CircFoxo3调节miR-130a-5p/TEAD1轴对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡影响的实验研究

目的探讨环状RNA叉头框蛋白O3(CircFoxo3)调节miR-130a-5p/TEA域转录因子1(TEAD1)轴对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法将SD大鼠分为对照组、HF组、si-NC组、si-CircFoxo3组、agomir NC组、miR-130a-5p agomir组、si-CircFoxo3+antagomir NC组、si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均通过腹腔注射盐酸阿霉素的方法构建HF大鼠模型。建模成功后进行药物处理,每3 d给药一次,持续3周。应用反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测心肌组织中CircFoxo3、miR-130a-5p表达水平。应用彩色多普勒超声仪检测大鼠左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室射血分数(LVEF)水平。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测大鼠血清人基质裂解素2(ST_(2))、N端脑钠肽前体(NT-pro BNP)水平。应用HE染色、Masson染色检测大鼠心肌组织病理变化和心肌纤维化情况。通过TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平。应用Western blot法检测大鼠心肌组织TEA域转录因子1(TEAD1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平。通过双荧光素酶报告基因实验验证CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1的关系。结果与对照组比较,HF组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化严重,LVESD、LVEDD水平上升,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p和Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、si-NC组比较,si-CircFoxo3组大鼠心肌组织病理损伤减轻,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织CircFoxo3及TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与HF组、agomir NC组比较,miR-130a-5p agomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化有所改善,LVESD、LVEDD水平降低,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平降低,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平降低,心肌细胞凋亡率降低,LVEF、miR-130a-5p及Bcl-2蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-CircFoxo3组、si-CircFoxo3+antagomir NC组比较,si-CircFoxo3+miR-130a-5p antagomir组大鼠心肌组织病理损伤、心肌纤维化加剧,LVESD、LVEDD水平升高,心肌组织TEAD1、Bax、cleaved caspase-3蛋白表达水平升高,血清ST_(2)、NT-pro BNP水平升高,心肌细胞凋亡率升高,LVEF、miR-130a-5p、Bcl-2蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。CircFoxo3与miR-130a-5p、miR-130a-5p与TEAD1存在靶向关系。结论沉默CircFoxo3可能通过海绵化上调miR-130a-5p来抑制TEAD1表达,进而抑制HF大鼠心肌细胞凋亡。

脑泰通组方对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型的影响及保护机制

目的:观察脑泰通组方对局灶性脑缺血再灌注大鼠模型的影响及保护机制。方法:构建局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,成模后随机分为模型对照组、阳性药物组、中药组、联合用药组,另选取健康斯泼累格·多雷(SD)大鼠作为假手术组。观察并评估各组大鼠的美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比,免疫组织化学法检测脑组织Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)的平均光密度值,蛋白质免疫印迹法、实时定量PCR(QT-PCR)检测脑组织叉头框转录因子3a(FoxO3a)基因、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、核因子κB(NF-κB)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白及mRNA的表达水平。结果:与假手术组比较,模型对照组NIHSS评分,脑组织含水量,脑组织缺血体积百分比,脑组织FoxO3a、HIF-1α、NF-κB、BDNF蛋白和mRNA的表达水平,Bax、Bcl-2平均光密度值以及Bax/Bcl-2值均显著升高(均P<0.05);与模型对照组比较,药物干预各组的NIHSS评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、Bax平均光密度值、Bax/Bcl-2值、脑组织NF-κB蛋白和mRNA的表达水平显著降低(均P<0.05),其中联合用药组的降低程度最大(均P<0.05),Bcl-2平均光密度值,脑组织FoxO3a、HIF-1α、BDNF蛋白和mRNA的表达水平显著升高(均P<0.05),其中联合用药组的升高程度最大(均P<0.05)。结论:脑泰通组方能有效保护局灶性脑缺血再灌注大鼠模型脑组织损伤,改善局部脑缺血,其作用机制可能与脑泰通组方调控FoxO3a/HIF-1α/NF-κB信号通路相关。

