2 2、PY313既具有真菌抗性又能产生铁载体 。

根际促生细菌(PGPR)对冬枣根际土壤微生物数量及细菌多样性影响

从6年生冬枣根际土壤中筛选出1株根际促生细菌(PGPR),以发酵鸡粪(DC)为吸附载体制成PGPR生物肥(PF),利用传统的氯仿熏蒸法和现代的T-RFLP技术,从冬枣根际土壤中可培养微生物的数量、细菌群落多样性和微生物量碳的动态变化3个方面,分析PF、普通生物肥料(NF)和DC对冬枣根际土壤微生物特征的影响。结果表明:同NF处理相比,PF处理中的细菌数量和微生物总量显著增加,真菌数量显著减少,但放线菌数量差异不显著。PF处理根际土壤具有较高的丰富度指数、多样性指数和均匀度指数。基于T-RFLP的主成分分析结果表明:PF处理的细菌群落结构成为1个独立的群,NF,DC和CK处理构成1个相对独立的群。此外,同其他试验处理相比,PF可相对稳定地提供冬枣生长周期内的微生物生物量碳。PGPR生物肥料的施用可提高可培养微生物数量,提高根际土壤中微生物多样性,有效改善冬枣根际土壤的微生态环境。

持续干旱对樱桃根际土壤细菌数量及结构多样性影响

以1年生吉塞拉实生容器苗为试材,采用绿色荧光蛋白基因标记技术,研究了干旱胁迫(连续干旱0、7、14、21、28 d和35 d)对樱桃根际促生细菌YT3的标记菌YT3-gfp数量的影响,同时结合平板计数法和末端限制性片段长度多态性分析(terminal restriction fragment length polymorphism,T-RFLP)技术,研究了干旱对樱桃土壤中的微生物数量及细菌群落结构多样性影响。结果表明:樱桃根际土壤中的YT3-gfp数量是非根际土壤中的8.75—28.77倍,随着持续干旱强度的增加,YT3-gfp的数量先增加后减小。干旱对根际土壤中YT3-gfp数量的影响大于对非根际土壤的影响,分别在持续干旱至第21天和28天时,YT3-gfp的数量达到最大值。随着持续干旱强度的增加,根际土壤中细菌和放线菌数量先增加后减小,而真菌的数量一直减少。此外,持续干旱至第21天或28天时,樱桃根际土壤具有最高的丰富度指数、多样性指数和最低的优势度指数。基于T-RFLP的主成分分析结果显示持续干旱14—35 d时,其细菌群落结构成为一个相对独立的群,群落结构趋于多样性;而持续干旱7 d和42 d构成另外两个相对独立的群,群落结构趋于简单。以上分析可知,干旱对土壤微生物影响显著,一定强度的干旱可提高细菌和放线菌数量,提高细菌群落结构多样性,适当干旱对维持根际土壤细菌群落结构多样性是有益的。

烟草根际铁载体产生菌G-229-21T的筛选、鉴定及拮抗机理

【目的】从烟草根际筛选烟草疫霉[Phytophthora parasitica var.nicotianae(Breda de Hann)Tucker]拮抗菌,探索其拮抗机理。【方法】限铁(2.0μmol/LFeCl3)蔗糖-天冬酰胺平板对峙法筛选烟草疫霉拮抗菌;刃天青(CAS)法检测其铁载体的产生及其对铁离子的亲和能力。结合形态、生理生化、16SrRNA序列同源性和系统发育分析及种特异性分子法对其进行鉴定。XAD-2吸附层析法提取其铁载体,分光光度法检测其铁载体类型。不同铁离子浓度下,比较其铁载体对烟草疫霉的抑制作用。【结果】我们筛选到一株限铁条件下烟草疫霉拮抗菌G-229-21T,该菌产生高亲和力铁载体,被初步鉴定为Pseudomonas mediterranea。该菌产生的羧酸型铁载体,在低铁条件下(0.16μmol/L～10μmol/LFeCl3)对烟草疫霉的抑制率达92.3%以上,而在富铁条件下(100μmol/LFeCl3)抑制率仅为2.0%。【结论】首次报道P.mediterranea G-229-21T产生高亲和力羧酸型铁载体,该铁载体在低铁条件下对烟草疫霉有显著的抑制作用。

