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猪肌生成抑制素(MSTN)基因cDNA克隆及序列分析 被引量:5
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作者 乔宪凤 刘西梅 +7 位作者 华文君 周荆荣 刘中华 张立萍 肖红卫 华再东 李莉 郑新民 《江西农业学报》 CAS 2010年第10期130-132,共3页
利用GenBank中猪肌生成抑制素(MSTN)编码序列设计引物,以湖北白猪背最长肌肌细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增出MSTN基因cDNA片段。该片段全长1277bp,包含猪MSTN基因的全部编码序列。将所得片段与pUCm-T载体连接,转化到DH5α大肠杆... 利用GenBank中猪肌生成抑制素(MSTN)编码序列设计引物,以湖北白猪背最长肌肌细胞总RNA为模板,利用RT-PCR技术,扩增出MSTN基因cDNA片段。该片段全长1277bp,包含猪MSTN基因的全部编码序列。将所得片段与pUCm-T载体连接,转化到DH5α大肠杆菌中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒测序结果与文献报道的一致。 展开更多
关键词 猪肌生成抑制素 MSTN基因 cDNA克隆 序列分析 MYOSTATIN Gene 编码序列 CDNA片段 RT-PCR技术 载体连接 阳性克隆 设计引物 大肠杆菌 测序结果 背最长肌 GENBANK 肌细胞 质粒 文献 筛选 模板
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猪乙脑病毒WHe株的PrM-E、NS1、E-NS2A基因的克隆及序列测定 被引量:3
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作者 乔宪凤 熊东海 +3 位作者 郑新民 徐涤平 赵浩斌 魏庆信 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期191-194,共4页
本文通过RT_PCR扩增了猪乙型脑炎病毒WHe株主要抗原基因NS1(约 1.14kb)、prM_E(约 2 .1kb)、E_NS1_NS2A (约 3.0kb) ,并将NS1、E_NS1_NS2A、PrM_E基因克隆、测序。与Genbank发表的JEV基因序列进行序列分析 ,发现WHe株与其他 12种典型的... 本文通过RT_PCR扩增了猪乙型脑炎病毒WHe株主要抗原基因NS1(约 1.14kb)、prM_E(约 2 .1kb)、E_NS1_NS2A (约 3.0kb) ,并将NS1、E_NS1_NS2A、PrM_E基因克隆、测序。与Genbank发表的JEV基因序列进行序列分析 ,发现WHe株与其他 12种典型的JEV强毒株的同源性在 88.3%~ 99.4 %之间。WHe株与K94P0 5株的同源性最低 (88.3% ) ,与P3株的同源性最高 (99.4 % ) ,可认为WHe株是由P3株衍生而来的。在JEV基因组 5’端 389~ 3910的长 35 2 2nt的决定JEV抗原性的C_prM_E_NS1_NS2A区中 ,WHe株与P3株仅有 2 1个碱基不同 ,其中的 14个单碱基突变为同义突变 ,另外7个为错义突变 ,导致相应的氨基酸序列 (1173个 )中的 6个氨基酸发生了变异 ,其中的 5个氨基酸变异出现在含有各关键的抗体中和决定簇的E蛋白内 ,另一个位于NS1蛋白内。 展开更多
关键词 日本乙型脑炎病毒 NS1、prM-E、E-NS1-NS2A基因 基因克隆 核酸序列
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湖北白猪IGF-I基因的克隆及序列分析 被引量:4
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作者 乔宪凤 张立苹 +6 位作者 毕延震 刘西梅 华文君 华再东 肖红卫 周荆荣 郑新民 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第33期20517-20519,共3页
