中和低剂量重组人凝血因子Ⅷ防治血友病A关节出血的疗效

目的 比较中、低剂量重组人凝血因子Ⅷ防治血友病A关节出血的临床疗效.方法将58 例血友病A患儿按预防剂量的大小分为2组：中剂量组（28例）和低剂量组（30例）.中剂量组采用重组人凝血因子Ⅷ15～25 ·kg-1静脉推注,3次周-1,连用4个月;低剂量组采用重组人凝血因子Ⅷ＜15 U·kg-1静脉推注,3次＆#183;周-1,连用4个月.观察2组防治前、防治4个月后关节出血次数的情况.结果 2组防治4个月后关节出血次数明显低于防治前（P＜0.05）,中剂量组防治4个月后关节出血次数明显低于低剂量组（P＜0.05）.结论 重组人凝血因子Ⅷ用于防治血友病A能明显改善关节出血症状,且中剂量防治优于低剂量.

cMyc抑制剂10058-F4诱导白血病THP1细胞凋亡和DNA损伤的机制

目的研究cMyc抑制剂10058-F4对白血病THP1细胞的抑制作用及分子机制。方法体外培养人白血病THP1细胞,加入不同浓度(1、5、10、50、100μmol/L)的cMyc抑制剂10058-F4处理THP1细胞,CCK-8分析药物对细胞生长抑制作用;Calcein/PI和JC-1荧光染色分别检测细胞凋亡和线粒体膜电位的变化;流式细胞仪检测细胞周期;Western blot分析凋亡相关蛋白(Cleaved-Caspase-3、Bax)和DNA损伤应答相关蛋白(pATM和γH2AX)表达。结果不同浓度10058-F4处理THP1细胞后明显抑制细胞的增殖,并呈浓度依赖和时间依赖性;10058-F4呈浓度依赖地诱导THP1细胞凋亡,并且降低线粒体膜电位水平,差异具有统计学意义(P<0.05);10058-F4可诱导THP1细胞发生G2/M期阻滞,上调促凋亡蛋白(Cleaved-Caspase-3和Bax)以及DNA损伤应答相关蛋白(pATM和γH2AX)的表达水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论cMyc抑制剂10058-F4对白血病THP1细胞具有凋亡诱导作用,可能与其诱导细胞DNA损伤并激活相关信号途径有关。

PTEN、NF-κB基因在正常核型急性髓细胞白血病患者中的表达意义

目的探讨PTEN和NF-κB基因在正常核型急性髓细胞白血病(CN-AML)中的表达情况及其对预后的影响。方法应用逆转录聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)技术检测40例初治CN-AML和10例对照(正常骨髓6例和非恶性血液病4例)骨髓单个核细胞中PTEN、NF-κB p65的表达,分析PTEN、NF-κB与患者年龄、性别、外周血白细胞数、骨髓原始细胞数及总生存时间(OS)的关系。结果对照组PTEN基因表达阳性率为90%,CN-AML组阳性率50%,明显低于对照组(P=0.031);PTEN基因表达与年龄、骨髓中原始细胞百分比有关,(P值分别为0.016、0.01),与性别、外周血白细胞计数、OS无关(P>0.05);对照组NF-κB P65基因表达均为阴性,CN-AML组阳性率为35%,差异有统计学意义(P=0.045),NF-κB p65基因阳性表达与较短OS有关(P=0.024),与性别、年龄、外周血白细胞计数及骨髓中原始细胞百分比均无关(P>0.05)。结论 CN-AML患者存在PTEN、NF-κB基因表达异常,NF-κB阳性者预后较差,是影响CN-AML患者预后的生物学指标之一。

