免疫治疗在胃癌中的应用研究进展

胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一,由于胃癌筛查率低和早期症状轻微,多数患者在晚期才被确诊,影响预后。近年来,随着研究深入,胃癌的免疫治疗取得显著进展,尤其对不可切除和转移性病例效果显著,使其成为继手术、化疗、放疗和靶向治疗后的有效治疗方法。免疫治疗通过人为调控免疫系统生效,包括过继细胞疗法、免疫检查点抑制剂和肿瘤疫苗等。目前,免疫治疗虽然前景广阔,但在临床应用中仍面临诸多挑战和问题。本文就胃癌免疫治疗的临床应用以及存在的问题进行综述。

5-脂氧合酶抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡

目的:检测胰腺癌细胞中5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)及其代谢产物的表达情况,分析高表达5-LOX及LTB4对胰腺癌细胞生长凋亡的影响.方法:体外培养人胰腺癌细胞株ASPC-1,PANC-1和SW1990,并构建5-LOX基因稳定转染细胞株.用RT-PCR和Western blot检测细胞5-LOX mRNA和蛋白的表达,ELISA检测细胞培养上清中LTB4的含量,采用流式细胞仪、Annexin V/PI双染法检测TNF-α诱导细胞的细胞凋亡.结果:三种胰腺癌细胞株均表达5-LOX mRNA和蛋白,细胞上清中也都检测到一定量LTB4分泌.5-LOX基因稳定转染细胞株表达5-LOX和LTB4的水平上升.TNF-α(20μg/L)处理野生型SW1990细胞,12和24 h后凋亡率分别为25.4%±3.65%和43.5%±5.23%,但该效应在高表达5-LOX的细胞株中明显减弱,分别为13.2%±2.01%和21.7%±3.65%.在野生型SW1990细胞培养中加入外源性LTB4(10 nmol/L)能抑制TNF-α诱导的细胞凋亡,野生型与处理组细胞24 h后凋亡率有显著性差异(47.6%±5.32%vs 18.5%±5.69%,P<0.01).用LTB4受体阻断剂处理5-LOX高表达细胞株,能恢复其对凋亡诱导的敏感性.结论:胰腺癌细胞均能表达5-LOX并产生LTB4,高表达5-LOX能抑制TNF-α诱导的胰腺癌细胞凋亡.

雷公藤内酯醇对5-LOX代谢通路和胰腺癌细胞凋亡的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TL)通过抑制5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)代谢通路对胰腺癌细胞生长增殖及凋亡的影响.方法:台盼蓝染色检测TL对胰腺癌细胞PANC-1、ASPC-1和SW1990的杀伤作用;流式细胞术分析凋亡率;Real-time PCR和Westernb lot检测TL对5-LOX表达的影响;ELISA检测5-LOX下游产物LTB4的含量.构建5-LOX表达质粒,筛选稳定转染的SW1990细胞株(SW1990/5-LOX),Western blot检测野生型、转染空质粒、转染5-LOX基因的SW1990细胞5-LOX蛋白表达水平,并检测胰腺癌细胞高表达5-LOX对TL诱导凋亡的影响.结果:TL能诱导胰腺癌细胞凋亡,TL50μg/L作用24h后活细胞比例为PANC-170.5%±6.8%,ASPC-161.2%±5.6%,SW199052.8%±5.3%,比对照组显著减少(P<0.05);凋亡细胞数12h组与对照组相比,有差异(24.2±3.23vs9.5±2.18,P<0.05).TL能显著抑制5-LOX表达及LTB4生成.稳定转染后,细胞内5-LOX蛋白表达量是Wt组的4倍左右,培养上清中LTB4表达水平也显著高于Wt组(P<0.01).过表达5-LOX使SW1990细胞增强了对TL诱导凋亡的抵抗作用,细胞死亡和凋亡率均明显低于对照组(P<0.01或0.05).结论:TL可以在体外诱导胰腺癌细胞增殖抑制和细胞凋亡,该效应与TL抑制5-LOX代谢通路的活性可能有直接关系,提示TL可能开发成临床治疗胰腺癌的有效药物.

