长链非编码RNA在肝细胞癌中的作用机制研究进展

肝细胞癌(HCC)是一种常见的恶性肿瘤,具有发病率高、生存率低等特点,目前的治疗方法缺乏有效性。HCC的发生发展是一个复杂的过程,其潜在的分子机制目前尚未完全阐明。长链非编码RNA(lncRNA)参与调控细胞分化、增殖、死亡、代谢等生物学过程,在HCC进展中也发挥重要作用。lncRNA可通过调节基因表达或蛋白活性影响HCC细胞增殖、死亡、迁移、血管生成、免疫逃逸以及细胞代谢重编程等。因此,lncRNA可作为HCC潜在治疗靶点,使HCC患者达到精准治疗,提高患者生存率。

HIV TAT——一种生物大分子的运载体

人工合成编码TAT蛋白转导区核心区域11个氨基酸的双链寡核苷酸,构建pET28a-TAT-LacZ表达子,转化大肠杆菌,得到高表达的TAT-β-Gal融合蛋白。TAT-β-Gal加入体外培养的平滑肌细胞中,15min细胞即出现蓝染,1h TAT-β-Gal 100％进入细胞。该融合蛋白ip到Wistar大鼠体内,30min各组织出现蓝染,4h光密度值达高峰。实验证明TAT蛋白可有效携带大分子物质穿过生物膜,是一良好的生物大分子运载体。

pET28a-TAT-LacZ重组子的构建

为了构建高表达pET28a-TAT-LacZ重组子,观察表达的融合蛋白TAT-β-Gal能否穿过生物膜,使用人工合成编码TAT蛋白转导区的DNA片段,插入载体pET28a组氨酸编码区后再连接lacZ基因,组成pET28a-TAT-LacZ重组表达子,转化大肠杆菌,利用组氨酸亲和层析柱纯化TAT-β-Gal融合蛋白,将融合蛋白加入培养的平滑肌细胞。得到高度纯化的、有活性的TAT-β-Gal融合蛋白,TAT-β-Gal在短时间内进入体外培养平滑肌细胞,成功地构建了高表达pET28a-TAT-LacZ重组子,并在体外培养的细胞中证实TAT-β-Gal融合蛋白穿透生物膜的能力,为肽类、生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用提供了理论基础。

细胞穿膜肽的研究进展

细胞穿膜肽是一类能携带大分子物质进入细胞的短肽,其穿膜能力不依赖经典的胞吞作用。经过对天然存在的细胞穿膜肽的生物化学性质研究,已经逐渐掌握了细胞穿膜肽的一些共有特性,这类物质均为带有正电荷的长短不等的多肽片段,其中富含精氨酸、赖氨酸等碱性氨基酸残基,二级结构皆具有α-螺旋的空间构象。利用这些特性,目前已人工合成了穿透力更强、效率更高的穿膜肽PEP-1、MPG,并且成功地携带大分子物质进入细胞发挥生物学活性。

TAT-β-半乳糖苷酶对小鼠生物膜穿透性的研究

为寻找介导外源蛋白质进入组织细胞的生物学方法 ,本研究构建了pET2 8a TAT LacZ重组表达子 ,纯化得到TAT β Gal融合蛋白 ,通过腹腔注射到小鼠体内观察TAT β Gal能否穿过各组织生物膜及达到各组织的时间、浓度。结果发现TAT β Gal在短时间内可到达各组织。该研究证明在生物大分子的N 末端加上TAT具有穿透力的蛋白转导区肽段形成的融合蛋白可穿过生物膜到达各组织 ,这一发现为肽类。

质粒DNA制备方法的改进

目的 :改进碱裂解制备质粒DNA的方法。方法 :在小规模制备中 ,采用 7 5mol/LNH4 Ac中和碱溶液及室温下异丙醇沉淀 ;在中规模制备中 ,采用三步沉淀将质粒分离纯化 ;在大规模制备中 ,用两步清洗弃去由于量大而不宜除掉的杂物 (碎屑物、杂蛋白等 )。结果 :建立了一套快速、高效、无毒、经济的方法。

以社会需求为导向、专业建设为核心 全面推进就业工作

为了推进毕业生就业这一重要工作，在教学管理上，我校采取各种有效措施，形成了“学生质量高、毕业生就业率高”的“双高”局面。这些措施包括：以社会需求为导向，积极申办新专业，巩固传统优势专业，建立主辅修制，实施品牌专业和精品课程战略，为人才培养和社会需求之间的无缝连接提供了可靠的保障；在课程体系改革方面，坚持通识教育与专业教育并重的人才培养模式，搭建了医学教育的A、B、C三个平台，加强基础、拓宽口径、强化技能训练，我校的毕业生受到用人单位的广泛好评；进一步规范学籍管理，服务于招生就业工作；建立健全有效的教学质量评价与监控体系，确保人才培养质量。

提高医用生化教学质量的几点建议

生物化学是自然科学及基础医学发展的重点学科之一，生物化学的重点内容“分子生物学”是二十一世纪的三大主导学科之一。为提高生物化学的教学质量，在教学中应注意：培养和激发学生的学习动机；把现代化教学手段引入生化教学；注重与临床学科的相互联系；增加实验内容；注重学科的发展性。