[目的]以湖北白猪肝脏作为试验材料,克隆出湖北白猪胰岛素生长因子(IGF-I)基因,并对其序列进行分析。[方法]采用Trizol法从湖北白猪的肝脏中提取总RNA,将其作为RT反应的模板,用P2(5'-CAGGTAACTCGTGCAGAGCAAAGGA-3')引物合成IGF-... [目的]以湖北白猪肝脏作为试验材料,克隆出湖北白猪胰岛素生长因子(IGF-I)基因,并对其序列进行分析。[方法]采用Trizol法从湖北白猪的肝脏中提取总RNA,将其作为RT反应的模板,用P2(5'-CAGGTAACTCGTGCAGAGCAAAGGA-3')引物合成IGF-I基因cDNA第一链,以其产物为模板,再以P1(5'-CCCATCTCCCTGGATTTCTTTTTG-3')和P2为上下游引物扩增到大小约为607 bp的产物,并将其克隆至pCRII载体上,经蓝白斑筛选、酶切、测序。[结果]经筛选、酶切、序列分析,表明该片段为IGF-I基因的cDNA克隆,它由607个核苷酸组成,其中1~145位是5'端非翻译区,从第146位ATG起始密码子开始至第538位TAG终止密码子5,39~607位是3'端非翻译区,包含一完整的ORF,该ORF共有393核苷酸,编码一个推断由130个氨基酸组成的多肽。与GenBank中的序列比较,该序列与Muller等报道的猪IGF-I基因编码序列完全同源。[结论]成功克隆了湖北白猪IGF-I基因,并对其进行序列分析,证实了IGF-I基因的高度保守性,为采用转基因技术对湖北白猪进行育种奠定了基础和提供了技术依据。 展开更多
关键词 湖北白猪 IGF-I基因 序列分析
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CPR和P450基因在昆虫抗药性中的作用研究进展 被引量:4
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作者 乔宪凤 王康 +2 位作者 彭雄 张晓赫 陈茂华 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2023年第4期862-870,共9页
P450酶系在昆虫代谢农药中有重要作用,NADPH-细胞色素P450还原酶(NADPH-cytochrome P450 reductase,CPR)和细胞色素P450(P450)在该酶系起核心作用。昆虫具有P450超基因家族,但只有一个单一的CPR基因,CPR是昆虫所有参与农药代谢的P450酶... P450酶系在昆虫代谢农药中有重要作用,NADPH-细胞色素P450还原酶(NADPH-cytochrome P450 reductase,CPR)和细胞色素P450(P450)在该酶系起核心作用。昆虫具有P450超基因家族,但只有一个单一的CPR基因,CPR是昆虫所有参与农药代谢的P450酶的唯一电子供体,其影响P450活性。P450基因的高水平表达在害虫抗药性中具有重要作用,P450基因介导的昆虫抗药性是最重要的代谢抗性类型。不同P450基因的高表达的调控机制不同,引起P450基因过量表达的原因可能有P450基因的编码区突变、顺式作用元件和反式作用因子变化、基因扩增等。细胞色素P450介导的抗药性存在一定程度的进化可塑性,即同种昆虫不同种群对相同的农药产生抗药性时,导致抗性产生的P450基因不同;同一昆虫品系在某种农药的抗性选择压力下,影响抗性的P450基因的种类和表达特性会随着持续的农药选择而发生变化。最近的研究显示,CPR的变异和昆虫抗药性相关,但是昆虫CPR基因介导抗药性的机制还缺乏深入研究。全面阐释P450酶系介导昆虫抗药性的机制、建立基于P450基因表达量变化与CPR突变的抗性分子标记,对于害虫抗药性治理具有重要意义。 展开更多
关键词 P450 CPR 昆虫抗药性 表达调控 突变 过表达 进化可塑性
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CSP介导的害虫抗药性新机制研究进展 被引量:1
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作者 乔宪凤 张晓赫 +1 位作者 彭雄 陈茂华 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2023年第2期360-366,共7页
CSPs(Chemosensory proteins)即化学感受蛋白,其在昆虫体内各个阶段均有表达,参与昆虫的多种生理过程,具有十分复杂的化学功能。CSPs基因介导昆虫抗药性是最新发现的害虫抗药性新机制,且近几年在几种昆虫中被报道。CSPs可以通过螯合作... CSPs(Chemosensory proteins)即化学感受蛋白,其在昆虫体内各个阶段均有表达,参与昆虫的多种生理过程,具有十分复杂的化学功能。CSPs基因介导昆虫抗药性是最新发现的害虫抗药性新机制,且近几年在几种昆虫中被报道。CSPs可以通过螯合作用大量结合农药,进而导致昆虫产生抗药性,但CSPs与杀虫剂的结合机理及其表达调控机制尚未被阐明。基于目前现状,本文系统综述了CSPs在昆虫抗药性中的功能以及抗药性相关酶的表达调控机制等方面的研究进展,分析其表达调控的可能机制,旨在为害虫抗药性机制研究提供新思路。 展开更多
关键词 CSP 昆虫 抗药性 螯合作用 调控机制
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PEDV膜蛋白基因RT-PCR最适反应条件的确立 被引量:3
