米糠多糖的提取及免疫调节作用

用热水抽提法从米糠中提取出多糖成分，经Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ层析柱收集单峰部分（Ｒｉｃｅ ＢｒａｎＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＲＳ多糖）。对其理化性质及药理作用作了初步研究，发现ＲＳ多糖为α－呋喃葡聚糖，以α－１．４和α－１．６糖甙键连接，具有较好的免疫调节作用。

少腹逐瘀汤活血化瘀及镇痛、抗炎作用的实验研究

目的:评价少腹逐瘀汤的活血化瘀和镇痛、抗炎作用。方法:采用肾上腺素+冷水浸方法制作大鼠急性血瘀模型,实验分为正常组,模型组,丹参片组,少腹逐瘀汤低、中、高剂量组,通过检测血液流变性变化以及血栓素B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平,评价活血化瘀作用;采用小鼠醋酸扭体实验和大鼠棉球肉芽肿实验评价镇痛、抗炎作用。结果:少腹逐瘀汤能显著改善急性血瘀大鼠的的全血黏度和血浆黏度,降低急性血瘀大鼠血浆TXB2水平,升高血浆6-keto-PGF1α水平;并能显著减少醋酸所致小鼠扭体次数;抑制大鼠棉球肉芽肿的形成。结论:少腹逐瘀汤具有明显的镇痛、抗炎和活血化瘀作用,其活血化瘀作用与调节血浆TXA2/PGI2的平衡有关。

肝细胞生长因子与组织器官损伤再修复

组织器官损伤后，肺、脾及损伤器官产生的肝细胞生长因子（ＨＧＦ）进入血浆，在损伤部位被水解为有活性的二聚体，促进组织器官的修复。

重组人肝细胞生长因子真核表达的定性及定量检测

将人肝细胞生长因子 ( human hepatocyte growth factor ,h HGF)全长 c DNA重组入 p EE1 4真核稳定表达质粒 ,用 lipofectin脂质体将 p EE1 4 /rh HGF转染入 CHO-K1细胞 ,蛋氨酸亚氨基代砜 ( methioninesulfoximine,MSX)筛选出阳性细胞克隆 .利用 RT-PCR检测 rh HGF m RNA的表达 ,通过 ELISA法测定rh HGF的蛋白表达 ,3H掺入法检测培养上清液对大鼠原代培养肝细胞 DNA合成的影响 .结果表明转染p EE1 4 /rh HGF的细胞可扩增出 h HGF特异的 396bp RT-PCR片段 ,培养上清液明显促进大鼠肝细胞 DNA的合成 ,ELISA法测出上清液中 rh HGF的含量在 8μg/L以上 ,显示 rh HGF在

重组人肝细胞生长因子的纯化及鉴定

目的对重组人肝细胞生长因子（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｈｕｍａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｏｒ， ｒｈＨＧＦ）进行初步纯化及鉴定。方法 培养上清液经过离心、超滤，在ＦＰＬＣ系统上经肝素亲和层析分离纯化，用ＥＬＩＳＡ法检测、收集ｒｈＨＧＦ。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电 泳鉴定纯度和相对分子质量，大鼠原代肝细胞培养法检测ｒｈＨＧＦ的生物学活性。结果ｒｈＨＧＦ主要在０．９～１．３ ｍｏｌ／Ｌ ＮａＣｌ 范围内被洗脱，由约６２ ０００和３４ ０００两个亚基组成，明显促进大鼠肝细胞ＤＮＡ合成。结论 经肝素亲和层析分离，从 表达山ＨＧＦ的ＣＨＯ细胞培养上清液中纯化出有活性的ｒｈＨＧＦ。

HGF/C-Met促进肝细胞生长的跨膜信号转导

肝细胞生长因子与其受体Ｃ－Ｍｅｔ蛋白相结合，激活受体蛋白质酪氨酸激酶（ＰＴＫ），使受体自身磷酸化，并使胞浆信使蛋白质磷酸化，同时启动几条信号通路，将增殖信号传至细胞核内。