丙酮在细菌ArgRS纯化过程中的作用

目的：纯化细菌的精氨酸－ｔＲＮＡ合成酶。方法：培养大肠杆菌、酵母菌、嗜热脂肪芽胞杆菌，分别采用超声波破菌和丙酮破菌、层析、测活力峰。结果：酵母菌、大肠杆菌用不同和破菌方法纯化结果完全相同，丙酮破菌法显著提高嗜热脂肪芽胞杆菌ＡｒｇＲＳ的纯化。结论：丙酮在破菌过程中去掉了嗜热脂肪芽胞杆菌体内的大量脂类化合物，提高了纯化效率。

TAT-EGFP融合蛋白对小鼠生物膜穿透性的研究

探讨TAT-穿透生物膜的效应,为临床上应用生物大分子药物进入组织细胞内发挥治疗作用提供实验基础。按分子克隆常规操作构建pET28a-TAT-EGFP重组表达载体,转导入宿主菌BL21后用IPTG诱导TAT-EGFP融合蛋白表达,经镍金属鳌合层析柱纯化获得融合蛋白。通过腹腔注射到小鼠体内,观察TAT-EGFP融合蛋白穿透各组织生物膜及达到各组织的时间、浓度。腹腔注射TAT-EGFP,30 min后各主要脏器经检测均有荧光出现,4 h各组织荧光强度达最大值。证明在生物大分子的N-末端加上TAT具有穿透力的蛋白转导区肽段形成的融合蛋白可有效穿透细胞膜到达各组织。

氨基酰-tRNA合成酶结构与功能

氨基酰－ｔＲＮＡ合成酶结构与功能严世荣综述肖瑛审校（郧阳医学院生化教研室十堰４４２０００）氨基酰－ｔＲＮＡ合成酶（ａｍｉｎｏａｃｙｌ－ｔＲＮＡｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ，ａａＲＳ）是有机体最早出现的一类蛋白质，该类酶对蛋白质的生物合成起着关键作用。它们将...

肝细胞癌p53和Rb基因改变的分析

目的 研究肝细胞癌p5 3和Rb基因的突变特点和规律。探讨 2种抗癌基因在肝癌发生过程中的作用及其与组织学和预后的关系。方法 应用PCR SSCP和PCR RFLP法检测 6 5例肝癌 p5 3基因第 5～ 8外显子和Rb基因 17和 2 1外显子的突变率。结果 肝癌中 p5 3基因突变率为 5 0 .8% ,以缺失为主 ;Rb基因的突变率为 38.5 % ;p5 3和Rb基因同时突变率为 12 .3 %。结论 肝细胞癌中既有 p5 3基因突变也存在Rb基因突变 ,两者在肝癌的发生中均有重要作用。p5 3和Rb基因同时突变与肝癌组织学分级密切相关。

骨髓基质干细胞的分离纯化及培养

目的 建立骨髓基质干细胞(MSCs)良好的分离纯化和培养方法。方法 将小鼠骨髓基质干细胞自股骨中分离,应用贴壁选择法结合细胞克隆挑选法进行分离纯化,应用细胞生长因子(EGF和PDGF-BB)刺激法进行MSCs的体外培养和传代,倒置显微镜下观察分离培养的细胞并照像记录。结果,培养获得了纯化的呈梭形成纤维样细胞的骨髓基质干细胞。在生长因子EGF和PDGF-BB的共同作用下,传代MSCs生长旺盛,形态均一。结论 该方法是简便高效的骨髓基质干细胞的分离纯化和培养方法。

降钙素原对重型颅脑损伤并发颅内感染后抗生素使用的指导意义

目的探讨动态监测血清降钙素原（PCT）对指导重型颅脑损伤并发颅内感染患者抗生素使用的临床价值。方法选取91例重型脑损伤合并颅内感染的患者，随机分为PCT监测治疗组（45例，PCT组）和常规治疗组（46例，对照组）。相同的诊疗基础上，对照组根据抗生素应用指南决定疗程。PCT组根据血清PCT检测值判断是否继续或停止使用抗生素，当血清PCT≥0．25ng，ml时，进行抗生素治疗；PCT〈0．25ng／ml时，停止抗生素治疗。结果PCT组抗生素疗程8～15d，平均（12．35±2．47）d；对照组抗生素疗程11—19d，平均（15．78±2．69）d；PCTfR患者抗生素疗程明显少于对照组（P〈0．05）。治疗后，两组患者全身炎症反应综合征修正评分较治疗前明显改善（P〈0．05），但两组之间无统计学差异（P〉0．05）。结论重型颅脑损伤并发颅内感染患者根据PCT使用抗生素，能够缩短抗生素疗程，动态监测PCT水平可作为优化抗生素治疗的有效指标。

