经方丹栀逍遥丸对代谢相关脂肪性肝病小鼠巨噬细胞抗慢炎状态的调节作用

目的 评价经方丹栀逍遥丸(JF-DZXYW)对代谢相关脂肪性肝病小鼠巨噬细胞抗慢性炎症的调控作用,对巨噬细胞吞噬能力、巨噬细胞表面标志物MHC-Ⅱ、CD86、CD80、TLR4表达及巨噬细胞内活性氧表达(ROS)的影响,并阐述其诱导免疫系统发挥抗炎症作用。方法 40只体质量18~22 g雄性昆明种小鼠,随机分为对照组(生理盐水组)、JF-DZXYW低剂量组(125μg/mL)、JF-DZXYW中剂量组(250μg/mL)和JF-DZXYW高剂量组(500μg/mL),灌胃0.4 mL/t/d,共15 d。第16天小鼠行腹腔注射0.2 mL 10%蛋白胨,3 d后小鼠腹腔注射新配制的5%鸡红细胞各0.5 mL,提取小鼠腹腔巨噬细胞进行巨噬细胞吞噬功能检测、细胞表面标志物流式细胞分析及ROS表达检测。结果 3个剂量组的JF-DZXYW汤剂吞噬百分率及吞噬指数均显著高于对照组(P<0.01)。JF-DZXYW低、中、高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞表面标志物MHC-Ⅱ、CD86、CD80表达明显高于对照组(P<0.01),JF-DZXYW中、高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞表面标志物TLR4表达均明显高于对照组(P<0.01)。JF-DZXYW低剂量组小鼠腹腔巨噬细胞内ROS表达明显高于对照组(P<0.05),JF-DZXYW中、高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞内ROS表达均明显高于对照组(P<0.01)。结论 JF-DZXYW可以通过上调巨噬细胞功能、促巨噬细胞表面标志物MHC-Ⅱ、CD86、CD80、TLR4及巨噬细胞内活性氧表达提升机体免疫功能从而抑制慢性炎症状态。

针药结合治疗痰湿型多囊卵巢综合征临床研究进展

多囊卵巢综合征是目前临床上较为难治的妇科内分泌紊乱性疾病,其发病机制复杂,临床表现异质性高,病程缠绵难愈,且近年来发病率逐渐攀升,严重影响育龄期女性身心健康。中医疗法在该病的治疗方面发挥了学科优势,收到较好疗效。针药结合作为以中医药理论为指导的综合疗法,具有高效安全的优点,临床疗效显著。该文通过搜索整理近五年针药结合治疗痰湿型多囊卵巢综合征的临床研究文献,总结临床常用的针灸疗法与药物结合治疗该病的临床疗效,提出现阶段针药结合疗法治疗该病临床研究的进展以及存在的一些不足。

基于TMT标记定量蛋白质组学技术研究老龄肾阳虚证患者血浆差异蛋白的变化及意义

目的:基于TMT标记定量蛋白质组学技术挖掘老龄肾阳虚患者的血浆差异性表达蛋白的变化及意义。方法:收集8例符合中医辨证的老龄肾阳虚证患者及8例同年龄段健康者的血浆样品,分别在两组中随机挑选3例血浆样品,通过TMT蛋白质组学技术进行蛋白质定量分析并筛选出差异表达蛋白,对差异表达蛋白进行GO富集和KEGG富集分析,通过蛋白互作网络分析筛选出差异表达蛋白中的重要蛋白,然后将其中与阿尔茨海默病(AD)具有相互作用的蛋白在另外5例老龄肾阳虚患者和5例同年龄段健康人中进行ELISA验证。结果:老龄肾阳虚患者组与同年龄段健康人组对照共得到83个差异表达蛋白,其中73个上调,10个下调。差异表达蛋白涉及糖酵解、蛋白折叠等生物过程,胞浆、胞外空间等细胞成分,钙黏蛋白结合、蛋白结合等分子功能;涉及丙酮酸盐代谢、AD、雌激素信号通路、胰高血糖素信号通路等。与AD发生发展可能相关的蛋白验证表明,老年肾阳虚患者血浆中钙蛋白酶-1(Calpain1)、α-突触核蛋白(α-synuclein)表达显著高于对照组(P<0.05)。结论:老龄肾阳虚患者与同年龄段健康者血浆之间存在差异性蛋白表达,其中Calpain1和α-synuclein与AD的发生发展有关,为探索老年肾阳虚易患AD提供分子机制,在中医治未病中发挥重要作用。

