固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱同时测定乳制品中的苯并咪唑类药物及其代谢物残留量

建立了乳制品中苯并咪唑类药物及其代谢物固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱的分析方法。样品经含0.2%甲酸的乙腈提取后离心,上清液使用固相萃取柱进行净化,UPLC HSS T_(3)色谱柱分离,电喷雾正离子模式下多反应监测(Multiple Reaction Monitoring,MRM)测定。结果显示,在1.0~50μg/L范围内的线性相关系数r≥0.995(除三氯苯达唑为0.9578),方法检出限(Limit of Detection,LOD)(S/N=3)为0.002 mg/kg(除阿苯达唑-2-氨基砜、噻苯达唑和噻苯咪唑-5-羟基为0.003 mg/kg),方法定量限(Limit of Quantitation,LOQ)(S/N=10)为0.005 mg/kg(除阿苯达唑-2-氨基砜、噻苯达唑和噻苯咪唑-5-羟基为0.010 mg/kg)。在0.005、0.01、0.05 mg/kg三个加标水平下回收率在62.5%~117.6%之间,相对标准偏差RSD在1.92%~12.17%之间。该方法操作简单、灵敏度高,适用于乳制品中苯并咪唑类药物及其代谢物的定量分析。

青海部分地区藏羊高效养殖场主要动物疫病的检测与分析

为了解青海部分地区高效养殖环境下藏羊主要疫病的感染和流行情况,本研究通过双抗体夹心法酶联免疫吸附试验,对青海省7个地区藏羊高效养殖场的277份血清样品分别进行了羊传染性胸膜肺炎、羊蓝舌病、羊传染性脓疱、羊衣原体病和羊包虫病等5种主要动物疫病的ELISA检测。结果显示,在277份血清样本中,5种疫病的阳性率分别为4.7%(13/277)、6.5%(18/277)、2.5%(7/277)、7.6%(21/277)和6.9%(19/277)。其中,都兰县羊传染性胸膜肺炎的阳性率最高,为14.3%(2/14);贵德县羊蓝舌病的阳性率最高,为18.2%(2/11);共和县羊传染性脓疱的阳性率最高,为9.7%(7/72);共和县羊衣原体病的阳性率最高,为19.4%(14/72);都兰县羊包虫病的阳性率最高,为14.3%(2/14)。5种疫病在乐都区和湟源县均未检出。研究结果可为当地藏羊高效养殖场主要动物疫病防控决策、疾病净化及后期无规定动物疫病区建设提供相应的科学依据。

酸提取快速测定法检测复合维生素中维生素B_(1)、维生素B_(2)的含量

本研究旨在建立一种酸提取快速测定复合维生素中维生素B_(1)、维生素B_(2)的方法。样品前处理采用盐酸溶液在70℃提取10 min后,在高效液相色谱仪联合二极管阵列检测器260 nm的检测波长下,可以实现维生素B_(1)、维生素B_(2)的分离和检测。结果表明:两种组分在浓度0.1~50.0μg/mL内线性关系良好,检出限均为0.1μg/kg,定量限均为0.3μg/kg,加标回收率达到82.3%~95.7%,相对标准偏差为3.2%~5.9%(n=5)。本方法准确度和灵敏度均较高,可减少两种目标物分别测定的繁琐步骤,可以满足复合维生素中维生素B_(1)、维生素B_(2)同时快速测定需求。

酸水解快速测定法检测特医食品中多种维生素的含量

本研究建立了一种酸水解快速测定特殊医学配方食品中VB_(1)、VB_(2)、VB_(6)和烟酰胺的方法。样品前处理采用盐酸溶液在70℃温度下水解10 min,得到水解液经沉淀蛋白后,在高效液相色谱仪联合二极管阵列检测器268 nm的检测波长下,可以实现VB_(1)、VB_(2)、VB_(6)和烟酰胺的分离和检测。结果表明,4种组分在0.1~50.0μg/mL浓度范围内线性良好,检出限范围为0.1~0.3 mg/kg,定量限范围为0.3~0.9 mg/kg,加标回收率范围为87.4%~93.9%,相对标准偏差为3.0%~5.1%(n=5)。本方法准确度和灵敏度均较高,可以满足特殊医学用途配方食品中VB_(1)、VB_(2)、VB_(6)和烟酰胺的快速测定检测需求。