心痛泰通过降低Lp-PLA2、IL-6、hs-CRP、LOX-1水平减轻兔动脉粥样硬化炎症反应

目的研究心痛泰对动脉粥样硬化兔血清脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、白细胞介素6(IL-6)以及主动脉组织高敏C反应蛋白(hs-CRP)和血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)的影响。方法 120只日本大耳白兔随机分为空白组、模型组、心痛泰低剂量组、中剂量组、高剂量组和瑞舒伐他汀组。采用前瞻性研究,造模的同时予以相应药物灌胃。60天后采血,测定血清Lp-PLA2和IL-6水平;免疫组织化学法检测胸主动脉hs-CRP和LOX-1含量。结果心痛泰低剂量组、中剂量组和高剂量组血清Lp-PLA2和IL-6水平比模型组低(P<0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中剂量组和高剂量组、瑞舒伐他汀组血清Lp-PLA2和IL-6水平降低(P<0.01或P<0.05)。心痛泰中剂量组和高剂量组的hs-CRP和LOX-1表达水平比模型组低(P<0.01);与心痛泰低剂量组比较,心痛泰中剂量组和高剂量组、瑞舒伐他汀组的hs-CRP和LOX-1表达水平降低(P<0.05)。免疫组织化学染色显示,模型组主动脉内膜hs-CRP和LOX-1大量表达;与模型组比较,心痛泰低剂量组、中剂量组、高剂量组和瑞舒伐他汀组主动脉内膜hs-CRP和LOX-1表达减轻。结论心痛泰能降低动脉粥样硬化兔Lp-PLA2、IL-6、hs-CRP、LOX-1的水平,从而达到抗动脉粥样硬化炎症反应的作用。

中风中医证型动物模型的研究概述

中风具有致残率高、预后差、易复发的特点，在全球已成为第一致残和第二致死原因的疾病。给社会和家庭造成巨大的经济负担。长期以来中风的西医治疗措施虽多，但尚缺乏理想的、安全的药物。随着现代实验技术的应用，通过动物实验来探索中医药的作用机理已成为一个重要方法，亦是热点。

益气活血组方对大鼠骨髓源性内皮祖细胞增殖、迁移和黏附的影响

目的:探究内皮祖细胞(endothelial progenitor cell,EPCs)的原代培养及鉴定方法,并探讨益气活血组方对大鼠骨髓源性内皮祖细胞增殖、迁移和黏附的影响。方法:将EPCs随机分为空白血清组、5%、10%、15%含药血清组和对照组,以相应血清干预原代EPCs,并分别通过CCK8法、Transwell迁移实验、黏附实验评估对EPCs的增殖、迁移、黏附的影响。结果:空白血清组和含药血清组EPCs增殖、迁移、黏附能力均高于对照组(P<0.05或P<0.01)。10%、15%含药血清组EPCs增殖、迁移、黏附能力均高于空白血清组(P<0.05);10%、15%、5%含药血清组与空白血清组比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:益气活血组方能提高大鼠骨髓源性内皮祖细胞增殖、迁移和黏附能力,且与含药血清浓度值呈正相关,并且血清浓度的平台值为15%,超过这个阀值时,血清浓度的增高对细胞的生长影响不大。

复方七芍降压片对SHR大鼠内皮细胞线粒体自噬和炎症应激的影响

目的分析复方七芍降压片对原发性高血压大鼠(SHR)内皮细胞线粒体自噬和炎症应激的影响。方法将50只SHR大鼠均分为空白组[予10 mg/(kg·d)生理盐水灌胃]、阳性对照组[予10 mg(kg·d)厄贝沙坦灌胃]及复方七芍(低、中、高)剂量组[分别予5、10、20 mg/(kg·d)复方七芍降压片灌胃],1次/d、连续30 d;麻醉处死大鼠并取腹主动脉组织检测PINK1蛋白、Parkin蛋白、LC3蛋白、丙二醛(MDA)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平;以高剂量组PINK1蛋白、Parkin蛋白、LC3蛋白含量为因变量,以MDA、SOD、CAT、IL-1β、TNF-α、NO含量为自变量,分别拟合回归方程分析自变量对因变量的综合影响。结果阳性对照组、复方七芍各剂量组大鼠腹主动脉组织内皮细胞PINK1、Parkin、LC3、MDA、IL-1β、TNF-α以及NO含量高于空白组,复方七芍各剂量组低于阳性对照组,其中复方七芍低剂量>中剂量组>高剂量组(P<0.05);阳性对照组、复方七芍各剂量组大鼠腹主动脉组织内皮细胞SOD、CAT含量低于空白组,复方七芍各剂量组高于阳性对照组,其中低剂量组<中剂量组<高剂量组(P<0.05);对照组、阳性对照组、复方七芍各剂量组大鼠PINK1蛋白、Parkin蛋白、LC3蛋白含量与MDA、CAT、IL-1β、TNF-α、NO含量呈正相关,与SOD、CAT含量呈负相关(P<0.05);MDA、SOD、CAT、IL-1β、TNF-α、NO含量对PINK1、Parkin、LC3蛋白含量的综合影响均有统计学意义(P<0.05)。结论复方七芍降压片能明显改善SHR大鼠内皮细胞的炎症应激状态,其机制可能与影响线粒体自噬有关。