老龄肾阳虚证患者血清代谢组学特征研究

目的 运用代谢组学方法探究老龄肾阳虚证患者血清特征性生物代谢标志物及相关代谢通路,以期阐明老龄肾阳虚证的本质。方法 收集中医辨证符合老龄肾阳虚证患者15例及同年龄段健康者12例血清样品,采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)技术检测两组血清样本中代谢物及代谢提取物,并结合主成分分析(principal component analysis,PCA)和正交偏最小二乘法判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant Analysis,OPLS-DA)等技术对血清样品进行研究,找出不同代谢物,运用Metaboanalyst 5.0数据处理软件对差异代谢物进行网络分析,聚焦关键代谢通路。结果 代谢组学分析表明老龄肾阳虚证患者血清代谢物轨迹变化明显,通过生物信息学分析,筛选到49种差异代谢物,涉及氮代谢、苯丙氨酸代谢、D-谷氨酰胺代谢、D-谷氨酰胺代谢、丁酸代谢、泛酸酯和CoA合成、酪氨酸、色氨酸、精氨酸、氨基酰-tRNA等多种代谢途径。结论 与同年龄段健康者相比,老龄肾阳虚证患者体内存在着能量代谢、脂肪代谢和氨基酸代谢活动减退的现象,从而呈现出一系列阳热不足的临床病理变化。该研究为揭示老龄肾阳虚本质及病证的临床诊断和治疗提供了重要的信息。

基于“痰湿不孕”探析多囊卵巢综合征的发病机制

基于对古代中医“痰湿不孕”理论的阐释,探讨痰湿与多囊卵巢综合征(PCOS)的关系,从中西医角度,深入阐析多囊卵巢综合征的发病机制。认为“窠囊之痰”的产生是多囊卵巢形成的特征表现,痰湿阻塞胞宫是多囊卵巢综合征的发病关键。痰湿可引发卵巢多囊样的改变和下丘脑-垂体-卵巢轴(HPOA)的调控失常,造成机体激素代谢紊乱、糖脂异常,并且诱导氧化应激,同时激发铁死亡。上述机制相互作用,进而影响胞宫生殖功能,卵泡发育障碍,最终导致多囊卵巢综合征的发生。

二陈汤对痰湿型多囊卵巢综合征大鼠内分泌及糖脂代谢的影响

目的观察二陈汤对痰湿型多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠内分泌及糖脂代谢的作用,探讨"痰湿"的科学内涵。方法选取动情周期规律SD大鼠42只,随机分为对照组(n=10),模型组(n=32),模型组给予高脂饲料+来曲唑溶液灌胃。造模结束后,选周期延长的模型组大鼠随机分为中药组(n=10)和二甲双胍组(n=10),1 mL/100 g剂量灌胃给药,连续4周。Elisa法测定大鼠血清性激素水平,HOMA-IR指数;HE染色观察卵巢病理组织形态;生化分析仪检测血脂水平;实时荧光定量PCR法检测卵巢胰岛素抵抗相关基因的表达。结果与对照组比较,模型组大鼠血清LH、FSH、T、TC、TG、LDL、HDL、FPG、FINS、HOMA-IR水平升高,E2水平降低;卵巢IGF1、PTEN mRNA升高,IGFBP1 mRNA降低;卵巢呈多囊样改变。与模型组比较,中药组和二甲双胍组大鼠血清LH、FSH、T、TC、TG、LDL、HDL、FPG、FINS、HOMA-IR水平降低,E2水平升高;卵巢IGF1、PTEN mRNA降低,IGFBP1 mRNA升高;颗粒细胞增厚,各级卵泡增多。结论二陈汤能够显著改善痰湿型PCOS内分泌及糖脂代谢功能,可能是其"化痰"的科学本质。