c-myc基因与急性髓性白血病的相关性研究

目的检测c-myc基因在急性髓性白血病(AML)不同临床阶段的表达情况,探讨c-myc基因与AML的关系。方法 20例初诊AML患者作为初诊AML组,16例复发AML患者作为复发AML组,10例外周血造血干细胞移植治疗的AML患者作为对照组。检测三组骨髓单个核细胞中c-myc基因的表达水平,分析c-myc基因与AML不同临床阶段之间的关系。结果初诊AML组与复发AML组治疗前骨髓中单个核细胞的c-myc基因表达(1.12±0.26)、(0.97±0.18)高于对照组(0.27±0.08)(P<0.05);治疗后达CR患者骨髓中单个核细胞的c-myc基因表达(0.38±0.24)、(0.49±0.12)较治疗前下降(P<0.05);治疗后未达CR患者骨髓中单个核细胞的c-myc基因表达(0.91±0.23)、(1.02±0.25)高于对照组(P<0.05);复发AML组再诱导治疗后达CR患者骨髓中单个核细胞的c-myc基因表达(0.49±0.12)高于初诊AML组诱导治疗后达CR患者(0.38±0.24)和对照组(0.27±0.08)(P<0.05)。结论 c-myc基因高表达可能是AML发生与复发的机制之一,其表达水平在AML患者病程监测与预后判断中具有重要意义。

载体介导的RNA i技术对HL-60细胞端粒酶逆转录酶基因表达和细胞增殖的影响

目的探讨由载体介导的靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的RNA i技术对人类髓系白血病HL-60细胞hTERT基因表达和细胞增殖的影响。方法用表达针对hTERT基因siRNA的质粒载体转染HL-60细胞,以转染后24、72、120 h细胞组作为3个实验组,以空质粒组、转染试剂组及空白对照组作为3个对照组,RT-PCR法检测HL-60细胞hTERT基因mRNA的表达,MTT法检测HL-60细胞增殖活性。结果转染后24、72、120 h组HL-60细胞hTERT基因mRNA相对表达水平分别为0.31±0.08、0.28±0.05、0.32±0.06,质粒组、转染试剂组、空白对照组分别为0.55±0.13、0.49±0.08、0.58±0.19,3个实验组HL-60细胞hTERT mRNA表达水平低于3个对照组,差异有显著性(P<0.05),3个实验组组间比较差异无显著性(P>0.05),3个对照组间表达水平比较差异无显著性(P>0.05);24、72、120 h实验组细胞增殖活性抑制率分别为(23.7±4.0)%、(35.1±5.9)%、(29.6±3.8)%,质粒组分别为(3.7±0.8)%、(2.1±0.5)%、(2.7±0.9)%,转染试剂组分别为(4.0±1.8)%、(2.6±1.3)%、(2.2±1.1)%,空白对照组均为0,3个实验组HL-60细胞增殖活性抑制率明显高于各对照组,差异有显著性(P<0.05),3个实验组及组间比较差异无显著性(P>0.05),3个对照组组间比较差异无显著性(P>0.05)。结论载体介导的靶向hTERT基因的RNA i技术能在体外抑制HL-60细胞hTERT基因的表达,细胞增殖活性受抑制。

靶向γ-catenin基因的RNAi对人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞增殖的影响

目的探讨靶向γ-连接素(γ-catenin)基因的RNA干扰(RNAi)对人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞增殖的影响,为白血病的治疗寻找新的靶点。方法针对γ-catenin基因设计dsRNA,转染HL-60细胞,运用RT-PCR检测细胞γ-catenin mRNA表达,Westernblot检测γ-catenin蛋白表达,MTT法检测细胞增殖活性。结果经dsRNA转染后,γ-catenin基因表达及蛋白表达水平下降,HL-60细胞增殖受抑制。结论靶向γ-catenin基因的RNAi可以有效地降低HL-60细胞中γ-catenin基因表达,抑制HL-60细胞增殖,故γ-catenin基因可能作为潜在的白血病治疗靶点。

