纤维蛋白胶凝素-3在非小细胞肺癌中的表达及其生物学功能研究

目的探讨纤维蛋白胶凝素-3(FCN3)调控非小细胞肺癌细胞A549的潜在机制。方法通过在线软件预测对FCN3进行生物信息学分析,并构建其过表达载体和siRNA干扰体系。采用CCK8法和流式细胞仪检测过表达、敲低FCN3对A549细胞增殖和凋亡的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测FCN3对肺腺癌相关基因[染色体盒同源物5(CBX3)、细胞周期依赖激酶抑制剂3(CDKN3)和含杆状病毒凋亡抑制蛋白重复序列蛋白5(BIRC5)]表达的影响。结果过表达FCN3后,A549细胞的凋亡水平升高,增殖水平下降,差异有统计学意义(P<0.05)。敲低FCN3后,A549细胞的凋亡水平下降,增殖水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。过表达FCN3可抑制CBX3、CDKN3和BIRC5 mRNA表达,促进FABP4 mRNA表达;敲低FCN3可促进CBX3、CDKN3和BIRC5 mRNA表达,抑制FABP4 mRNA表达。结论FCN3可以抑制A549细胞增殖,并促进其凋亡。FCN3或可作为非小细胞肺癌的潜在治疗靶点。

miR-30a-5p靶向E2F7阻滞A549细胞周期并抑制其增殖

目的探究miR-30a-5p靶向E2F7调控非小细胞肺癌细胞周期和增殖的机制。方法通过荧光定量(qRT-PCR)验证miR-30a-5p在非小细胞肺癌A549细胞与人正常肺上皮细胞BEAS-2B中的相对表达水平。在线软件预测了miR-30a-5p的靶基因及其靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验进一步验证miR-30a-5p和E2F7 mRNA 3’UTR区域的靶向关系。其次在A549细胞中分别转染miR-30a-5p模拟物(miR-30a-5p mimics)和miR-30a-5p抑制剂(miR-30a-5p inhibitor),应用CCK-8细胞计数试剂盒检测A549细胞增殖情况,流式细胞术检测A549细胞凋亡和细胞周期。qRT-PCR和免疫印迹检测细胞周期相关基因和肺腺癌相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果miR-30a-5p在A549细胞中表达水平低于BEAS-2B,且miR-30a-5p靶向结合与E2F7 mRNA 3’UTR 514-520位点,抑制E2F7表达。转染miR-30a-5p mimics抑制A549细胞增殖,并促进A549凋亡。将A549细胞周期阻滞在G 1期。调控肺腺癌相关基因TFDP3、CDK1、E2F8、CCNA2和CDC6的mRNA和蛋白表达水平。结论非小细胞肺癌A549细胞中miR-30a-5p通过靶向负调控E2F7的表达,调控TFDP3、CDK1、E2F8、CCNA2和CDC6的mRNA和蛋白表达,抑制A549细胞增殖和细胞周期。

红番3号加工番茄遗传转化再生体系的建立

本研究以加工番茄红番3号子叶为外植体,对加工番茄再生体系无菌苗的苗龄、培养基激素的配比和培养基基质选择方面进行优化。结果表明:8～10 d的子叶为最佳的外植体。以MS为基本培养基,附加不同浓度IAA(0.05、0.10、0.15、0.20mg·L-1)分别与不同浓度6-BA(1.0、1.5、2.0、2.5mg·L-1)/ZT(0.1、0.5、1.5、2.0mg·L-1)的组合。经诱芽比较,在不同浓度6-BA/ZT与不同浓度IAA组合中,诱导出愈伤组织和不定芽分化最高的培养基为MS+ZT 0.5mg·L-1+IAA 0.1mg·L-1+植物凝胶2g·L-1。以1/2MS添加不同浓度IAA(0.05、0.10、0.15、0.20mg·L-1)进行生根比较,再生芽在1/2MS+IAA 0.1mg·L-1生根培养基上生根最好。