脾气虚和脾阳虚模型大鼠脑肠肽与下丘脑葡萄糖转运体1及葡萄糖转运体3表达水平变化的实验研究

目的分析脾虚模型大鼠脑肠肽〔β-内啡肽(β-EP)、胆囊收缩素(CCK)、血管活性肽(VIP)〕、下丘脑葡萄糖转运体(GLUT)1、GLUT3表达水平变化。方法 2015年3—9月,采用随机数字表法将24只SPF级雄性SD大鼠分为对照组、脾气虚组、脾阳虚组,每组8只。脾气虚模型的建立采用饮食失节结合劳倦过度的原则,脾阳虚模型则是在脾气虚的基础上施加苦寒泻下法完成。观察3组大鼠一般情况(体征状态、体质量、体温、进食量等)及前肢抓力。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定下丘脑、胃、空肠β-EP、CCK、VIP表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法测定下丘脑GLUT1、GLUT3 mRNA表达水平,Western blotting法测定下丘脑GLUT1、GLUT3表达水平。结果脾气虚组大鼠体质量、进食量、前肢抓力低于对照组(P<0.05);脾阳虚组大鼠体质量、体温、进食量、前肢抓力低于对照组(P<0.05);脾阳虚组大鼠体温低于脾气虚组(P<0.05)。脾气虚组大鼠下丘脑β-EP表达水平低于对照组,胃、空肠β-EP表达水平及下丘脑、胃、空肠CCK、VIP表达水平高于对照组(P<0.05);脾阳虚组大鼠下丘脑β-EP表达水平低于对照组,胃、空肠β-EP、CCK表达水平及下丘脑、胃、空肠VIP表达水平高于对照组(P<0.05);脾阳虚组大鼠下丘脑β-EP表达水平及下丘脑、空肠CCK表达水平低于脾气虚组,胃、空肠β-EP表达水平及下丘脑、胃、空肠VIP表达水平高于脾气虚组(P<0.05)。脾气虚组、脾阳虚组大鼠下丘脑GLUT1、GLUT3 mRNA及其蛋白表达水平低于对照组(P<0.05);脾阳虚组大鼠下丘脑GLUT1、GLUT3 mRNA及其蛋白表达水平低于脾气虚组(P<0.05)。结论脾虚状态下,大鼠下丘脑GLUT1、GLUT3 mRNA及其蛋白表达水平下降,导致下丘脑、胃、空肠β-EP、CCK、VIP表达水平异常,这可能是脾虚本质研究的又一新观点。

二陈汤通过增强自噬改善痰湿型PCOS大鼠子宫葡萄糖转运功能的研究

目的:观察二陈汤通过增强自噬改善痰湿型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠子宫自噬相关基因7(autophagy related gene,Atg7)、磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter protein 4,Glut4)信号通路的作用,探讨二陈汤改善痰湿型PCOS胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的可能机制。方法:选取动情周期规律SD大鼠42只,运用高脂+来曲唑灌胃法复制痰湿型PCOS大鼠,随机分为对照组10只和模型组32只。造模结束后,周期延长的模型组大鼠随机分为模型组、中药组和二甲双胍组各10只。Elisa法测定大鼠血清激素水平,胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment-Insulin resistance,HOMA-IR),HE染色观察子宫病理组织形态,Western Blot法检测子宫Atg7、PI3K、Akt及Glut4蛋白表达水平。结果:与对照组比较模型组血清性激素水平普遍升高(P<0.05),与模型组比较2组药物治疗组性激素水平降低(P<0.05),与对照组比较模型组HOMA-IR升高(P<0.05),与模型组比较药物治疗组HOMA-IR降低(P<0.05),与对照组比较模型组子宫Atg7、PI3K、Akt及Glut4蛋白水平降低(P<0.05),与模型组比较药物治疗组子宫Atg7、PI3K、Akt及Glut4蛋白水平有一定改善(P<0.05)。结论:二陈汤能够显著抑制PCOS IR水平,其机制可能是通过提高子宫内膜的自噬能力、增强PI3K/Akt/Glut4信号通路实现的。