自拟定眩汤治疗后循环缺血痰浊上扰证临床研究

目的:探讨自拟定眩汤治疗后循环缺血痰浊上扰证的临床疗效。方法:将70例后循环缺血痰浊上扰证患者随机分为观察组和对照组各35例,均予以合理饮食、适当运动及西医对症治疗,在此基础上,观察组患者予以自拟定眩汤治疗,对照组患者予以盐酸氟桂利嗪胶囊治疗,观察比较两组患者治疗前后中医症状评分及甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)水平,并评价临床疗效及复发情况。结果:观察组患者总有效率、治愈率分别为93.55%、51.61%,均显著高于对照组的84.85%、27.27%,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗后中医症状评分及TG、TC水平均较治疗前显著下降(P<0.05,P<0.01),且观察组患者下降程度高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);3个月后随访,观察组患者复发率为6.25%,显著低于对照组的44.44%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:自拟定眩汤治疗后循环缺血痰浊上扰证疗效确切,并能降低患者血脂水平,减少复发。

清瘟败毒饮对脓毒血症兔不同时相TLR4/NF-κB信号通路及炎症因子的影响

目的:探讨清瘟败毒饮对脓毒血症兔TLR4/NF-κB信号通路及下游炎症因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法:40只新西兰大耳白兔,随机选取10只作为空白组,其余30只造模,采用耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素建立脓毒血症模型;将造模成功的30只兔随机分为模型组、清瘟败毒饮组、血必净注射液组,每组10只。分别予以相应药物干预,空白组、模型组予等量生理盐水灌胃,分别于造模24 h和48 h耳缘静脉采血,检测Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)及其下游炎症因子IL-6、TNF-α水平。结果:模型组、清瘟败毒饮组、血必净注射液组TLR4、NF-κB、IL-6、TNF-α水平均高于空白组(P<0.05),提示造模成功;给药24 h后,清瘟败毒饮组、血必净注射液组TLR4、NF-κB、IL-6、TNF-α水平均低于模型组(P<0.05)。给药48 h后,清瘟败毒饮组TLR4、NF-κB、IL-6、TNF-α水平低于血必净注射液组(P<0.05)。结论:清瘟败毒饮可通过TLR4/NF-κB信号通路减轻脓毒血症兔的全身炎症反应。

清瘟败毒饮对毒瘀互结型脓毒血症患者炎症反应和脏器功能的影响

目的观察清瘟败毒饮对脓毒血症毒瘀互结证患者炎症反应和脏器功能的影响。方法收集2016年5月—2018年5月的脓毒血症患者80例,随机分为对照组和观察组,每组40例。对照组患者予以补液、抗感染等常规治疗,观察组常规治疗的基础上服用清瘟败毒饮汤剂,随证加减,疗程为7天。预后评价采用急性生理与慢性健康评分(APACHE-Ⅱ)、序贯性器官功能衰竭评分(SOFA);检测感染和炎症指标[包括白细胞(WBC)、中性粒细胞数(NEUT)、中性粒细胞百分比(NEUT%)、降钙素原(PCT)、IL-6、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、内毒素];检测肝、肾功能[包括ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL,肌酐(CREA)、尿素(UREA)、尿酸(UA)、肾小球滤过率(GFR)]和肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)、肌红蛋白(Mb)、乳酸脱氢酶(LDH)];中医治疗评分采用毒瘀互结证候评分。结果观察组中医证候疗效总有效率75%(29/38),高于对照组的总有效率55%(20/37,χ^2=13.625,P<0.01);与本组治疗前比较,两组治疗后第3、7天,APACHE-Ⅱ和SOFA评分均降低(F对照=6.42,F观察=7.38,P<0.05),WBC、NEUT、NEUT%、PCT、IL-6、hs-CRP、内毒素、ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、CREA、UREA、UA水平均明显降低(P<0.05),GFR明显增加(P<0.05);与对照组同期比较,观察组治疗第3、7天APACHE-Ⅱ和SOFA评分降低(P<0.05);WBC、NEUT、NEUT%、PCT、IL-6、hs-CRP、内毒素、ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、CREA、UREA、UA水平均明显降低(P<0.05),GFR明显提高(P<0.05),且第7天较第3天各检测指标改善明显(P<0.05)。结论在西医综合治疗的基础上,合用清瘟败毒饮辨证加减治疗毒瘀互结型脓毒血症患者,能明显降低感染指标和炎症因子的水平,减低APACHE-Ⅱ评分和SOFA评分,改善脏器损害。