抗CMV和ToMV RNAi载体的构建及加工番茄遗传转化

【目的】利用农杆菌介导法将抗CMV和ToMV的RNAi表达载体pBi35STC12转入红番3号加工番茄,获得抗CMV和ToMV的加工番茄植株,为加工番茄病毒病的防治奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增,选取新疆加工番茄CMV分离物NS0-4 1a复制酶第1 051-1 350bp序列和ToMV分离物SCS-2 130/180ku复制酶第1 920-2 200bp序列,作为干扰片段CR12和To12。通过T克隆载体将CR12和To12连接成拼接片段TC12,构建成含反向重复结构拼接片段的RNAi表达载体pBi35STC12。通过农杆菌介导法,用其转化红番3号加工番茄,经过筛选、PCR检测得到转基因植株。【结果】成功构建了抗CMV和ToMV的RNAi表达载体pBi35STC12,并用其转化番茄植株,从转化的1 500个愈伤组织中获得33株再生植株,利用PCR对再生植株进行检测,显示从33株再生植株中获得了19株转基因植株,转化率为1.26%。【结论】构建了抗CMV和ToMV的RNAi表达载体pBi35STC12,用其转化红番3号加工番茄,获得了转基因植株。

纤维支气管镜治疗急危重症合并严重肺部感染的疗效观察

目的观察经纤维支气管镜(简称纤支镜)吸痰及灌洗在急危重症合并严重肺部感染患者中的应用效果。方法将急危重症合并严重肺部感染患者52例随机分为2组,均给予全身抗感染、营养支持等治疗。观察组30例予纤支镜肺泡吸痰和灌洗治疗,对照组22例予常规吸痰治疗,比较2组疗效。结果观察组总有效率为90%,对照组总有效率为64%,2组比较有显著性差异(P<0.05);观察组临床症状改善情况优于对照组,机械通气时间及平均住院时间短于对照组,成功撤机、院内死亡例数少于对照组。结论急危重症合并严重肺部感染患者行纤支镜肺泡灌洗可明显改善通气和预后,且安全。

红霉素联合顺铂胸膜粘连治疗大量恶性胸腔积液

１材料与方法１．１一般资料：１８例患者均为我院１９９７年１月～１９９８年１２月期间确诊为恶性胸腔积液患者，且胸水量大，生长迅速，全身状况良好，能耐受胸腔闭式引流术者，其中男１０例，女８例，年龄２９～７２岁之间，平均年龄５６２岁。１．２临床表现：所有...

罗红霉素治疗慢性阻塞性肺疾病的临床研究

目的探讨罗红霉素治疗慢性阻塞性肺疾病(COPD)的临床疗效。方法选取COPD患者200例,将其随机分为观察组及对照组各100例,对照组采用包括吸氧、化痰、平喘等基础治疗;观察组在对照组治疗的基础上加用罗红霉素150 mg口服,每天1次;2组疗程均为3个月。结果疗程结束后观察组总有效率为95%,对照组为82%,2组比较有显著性差异(P<0.05)。治疗后2组FEV1及p(O2)、p(CO2)与治疗前比较有显著性差异(P均<0.05),组间比较有显著性差异(P均<0.05)。结论罗红霉素治疗COPD疗效显著,可明显改善患者肺功能,值得临床推广应用。