白血病患者血清IL-6、MCP-1、IL-22水平变化及临床意义

目的:探讨白血病患者血清白细胞介素-6(IL-6)、人巨噬细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-22(IL-22)水平变化及临床意义。方法:选取江西省人民医院2018年6月-2021年6月收治的67例白血病患者作为白血病组,另外选取同期接受体检的健康者96例作为健康组,比较两组血清IL-6、MCP-1、IL-22水平,分析IL-6、MCP-1、IL-22在不同类型白血病患者中的表达水平。结果:白血病组与健康组性别、年龄差异均无统计学意义(P>0.05);白血病组IL-6、MCP-1、IL-22水平均显著高于健康组(P<0.05);Pearson相关性分析得出,血清IL-6、MCP-1、IL-22水平呈现互为正相关(P<0.05);白血病患者中,急性白血病组血清中IL-6、MCP-1、IL-22水平均显著高于慢性白血病组(P<0.05),淋巴细胞白血病组血清中IL-6、IL-22水平均显著高于粒细胞白血病组(P<0.05),但两组MCP-1差异无统计学意义(P>0.05);不同疾病时期白血病患者中,血清IL-6、IL-22水平从高到低依次为复发白血病组、初诊白血病组、缓解白血病组患者,各组差异均有统计学意义(P<0.05),而初诊白血病组与复发白血病组血清中MCP-1水平均显著高于缓解白血病组(P<0.05)。结论:不同分化成熟程度和自然病程、细胞类型及疾病时期白血病患者血清中IL-6、MCP-1、IL-22水平存在差异,检测血清中IL-6、MCP-1、IL-22水平可能有助于评估白血病患者病情,进而为临床治疗提供参考。

雷公藤红素诱导多发性骨髓瘤H929细胞凋亡

目的:研究雷公藤红素对人多发性骨髓瘤H929细胞凋亡的诱导作用及分子机制。方法:体外培养H929细胞,加入不同浓度(0.5、1、5和10 mg/L)的雷公藤红素处理细胞,CCK8法分析药物对细胞活力的抑制率;annexin V-PE/7-AAD双染法检测雷公藤红素对H929细胞凋亡的影响;流式细胞术分析雷公藤红素处理的H929细胞中线粒体膜电位水平;彗星电泳实验分析雷公藤红素对细胞DNA损伤的诱导作用;Western blot分析不同浓度的雷公藤红素对H929细胞中凋亡相关分子P53、XIAP、cleaved PARP-1和cleaved caspase-3的蛋白水平以及线粒体细胞色素C释放的影响。结果:不同浓度雷公藤红素处理H929细胞后明显抑制细胞的活力,并呈浓度依赖和时间依赖性。雷公藤红素呈浓度依赖地诱导H929细胞凋亡,并且降低线粒体膜电位水平(P<0.05)。彗星电泳实验结果显示雷公藤红素可以诱导H929细胞的DNA损伤。Western blot实验结果显示雷公藤红素处理的H929细胞中,促凋亡蛋白P53、cleaved PARP-1和cleaved caspase-3的蛋白水平明显升高,而抗凋亡蛋白XIAP的表达水平明显降低(P<0.05)。雷公藤红素可以促进线粒体中细胞色素C的释放,并依赖于caspase-9而激活caspase-3。结论:雷公藤红素对多发性骨髓瘤H929细胞具有凋亡诱导作用,其机制可能与诱导DNA损伤、激活线粒体凋亡途径有关。

血友病A患儿预防治疗中凝血因子Ⅷ剂量与疗效的相关性

目的:研究血友病A患儿预防治疗中凝血因子Ⅷ剂量与疗效的相关性,探讨发展中国家预防性治疗的适宜剂量。方法:对不同体质量的患儿,每次使用相同用量的凝血因子Ⅷ(250 U/次,一周3次)进行预防治疗,观察及记录预防治疗后患儿的出血次数,与预防治疗前对比,考察预防治疗的疗效;根据患儿体质量的不同,计算每位患儿相应的每公斤体质量凝血因子使用Ⅷ剂量(以下简称剂量),使用Spearman相关系数研究不同剂量与预防治疗疗效的相关性。结果:58名患儿预防治疗前出血次数为(4.36±1.78)次,预防治疗后出血次数为(2.22±1.04)次(t=7.91,P<0.001);Ⅷ因子用量在5~10 U/kg的患儿预防剂量与出血次数的Spearman相关系数为-0.421(P=0.005),Ⅷ因子用量在10~15 U/kg的患儿预防剂量与出血次数的相关系数为-0.331(P=0.030);Ⅷ因子用量大于15 U/kg的患儿预防剂量与出血次数的相关系数为-0.16(P=0.325)。结论:预防治疗能明显减少血友病患者的出血次数。