两株烟草根际拮抗菌的生防和促生效果研究

使用植物根际促生细菌(PGPR)来防治土传病害是目前生物防治的研究热点。在温室内进行盆栽试验以研究从烟株根际筛选出的两株生防细菌对烟草黑胫病的防治和促生效果,试验设4个处理,分别为接种生防菌YC0573、YC0136、药剂对照(甲霜灵锰锌)和发病对照。结果表明,温室条件下YC0573和YC0136的防治效果分别达到90.9%和95.4%,均高于甲霜灵锰锌(86.4%);接种生防菌的烟株生长状况明显好于对照烟株。对不同生长期烟株叶片叶绿素含量、电解质相对渗透率以及超氧化物歧化酶、过氧化物酶、多酚氧化酶、苯丙氨酸解氨酶、过氧化氢酶等系统抗性相关指标进行测定,结果显示,两株拮抗菌可诱导烟株产生系统抗性(ISR),增强对病害的防御力,并且能有效防治烟草黑胫病,促进烟株生长,具有良好的应用潜力。

新疆棉花根际土壤铁载体产生菌的遗传多样性及系统发育研究

【目的】了解中国新疆地区铁载体产生菌的遗传多样性和系统发育,为筛选高效铁载体产生菌提供依据。【方法】采用BOXAIR-PCR、16S rRNA PCR-RFLP和16SrDNA全序列分析方法对分离自新疆地区棉花根际土壤的铁载体产生菌的遗传多样性进行分析。【结果】在BOXAIR-PCR分析中,68株供试菌分为11个遗传群;在16SrRNAPCR-RFLP分析中,68株供试菌分10个遗传群;代表菌株的16SrDNA全序列分析表明,供试菌分属于假单胞菌属(Pseudomonas)、肠杆菌属(Enterobacter)、不动细菌属(Acinetobacter)、芽孢杆菌属(Bacillus)、产碱杆菌属(Alcaligenes)、短状杆菌属(Brachybacterium)和泛菌属(Pantoea)。其中,假单胞菌属(Pseudomonas)为优势属。【结论】分离自新疆地区棉花根际土壤铁载体菌存在极大的遗传多样性。

西瓜根际枯萎病拮抗放线菌的筛选及鉴定

从西瓜根际分离获得了32个放线菌分离物,通过离体拮抗试验,筛选出3株对西瓜枯萎病有良好拮抗效果的放线菌,编号为XF9、XF18和XF22。通过对其进行形态学观察、生理生化测定以及16S rDNA序列分析,初步确定XF9为灰色链霉菌(Streptomyces griseus),XF18为淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae),XF22为脱叶链霉菌(Streptomyces exfoliates)。XF9、XF18和XF2216S rDNA序列的GenBank登录号分别为EU723881、EU723880和EU723879。

种植年限对牡丹根际土壤微生物群落结构的影响

为了探究牡丹连作对土壤微生物种群结构的影响,从菏泽牡丹园采集种植年限分别为3、5、8、12、20年的牡丹根际土壤样品,采用末端限制性片段长度多态性(T-RFLP)技术与变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法研究了样品中细菌和真菌的种群结构变化。结果表明,牡丹根际土壤细菌多样性变化不显著,而真菌多样性水平随种植年限的增加而降低,菌群结构趋于简单,种类大量减少。通过戴斯系数法对牡丹根际土壤的细菌与真菌DGGE图谱分析表明,各样品间细菌种群结构相似度均在76.9%以上,而牡丹根际土壤样品真菌种群结构相似度最低仅为58.3%,说明随着种植年限增加牡丹根际细菌种群结构未发生显著变化,而根际真菌种群结构变化显著。牡丹连作后真菌种群结构的变化可能是引发牡丹连作障碍的主要原因。