肥胖、高脂血症与急性胰腺炎相关性研究

目的 探讨肥胖、高脂血症在急性胰腺炎发病中的影响与作用。 方法 选择重症急性胰腺炎 (SAP)患者 98例 ,轻症急性胰腺炎 (MAP)患者 10 7例 ,测定体重指数 (BMI)、血脂水平以及急性胰腺炎相关的实验室检查指标。 结果 肥胖组 (BMI≥ 2 8kg/ m2 )共有 6 4例 ,超重组 (2 4 ≤ BMI<2 8kg/m2 )和体重正常组 (BMI<2 4 kg/ m2 )分别有 6 6例和 75例。肥胖组 SAP比例高于超重组和体重正常组 ;SAP患者 BMI和血三酰甘油高于超重组和体重正常组 ;对于肥胖的急性胰腺炎患者 ,血脂升高伴随着更为严重的胰腺和肝肾功能损害 ,在超重组和体重正常组未观察到同样的效应。 结论 肥胖影响急性胰腺炎的严重程度 ,并且肥胖者发生急性胰腺炎后 ,血脂水平可作为急性胰腺炎严重程度的预测指标。

TL对人胰腺癌细胞裸鼠移植瘤的治疗作用及抑制血管生成的研究

目的:探讨雷公藤内酯醇(TL)对人胰腺癌细胞SW1990移植瘤的生长及新生血管生成的抑制作用。方法:通过人胰腺癌裸鼠皮下移植实验,观察不同剂量TL对移植瘤生长抑制作用;应用免疫组化和RT-PCR研究裸鼠移植瘤组织VEGF表达变化,计算肿瘤组织微血管密度(MVD)。结果:各实验组(TL0.125、0.25和0.5mg·kg-1·day-1)抑瘤率分别达到66.16%、78.14%和89.92%,与对照组相比,肿瘤生长明显受抑,并具有剂量和时间依赖性。对照组和各实验组瘤组织MVD分别为36.25±8.64、22.75±6.67、17.65±7.11和9.87±3.34(P<0.01);TL抑制移植瘤VEGF基因和蛋白表达,且VEGF基因下调与MVD的减少具有相关性(r=0.7424,P<0.01)。结论:TL具有显著的抗胰腺癌移植瘤作用,其机制可能与抑制肿瘤新生血管生成有关。

乌司他丁对重症急性胰腺炎的临床应用研究

目的 :评价乌司他丁对重症急性胰腺炎的临床疗效。方法 :对照组 46例采用常规治疗 ,治疗组 48例在对照组的基础上加用乌司他丁。观察整个疗程中临床表现、实验室指标的变化及相关并发症的情况。结果 :治疗组症状和体征恢复较对照组快 (P <0 .0 5 ) ,血、尿淀粉酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、血尿素氮、血清肌酐下降较对照组明显 (P<0 .0 5 )。治疗组出现急性肾衰和胸水的比率也低于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :乌司他丁对重症急性胰腺炎有较好疗效 ,且可减少部分并发症的发生。

肝脓肿临床分析183例

目的:总结肝脓肿的诊断和治疗经验,提高诊疗水平.方法:回顾性分析本院2001-01/2011-06收治的183例肝脓肿诊断和治疗的临床资料.结果:男112例,女61例,年龄最小18岁,最大83岁.左肝脓肿65例,右肝脓肿110例,混合型脓肿8例.单腔脓肿152例,2个以上脓腔31例.脓腔最大139mm×115mm,最小17mm×16mm;合并糖尿病、空腹血糖受损、糖耐量低减107例,感染性休克5例.好转治愈178例,2例转外科手术治疗,3例自动出院;B超引导下穿刺抽脓107例,穿刺次数1-7次.结论:肝脓肿与糖尿病密切相关;病原菌以肺炎克雷伯菌多见;B超引导下肝脓肿穿刺操作简便,效果好,可作为肝脓肿局部治疗的首选治疗方法.