EBV－DNA酶全基因扩增克隆和鉴定

根据Ｂｅａｒ的ＥＢ病毒（ＥＢＶ）基因全序列，设计包括ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶全基因的一对引物，在引物上设计有一个ＳａｌⅠ切点，以便于克隆。选用蛋白酶Ｋ裂解的Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ为模板，扩增出一条１４６０ｂｐ的特异条带，纯比后经ＴａｑⅠ酶切形成１１９８ｂｐ和２６２ｂｐ的两个片段，证实该扩增片段即为ＥＢＶ特异性ＤＮＡ酶的全基因片段。以ＪＭ１０３为宿主菌，以高效表达质粒ＰＢＶ２２１为载体，按常规方法作酶切、连接、转化，最后在含氨中青霉素的培养基上挑取单菌落扩大培养，用快速法少量制备质粒ＤＮＡ。根据质粒电泳结果粗筛，再行ＢａｍＨⅠ酶切初步鉴定，确定质粒大小为５１１７（１４５１＋３６６６）ｂｐ的菌落为阳性克隆。先后用ＢａｍＨⅠ和ＴａｑⅠ消化阳性重组体，以形成１２００ｂｐ和３９１７ｂｐ两片段的确定为正向连接重组体。

医学生职业精神的培养与评估模式研究

医学生职业精神的培养途径有学校教育、社会舆论引导和自我教育三种。以综合课程论为原则,从知识、技能、情感三模块进行学校为主的教育和评估,采取学校形成性评估和患者定性评估为主,见习或实习带教教师总结评估为辅的三结合模式,最后进行效能评价,体现研究的实践意义即实践教育学理论,统筹教学资源,优化课程设置;促进医学院校教育与研究工作的落实,充分体现医学教学规律;有助于明晰医学各学科教学目的,完善学科建设;加强医学生对职业内涵的认知,增强受教育主体的职业使命感。

强化麻醉学专业本科生实习期人文关怀教育的探索

人文关怀教育是麻醉学专业人才培养的重要内容之一,加强人文关怀教育的措施包括:见习期启发诱导制、入科前强化训练准入制、实习期带教老师负责制、学科周期轮转制及"教学老总"督导制等。通过一系列强化人文关怀教育的措施,使学生不仅具有严谨科学的专业基础知识,而且具备以人为本的道德理念、认真负责的工作态度和勇于开拓的创新精神,从而为构筑和谐医疗培养更加实用的麻醉专业人才。

自噬对宫颈癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的观察自噬对宫颈癌细胞增殖迁移能力的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度雷帕霉素诱导人宫颈癌HeLa细胞,吖啶橙染色观察自噬小体的形成,Western blot检测自噬相关基因LC3B以及PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达情况,采用RTCA仪器实时检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞的迁移能力。应用自噬抑制剂3-methyladenine(3-MA)阻断宫颈癌细胞自噬后,采用RTCA仪器实时检测细胞的增殖能力,Transwell小室检测细胞的迁移能力。构建带有绿色荧光蛋白的LC3B质粒,转入HeLa细胞,通过G418药物筛选转染阳性细胞,荧光显微镜观察LC3B的细胞定位,Western blot检测LC3B表达。RTCA仪器实时检测野生型和LC3B过表达HeLa细胞的增殖能力,Western blot检测PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达。结果雷帕霉素诱导后,宫颈癌HeLa丑细胞自噬水平增高,增殖和迁移能力有所下降;PI3K/Akt/rnTOR通路蛋白表达改变(P<0.05)。自噬抑制剂3-MA诱导HeLa细胞增殖和迁移水平下降(P<0.05)。荧光显微镜和Westem blot结果显示构建的LC3质粒成功转入Hela细胞中并且能够抑制宫颈癌细胞的增殖(P<0.05)。结论在一定范围内,随着自噬水平的升高,HeLa细胞增殖和迁移能力降低,可能是通过PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥作用。通过基因靶向扰乱自噬关键基因(如LC3等)而改变宫颈癌细胞自噬水平可能为宫颈癌的治疗带来新策略。

氧化型低密度脂蛋白与脑梗塞的相关性探讨

目的：探讨氧化型低密度脂蛋白（OxidizedLow-densityLipoprotein,Ox-LDL）在脑梗塞发病中的作用。方法对41例非急性期脑梗塞患者和26例健康人对照，进行了血浆Ox－LDL和血清HDL－C．LDL－C，Cho．TG，apoA．apoB以及血浆内皮素（Endothelin，ET）的测定。结果脑梗塞组Ox－LDL、ET明显高于对照组，P＜0．01；LDL－C、Cho升高，HDL－C降低与对照组比较，P＜0.05，但Ox－LDL水平与HDL－C，LDL－C，Cho，TG,apoA，apoB的水平无相关性。结论Ox－LDL可能通过促进动脉粥样硬化和损伤内皮细胞致血小板聚集及释放，促进脑血管内皮细胞分泌ET．从而Ox－LDL参与了脑梗塞的发生和发展。

我国高等护理教育发展背景与现状分析及启示

我国自80年代恢复举办护理学本科专业以来,近30年的时间里,高等护理教育发展迅速。深入研究我国高等护理教育发展的背景,在此基础上分析其发展现状,对21世纪新型护理学高级人才培养具有重要的现实指导意义。