黄瓜枯萎病拮抗菌的生防效果及其对植株生长代谢的影响

利用从黄瓜根际土壤筛选的、经温室内消毒土壤处理证明有效的3株枯萎病拮抗菌DS-1、SG-126和Q-2接种日光温室连作黄瓜土壤,进一步研究对枯萎病防效、植株生长和代谢的影响,结果表明:3株拮抗菌均能提高黄瓜对枯萎病的抵抗能力,减少发病率,细菌DS-1、放线菌SG-126和细菌Q-2防治黄瓜枯萎病的效果分别为51.43%、42.86%和37.50%;DS-1和SG-126能显著促进黄瓜的生长发育,Q-2效果较差;接种拮抗菌不同程度地提高了黄瓜叶片保护酶(SOD、CAT、PPO和PAL)活性和叶绿素含量,降低了电解质渗漏率。

两株棉花立枯病拮抗菌MH1和MH25的筛选与鉴定

从棉花根际分离了1277个细菌分离物,以棉花立枯病病原真菌立枯丝核菌(Rhizoctonia solani Kuhn)为靶标菌,通过平板对峙法获得25个具有拮抗性能的分离物,其中MH1和MH25具有较强的拮抗性能,且拮抗性能稳定,具有较好的生防潜力。经过形态观察、生理生化特征分析及16SrDNA序列分析,MH1为短芽孢杆菌(Brevibacillus brevis),MH25为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。MH1和MH25的16SrDNA序列在GenBank中注册号分别为:EF488102,EF488103。

玉米秸秆低温快速腐熟菌的筛选、鉴定及效果试验

本试验模拟腐烂秸秆的环境,以玉米秸秆的浸出汁为培养基,在5℃低温条件下,用双层平板和穿刺法结合筛选到4株快速腐熟秸秆的兼性厌氧菌。依据形态、生理生化特征以及16S rDNA序列分析结果,将YO-1、YO-2鉴定为赫氏埃希菌(Escherichia hermannii),YO-B鉴定为霍氏肠杆菌(Enterobacter hormae-chei),YO-H鉴定为节杆菌(Arthrobacter arilaiti)。进一步通过发酵试验,验证了4株菌对玉米秸秆的降解效果,其中YO-1、YO-H对玉米秸秆降解能力好于YO-2和YO-B。

一株棉花根际铁载体产生菌E19的分离鉴定

目的:从棉花根际细菌中筛选出铁载体产生能力较强的菌株并对其进行鉴定。方法:用梯度稀释法从棉花根际中分离出细菌,再通过在CAS检测平板上显色圈的大小从中筛选出铁载体产生能力较强的菌株,并对其进行生理生化鉴定和16S rDNA序列分析。结果:筛选出一株铁载体产生能力较强的菌株E19,13项生理生化指标除甲基红试验呈阳性外,其它均与恶臭假单胞菌相同。其16S rDNA与恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的同源性为100%。

一株烟草根际溶磷细菌的筛选鉴定及其培养基优化

溶磷微生物可以加速土壤磷素循环,促进植物生长,具有较好的应用前景。本试验以无机磷为唯一磷源的选择性培养基从烟田土壤中筛选具有溶磷功能的细菌,同时分别运用钼锑抗显色法、Salkowski显色法对其溶磷能力、产IAA能力进行检测。通过生理生化特征和16S r RNA测序对溶磷效果较好的菌株JP6进行鉴定。通过模拟试验验证JP6对土壤中有效磷释放的影响;运用单因子试验确定最佳碳源、有机氮源、无机氮源和无机盐,并通过正交试验进行培养基配比优化。结果显示:菌株JP6具有较好的溶磷能力,发酵液中有效磷含量为50.1 mg/L,同时该菌株具有产IAA能力,在R_2A培养基中分泌IAA含量为128.9μg/m L,通过生理生化和16S r RNA序列比对将JP6鉴定为阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae),在土壤中具有较好的溶磷作用,最佳培养基配比为在10%黄豆芽基础上1.5%葡萄糖,2%豆粕,0.5%NH_4Cl,0.5%Ca CO_3。

多粘类芽孢杆菌SC2 xynD和gluB的克隆及序列分析

β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶活性检测结果表明,多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)SC2能同时产生β-1,4-木聚糖酶和β-1,3-1,4-葡聚糖酶。以菌株SC2的基因组DNA为模板,通过TAIL-PCR方法克隆到4 807bp的DNA片段。DNAMAN软件分析,该DNA片段包含2个开放阅读框(ORF),ORF1长度为1 908 bp,编码含635个氨基酸、分子量为67.8kD的蛋白;ORF2长度为714 bp,编码含237个氨基酸、分子量为26.8kD的蛋白。BLAST分析结果表明,ORF1与已报道的P.polymyxa ATCC 842的xynD基因相似性为94%,ORF2与P.polymyxaWY110的gluB基因相似性为99%。基因序列的系统发育分析进一步说明,ORF1和ORF2分别为β-1,4-木聚糖酶基因xynD和β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因gluB。