6
作者 乔宪凤 熊忠良 +1 位作者 华文君 郑新民 《湖北畜牧兽医》 2001年第1期8-10,共3页
以猪流行性腹泻病毒 (PEDV)的RNA为模板 ,探讨了影响猪流行性腹泻病毒(PEDV)的RT -PCR反应的各种因素 ,确立了RT -PCR的最适反应条件。
关键词 流行性腹泻病毒 RT-PCR 最适反应条件 膜蛋白基因
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猪胃蛋白酶原A基因cDNA的克隆及其表达
7
作者 乔宪凤 刘西梅 +3 位作者 安立国 华文君 周荆荣 郑新民 《武汉大学学报(理学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期508-512,共5页
根据GenBank中发表的猪胃蛋白酶原A(pepsinogen)基因序列设计引物,采用RT-PCR技术,成功获得了猪胃蛋白酶原A基因,该基因全长1 240 bp,将该基因克隆到表达载体pPIC3.5K的EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点构建重组表达质粒,通过电转化方法将重组质... 根据GenBank中发表的猪胃蛋白酶原A(pepsinogen)基因序列设计引物,采用RT-PCR技术,成功获得了猪胃蛋白酶原A基因,该基因全长1 240 bp,将该基因克隆到表达载体pPIC3.5K的EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点构建重组表达质粒,通过电转化方法将重组质粒转化毕赤酵母GS115,检测结果表明猪胃蛋白酶原A基因在毕赤酵母中得到了表达. 展开更多
关键词 猪胃蛋白酶原A基因 克隆 毕赤酵母 表达
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日本脑炎病毒WHe株NS1基因的克隆、测序及表达
8
作者 乔宪凤 唐青海 +5 位作者 郑新民 熊忠良 刘西梅 华文君 周荆荣 何维明 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第4期23-26,31,共5页
以日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)WHe株的基因组RNA为模板,采用RT-PCR技术,克隆了JEV WHe株的NS1基因,并对其进行了测序和序列分析。构建了pET28b-NS1表达载体,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),并对其进行了诱导表达,对... 以日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)WHe株的基因组RNA为模板,采用RT-PCR技术,克隆了JEV WHe株的NS1基因,并对其进行了测序和序列分析。构建了pET28b-NS1表达载体,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),并对其进行了诱导表达,对表达产物进行检测。结果表明,NS1基因全长1 145 bp,其核酸序列与JEV P3株同源性为99.4%,与SA14和SA14-14-2等27个JEV毒株的核苷酸序列同源性为98%,表明NS1基因的保守性很高;pET28b-NS1表达产物的相对分子质量约为43 ku,大小与预期结果相符。NS1基因克隆表达成功。 展开更多
关键词 日本脑炎 WHe株 NS1基因 RT-PCR
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乙型脑炎新型疫苗的研究进展 被引量:1
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作者 乔宪凤 刘西梅 +2 位作者 华文君 郑新民 周荆荣 《湖北畜牧兽医》 2005年第6期31-33,共3页
流行性乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。目前对该病尚无特效的治疗方法,主要靠疫苗接种预防该病的发生。传统的乙脑弱毒苗和灭活苗在控制和预防乙脑的过程中发挥着重要作用,但二者都... 流行性乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒。目前对该病尚无特效的治疗方法,主要靠疫苗接种预防该病的发生。传统的乙脑弱毒苗和灭活苗在控制和预防乙脑的过程中发挥着重要作用,但二者都存在缺点,因此研制和开发乙脑的新型苗成为近十几年JEV研究的重点。目前研究的新型疫苗主要包括基因工程亚单位疫苗、合成肽疫苗、JEV重组活疫苗以及核酸疫苗,就这些新型高效疫苗研究的进展作一综述。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 基因工程疫苗