药学相关专业临床药理学差异化教学改革实践

临床药理学是一门覆盖学科广、涉及内容多且理论性强的课程。为了促进学生将知识点内化于心,做到融会贯通,南方医科大学药学院根据实际教学情况,结合药学专业和临床药学专业的培养目标、专业需求的差异,针对这两个专业背景结合实际应如何开展临床药理学课程教学进行了探讨,从药学专业和临床药学专业的教学内容、课时、案例和教学方法等方面进行了相应的改革,以期做到因材施教,最大化启发学生学习能动性,提高临床药理学课程的教学质量。

重组腺病毒Ad-GFP-C197的构建及其抗肿瘤活性研究

端粒酶是维持端粒长度的重要组成部分,是肿瘤发生的标志物之一。构建了能表达人端粒酶逆转录酶(h TERT)C端936-1132氨基酸片段(C197)的重组腺病毒Ad-GFP-C197,并观察其对Hela细胞增殖的影响。结果显示,Ad-GFP-C197感染Hela细胞后,采用免疫印迹法检测到C197在细胞内得到高效表达。此外,AdGFP-C197明显抑制Hela细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并且降低Hela细胞中端粒酶活性。上述研究为进一步研究h TERT C末端功能打下基础,并为肿瘤的生物治疗提供新的思路。

PBL与LBL相结合在中医药专业药理学教学中的应用

针对中医药专业学生特点,尝试改革传统的教学方法,将PBL结合LBL教学方法运用于其药理学教学中。教学实践结果表明,PBL与LBL相结合的教学方法不仅利于医学生的全面培养,而且还促进了教师综合素质的提高,真正实现教学相长,使教学效果得到了明显的提高。

中华眼镜蛇蛇毒因子的简易提纯及鉴定

目的探索从中华眼镜蛇（Ｃｈｉｎｅｓｅ ｃｏｂｒａ，Ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ）蛇毒中一次性快速分离提纯具有抗补体活性及溶血活性的中华眼镜蛇蛇毒因子子质量测定，并鉴定其活性与毒性。结果本法ＣＣＶＦ得率高于２％，电泳图谱呈单一区带，由３个亚基组成，相对分子质量为１４５ ８００，抗补体及溶血活性强，毒性低。结论本法操作简单，时间短，纯度高，为一实用高效快速提纯方法。

指导药学本科专业毕业设计的实践与思考

毕业设计是高等学校四年本科教学的最后一个环节,是检验学生学习成果和综合素质的手段,是培养学生理论联系实际能力的活动。结合对药学本科毕业设计的指导实践,分析了目前高校毕业设计的主要问题及具体原因,提出指导教师在提高思想认识后通过对设计选题、研究过程和写作等方面的正确指导来保障毕业设计质量的措施。

尖吻蝮蛇血凝酶抗体检测方法的建立及其应用

目的建立尖吻蝮蛇血凝酶(商品名苏灵,代号Saculin)多克隆抗体检测的间接ELISA法,并应用于其临床免疫学检测。方法免疫家兔获得多克隆抗体,Western blot鉴定其特异性,通过比较各种不同条件的检测结果来确立检测尖吻蝮蛇血凝酶多克隆抗体的间接ELISA法的最佳工作条件,并以此为参考检测临床血清。结果间接ELISA法测定兔抗血清效价高达1∶6 553 600,55例临床试验受试者(36例为Saculin实验组,19例为安慰剂组)给药3周后血清抗体检测结果均为阴性。结论本研究建立的抗尖吻蝮蛇血凝酶多克隆抗体间接ELISA法能够用于临床血清的判定。