Pseudomonas mosselii E1铁载体合成相关基因cysI的克隆与功能初步分析

从棉花根际分离的铁载体产生菌E1,其16SrDNA与Pseudomonas mosselii ATCCBAA-99的同源性为100%。采用三亲本杂交方法将携带转座子Tn5-1063的质粒pRL1063a导入E1中进行转座子插入诱变。利用CAS法,从1000个突变株中,筛选到一株铁载体合成缺失突变株E1-185。利用TAIL-PCR方法,扩增位于Tn5-1063两端的侧翼序列。测序结果表明,转座子插入到E1的cysI基因内。该基因与Pseudomonas entomophila L48的cysI同源性为96%,其CysI氨基酸序列相似性为97%。该基因与半胱氨酸的合成密切相关,而在加有半胱氨酸的CAS平板上,突变株恢复了铁载体产生能力,证明cysI在E1铁载体合成过程中具有重要作用。据推测,cysI可能与铁载体合成途径中关键蛋白acyl-S-PCPs的形成有关。

辣椒根腐病拮抗细菌的筛选及其生物学特性研究

以辣椒根腐病原菌(Fusarium solani)为指示菌,从贵州辣椒根际筛选到5株具有明显拮抗效果的细菌,编号分别为:SC2、SC2-4、SC2-4-1、SC2-4-2、SC2-4X。上述菌株抗菌谱较广,对黄瓜枯萎病原菌(Fusarium oxysporum f.sp.cucumerinum)、黄瓜霜霉病原菌(Pseudoperonospora cubensis)、芹菜灰霉病原菌(Botrytis cinerea Pers)以及西红柿灰霉病原菌(Botrytis cinerea)也具有良好的拮抗性能。经形态学测定、生理生化分析和16S rDNA序列分析,将SC2、SC2-4-2、SC2-4X鉴定为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa),SC2-4、SC2-4-1鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。SC2菌株产生的抗菌物质可能为蛋白类或抗菌肽类物质。

植物根际促生菌对蓝莓根际土壤养分与微生物数量的影响

从蓝莓根际土壤中筛选出4种植物根际促生细菌（ PGPR） L12、L13、L14和L15。通过蓝莓盆栽试验，研究了这4株PGPR对蓝莓根际土壤养分与微生物数量的影响。结果表明，在蓝莓的一个生长周期内， L13和L14能够显著增加蓝莓根际土壤中的可培养微生物数量，而接种L12和L15降低了蓝莓根际土壤中可培养微生物的数量；接种4株PGPR均能增加土壤有机质含量。 L13对土壤速效养分具有明显的促进作用，增加幅度为5．05％～22．27％；菌株L15、L14、L13对土壤酶活性的影响较大。综合以上分析，L13能够明显改善蓝莓根际土壤的养分状况和提高根际土壤微生物数量，具有良好的应用潜力。

牡丹根腐病拮抗菌的筛选与鉴定

从菏泽曹州牡丹园采集根际土壤样品6个,从中分离出300个分离物,以牡丹根腐病病原菌(Fusarium solani)为靶标菌,通过平板对峙法筛选出27个具有拮抗性能的菌株,其中MD1、MD4、MD7、MD8、MD64、MD68、MD70具有较强拮抗能力,且拮抗性能稳定。经过形态观察、生理生化特性分析及16S rDNA序列分析,将MD1鉴定为Bacillus amyloliquefaciens,MD4鉴定为Bacillus malacitensis,MD7鉴定为Bacillus subtilis,MD8鉴定为Pseudomonas chlororaphis;MD64鉴定为Streptomyces albireticuli;MD68鉴定为Bacillus tequilensis;MD70鉴定为Bacillus methylotrophicus。它们的16S rDNA序列在GenBank中注册号分别为JN205338、JN205339、JN205340、JN205341、JN205342、JN205343、JN205344。