麻痹性贝毒研究进展

根据80－90年代国际上对麻痹性贝毒研究的最新进展，就研究中的几个热点问题进行综合评述，包括：麻痹性贝毒产毒藻的识别；毒素产生机制；毒素监测和分析方法；麻痹性贝毒对海洋生物的影响；麻痹性贝毒对水产养殖业的影响及对策等。概括了麻痹性贝毒研究的现状和研究中亟待解决的问题。中国在麻痹性贝毒毒素研究领域只进行了一些初步的工作，本文结合中国的研究现状，提出以后在此领域内的重点研究方向。

原子吸收光谱仪用于沉积物中锡分析的方法研究

１９９４－１９９６年间，利用原子吸收光谱仪，对沉积物中有机锡和总锡的石墨炉原子吸收分析方法进行了优化，探讨了分析过程中的仪器条件和改进剂类型。优化后方法的检出限为 ２．４５μｇ／Ｌ（ＴＰＴ－锡），特征浓度（相当于产生 １％净吸收或 ０．００４ ４吸光度的待测元素浓度）为４８２μｇ／Ｌ（ＴＰＴ－锡）。在这一条件下，采用盐酸酸化－正己烷萃取－氢氧化钠回洗－硝酸氧化的预处理方法，可以使沉积物样品中三苯基氯化锡（Ｔｒｉｐｈｅｎｙｌｔｉｎ， ＴＰＴ）的检出限达到４１ｎｇ／ｇ（ＴＰＴ－锡），回收率为 １０６％。应用这一方法对野外模拟实验和黄岛电厂出水口的沉积物样品进行了分析，结果表明，这一方法能够满足对沉积物样品中锡进行分析的要求。

黑褐新糠虾的急性毒性测试方法及在钻井液毒性评价中的作用

于 1992年开始在青岛胶州湾西海岸采集黑褐新糠虾 (Neomysisawatschensis)并进行实验室的长期驯化培养 ,在实验室内以 4～ 6d的幼虾为实验材料 ,研究了黑褐新糠虾的急性毒性测试方法。比较了黑褐新糠虾和美国一种标准毒性测试实验生物巴西拟糠虾的分类学地位、地理分布和形态 ,以及对标准毒物的敏感性。根据研究结果 ,建议将黑褐新糠虾作为我国的一种标准毒性测试的实验生物 ,并将该方法应用于钻井液及其添加剂的毒性评价 。

塔玛亚历山大藻对黑褐新糠虾存活、生长以及种群繁殖的影响

通过塔玛亚历山大藻 ( Alexandrium tamarense)对黑褐新糠虾 ( N eomysis awatschensis)的急性和慢性毒性作用研究 ,发现塔玛亚历山大藻对黑褐新糠虾的存活、生殖、生长等有不利影响 ,影响程度随塔玛亚历山大藻藻细胞密度的增加而增加。在 96 h急性毒性实验中 ,塔玛亚历山大藻对黑褐新糠虾的半致死密度为 70 0 0 cells/ml,去藻过滤液中糠虾的死亡率为 2 5 %。在 6 2 d的慢性毒性实验中 ,密度为 90 0 cells/ml的塔玛亚历山大藻对黑褐新糠虾的繁殖有严重影响 ,在此影响下的实验组亲虾产幼虾总数只有 2 7尾 ,仅为对照组产幼虾数目的 1 6 .4 % ;其总产幼虾天数、日最高产幼数分别只有对照的 32 %、4 1 % ,其初次产虾日期也推迟了 3d,并出现了 3次生殖中断。塔玛亚历山大藻对黑褐新糠虾亲虾的存活、生长也有一定的影响 ,处在密度为 90 0 cells/ml塔玛亚历山大藻中的黑褐新糠虾亲虾的存活率只有对照的 6 3% ,糠虾亲虾的体长和体重分别为对照组亲虾的 95 .6 %和 81 .9% ,但差异尚不显著 ( P>0 .0 5 )

赤潮异弯藻毒性及毒性来源的初步研究

以一种标准实验生物卤虫ArtemiasalinaLeach为实验材料 ,初步研究了一种鱼毒性赤潮藻———赤潮异弯藻Heterosigmaakashiwo的毒性及其来源。结果表明 ,赤潮异弯藻能强烈抑制卤虫的运动能力 ,0 .1、1 .5、6和 2 4h时 ,赤潮异弯藻对卤虫运动的半影响浓度分别为 1 .5× 1 0 4 、7.5× 1 0 3、4.5× 1 0 3、3× 1 0 3cells/ml,但在较低浓度 3× 1 0 3cells/ml的赤潮异弯藻中 ,经过48h,卤虫的运动能力能够恢复到正常水平。通过对该藻各组分 :藻液 (algalculture)、藻细胞悬浮液 (re suspendedcells)、去藻过滤液 (cell freemedium)、藻细胞内容物 (cellcontents)和藻细胞碎片 (cellfragments)的毒性比较 ,发现藻液、藻细胞悬浮液和藻细胞碎片对卤虫的活力有显著抑制作用 ,而去藻过滤液及藻细胞内容物无影响 ,结合致毒途径藻细胞结构 ,可以推断毒性物质来源于藻细胞表面。经苯酚硫酸法和紫外可见光范围的吸收扫描 ,结合该藻藻的细胞结构报道结果 ,分离到的毒性组分推断为多糖类物质 。