应用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱建立茶叶中农药残留的筛查与确证方法

基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱(UPLC-QTOF-MS),使用UNIFI软件建立91种农药残留的筛查与确证方法,进行定性方法验证并应用于流通市场中茶叶的筛查检测。通过对收集的农药认证标准物质(CRM)分析,构建91种农药化合物的质谱数据库。样品经乙腈提取,固相萃取柱净化,Acquity BEH C18色谱柱分离,在MSE模式下进行全信息采集(ESI+),UNIFI软件对数据进行匹配分析。设置保留时间最大偏差为±0.1 min,精确质量偏差阈值为±5×10^-6,可识别加合物形式包括[M+H]^+、[M+Na]^+、[M+K]^+、[M+NH4]^+。参照SANTE/11813/2017指南进行定性方法学验证。在21份茶叶样品中添加混合标准溶液至4个水平(0.01、0.05、0.10、0.20 mg/kg),确定每种农药在茶叶样品中的筛查检出限(SDL),共评估了1911种农药/样品组合。发现有66种农药的SDL为0.01 mg/kg,8种农药的SDL为0.05 mg/kg,1种农药的SDL为0.10 mg/kg,3种农药的SDL为0.20 mg/kg,共有13种农药的SDL大于0.20 mg/kg。一种农药在筛查检测中存在基质抑制效应。最后,应用建立的方法分析了流通市场中22份茶叶样品的农药残留情况,从6份茶叶样品中筛查检测出6种农药化合物,经人工鉴定均为阳性。该法为茶叶中农药残留的高通量筛查检测提供了参考。

高效液相色谱对液态奶中三聚氰胺的快速测定

建立了有机溶剂提取和离子对色谱相结合的三聚氰胺快速检测方法。样品中加入有机溶剂振荡提取,取上清液过滤进行高效液相色谱（HPLC）分析。对丙酮、乙腈、乙醇和异丙醇的提取物分别在甲醇-离子对试剂流动相体系和乙腈-离子对试剂流动相体系中进行测定和比较。结果显示,选择合适的流动相,使用丙酮、乙醇或异丙醇为提取剂可以获得较好的提取效果。在甲醇-离子对试剂流动相体系中,三聚氰胺的质量浓度在1.0-100.0 mg/L范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 98）,检出限为0.1 mg/kg,采用丙酮为提取剂,加标回收率为97%-103%,相对标准偏差（RSD）小于5%。

茄子内生细菌的分离及其对茄子黄萎病菌的室内拮抗活性测定

从罹病及健康的茄子植株中分离到409株内生细菌,通过离体抑菌作用初筛,共得到55株对茄子黄萎病菌有拮抗作用的细菌,占菌株总数的13.45%。拮抗活性测定表明,多数拮抗细菌与病原真菌之间可以产生清晰的抑菌圈,抑菌圈直径最大的可达13.9 mm,少数细菌在PDA平板上呈蔓延生长,细菌菌落“吞噬”了真菌菌落。培养液的拮抗活性测定表明,有10株细菌的培养液经过滤除菌或高温高压处理仍具有较强的拮抗效果。过滤除菌的细菌培养液经生长速率测定,浓度为20%时,有6株内生细菌对茄子黄萎病菌抑制率≥50%,最高的达61.21%。