超声引导下射频消融治疗原发性肝癌46例

目的:比较分析经皮射频消融术治疗原发性肝癌的疗效.方法:本院2003-03/2008-07收治肝癌患者46例,共69个结节,均经临床证实.患者予经皮射频消融治疗并跟踪随访.患者生存率以Kaplan-Meier模型及Log-rank检验进行单因素分析,完全消融率和局部复发率的比较采用卡方检验.结果:射频术后,直径<3cm的肿瘤完全消融率93.61%,局部复发率6.82%,1、2、3年的生存率为87.10%、80.13%和61.92%;直径≥3cm的肿瘤完全消融率68.18%,局部复发率27.27%,1、2、3年的生存率为73.33%、53.33%和30.48%.单个病灶的完全消融率90.00%,局部复发率10.00%,1、2、3年的生存率为90.00%、82.80%和63.98%;多发病灶者,完全消融率82.05%,局部复发率15.38%,1、2、3年的生存率为68.75%、50.00%和28.57%.Child-pugh A级组完全消融率87.93%,局部复发率13.21%,1、2、3年的生存率为86.40%、75.25%和54.99%;B-C级组完全消融率81.82%,局部复发率22.22%,1、2和3年的生存率为66.67%、53.33%和35.56%.结论:射频消融治疗肝癌的完全消融率和局部复发率与肿瘤的大小相关;长期生存率和肿瘤的数目、大小、肝功能分级相关.

射频消融治疗对兔肝VX2肿瘤VEGF表达的影响

目的:探讨射频消融(RFA)对兔肝VX2肿瘤血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法:建立日本大耳白兔肝VX2肿瘤模型,随机分为3组:对照组直接处死取肝脏标本;RFA治疗(4h和24h)组于射频消融后4h和24h处死取出肝脏组织.并以正常兔肝脏组织为正常对照,通过免疫组织化学方法和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测VEGF的蛋白和基因表达.结果:VX2肿瘤浸润性生长,射频后中央消融区呈现大片坏死,周围见炎性反应带,外围癌组织残留.免疫组化和RT-PCR示对照组肿瘤组织VEGF的蛋白和基因表达均高于正常组(VEGF/GAPDH基因灰度比:1.3048±0.1936vs0.8993±0.1107,P<0.05),射频消融后4h和24h表达明显下降(VEGF/GAPDH基因灰度比:0.7388±0.1503,0.8935±0.1936,均P<0.05),但不同时间段并无明显差异.结论:RFA治疗能下调肿瘤VEGF基因和蛋白水平的表达,抑制血管生成,减少血供,进而降低了复发和转移几率.

雷公藤内酯醇对胰腺癌细胞株SW1990基因表达谱的影响

目的:应用基因表达谱芯片研究胰腺癌细胞株(SW1990)在雷公藤内酯醇作用后其基因表达的差异性。方法:用Cy5和Cy3两种荧光染料通过逆转录反应将加药组和对照组的SW1990细胞的mRNA分别标记成两种探针,并与载有一组靶基因的表达谱芯片杂交,通过扫描荧光强度,计算机软件分析,寻找经雷公藤内酯醇作用后表达有差异的基因。对芯片结果中两个表达有改变的基因行荧光定量PCR验证。结果:胰腺癌细胞SW1990受雷公藤内酯醇作用4h后,共筛选出11条差异表达基因,且全部下调。结论:雷公藤内酯醇可能部分通过下调C-MYC、ETS2、TGIF、RTP801等基因来发挥其有效的抗肿瘤特性。

趋化因子SLC在小鼠实验性结肠炎中的表达和意义

背景:次级淋巴组织趋化因子(SLC)是一种CC型趋化因子,主要功能为趋化各种淋巴细胞向外周淋巴组织或器官归巢。既往研究发现结肠组织SLC表达增高可能参与了溃疡性结肠炎(UC)的发病。目的:明确SLC在UC中的作用及其作为UC治疗靶点的可能性。方法:24只雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、DSS模型组和地塞米松(DXM)治疗组,后两组饮用5%DSS溶液7 d诱导实验性结肠炎以模拟人类UC,DXM治疗组于造模第3 d起腹腔注射DXM 0.4 mg/kg qd×5 d。实验过程中评估疾病活动指数(DAI)。第8 d处死各组小鼠,行结肠大体形态和组织学评分,以免疫组化染色和RT-PCR检测结肠组织SLC表达。结果:对照组结肠组织SLC表达微弱,DSS模型组SLC mRNA和蛋白表达均较对照组显著上调(P<0.01),DXM治疗组SLC表达较DSS模型组显著降低(P<0.01),伴DAI以及结肠大体形态和组织学评分改善(P<0.01)。结论:结肠组织SLC表达增高与UC发病有关,针对SLC的靶向治疗可作为UC的治疗选择。