尿激酶对胸膜炎并广泛胸膜增厚疗效观察

目的观察静脉滴注尿激酶对结核性胸膜炎并广泛性胸膜增厚和胸廓塌陷的治疗效果及不良反应。方法对符合结核性胸膜炎出现广泛胸膜增厚和胸廓塌陷的患者随机分为两组,治疗组在常规抗痨的同时给予尿激酶10万U加入生理盐水250ml中静脉滴注,每日1次,两周为一疗程,对照组仅给予常规抗痨。结果治疗组治疗后胸膜明显减薄,与对照组相比差异有显著性(P<0.01);胸廓塌陷得到了纠正,与对照组相比差异有显著性;FVC%也明显提高,与对照组相比差异有显著性(P<0.01)。在不良反应方面,治疗组在治疗中仅有1例出现鼻道出血,经对症处理后治愈。结论静脉注射用尿激酶治疗结核性胸膜炎并广泛胸膜增厚和胸廓塌陷疗效显著,改善了肺功能,减少了后遗症,方法简单,经济安全,疗效满意。

抗番茄花叶病毒RNAi载体的构建及烟草遗传转化

为了获得抗番茄花叶病毒的转基因烟草,试验采用RT-PCR技术扩增新疆加工番茄花叶病毒基因组,然后与已知株系序列比对获得相应的保守序列。根据保守区选择干扰序列并设计引物进行PCR扩增,构建了pBi35STo5,pBi35SToBK,pBi35ToMV3 3个RNAi表达载体;利用农杆菌介导法分别将表达载体侵染普通烟,转化植株经分子鉴定,结果显示已成功获得了转基因阳性植株,为进一步的攻毒试验奠定了基础。

抗黄瓜花叶病毒RNAi载体的构建及烟草的转化

[目的]构建抗黄瓜花叶病毒RNAi载体,并将载体转入烟草。[方法]采用RT-PCR方法,扩增黄瓜花叶病毒NS04加工番茄分离物的RNA2基因组的序列。选取CMVRAN2基因组中的复制酶片段作为靶序列,构建pBi35SCR2真核表达载体,并对表达载体进行鉴定;通过农杆菌介导的方法将表达载体转入烟草,用PCR的方法检测载体是否转入。[结果]系统进化树分析结果表明,RNA2中编码CMV-2a的序列与中国浙江的DQ412731分离物有较高核苷酸及氨基酸同源性,分别达到98.0%和96.5%;PCR结果表明,试验成功构建了pBi35SCR2真核表达载体,并成功将表达载体转入烟草。[结论]试验获得的转基因烟草可作为后期攻毒试验的材料,并为研究加工番茄抗黄瓜花叶病毒奠定了基础。

应用RNAi技术获得抗ToMV和CMV转基因烟草

为了获得同时抗ToMV和CMV的转基因烟草,采用以ToMV和CMV部分CP基因片段作为干扰病毒的靶序列,构建了pBi35SG12RNAi表达载体。利用农杆菌介导法转化西方烟(Nicotiana occidentalis),经卡那霉素筛选、PCR鉴定证明干扰序列已整合到烟草基因组中,并对ToMV和CMV混合侵染表现抗性。

胸膜粘连术治疗36例恶性胸腔积液

目的 观察红霉素联合顺铂行胸膜粘连术治疗大量恶性胸腔积液的疗效。 方法 36例患者均采用胸腔闭式引流术 ,注入红霉素、5 0 %高渗葡萄糖、利多卡因、顺铂 ,每周 1次。 结果 红霉素联合顺铂行胸膜粘连术治疗恶性胸腔积液总有效率为 94 .4 % ,其中完全缓解 2 2例 (6 1.11% ) ,部分缓解 12例 (33.33% )。 结论 红霉素联合顺铂行胸膜粘连术治疗恶性胸腔积液安全。