载体介导的靶向人端粒酶反转录酶基因RNA干扰对白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨载体介导的靶向人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)对白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响。方法:采用靶向hTERT基因的RNAi重组质粒pSilencer1.0-U6/hTERT转染HL-60细胞,以空载体质粒pSilencer1.0-U6转染组、转染试剂及空白组作为对照,蛋白质印迹法检测转染后HL-60细胞hTERT蛋白的表达,MTT法检测细胞的增殖抑制率,FCM法检测HL-60细胞的凋亡情况。结果:转染pSilencer1.0-U6/hTERT质粒24、72和120h后,HL-60细胞hTERT蛋白的表达水平低于各对照组(P<0.05),细胞增殖抑制率和细胞凋亡率高于各对照组(P<0.05)。hTERT蛋白的表达水平、细胞增殖抑制率和细胞凋亡率在转染pSilencer1.0-U6/hTERT质粒24、72和120h组间无明显差异(P>0.05),在3个对照组间也无明显差异(P>0.05)。结论:载体介导的靶向hTERT基因的RNAi在体外能抑制白血病HL-60细胞hTERT蛋白的表达,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。

载体介导的RNA干扰技术对人类髓系白血病HL-60细胞端粒酶反转录酶基因、蛋白表达和凋亡的影响

目的探讨由载体介导的靶向端粒酶反转录酶(hTERT)基因的RNA干扰(RNAi)技术对白血病HL-60细胞hTERT基因、蛋白表达及细胞凋亡的影响。方法用已经构建好的表达针对hTERT基因siRNA的质粒载体经转染试剂RNAi-Mate转染HL-60细胞;以转染后24 h、72 h、120 h细胞作为实验组,以空质粒、转染试剂及空白组作对照,采用反转录-PCR(RT-PCR)检测细胞hTERT基因mRNA表达,Western blot检测细胞hTERT蛋白表达,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染后24 h、72 h、120 h实验组HL-60细胞hTERT基因mRNA相对表达水平分别为0.31±0.08、0.28±0.05、0.32±0.06,质粒组、转染试剂组、空白对照组分别为0.55±0.13、0.49±0.08、0.58±0.19;24 h、72 h、120 h实验组蛋白相对表达水平分别为0.47±0.09、0.32±0.07、0.51±0.08,质粒组、转染试剂组、空白对照组分别为0.75±0.11、0.76±0.15、0.73±0.14;24 h、72 h、120 h实验组,质粒组,转染试剂组,空白对照组凋亡率分别为(11.95±3.61)%、(14.61±2.97)%、(12.82±3.01)%、(4.25±2.16)%、(5.09±1.97)%、(3.76±1.84)%。24 h、72 h、120 h实验组hTERT mRNA、蛋白表达水平均低于各对照组(Pa<0.05),细胞凋亡率高于各对照组(Pa<0.05),hTERT mRNA、蛋白表达水平、细胞凋亡率实验组组间比较差异均无统计学意义(Pa>0.05);质粒组、转染试剂组hTERT mRNA、蛋白表达水平、细胞凋亡率与空白对照组比较差异均无统计学意义(Pa>0.05)。结论载体介导的靶向hTERT基因的RNAi技术能在体外抑制HL-60细胞hTERT基因和蛋白的表达,增加细胞凋亡。

减低剂量凝血因子替代治疗在血友病患者微创手术中的疗效

目的探讨减低剂量凝血因子替代治疗在血友病患者进行微创手术时的疗效。方法回顾性分析2012年3月~2019年12月我院行血友病微创外科手术的8例患者临床资料,均按照围手术期凝血因子替代治疗方案进行治疗,分析治疗情况、围手术期止血情况分级、术中出血量、术后引流量、凝血因子用时、住院时间、凝血因子用量及并发症发生情况。结果8例患者行9次微创手术均顺利完成,围手术期止血情况分级判定均为极佳(E级)。术中出血量(20.00±13.45)ml、术中出血量(57.22±34.98)ml、凝血因子用时(5.44±2.19)d、住院时间(13.54±7.48)d、凝血因子用量(260.44±111.63)U/kg。所有手术均未出现急性出血、延迟性出血、血栓、凝血因子抑制物、血制品相关病毒感染、手术部位感染等并发症。结论减低剂量凝血因子替代治疗在血友病患者微创手术中的疗效满意,在获得良好止血效果的同时,可减少并发症发生风险。