清瘟败毒饮对脓毒血症合并MODS兔模型PCT、HMGB1、sTREM-1、器官功能和凝血功能的影响

目的探讨清瘟败毒饮对脓毒血症合并多器官功能衰竭兔炎症因子PCT、HMGB1、sTREM-1、脏器功能和凝血功能的影响。方法将60只日本大耳白兔随机抽取10只作为空白组,其余50只采用耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素的方法,建立脓毒血症合并多脏器功能衰竭(MODS)的模型。造模的50只兔,随机分为模型组10只、清瘟败毒饮低剂量组10只、清瘟败毒饮中剂量组10只、清瘟败毒饮高剂量组10只、乌司他丁组10只,分别予以相应药物干预,空白组予以等量生理盐水灌胃,治疗48h后,耳缘静脉采血,检测炎症标记物降钙素原(PCT)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、血清可溶性髓系细胞触发受体-1(sTREM-1),检测脏器功能谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)、间接胆红素(IBIL)、肌酐(CREA)、尿素氮(UREA)、肾小球滤过率(GFR)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CKMB)、肌红蛋白(Mb)、乳酸脱氢酶(LDH)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、国际标准化比率(INR)、血浆凝血酶原时间(PT)。结果与模型组相比,清瘟败毒饮低、中、高剂量组和乌司他丁组干预48h后的PCT、HMGB1、sTREM-1、ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、CREA、UREA、GFR、CK、CKMB、Mb、LDH、APTT、FIB、INR、PT的水平均下降,结果有统计学差异(P<0.05),与乌司他丁组比较,清瘟败毒饮中、高剂量组干预后的PCT、HMGB1、sTREM-1、ALT、AST、TBIL、DBIL、IBIL、CREA、UREA、GFR、CK、CKMB、Mb、LDH、APTT、FIB、INR、PT改善显著,结果有统计学差异(P<0.05)。结论清瘟败毒饮能减轻脓毒血症合并MODS兔的炎症反应,减轻心肌损伤,改善肝、肾功能和凝血功能。

加味大承气汤保留灌肠辅助治疗重症急性胰腺炎并发急性呼吸窘迫综合征腑实热结证45例临床观察

目的观察加味大承气汤保留灌肠辅助治疗腑实热结证重症急性胰腺炎(SAP)并发急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的疗效。方法将腑实热结证SAP并发ARDS患者90例随机分为观察组和对照组各45例。对照组予以常规治疗,观察组在常规治疗的基础上加用加味大承气汤保留灌肠,每次200 ml,每日2次,疗程为5天。记录患者腹痛腹胀缓解时间、首次排便或排气时间、机械通气时间、ICU住院时间以及患者的病死率;分别于治疗前及治疗第3天、第5天测定胰腺炎相关指标:血淀粉酶(AMS)、尿淀粉酶(UAMY)、腹腔内压(IAP);肠黏膜屏障功能指标:二胺氧化酶(DAO)、内毒素(ET)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6 (IL-6)、超敏C反应蛋白(hs-CRP);ARDS评价指标:气道峰压(Peak)、气道平台压(Plat)、呼吸频率(F)、动脉血氧分压(PaO2)、氧合指数(PaO2/Fi O2)。治疗前后进行中医证候评分,治疗后评价中医证候疗效。结果观察组中医证候疗效总有效率为82. 2%,对照组为64. 5%,观察组明显高于对照组(P <0. 01);与本组治疗前比较,两组治疗第3天和第5天,AMS、UAMY、IAP、DAO、ET、TNF-α、IL-6、hs-CRP、Peak、Plat、F水平均明显降低,PaO2、PaO2/Fi O2均明显升高(P <0. 05);与对照组治疗第3天、第5天比较,观察组相应时间点的AMS、UAMY、IAP、DAO、ET、TNF-α、IL-6、hs-CRP、Peak、Plat、F明显降低(P <0. 05),PaO2、PaO2/Fi O2明显升高(P <0. 05);与对照组比较,观察组患者腹痛腹胀缓解时间、首次排便或排气时间、机械通气时间、ICU住院时间明显缩短,病死率明显下降(P <0. 05)。结论加味大承气汤保留灌肠联合西医常规治疗腑实热结证SAP并发ARDS患者,能促进肠功能的恢复,修复受损的肠黏膜屏障,降低腹腔压力,提高氧合,降低气道压力,减轻ARDS所致的呼吸衰竭,减少住院时间,降低病死率,临床疗效优于单用西医常规治疗。