麻痹性贝毒PSP在紫贻贝体内的累积、转化与排出

于 1 998年 9月在青岛鲁迅公园附近礁石区采集紫贻贝 (Mytilusedulis) ,采用实验室培养的方法 ,初步研究了塔玛亚历山大藻 (Alexandriumtamarense,ATHK)产生的麻痹性贝毒 (ParalyticShellfishPoison ,PSP)在其体内累积、转化与排出的规律。结果表明 ,在累积实验阶段 ,紫贻贝内脏和肌肉中的PSP毒素含量均随实验时间的延长而逐渐增加 ,累积实验结束时 ,平均每只贝体内的PSP毒素含量为 1 3 40nmol,毒性水平为 1 2 2 4 μgSTXEq/1 0 0 g。紫贻贝内脏中的毒素含量远远高于肌肉 ,内脏中PSP毒素占贝体内PSP毒素总量的 97 5%。在 8天的排出实验阶段 ,贝体内的PSP毒素总量呈下降趋势 ,实验结束时 ,PSP毒素共排除了约 50 % ,每天排除率约为 9%。

不同氮源对微小亚历山大藻生长和毒素产生的影响

通过尿素、氯化铵、酵母浸出粉和硝酸钠等氮源对微小亚历山大藻（Alexandrium minutum）生长及毒素产生的影响研究，分析了微小亚历山大藻对不同氮源利用状况的差异．结果表明，在氮饥饿条件下，加入硝酸钠和酵母浸出粉能显著促进微小亚历山大藻的生长；高浓度的氯化铵在加入后对微小亚历山大藻有一定的毒性效应，表现为生长停滞，但毒性效应在5d后消失，并得到与添加硝酸钠及酵母浸出粉相似的增长速率0．21d^-1；添加尿素对微小亚历山大藻的生长没有显著促进作用．在四种氮源中，尿素对微小亚历山大藻毒素产生的刺激作用也最弱，在稳定期每个细胞藻细胞毒素含量维持在6．00～8．00fmol；添加硝酸钠、氯化铵和酵母浸出粉的藻细胞在稳定期毒素含量分别达到11．85，12．86和14．64fmol．硝酸钠和氯化铵刺激藻毒素产生的效果比酵母浸出粉更为直接．四种含氮营养盐对微小亚历山大藻毒素组成的影响都很小．

不同类型含磷营养物质对微小亚历山大藻(Alexandrium minutum)生长和毒素产生的影响

采用显微镜细胞计数和麻痹性贝毒的高效液相色谱分析方法,通过对比磷酸二氢钾、磷酸甘油和三磷酸腺苷(ATP)等含磷营养物质对微小亚历山大藻生长和毒素产生的影响,研究了微小亚历山大藻对不同类型含磷营养物质的利用情况。结果表明,在磷限制条件下,加入磷酸二氢钾、磷酸甘油和ATP均能促进微小亚历山大藻的生长,所获得的最大藻细胞密度分别为22700、28400和27800藻细胞/ml,对数期生长速率分别为0.12/d、0.14/d和0.15/d,溶解态有机磷对藻生长的促进作用稍好于溶解态无机磷。三种含磷营养物质对毒素产生的效应没有明显差别,稳定期藻细胞毒素含量分别为22.87、23.98和21.80fmol/cell。磷限制对毒素组成的影响很大,磷限制条件下膝沟藻毒素GTX1/4的含量占绝对优势,GTX2/3含量很少。在添加含磷营养物质后,GTX1/4所占比例降低,GTX2/3比例增加,说明磷限制显著改变了微小亚历山大藻的毒素组成。对藻体碱性磷酸酶活性分析的结果显示,磷限制组具有最高的碱性磷酸酶活性,添加有机磷化合物实验组的碱性磷酸酶活性显著高于添加无机磷化合物的实验组。研究结果表明,微小亚历山大藻可以利用实验中采用的无机磷化合物和有机磷化合物,但其利用溶解态有机磷化合物的机制尚不清楚,可能是通过诱导合成碱性磷酸酶来水解培养基中的溶解态含磷有机物,从而释放无机磷酸盐用于藻细胞的生长。