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Cloning and Sequence Analysis on IGF-1 Gene of Hubei White Swine
10
作者 乔宪凤 张立苹 +6 位作者 毕延震 刘西梅 华文君 华再东 肖红卫 周荆荣 郑新民 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2011年第11期1569-1571,1593,共4页
[Objective] The study aimed at cloning and analyzing the insulin-like growth factor-1 (IGF-1) gene from liver of Hubei white swine. [Method] The total RNA was extracted by using Trizol from the liver of Hubei white ... [Objective] The study aimed at cloning and analyzing the insulin-like growth factor-1 (IGF-1) gene from liver of Hubei white swine. [Method] The total RNA was extracted by using Trizol from the liver of Hubei white swine and used as template to amplify IGF-1 gene cDNA by RT-PCR. The cDNA product was cloned into pCRII vector, screened with blue-white colonies, digested with double enzymes and sequenced. [Result] The sequencing result indicated that the IGF-1 gene consisted of 607 nucleotides, containing 5'-untranslated region at nucleotides 1-145, a complete ORF at nucleotides 146-538 encoding 130 amino acids, and 3'-untranslated region at nucleotides 539-607. It shared 100% homology with the porcine IGF-1 gene reported by Muller et al. [Conclusion] The successful cloning and sequencing of the Hubei white swine IGF-1 gene confirmed that IGF-I gene was highly conserved, which provided technical basis for the use of transgenic technology for breeding of Hubei white swine. 展开更多
关键词 Hubei white swine IGF-1 gene Sequence analysis
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长PCR扩增人血清白蛋白基因反应条件及体系的确立
11
作者 乔宪凤 郑新民 +1 位作者 熊忠良 华文君 《湖北农业科学》 北大核心 2001年第4期73-75,共3页
从人的血液中提取基因组的DNA作为模板 ,通过对长PCR反应条件体系的优化 ,获得基因组中大片段的人血清白蛋白基因 (HSA)。
关键词 人血清白蛋白基因 大片段DNA 长PCR 反应条件 反应体系
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谷胱甘肽对氯化汞致果蝇肠损伤的影响
12
作者 乔宪凤 陈志 李爽 《湖北农业科学》 2016年第11期2849-2851,共3页
以模式生物果蝇为模型,研究了谷胱甘肽(1 mmol/L)对氯化汞(400μmol/L)致果蝇肠损伤的影响。结果表明,谷胱甘肽对氯化汞所致果蝇肠道损伤有一定的保护作用。1 mmol/L谷胱甘肽显著抑制400μmol/L氯化汞所致果蝇肠道上皮活性氧的产生、细... 以模式生物果蝇为模型,研究了谷胱甘肽(1 mmol/L)对氯化汞(400μmol/L)致果蝇肠损伤的影响。结果表明,谷胱甘肽对氯化汞所致果蝇肠道损伤有一定的保护作用。1 mmol/L谷胱甘肽显著抑制400μmol/L氯化汞所致果蝇肠道上皮活性氧的产生、细胞凋亡以及肠道干细胞的分裂。 展开更多