肺气虚模型大鼠肺、肾组织水液代谢相关性的机制研究

目的:观察肺气虚模型大鼠肺、肾组织AQP1表达及血中ET、IL-1β、TNF-α水平的变化,为机体水液代谢过程中肺肾相关理论提供依据。方法:用气管内注入脂多糖及熏香烟方法复制肺气虚大鼠模型,应用免疫组化、Westernblot方法、RT-PCR方法测定肺、肾组织AQP1蛋白及mRNA表达的变化,应用放免法测定血中、肺组织匀浆中ET、IL-1β及TNF-α含量。结果:与对照组比较,模型组肺组织AQP1mRNA及蛋白表达明显下降;肾组织AQP1mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01)。模型组血中ET、IL-1β及TNF-α含量明显升高(P<0.01)。结论:肺气虚模型大鼠肺组织AQP1表达下调;肾组织AQP1表达上调;血中及肺组织中ET、IL-1β、TNF-α含量明显升高,结果提示肺主"通调水道"功能之一可能与影响肺肾组织AQP1表达有关。

固本化瘀法通过影响多囊卵巢综合征大鼠GLUT4/AKt表达调控胰岛素抵抗作用的机制研究

目的:观察固本化瘀法通过GLUT4/AKt调节肥胖型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠胰岛素抵抗的作用机制。方法:60只SPF级雌性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。模型组采用高脂加来曲唑复合造模。放射免疫法检测血清性激素水平,ELISA法检测胰岛素抵抗状态,Western blotting检测卵巢GLUT4/AKt蛋白表达变化。结果:模型组血清性激素水平紊乱,胰岛素敏感性降低,各级卵泡出现囊性扩张,闭锁卵泡增多,卵巢局部GLUT4/AKt表达降低显著(P<0.05 or P<0.01)。中药高、中剂量组血清性激素水平有一定改善,胰岛素抵抗有所抑制,皮质内发育不同阶段的各级卵泡及黄体和闭锁卵泡有所恢复,卵巢局部GLUT4/AKt表达升高显著(P<0.05 or P<0.01),尤以中剂量组整体恢复效果最佳。结论:肥胖型PCOS大鼠可出现严重的性激素紊乱,伴有全身胰岛素抵抗,卵泡成熟障碍的现象,固本化瘀法可显著改善这些不良症状,GLUT4/AKt可能是临床治疗PCOS患者的有效靶蛋白。

痰湿型多囊卵巢综合征大鼠颗粒细胞AMPK/UCP2途径与线粒体功能变化的研究

目的观察痰湿型多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠颗粒细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)(AMPK/UCP2)途径与线粒体功能的变化,探讨“痰湿不孕”的机制。方法选取动情周期规律SD大鼠22只。运用高脂+来曲唑灌胃法复制痰湿型PCOS大鼠,随机分为对照组和模型组,造模成功后,取卵巢组织提取原代颗粒细胞,比色法检测三磷酸腺苷(ATP)含量;化学发光法检测活性氧(ROS)水平;Western blot法检测AMPKα、p-AMPKα及UCP2蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠颗粒细胞线粒体数量减少,出现肿胀,嵴断裂及空泡化改变;ATP降低、ROS增高(P<0.01);p-AMPKα/AMPKα比值降低(P<0.05);UCP2蛋白表达升高(P>0.05)。结论“痰湿不孕”可能与AMPK/UCP2途径所致的线粒体受损相关。