壮阳药效动物实验评价方法的改进

目的对壮阳药效评价方法进行优化,以探求更为有效的候选药物筛选方法。方法模型组大鼠均灌胃给予西地那非10 mg/kg,对照组大鼠给予相同容量的生理盐水灌胃,每天1次,连续灌胃给药14 d。每次给药后连续记录2 h内大鼠阴茎勃起、阴部理毛、爬背次数和参与动物数,并计算PEI值。采用改良的壮阳药效评价方法,整个过程采用摄像头观察并在不同时间段给予雌鼠诱导。结果在雌鼠诱导组中,模型组大鼠给药后2 h PEI值较对照组明显升高(P<0.05)。在模型组中,与人为观察组相比,摄像头观察组大鼠给药后2 h PEI值明显升高(P<0.05);与非雌鼠诱导组相比,雌鼠诱导组大鼠给药后2 h PEI值明显升高(P<0.05);与持续诱导组相比,间断诱导组2h PEI值无明显差异,但60～120 min时间段PEI值明显升高(P<0.05)。结论优化后的壮阳药效评价方法能更为有效的评价候选药物的壮阳药效。

以hURAT1为靶点的排尿酸药物体外细胞筛选模型的建立和应用

人尿酸盐阴离子转运体1(human urate anion transporter 1,hURAT1)是人肾小管重吸收尿酸的主要转运蛋白,以hURAT1为靶点,筛选hURAT1抑制剂是近年来降尿酸药物开发的热点,因此建立hURAT1抑制剂体外细胞筛选模型具有重要的意义与实用价值。本实验首先构建了表达SLC22A1 2(hURAT1编码基因)的慢病毒载体,感染MDCK细胞后,通过G41 8筛选出稳转细胞株(稳转株);随后采用W estern-blot及免疫荧光方法检测目的蛋白的表达,并通过液闪计数仪检测hURAT1稳转株对[^(14)C]尿酸的摄取作用及hURAT1抑制剂苯溴马隆、丙磺舒对[^(14)C]尿酸摄取的抑制效果。实验结果显示,hURAT1稳转株目的蛋白表达量为对照稳转株的两倍,并且吸收尿酸的量明显大于对照细胞(P>0.001)。此外,实验中测得hURAT1稳转株对尿酸吸收的Km值为365.4μmol/L,苯溴马隆及丙磺舒对尿酸吸收的IC_(50)分别为0.1 8μmol/L和66.82μmol/L。以上结果表明,本实验成功构建了稳定表达hURAT1的MDCK细胞株,并建立了一套hURAT1抑制剂体外准确筛选和评价的方法体系。

石参总黄酮对一氧化氮致大鼠胰岛细胞损伤的保护作用

采用硝普钠为NO供体,造成大鼠胰岛β细胞RIN-m的损伤,通过检测细胞活力、细胞内丙二醛(MAD)含量、总谷胱甘肽(GSH)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性,探讨石参总黄酮的保护作用和机制。结果显示,石参总黄酮能明显提高损伤细胞的活力,降低细胞内MDA的含量、提高总GSH含量和SOD活力,表明石参总黄酮对NO所致RIN-m细胞的损伤具有保护作用,其机制可能与提高细胞内GSH含量与SOD活力有关。

石参总黄酮抗氧化活性研究

目的:研究石参总黄酮的抗氧化活性。方法:采用50%乙醇回流冷凝提取石参根,提取液分别用乙醚和乙酸乙酯萃取,得到石参总黄酮。利用2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐[2,2'-azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS]法检测总抗氧化能力,采用分光光度法检测对1,1-二苯基-2-苦味肼基(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazy,DPPH),羟基自由基(.OH)、一氧化氮(NO)的清除作用及对脂质过氧化的抑制作用。结果:石参总黄酮在20～100 mg·L-1对DPPH,ABTS+,.OH和NO等自由基具有明显的清除作用,最大清除率分别达到60.89%,74.87%,41.77%,81.01%;对脂质过氧化亦有明显的抑制作用,最大抑制率达41.07%,并具有浓度依赖性。结论:石参总黄酮具有较好的清除自由基活性和抑制脂质过氧化的作用。