关键词 氯化汞 果蝇 谷胱甘肽
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精子介导生产转hCD59基因猪 被引量:15
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作者 肖红卫 郑新民 +5 位作者 陈思怀 乔宪凤 谷习文 田永祥 张涌 魏庆信 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期170-173,共4页
为研究精子介导法生产异种器官移植用转基因猪的效率,将人膜反应性溶解抑制物(hCD59)基因与脂质体混合制成基因/脂质体复合物,分别采用睾丸注射法和基因脂质体复合物/精子共孵育法制备转人hCD59基因猪,其中睾丸注射法处理公猪1头,44 d... 为研究精子介导法生产异种器官移植用转基因猪的效率,将人膜反应性溶解抑制物(hCD59)基因与脂质体混合制成基因/脂质体复合物,分别采用睾丸注射法和基因脂质体复合物/精子共孵育法制备转人hCD59基因猪,其中睾丸注射法处理公猪1头,44 d后配母猪8头,7头受孕(受孕率87.5%),产仔73头,PCR阳性猪3头(阳性率4.3%);外源基因/精子共孵育法处理公猪4头,处理母猪4头,1头受孕(受孕率25%),产仔11头,PCR阳性猪1头(阳性率9%)。从15头受孕母猪共获得84只仔猪,经PCR初步检测,其中4只仔猪为转基因阳性,阳性率4.8%。研究结果表明:通过精子介导法可以获得转基因猪。 展开更多
关键词 精子介导 hCD59基因 脂质体 转基因猪
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禾谷缢管蚜羧酸酯酶基因cDNA片段的克隆与序列分析 被引量:7
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作者 陈茂华 蓝家样 +2 位作者 韩召军 乔宪凤 曲明静 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期145-148,共4页
为开展禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padiLinnaeus)抗性的分子生物学研究,设计简并引物并采用RT-PCR技术,克隆了长度分别为260、331、337bp的3个禾谷缢管蚜的羧酸酯酶cDNA片段,命名为Rp.est1、Rp.est2、Rp.est3;3个片段推导氨基酸残基分别... 为开展禾谷缢管蚜(Rhopalosiphum padiLinnaeus)抗性的分子生物学研究,设计简并引物并采用RT-PCR技术,克隆了长度分别为260、331、337bp的3个禾谷缢管蚜的羧酸酯酶cDNA片段,命名为Rp.est1、Rp.est2、Rp.est3;3个片段推导氨基酸残基分别为87、110、112个;同源性分析表明,Rp.est1、Rp.est2、Rp.est3之间的相似性在40%左右,表明其分别代表不同基因;Rp.est1、Rp.est2、Rp.est3与其他昆虫羧酸酯酶基因序列具有较高的相似性,其GeneBank登录号分别为AY622997、AY869713、AY869714。 展开更多
关键词 禾谷缢管蚜 羧酸酯酶 基因克隆 序列分析
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亚致死浓度毒死蜱和异丙威对禾谷缢管蚜试验种群的影响 被引量:15
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作者 段辛乐 乔宪凤 陈茂华 《中国生态农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期329-336,共8页
禾谷缢管蚜[Rhopalosiphum padi(Linnaeus)]是重要的小麦害虫,毒死蜱和异丙威作为有效防治禾谷缢管蚜的杀虫剂,可以在致死浓度下直接杀死禾谷缢管蚜,其亚致死浓度也可能会引起禾谷缢管蚜生理和行为的改变。为明确亚致死浓度的毒死蜱和... 禾谷缢管蚜[Rhopalosiphum padi(Linnaeus)]是重要的小麦害虫,毒死蜱和异丙威作为有效防治禾谷缢管蚜的杀虫剂,可以在致死浓度下直接杀死禾谷缢管蚜,其亚致死浓度也可能会引起禾谷缢管蚜生理和行为的改变。为明确亚致死浓度的毒死蜱和异丙威对禾谷缢管蚜试验种群的影响,本研究采用浸叶法分别测定了毒死蜱和异丙威对禾谷缢管蚜成蚜的毒力;并以含0.1%吐温-80的蒸馏水为对照,利用生命表技术分别研究了毒死蜱亚致死浓度(C-LC20和C-LC30)和异丙威亚致死浓度(I-LC20和I-LC30)对禾谷缢管蚜F0代和F1代种群生长发育和繁殖的影响。