塔玛亚历山大藻对鲈鱼幼鱼毒性效应研究

塔玛亚历山大藻 (Alexandriumtamarense) (ATHK)藻液能对鲈鱼 (Lateolabraxjaponicus)幼鱼 (2 5cm)的存活有明显的影响 ,96h的半致死浓度为 4 0 0 0cells mL .根据该藻PSP产毒量 37 4 8fmol cell (毒性为 11pg (STXeq) cell)计算 ,鲈鱼幼鱼的 96h半致死藻毒素浓度相当于 14 9 92fmol L (毒性为 4 4pg (STXeq) L) .通过对塔玛亚历山大藻藻液各组分 (都相当于 80 0 0cells mL) :藻细胞悬浮液、去藻过滤液、细胞内容物以及细胞碎片的毒性大小比较研究 ,发现藻细胞的毒性作用很强 ,与藻液相近 ,细胞内容物也有显著影响 ,其他组分无显著的毒性作用 ,结果表明幼鱼摄入PSP毒素是幼鱼致死的原因 .较大的幼鱼(12cm)对有毒藻不敏感 ,暴露在 10 0 0 0cells mL 10d后 ,存活率为 10 0 % .

赤潮异弯藻对中国对虾感染白斑综合症病毒的影响

1 引言 白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是近年来危害我国乃至世界对虾养殖业的主要流行病原[1-4].WSSV病毒暴发流行范围广、致病性强,自出现以来给对虾养殖业造成了巨大的损失.对虾病毒病的发生是对虾自身的健康状况、病原生物。

塔玛亚历山大藻和赤潮异弯藻对黑褐新糠虾和卤虫的急性毒性作用

以黑褐新糠虾和卤虫为实验材料,研究了两种典型有毒有害赤潮藻,塔玛亚历山大藻和赤潮异弯藻的毒性.结果表明塔玛亚历山大藻和赤潮异弯藻都能影响糠虾的存活,在96h内塔玛亚历山大藻和赤潮异弯藻对糠虾的半致死浓度分别约为7000和450000个/cm3;在24h内塔玛亚历山大藻和赤潮异弯藻对卤虫存活没有显著影响,而赤潮异弯藻能对卤虫的活力产生强烈的抑制作用,0 1,1 5,5和24h的半抑制浓度分别为15000,7500,4500,3000个/cm3,但在赤潮异弯藻较低浓度为3000个/cm3时,经过48h卤虫的运动能力能够恢复到正常水平.结果表明,这两种有害藻对同一种生物的毒性大小存在差异,而这两种甲壳类生物对同一种有害藻的反应也不相同.

三苯基氯化锡对黑褐新糠虾的毒性效应

于 1 992年 7月在青岛胶州湾西岸采集黑褐新糠虾 ,经实验室常年培养驯化后作为实验材料 ,研究了三苯基氯化锡 (TPTC)的急性毒性效应及其对糠虾繁殖、生殖周期和种群的慢性毒性影响。结果表明 ,在急性毒性实验中 ,TPTC对糠虾的半致死浓度为 2 5× 1 0 - 9g/L( 2 4hLC50 )和 1 5× 1 0 - 9g/L( 4 8hLC50 ) ;慢性毒性实验结果表明 ,TPTC能影响糠虾种群的世代繁殖 ,2× 1 0 - 9g/L的TPTC能使糠虾首次生育的年龄延迟 3d ,产幼总数比对照组减少80 %以上 ,1× 1 0 - 9— 2× 1 0 - 9g/L的TPTC能导致糠虾生殖周期延长 3— 4d ,在生殖期内的死亡率上升 30 %— 55% ,暴露于 0 2 5× 1 0 - 9— 2 0 0× 1 0 - 9g/LTPTC中的糠虾其子代的在 6× 1 0 - 9g/LTPTC中存活能力下降。可以认为 ,1× 1 0 - 9g/L的TPTC可导致糠虾种群的衰亡。

中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)血细胞中一氧化氮合成酶的鉴定及其在白斑综合症病毒感染过程中的变化

诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)在生物机体免疫 ,特别在无脊椎动物免疫中的作用近来得到了广泛的关注 ,由其催化产生的一氧化氮 (NO)除具有已知的神经传导、松弛平滑肌等功能外 ,还具有抗菌、抗病毒、抗寄生虫等作用。作者通过硝基四氮唑蓝 (NBT)法和血细胞形态观察等方法 ,对中国明对虾 (Fenneropenaeuschinensis)血细胞中存在的诱导型一氧化氮合成酶进行了初步鉴定。在此基础上 ,通过亚硝酸盐法和L 瓜氨酸法对比 ,研究了感染白斑综合症病毒 (WSSV)后中国明对虾血细胞中一氧化氮合成酶的变化情况。结果显示 ,中国明对虾在感染WSSV后 ,iNOS活性在 1 2h内有上升趋势 ,实验 36h后酶活性显著下降 ,至 60h后酶活性降至对照组的一半左右。同时 ,被脂多糖 (LPS)诱导的一氧化氮合成酶活性与对照相比也有显著下降。与此对应的是 ,核酸探针斑点杂交法检测病毒的结果显示 :实验 36h后在对虾体内能够检测到白斑综合症病毒。对照组中国明对虾血细胞的iNOS在实验过程中基本保持稳定。这说明WSSV在感染中国明对虾初期可以诱导血细胞产生iNOS ,但随着WSSV在中国明对虾体内的大量增殖及其对血细胞的破坏 ,使得iNOS活性显著降低 ,对虾也趋于死亡。因此 。