四君子丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞caspase-3表达的影响

目的探讨四君子丸对Lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞凋亡相关蛋白caspase-3表达的影响。方法在小鼠右侧腋窝皮下,接种浓度为1×10~7个/ml的小鼠肺癌Lewis细胞悬液0.1 ml,模型建立成功后将小鼠分为Lewis肺癌组、中药治疗组(成瘤后灌胃四君子丸0.093 6 g/10 g,1次/d,连续14 d)、顺铂组(腹腔注射0.05 mg/10 g,1次/w,持续2次)。采用透射电镜观察各组肿瘤组织细胞形态学变化,采用Real-time PCR和免疫组化测定肿瘤组织caspase-3 mRNA及蛋白的表达水平。结果透射电镜结果显示:Lewis肺癌组细胞镜下呈现出明显恶性肿瘤细胞特征;中药治疗组镜下可见肿瘤细胞以凋亡变化为主,大量凋亡细胞、凋亡小体及坏死细胞;顺铂组镜下可见坏死细胞和典型凋亡细胞及凋亡小体。Real-time PCR及免疫组化结果共同显示:和Lewis肺癌组比较,中药治疗组和顺铂组caspase-3 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论四君子丸能够显著提高Lewis肺癌小鼠模型肿瘤组织中caspase-3的表达,从而促进肿瘤细胞凋亡。

脾气虚证模型小鼠骨髓CD_(34)^+与血清SCF含量变化的实验研究

目的:通过研究脾气虚模型小鼠造血干细胞因子对红系造血系统的作用,为中医脾统血提供实验学依据。方法:采用复合因素造模法建立脾气虚证小鼠模型,运用血细胞计数板镜下计数外周全血细胞数,运用直接免疫荧光标记法检测骨髓CD34+及ELISA法检测血清SCF含量,HE染色观察胸腺、脾组织的形态改变。结果:脾气虚证模型组与正常对照组比较,小鼠外周血象有明显下降,骨髓CD34+与血清SCF的含量也明显降低。结论:脾气虚证小鼠骨髓CD34+与血清SCF的含量明显降低,为脾为气血生化之源提供了科学依据。

脾阴虚模型大鼠氧自由基损伤实验研究

目的:探讨脾阴虚状态下模型大鼠体内自由基损伤程度和体内抗氧化酶活性的变化,了解脾阴虚在中医脾病发展过程中的地位,为中医脾阴虚证提供现代科学依据,为中医延缓衰老提出新见解。方法 :首先采用"饮食不节+疲劳过度"复合方法造模14 d后,继而给大鼠以温热伤阴药灌胃10 d复制脾阴虚大鼠模型,取大鼠最后24 h尿样测定8-OHdG的含量,取脑皮质和血清测定SOD、GSH-Px、T-AOC、MDA的含量。结果 :脾阴虚模型组大鼠血清和脑皮质中SOD活性、GSH-Px活性、T-AOC和MDA含量与正常组相比均有显著差异(P<0.05)。模型组尿样中8-OHdG含量也有明显上调趋势(P<0.05)。结论 :脾阴虚模型大鼠体内存在着明显的自由基攻击和氧化损伤,但脾阴虚状态处于脾病全程的何种阶段尚需结合前期脾气虚实验数据,并做进一步探究深入了解。

痰湿型PCOS大鼠卵巢颗粒细胞线粒体功能及Nox1/p-Akt/Glut4信号通路变化的研究

目的:观察痰湿型多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)大鼠卵巢颗粒细胞(granulosa cells,GCs)线粒体功能及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1(NADPH oxidase1,Nox1)/磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)/葡萄糖转运蛋白4(glucose transporter protein 4,Glut4)信号通路的作用,探讨“痰湿不孕”的科学内涵。方法:选取动情周期规律的SD大鼠22只,运用高脂+来曲唑灌胃法复制痰湿型PCOS大鼠并随机分为对照组10只和模型组12只。造模结束后选取动情周期延长的大鼠为模型组10只提取卵巢GCs,透射电镜观察GCs中线粒体的形态学变化,比色法检测GCs中腺嘌呤核苷三磷酸(adenine triphosphate,ATP)含量,化学发光法检测GCs中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot法检测GCs中Nox1、p-Akt和Glut4蛋白表达水平。结果:模型组线粒体数量降低出现肿胀、嵴减少、空泡化改变,与对照组比较模型组GCs中ATP含量降低,ROS水平升高(P<0.01)。Nox1蛋白表达增高,p-Akt和Glut4蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:GCs线粒体功能下降和Nox1/p-Akt/Glut4信号通路异常是痰湿型PCOS卵泡发育异常与闭锁的可能机制。