结果表明,C-LC20、C-LC30、I-LC20和I-LC30处理后,禾谷缢管蚜F0代成蚜寿命分别缩短14.03%、36.04%、12.01%和26.86%,产蚜量分别下降20.55%、42.27%、17.13%和26.00%,均显著低于对照种群;与对照相比,C-LC20、C-LC30、I-LC20和I-LC30处理后,禾谷缢管蚜F1代种群的若虫期分别延长1.51 d、1.92 d、0.9 d和1.19 d,成蚜寿命分别缩短21.62%、33.68%、15.51%和23.14%,产蚜量分别降低21.81%、37.4%、14.51%和29.29%,且F1代种群的内禀增长率rm、净生殖率R0、周限增长率λ以及总生殖率GRR都比对照降低,而F1代种群加倍时间Dt和平均世代周期T均延长。本研究结果显示,亚致死浓度的毒死蜱和异丙威能够降低禾谷缢管蚜种群的发育和繁殖速率,对禾谷缢管蚜种群具有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 禾谷缢管蚜 毒死蜱 异丙威 生命表 亚致死浓度
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VLDL双向选择肉鸡群SSR指纹分析 被引量:4
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作者 白秀娟 乔宪凤 +2 位作者 李辉 王宇祥 唐志权 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期149-151,共3页
对初步进行VLDL双向选择的三个世代高、低脂群肉鸡进行SSR指纹分析 ,评定各基因座基因频率的变化 ,进而判断SSR标记与肉鸡肥度性状VLDL的相关关系 ,为低脂肉鸡的早期选育奠定基础。 5个微卫星引物一个未扩增出产物 ,其余 4个引物扩增出... 对初步进行VLDL双向选择的三个世代高、低脂群肉鸡进行SSR指纹分析 ,评定各基因座基因频率的变化 ,进而判断SSR标记与肉鸡肥度性状VLDL的相关关系 ,为低脂肉鸡的早期选育奠定基础。 5个微卫星引物一个未扩增出产物 ,其余 4个引物扩增出 14个微卫星位点。各位点在高、低脂系中的基因频率经卡方检验 ,一世代有一个基因座的基因频率差异显著 (P <0 .0 5 ) ;二世代两个基因座差异显著 ;三世代共检测到 展开更多
关键词 肉鸡群 SSR指纹分析 遗传相关性 VLDL双向选择 肥度
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表达人血清白蛋白转基因猪的研究 被引量:8
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作者 郑新民 魏庆信 +4 位作者 乔宪凤 华文君 李莉 杨在清 肖作焕 《西南农业学报》 CSCD 2003年第1期119-121,共3页
本研究采用显微注射法 ,使含有猪血清白蛋白侧翼序列的微小人血清白蛋白基因导入猪的基因组中 ,生产出转人血清白蛋白 (HSA)基因猪 ,经PCR和Southern杂交检测 ,有 4头活仔整合有HSA基因 ,其中的 3头不同程度的表达了人血清白蛋白。
关键词 转基因猪 人血清白蛋白 表达
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检测miRNA活性的双荧光素酶单载体 被引量:4
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作者 毕延震 郑新民 +5 位作者 邵长伟 潘雯 姜黎 欧阳辉武 乔宪凤 刘西梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期775-780,共6页
本研究报道了微小RNA靶分子鉴定及其活性分析的内参内置型双荧光素酶单载体与其应用.利用非连接酶依赖的基因克隆技术,借助一步式二元搭桥耦联长距离PCR及大肠杆菌体内同源重组方法,将萤火虫荧光素酶基因(Firefly luc)融合到pRL-TK载体... 本研究报道了微小RNA靶分子鉴定及其活性分析的内参内置型双荧光素酶单载体与其应用.利用非连接酶依赖的基因克隆技术,借助一步式二元搭桥耦联长距离PCR及大肠杆菌体内同源重组方法,将萤火虫荧光素酶基因(Firefly luc)融合到pRL-TK载体的海肾荧光素酶基因(Renillaluc)和氨苄青霉素抗性基因之间,构建为两种荧光素酶基因表达框并置的单载体报告系统,命名为pMiSensor.在海肾荧光素酶基因的3'非翻译区引入多克隆位点Xba I和Apa I,便于克隆目的基因的3'UTR.海肾荧光素酶为报告基因,萤火虫荧光素酶为内参基因.多种哺乳动物细胞系的转染实验证实,pMiSensor可同时有效表达两种报告基因,其酶活显示出宽广的线性范围.通过构建pMiSensor-CCNE1报告载体,证明pMiSensor能够重现miR16对细胞周期蛋白CCNE1的调控作用.通过转染miR16抑制剂,证明pMiSensor-CCNE1可作为一种灵敏的生物感应器,探测细胞内微小RNA的活性变化.该双荧光素酶单载体具有重复性高、操作简便、定量准确的优点,适用于微小RNA靶分子的筛选、鉴定和确认,也适用于在细胞水平定量分析微小RNA的活性变化. 展开更多