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定食用调味油中的罗丹明B

食用调味油样品经丙酮提取后,所得提取液经MCX阳离子固相萃取柱提取,用氨水-甲醇(5+95)溶液洗脱,洗脱液在45℃氮吹至近干后用2 mL甲醇定容。以ACQUITY BHE C_(18)色谱柱为分离柱,以不同体积比的0.1%(体积分数)甲酸溶液和甲醇混合液为流动相进行梯度洗脱,采用电喷雾正离子源多反应监测模式检测。罗丹明B的质量浓度在1.00~100μg·L^(-1)范围内与其峰面积呈线性关系,方法的检出限(3S/N)为0.003 mg·kg^(-1)。在0.01,0.05,0.20 mg·kg^(-1)3个浓度水平下进行加标回收试验,所得方法的回收率在82.1%~97.2%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)均小于9%。

植物内生细菌及其生物防治植物病害的研究进展

综述了植物内生细菌及其生物防治植物病害的研究进展。植物内生细菌分布广,种类多,存在于大多数高等植物中,已在生物防治细菌性病害、真菌性病害和线虫病害方面发挥了巨大的作用。植物内生细菌的防病机理主要通过与病原菌竞争生态位和营养物质、产生抗菌活性物质以及诱导植物产生系统抗性等多种作用方式。同时,对植物内生细菌防治植物病害存在的问题及未来发展前景进行了讨论。

茄子黄萎病生防内生细菌的筛选、鉴定及胞外抗菌物质的特性

对分离筛选获得的6株对茄子黄萎病菌Verticillium dahliae具有强拮抗活性的内生细菌进行盆钵防效测定,其中3个菌株29-122、2-5和0-21对茄子黄萎病防治效果均在80%以上。对菌株29-12和22-5进行内生定殖能力检测,发现菌株29-12在茄子体内定殖时间更长。经鉴定,菌株29-12为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。菌株29-12能产生抗茄子黄萎病菌的胞外活性物质。该活性物质对热较稳定;pH6.0~9.0时活性稳定,pH【4.0时没有活性;对蛋白酶K和胰蛋白酶都不敏感。抑菌谱测定表明,该物质对10种病原真菌均有较强的抑制作用。

固相萃取-超高效液相色谱荧光法检测植物油中苯并[a]芘

为建立固相萃取-超高效液相色谱大体积流通池荧光法检测植物油中苯并[a]芘(benzo[a]pyrene,Ba P)的方法,对4种商业化固相萃取柱净化油样和富集Ba P的效果进行评价,同时比较了4种超高效液相色谱柱的分离效果.结果表明:借助商业化Ba P专用固相萃取柱处理样品,洗脱液旋蒸至干后用乙腈-四氢呋喃(体积比为9∶1)溶解定容,经过BEH Shield RP18柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,流动相为乙腈-水(体积比为70∶30),流速0.4 m L/min,Ba P在0.101~10.1μg/L范围内有良好的线性关系(r>0.999 993),检出限为0.2μg/kg;商业化固相萃取柱能较好地除去样品中的油和吸附Ba P,4种固相萃取柱的3个加标水平的回收率为91.0%~106.9%,相对标准偏差为1.4%~9.6%(n=6);用超高效液相色谱法分析样品,速度比高效液相色谱快3倍.与国标相比,该方法具有操作简便、重复性好、灵敏度高、节省溶剂等优越性,可快速、准确地对植物油中的Ba P进行定性和定量检测.

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定工业染料中芳香胺

工业染料中的偶氮染料在柠檬酸缓冲液中用连二亚硫酸钠还原为芳香胺,所得芳香胺经ProElut AZO专用硅藻土柱提取,用乙醚洗脱,浓缩至近干后用甲醇定容。以UPLC BEH C18色谱柱为分离柱,以不同体积比混合的甲酸-水(0.1+99.9)溶液和甲醇为流动相梯度洗脱,采用电喷雾电离源正离子模式检测。方法的检出限(3S/N)在0.5～1.0mg.kg-1之间。24种芳香胺的平均回收率在71.8%～96.5%之间,相对标准偏差(n=5)均小于8.0%。