现代荧光光谱法在药物与蛋白相互作用研究中的应用

药物与蛋白相互作用是生命科学研究的重要领域,而荧光法是研究药物与蛋白相互作用的重要方法。文中综述了药物与蛋白相互作用的荧光猝灭法、荧光敏化法、同步荧光光谱、荧光偏振法、三维荧光光谱和时间分辨荧光法等。

五灵肩周丸镇痛抗炎作用和急性毒性研究

目的:研究五灵肩周丸的镇痛抗炎作用及急性毒性。方法:采用小鼠扭体实验和甲醛致痛模型来观察五灵肩周丸的镇痛作用;抗炎实验采用大鼠棉球肉芽肿实验及小鼠二甲苯致耳廓肿胀模型;采用小鼠单次ig的方法测定其LD50。结果:给予3.8,7.6 g·kg-1的五灵肩周丸能明显减少醋酸所致小鼠的扭体次数(P<0.05),抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀(P<0.01);五灵肩周丸在3.8,11.4 g·kg-1时能明显减轻甲醛致痛实验中小鼠的Ⅰ相疼痛反应(P<0.01),但对甲醛引起的Ⅱ相疼痛反应没有显著影响;剂量为7.6 g·kg-1时对大鼠棉球肉芽肿的形成有明显的抑制作用(P<0.05);急性毒性试验表明,其LD50为148.4 g·kg-1。结论:五灵肩周丸具有明显的镇痛抗炎作用,且具有较高的安全性。

荧光法研究3种甲基黄嘌呤类生物碱与牛血清白蛋白的相互作用

目的:研究咖啡因、茶碱、可可碱3种甲基黄嘌呤类生物碱与牛血清白蛋白(BSA)结合反应的荧光光谱行为,了解其与蛋白质结合的信息。方法:采用荧光光谱法研究25℃和37℃时3种生物碱不同浓度对BSA的荧光猝灭作用,通过Stern-Volmer曲线和Perrin曲线线性拟合计算得到动态猝灭常数和静态猝灭常数,判断猝灭机制;计算结合常数、结合位点数及热力学函数ΔH、ΔS、ΔG,判断其结合作用力模型。结果:随着3种生物碱浓度升高,BSA内源荧光强度有规律地降低;随温度的升高,静态猝灭常数和结合常数均降低,而3种生物碱与BSA的结合常数差别较大,但结合位点数均接近1;ΔG<0,ΔH<0,ΔS>0。结论:3种生物碱能较显著猝灭BSA的荧光,且机制均为静态猝灭,与白蛋白之间均存在以疏水相互作用为主的结合作用;3种结构相近的生物碱与BSA的相互作用存在差异。

超高效液相色谱-串联质谱法测定大鼠血浆中替诺福韦的浓度

目的:建立大鼠血浆中替诺福韦浓度的测定方法。方法:采用超高效液相色谱-串联质谱法。取6只大鼠单次灌胃给予富马酸替诺福韦酯100mg.kg-1,检测给药45min后血浆中药物浓度,以恩替卡韦为内标,选用阳离子固相萃取柱除去血浆中的蛋白质。色谱柱为AcquitybenUPLC-C18,流动相为0.2%甲酸水溶液(含40mmo.lL-1醋酸铵)-乙腈=97:3,流速为0.25mL.min-1,柱温为40℃,电喷雾正离子(ESI+)源,监测离子对分别为质荷比(m/z)287.9→175.7(替诺福韦)和m/z277.9→151.7(恩替卡韦)。结果:替诺福韦检测浓度的线性范围为10～800ng.mL-1(r=0.9992),最低检测限为10ng.mL-1,回收率为(100.22±9.47)%～(102.76±4.99)%,日间、日内RSD均小于9.4%;给药45min后血浆样品中替诺福韦的平均浓度为819.2ng.mL-1。结论:该方法操作简便、专属性强、灵敏度高,可用于血浆中替诺福韦的浓度测定。