肺气虚模型大鼠介导TNF-α-MAPK信号途径对肾AQP2表达的影响

目的:通过观测肺气虚大鼠血浆中肿瘤坏死因子(TNF-α)含量,肾组织水通道蛋白2(AQP2),丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)和核因子-κB(NF-κBp65)表达的变化,探讨中医藏象中肺与肾在水液代谢之间关系的现代科学内涵。方法:将SPF级健康雄性Wistar大鼠20只随机分为正常组和模型组,采用ELISA法检测血浆TNF-α含量、Western法检测肾组织AQP2、免疫组化法检测肾组织p38MAPK和NF-κB p65表达变化。结果:与正常组比较,模型组血浆中TNF-α含量升高,肾组织AQP2、p38MAPK和NF-κB p65表达上调(P<0.01)。结论:肺气虚状态下肾组织AQP2表达变化可能是通过TNF-α-MAPK信号转导途径实现的。

“脾为气血生化之源”生血、统血机制的实验研究

目的:以造血干细胞因子对红系造血系统调节的角度,探讨"脾胃气血生化之源"生血、统血的作用及机制。方法:采用经典的复合因素造模法建立脾气虚证小鼠模型和采用苯皮下注射造模法建立再障贫血模型,运用血细胞计数板镜下计数外周全血细胞数,运用直接免疫荧光标记法检测骨髓CD34+及ELISA法检测血清SCF含量。结果:3组相比较,两模型组小鼠外周血象均明显下降,骨髓CD34+与血清SCF的含量也明显降低;脾气虚证模型组与再障贫血组相比较,再障贫血组小鼠骨髓CD34+与血清SCF的含量的降低程度低于脾气虚证模型组小鼠。结论:脾气虚证小鼠骨髓CD34+与血清SCF的含量明显降低,为脾为气血生化之源提供了现代生物学依据。

脾气虚证自由基损伤、端粒长度变化探析

目的:探讨脾气虚状态下模型大鼠体内氧自由基损伤程度和端粒长度的变化情况。方法:采用"饮食不节+疲劳过度"复合方法造模14 d后,取大鼠脑皮质和血清测定SOD、GSH-Px、T-AOC、MDA的含量,取脑皮质测端粒长度。结果:脾气虚模型组大鼠血清和脑皮质中SOD活性、GSH-Px活性、T-AOC和MDA含量与正常组相比均有显著差异(P<0.05)。模型组脑皮质中端粒长度明显缩短(P<0.05)。结论:脾气虚模型大鼠体内存在着明显的抗氧化酶活性降低和端粒长度缩短,但脾气虚状态处于脾病全程的何种阶段尚需深入研究了解。

中医治疗慢性再生障碍性贫血的新思路

再生障碍性贫血是由多种原因导致骨髓造血功能衰竭,中医认为,血虚是"再障"的主要表现,治"再障",必须把住先天命火,后天脾胃,先天肾精。补脾益肾改善循环,祛瘀才可生新。

以科研人才培养为导向的医学实验技能教学改革探讨

实验技能教学是医学基础教学的重要组成内容,不断改革完善的教学内容是整个教学的重要环节。文章通过总结以往实验课教学过程的经验,探索新的改革举措,结合现有资源,建立了以科研人才培养为导向的新型教学模式,以待充分调动师生的课堂积极性,促进技能教学更好地发展。