显色培养基上沙门氏菌及干扰菌的分离鉴定

研究比较沙门氏菌显色培养基(CAS)上干扰菌与沙门氏菌的区别,提高沙门氏菌的分离鉴定效率。使用沙门氏菌和7株干扰菌(铜绿假单胞菌、恶臭假单胞菌、施氏假单胞菌、荧光假单胞菌、斯氏普罗威登斯菌、摩氏摩根菌摩根亚种、粪产碱菌亚种)分别接种CAS、BS、XLD和HE培养基,观察菌落形态特征,分析生化试验结果,考察TTB和SC选择性增菌液对7株干扰菌的选择效果。7株干扰菌在CAS培养基上都是紫色菌落,仔细辨认大部分都可与沙门氏菌区分,无法从菌落形态区分的恶臭假单胞菌和荧光假单胞菌通过在BS上的生长情况或生化试验可以排除,TTB和SC选择性增菌液对7株干扰菌的选择效果各不相同,提示检测过程中TTB和SC两种增菌液须同时使用,相互补充,提高检出率。

酱卤肉制品中酸性橙Ⅱ检测方法的优化

优化了固相萃取-高效液相色谱检测酱卤肉制品中酸性橙Ⅱ的方法。样品经过石油醚去油后,用氨水-乙醇-水溶液(体积比20∶70∶10)提取,70℃水浴浓缩,调节pH至5~6,通过Cleanert PWAX弱阴离子交换柱净化和富集,60℃水浴挥干洗脱液后用水溶解定容,借助Thermo Hypersil Gold C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,20 mmol/L乙酸铵溶液-甲醇(体积比35∶65)为流动相,以1 m L/min的流速等度洗脱。结果表明:酸性橙Ⅱ在0.1~5μg/m L内线性良好,相关系数(r)大于0.99995,检出限为0.01 mg/kg。对鸭翅空白样品分别进行0.5、1.0、1.5、2.0 mg/kg四种水平的加标回收实验,酸性橙Ⅱ的加标回收率为80.8%~86.3%,相对标准偏差为2.1%~4.7%(n=6)。该方法去除了样品中的基质干扰,较好地提取了酸性橙Ⅱ,选用的固相萃取柱净化和富集效果理想,具有灵敏度高、可操作性强、重复性好、适用于批量检测等特点。

高效液相色谱测定食品中的7种抗氧化剂

建立了高效液相色谱同时定量测定食品中叔丁基对羟基茴香醚、2,6-二叔丁基对甲酚、特丁基对苯二酚、没食子酸丙酯、没食子酸辛酯、没食子酸异戊酯和没食子酸月桂酯7种抗氧化剂的分析方法。液态油脂样品经甲醇反复提取后氮气吹干,5 mL甲醇定容;固体样品使用正己烷提取,再用乙腈反萃取多次,氮气吹干,5 mL甲醇定容。提取液经Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,以1.5%乙酸-甲醇为流动相,梯度洗脱。用二极管阵列检测器(PDA)进行检测,结合保留时间和紫外光谱进行定性分析,定量检测波长280 nm。7种抗氧化剂在1～100 mg/L范围内具有较好的线性关系,相关系数r2>0.999,定量下限(LOQ,S/N=10)为1.0～1.5 mg/kg;空白样品的加标回收率为79%～101%,相对标准偏差均低于7%。将该方法应用于食品中抗氧化剂的检测,从成品植物油、坚果等食品中检出抗氧化剂的残留。该方法准确快速、灵敏度高,满足食品中添加剂的检测要求。

猪源性成分检测中3种DNA提取方法比较

为了达到对动物源性成分快速、准确的检定,对提取动物源性基因组DNA的方法进行了比较分析。考察酚-三氯甲烷法、聚乙烯吡咯烷酮法(PVP法)和试剂盒法这3种方法对DNA提取的浓度、纯度及实时荧光PCR扩增效果的影响。结果表明:酚-三氯甲烷法提取DNA浓度最高,试剂盒法纯度最高且实时荧光PCR扩增效果最好,但PVP法操作简单、安全、经济,提取的DNA用于实时荧光PCR扩增检出限可达1.98 pg/μL。使用PVP法对市场上10份不同类型的动物性产品进行了检测,检出两份产品中含有猪源性成分。PVP法应是3种方法中的首选方法,本文为实验室选择合适的DNA提取方法提供了依据。