趋化因子MIP-3α及其受体CCR6在溃疡性结肠炎中的表达及其意义

目的:研究趋化因子巨噬细胞炎症蛋白-3α(MIP-3α)及其受体CCR6在溃疡性结肠炎(UC)中的表达情况以及与UC病变程度和范围的关系,探讨其在UC发病机制中的作用。方法:用免疫组织化学法检测35例活动期UC及20例正常对照石蜡包埋组织中MIP-3α及CCR6的表达情况。结果:UC组MIP-3α及CCR6均为阳性表达,对照组为阴性或弱阳性表达。MIP-3α及CCR6在UC组的表达与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。UC病变范围越广、程度越重,MIP-3α及CCR6表达阳性率越高;且MIP-3α和CCR6表达有明显相关性(r=0.765,P<0.01)。结论:MIP-3α与CCR6均参与了UC的发生和发展,两者的相互作用可能在UC局部结肠组织破坏和病理变化中起着重要作用。

靶向5-LOX的siRNA诱导胰腺癌细胞的凋亡

目的:采用RNA干扰技术(siRNA)阻断5-LOX基因的表达,观察其抑制人胰腺癌细胞增殖及诱导细胞凋亡的作用.方法:构建靶向5-LOX的siRNA质粒表达载体,采用Lipofectamine-2000转染人胰腺癌细胞株SW1990,采用RT-PCR检测RNA干扰后5-LOX mRNA表达,MTT法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果:靶向5-L O X序列特异性的三条s i R N A(组1、组2、组3)可以有效地抑制SW1990细胞5-LOX基因表达,其表达抑制率分别为19.6%±1.9%、55.4%±2.6%和55.2%±2.7%.转染靶向5-LOX siRNA的三个质粒表达载体可以显著抑制SW1990细胞的增殖,细胞接种24h后,三组增殖抑制率分别为5.37%±1.19%、11.63%±1.25%和13.67%±1.04%;48h后其增殖抑制率分别为16.13%±1.5%、26.63%±1.22%和25.47%±1.67%,各siRNA组增殖抑制率高于空白组和阴性对照组(均P<0.05),转染后24h和48h三组细胞凋亡率分别为5.56%±1.05%、11.45%±1.44%、12.13%±1.36%和7.37%±1.23%、18.75%±1.5%和22.02%±1.45%,均高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05).结论:所构建的靶向5-LOX的siRNA质粒表达载体可以有效阻断SW1990细胞5-LOX基因表达,显著地抑制SW1990细胞增殖,并在一定程度上诱导其凋亡.

趋化因子CXCL11及其受体CXCR3在重症急性胰腺炎相关肺损害中的作用

目的:制作大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)模型,检测不同时间点趋化因子CXCL11及其受体CXCR3在SAP肺组织中的动态变化,探讨他们在SAP肺功能损害过程中的作用.方法:48只SD大鼠,雌雄不限,随机分为2组:对照组(C组),SAP组(P组),每组24只.4%牛黄胆酸钠逆行胰胆管注射建立SAP大鼠模型,剂量为1mL/kg,C组打开腹腔后仅仅翻动胰腺组织数次.每组随机分为4个亚组,每个亚组6只.4个组分别在1、3、6、12h抽血、处死,留取组织标本.分别检测各不同时间点组的血清淀粉酶、肺湿干重比,胰腺组织、肺组织病理,免疫组织化学法检测肺CXCL11及CXCR3的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的CXCL11的水平.结果:P组各亚组血清淀粉酶值明显升高(P<0.01vsC组);肺湿干重比值:P组3、6、12h组较C组明显升高(P<0.05);胰腺组织、肺组织病理:3、6、12hP组肺组织损伤明显;免疫组织化学显示P组CXCL11与CXCR3蛋白表达较C组表达明显增强(P<0.05),ELISA显示:1、3、6、12hP组血清CXCL11蛋白较C组明显增高(P<0.01).结论:CXCL11/CXCR3可能参与大鼠SAP急性肺功能损害的发病过程.