特布他林氧驱雾化吸入联合有创-无创序贯通气对老年性重症哮喘合并呼吸衰竭患者肺功能及外周血NOD2、TIM-3 mRNA的影响

目的探讨特布他林氧驱雾化吸入联合有创-无创序贯通气对老年性重症哮喘合并呼吸衰竭患者肺功能及外周血核苷酸结合寡聚化结构域(NOD)2、T淋巴细胞免疫球蛋白黏蛋白(TIM)-3 mRNA的影响。方法选取80例老年性重症哮喘合并呼吸衰竭患者,根据随机数字化表分为研究组和对照组,每组40例,两组均行常规治疗,其中对照组同时给予有创-无创序贯通气治疗,研究组给予有创-无创序贯通气联合特布他林治疗。比较两组治疗后临床疗效、肺功能、免疫功能及外周血NOD2、TIM-3 mRNA变化情况。结果研究组总有效率显著高于对照组(P<0.05),平均住院天数、气管插管率显著低于对照组(P<0.05),呼吸机相关性肺炎(VAP)发生率低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。研究组治疗后动脉血氧分压(PaO 2)、血氧饱和度(SpO 2)均显著高于对照组,动脉血二氧化碳分压(PaCO 2)显著低于对照组,第1秒用力肺活量占预计值百分比(FEV1%)、FEV1/用力肺活量(FVC)、最大呼气峰流速(PEF)均显著高于对照组,白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-18水平显著低于对照组(均P<0.05)。两组治疗后NOD2、TIM-3水平均显著降低,且研究组显著低于对照组(P<0.05)。结论特布他林氧驱雾化吸入联合有创-无创治疗对老年性重症哮喘合并呼吸衰竭效果显著,可有效改善患者NOD2、Tim-3 mRNA水平,从而调控免疫功能,减轻炎性反应,有利于呼吸功能的改善和疾病预后。

二甲双胍调控miR-34a对慢阻肺大鼠气道炎症的影响研究

目的探讨二甲双胍(Met)调控微小RNA(miR)-34a对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道炎症的影响。方法每天烟熏30 min,持续30 d,并在第1、14、28天经气道滴注2 mL脂多糖(LPS)溶液制备COPD大鼠模型,实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测Met对肺组织中miR-34a水平的影响;支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞计数和wright染色分类检测Met对其影响;苏木精-伊红(HE)检测Met对肺组织形态影响;酶联免疫吸附(ELISA)检测Met对血清中白介素IL-6、IL-8、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响;蛋白免疫印迹检测Met对肺组织中sirt1蛋白水平的影响;Target Scan查找sirt1 mRNA的3'UTR与miR-34a结合位点,并经双荧光素酶报告基因检测试剂盒鉴定。结果与对照组相比,模型组肺组织中sirt1蛋白水平,单核-巨噬细胞比例降低(P<0.05),miR-34a水平、BALF中白细胞数量,中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞比例,血清中IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平升高(P<0.05);添加Met后可缓解肺组织中sirt1蛋白水平,单核-巨噬细胞比例降低,miR-34a水平、BALF中白细胞数量,中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞比例,血清中IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平升高现象(P<0.05);升高miR-34a水平逆转Met对COPD大鼠的影响。并经双荧光素酶验证,miR-34a与sirt1存在靶向关系。结论Met可下调miR-34a从而上调sirt1实现对COPD气道炎症的缓解,为临床上Met治疗COPD提供一定的实验基础和依据。

库尔勒香梨苹果褪绿叶斑病毒RNAi载体构建及烟草遗传转化

为了初步研究苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)中CP、MP基因的功能及致病相关性,根据Genbank中登录的ACLSV序列设计简并引物,通过RT-PCR扩增CP基因5’端序列377bp(PCR-CLA)和MP基因3’端序列354bp(PCR-CLB)作为靶标基因。以植物表达载体pBi35SG12为骨架载体,卡那霉素抗性基因为筛选基因,将靶标基因的正向序列和反向重复序列分别插入到内含子(intron)的两侧,构建RNAi载体pBi35S_CLA和pBi35S_CLB,利用农杆菌介导的方法转化西方烟(Nicotiana occidentalis),通过对各载体的干扰效果评价来分析各基因的主要功能。通过PCR检测pBi35S_CLA和pBi35S_CLB,结果表明已分别获得27株和24株转基因植株。本研究为进一步评价各载体的干扰效果和研究ACLSV主要基因的功能奠定了基础。