三种专用固相萃取柱-高效液相色谱法检测食品中苏丹红含量

建立了专用固相萃取柱-高效液相色谱法检测食品中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的方法。样品经过正己烷提取,通过苏丹红专用固相萃取柱净化和富集,40℃水浴旋蒸至干后用甲基叔丁基醚-甲醇(体积比4∶6)溶解定容,借助Waters Symmetry C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)分离,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,二极管阵列检测器检测,外标法定量。结果表明,四种苏丹红在0.16~2.56μg/mL内线性相关系数(r)均大于0.9999,不同食品的检出限在2.3~9.7 mg/kg之间。不同品牌的苏丹红专用固相萃取柱去除基质干扰和富集目标物的能力不同,可根据食品种类选择合适的固相萃取柱。ProElut SDH SPE柱普遍适用于不同种类食品的前处理;CNW Poly-sery MIP-SDR SPE柱适用于除辣椒粉以外的大部分食品的前处理;Cleanert Sudan SPE柱适用于浅色、低油脂食品的前处理。对六种食品加标2.0 mg/kg,经过ProElut SDH SPE柱处理后,回收率为83.7%~91.1%,相对标准偏差为2.4%~6.2%(n=6)。该方法净化和富集效果理想,与GB/T 19681-2005相比,具有操作简便、重复性好、准确度高、分析时间短、节省溶剂等特点。

小麦穗期施用多菌灵对籽粒中残留量的影响

为研究多菌灵在小麦穗期使用后对籽粒中残留量的影响,进行了多菌灵不同用药时间、用药量田间试验,并对小麦籽粒中多菌灵含量进行高效液相色谱法检测。结果表明:小麦收获前26 d施用多菌灵纯药723 g/hm2或在收获前40 d内施用多菌灵纯药868 g/hm21次,小麦收获前38、30 d内各施用多菌灵纯药723 g/hm21次,小麦籽粒中多菌灵残留量均有可能超过0.05 mg/kg。应用多菌灵防治小麦赤霉病时,为确保安全有效,可掌握在小麦齐穗至扬花初期尽早喷施,并严格注意用药量与安全间隔期。

傅立叶变换红外光谱技术对阪崎肠杆菌及奇异变形杆菌的分类鉴定

运用傅立叶变换红外光谱技术(Fourier transform infrared spectroscopy,FT-IR)对2株不同来源的阪崎肠杆菌及奇异变形杆菌建立数据库并进行快速分类鉴定。利用FT-IR技术采集菌体生化构成光谱信息,对数据预处理后借助计算机和化学计量学方法进行主成分分析(principal component analysis,PCA)和系统聚类分析(hierarchical cluster analysis,HCA)。结果显示,PCA和HCA两种分析方法成功将阪崎肠杆菌和奇异变形杆菌进行区分,且不同来源的2株阪崎杆菌也得到明显区分。FT-IR技术结合计算机与化学计量学方法,对阪崎肠杆菌及奇异变形杆菌的分类鉴定方面提供了一种有效的工具。

高效液相色谱——荧光检测法同时检测火锅底料中吗啡和可待因

建立了高效液相色谱-荧光法同时测定吗啡和可待因的方法。采用的色谱柱为C18柱（250mm×4．6mm，5μm）；检测激发波长为285nm，发射波长为340nm；流动相为甲醇-0．01mol／L乙酸铵（体积比为40：60），流速1．0mL/Mmin。实验结果表明，进样量为5×10-4～0．02μg时其质量浓度与相应峰面积有良好的线性关系，最低检测限达到0．12ng。样品中吗啡和可待因的回收率为91．1％-94．6％。方法快速准确，简便灵敏，分离度高，能够满足火锅底料中吗啡和可待因的检测要求。