关键词 微小RNA 荧光素酶 非连接酶依赖 mRNA靶分子 单载体
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梨小食心虫微卫星标记的扩增稳定性及多态性分析 被引量:3
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作者 郑燕 王康 +2 位作者 李玉婷 乔宪凤 陈茂华 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1335-1342,共8页
【目的】筛选适合我国梨小食心虫Grapholita molesta种群遗传学研究的微卫星位点,并依据所筛选的微卫星位点进行梨小食心虫地理种群的遗传多样性分析。【方法】利用欧洲梨小食心虫和苹果蠹蛾Cydia pomonella种群中已报道的11个微卫星位... 【目的】筛选适合我国梨小食心虫Grapholita molesta种群遗传学研究的微卫星位点,并依据所筛选的微卫星位点进行梨小食心虫地理种群的遗传多样性分析。【方法】利用欧洲梨小食心虫和苹果蠹蛾Cydia pomonella种群中已报道的11个微卫星位点,分析各位点在我国12个种群257头梨小食心虫样本中的扩增稳定性,再进行其多态性分析,筛选适合的位点,然后进行种群遗传多态性分析。【结果】在分析的11个微卫星位点中,位点Gm01,Gm03,Gm04和Cyd15无法稳定扩增;位点Gm05扩增成功率较低,位点Gm07遗传多态性较低;而位点Gm02,Gm06,Gm08,Gm09和Gm10等扩增效果稳定且遗传多态性丰富。这5个稳定扩增的微卫星位点平均等位基因数量(NA)为7.417~12.500,平均观察杂合度(Ho)为0.366~0.655,平均期望杂合度(He)为0.642~0.846,多态信息含量(PIC)为0.800~0.935。【结论】本研究成功筛选出位点Gm02,Gm06,Gm08,Gm09和Gm10等5个微卫星位点。基于这5个微卫星位点标记的结果显示,山东和陕西不同梨小食心虫地理种群均具有丰富的遗传多样性。这5个位点可以适用于我国梨小食心虫种群的进一步遗传分析研究。 展开更多
关键词 梨小食心虫 地理种群 微卫星位点 扩增稳定性 遗传多态性 无效等位基因
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猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响 被引量:4
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作者 赵永贞 刘西梅 +5 位作者 李莉 乔宪凤 魏雁 曹斌云 魏庆信 郑新民 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第5期9-13,共5页
研究了不同生殖时期猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响,以此建立了适于早期小鼠转基因胚胎体外培养的猪输卵管上皮细胞共培养体系,并用PCR法对体外培养发育到不同阶段的小鼠转基因胚胎进行了外源基因整合检测。结果表明,在... 研究了不同生殖时期猪输卵管上皮细胞对小鼠早期胚胎体外发育的影响,以此建立了适于早期小鼠转基因胚胎体外培养的猪输卵管上皮细胞共培养体系,并用PCR法对体外培养发育到不同阶段的小鼠转基因胚胎进行了外源基因整合检测。结果表明,在受孕初期的猪输卵管上皮细胞(无论是原代还是传代细胞)上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率显著高于发情间期的猪输卵管上皮细胞(P<0.01);在相同生殖时期猪输卵管原代和传代上皮细胞上,培养的小鼠1-细胞期胚胎的囊胚率差异不显著;在转基因胚胎不同发育阶段,PCR检测呈阳性的胚胎比率分别为:2-细胞期为96%,4-细胞期为63%,8-细胞期为43%,囊胚期为19%。由此可见,受孕初期的猪输卵管上皮细胞可促进与之体外共培养的小鼠早期胚胎的发育;随着早期小鼠转基因胚胎的发育,PCR检测呈阳性的转基因胚胎的比率逐渐降低。 展开更多
关键词 显微注射 共培养 小鼠胚胎 转基因
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