射频消融治疗对肝VX2瘤及转移肿瘤血管生成的影响

目的:探讨射频消融(RFA)对兔肝VX2肿瘤及转移结节中肿瘤血管生成的影响。方法:建立兔VX2移植瘤模型,模型组直接处死,实验组于射频后4、24h处死取出肝、肺肿瘤组织。免疫组化法检测VEGF的蛋白表达和MVD,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测VEGF的基因表达。结果:VX2肿瘤呈浸润生长,射频后,中央消融区细胞呈现大片坏死,周边为炎性反应带,外围癌组织残留。免疫组化结果示模型组VEGF蛋白表达及MVD均高于正常组,射频处理后肝脏残癌组织中VEGF蛋白及MVD下降,而肺组织内无明显变化;RT-PCR结果示模型组肺转移结节的VEGF/GAPDH基因表达比为1.117±0.125 4,射频消融后4h和24h,基因表达比分别为1.046 5±0.136 6,1.057 4±0.145 2,与模型组比较无明显差异,P>0.05。结论:RFA能破坏局部的肿瘤微血管,下调VEGF表达,抑制肿瘤血管生成;对于远处肿瘤血管生成,RFA治疗并无明显影响。

花生四烯酸代谢通路与胰腺癌

花生四烯酸(arachidonic acid,AA)是人体一种必需脂肪酸,该脂肪酸含有20个碳原子,4个双键,是5,8,11,14-二十碳四烯酸.其代谢有两条途径:环氧化酶(COX)和脂氧合酶(LOX).研究表明其代谢限速酶COX和LOX在胰腺癌中呈高表达,AA代谢产物抑制COX和LOX通路,具有抑制肿瘤生长,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞转移等功能.非选择性和选择性COX或LOX抑制剂被用来尝试治疗胰腺及其他肿瘤.

雷公藤内酯醇降调胰腺癌细胞5-脂氧合酶表达作用研究

目的探讨雷公藤内酯醇(TL)对胰腺癌细胞中5-脂氧合酶(5-LOX)蛋白表达及胰腺癌细胞凋亡的影响。方法应用RT-PCR法和免疫细胞化学法检测胰腺癌细胞株SW 1990中5-LOX表达,同时应用流式细胞术检测胰腺癌细胞SW 1990的凋亡指数。结果胰腺癌细胞株SW 1990表达5-LOX,正常胰腺组织不表达;TL可抑制SW 1990中5-LOX表达,并促进胰腺癌细胞SW 1990凋亡,作用随浓度的增加而增强(P<0.01);细胞凋亡与5-LOX蛋白的表达相关(P<0.01)。结论TL可抑制胰腺癌细胞SW 1990中5-LOX的表达,并促进胰腺癌细胞凋亡。

5-LOX在结肠癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)在结肠癌组织中表达的意义.方法:收集南通大学附属医院2008-01/2009-03外科手术切除的结肠癌标本60例,正常结肠组织30例,采用SP免疫组织化学检测结肠癌组织和正常结肠组织中5-LOX的表达情况.结果:5-LOX在结肠癌组织中的阳性表达率高于正常结肠组织,差异有统计学意义(76.7%vs40.0%,P<0.05);结肠癌组织多为中等或强阳性表达,而正常黏膜组织中多不表达或弱阳性表达.TNM分期Ⅰ+Ⅱ期和Ⅲ+Ⅳ期5-LOX的表达阳性率分别为45.0%、80.0%,差异显著(P<0.05);有、无淋巴结转移组织中5-LOX的表达阳性率分别为90.0%、60.0%,差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤浸润全层及浆膜5-LOX的表达阳性率明显高于肿瘤累及浸润黏膜、肌层,差异有统计学意义(87.9%vs55.6%,P<0.05).结论:5-LOX在结肠癌组织中表达明显增高,其异常表达与结肠癌的发生、发展有关.

超声引导下射频消融治疗肝癌对免疫功能的影响

目的:探讨超声引导下射频消融治疗肝癌对患者血清免疫功能的影响。方法:超声引导下射频消融治疗肝癌患者46例,以ELISA法测定患者术前术后外周血IL-2,sIL-2R水平,并行统计学分析。结果:射频消融术前,患者血清IL-2,sIL-2R水平分别为(136.91±55.11)pg/ml、(273.18±89.45)pmol/l,术后1月(186.62±64.88)pg/ml、(171.73±38.49)pmol/L,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:超声引导下射频治疗肝癌可以有效改善患者免疫功能。