赤潮藻毒素研究进展

本文简单介绍了几类主要的赤潮藻毒素，包括麻痹性贝毒毒素，腹泻性贝毒毒素，记忆缺失性贝毒毒素，神经性贝毒毒素以及西加鱼毒素的来源，结构和作用机制。并对一些毒素的应用前景做了介绍。

赤潮的生物毒性评价初步研究——生物毒性测试方法在一次胶州湾赤潮中的应用

在 2 0 0 0 0 7 2 5～ 30发生于青岛胶州湾 ,面积约 10km2 的赤潮过程中 ,于 2 0 0 0 0 7 2 6和 2 7日分别采集赤潮现场海水 ,以三种标准毒性实验生物黑褐新糠虾 (Neomysisawatschensis) ,卤虫 (Artemiasalina)和ICR品系小白鼠为实验动物 ,对胶州湾这次赤潮进行了初步的毒性研究。结果表明 :现场采集的赤潮海水和实验室经f/ 2培养后的藻液对卤虫有急性毒性作用 ,2 4h卤虫幼体的存活率分别为 83 %和 73 % ,对小白鼠的毒性均在相当于STX 0 .87～ 1.8μg/L的范围内 ,而对糠虾没有明显影响。本文同时分析了赤潮现场海水中的藻类组成与数量 ,探讨了此次赤潮的毒性来源和致毒机制 ,提出了对赤潮进行生物毒性评价的观点 。

三苯基氯化锡(TPTC)对孔石莼光合作用及生长的影响

于 1 995年 5月在青岛太平角采集孔石莼 ,研究了三苯基氯化锡 (TPTC)对其光合、呼吸、色素含量及生长的影响。结果表明 ,低浓度的TPTC(≤ 2 μg/L)对光合过程无明显作用 ,高浓度的TPTC( >2 μg/L)能抑制光合作用 ,当TPTC浓度达到 1 6μg/L时 ,光合过程基本停止 ,TPTC对光合作用的半数效应浓度为 96hEC50 =7.39μg/L。低浓度的TPTC就能够使呼吸速率加快 ,但TPTC浓度达到 8μg/L后 ,呼吸速率开始下降。 1 μg/L的TPTC能促进叶绿素a的合成 ,当TPTC浓度在 2 μg/L以上时 ,叶绿素a含量下降 ,TPTC对叶绿素a含量的半数效应浓度为 96hEC50 =1 2 .99μg/L。TPTC能抑制藻片的生长 ,其对藻片半径增长和藻体生物量增加的半数效应浓度为 96hEC50 =4.0 1 μg/L和 1 0 .1 1 μg/L。

塔玛亚历山大藻对栉孔扇贝胚胎和早期幼虫的影响

塔玛亚历山大藻Alexandriumtamarense(藻株ATHK)能抑制栉孔扇贝Chlamysfarreri受精卵的孵化和早期D型幼虫的存活 .实验发现 ,暴露于密度为 10 0和 5 0 0cells mL的塔玛亚历山大藻中 ,36h后 ,扇贝受精卵的孵化率分别为对照组的 30 %和5 % .在实验范围内 ,三角褐指藻和赤潮异弯藻对受精卵孵化无影响 ,而另一塔玛亚历山大藻藻株ATCI0 2对受精卵孵化有显著影响 .指数生长前期时的藻对受精卵的毒性最大 .原肠期之前各阶段的胚胎对塔玛亚历山大藻毒性最敏感 .在密度为 30 0 0cells mL以上的塔玛亚历山大藻中 ,早期D型幼虫存活和活力开始显著下降 ,在密度为 5 0 0 0cells mL藻中暴露 2 0d或 10 0 0 0cells mL藻中暴露 14d后 ,D型幼虫的存活率为 0 .

塔玛亚历山大藻对海产双壳类生命活动的影响

通过一种重要有毒赤潮藻———产麻痹性贝毒毒素PSP的塔玛亚历山大藻对几种海产双壳类主要发育阶段:受精卵、D形幼虫、眼点幼虫、稚贝、仔贝和成贝生命活动的影响研究,发现该藻对双壳类孵化率、存活率、运动能力、滤食率和生长都有影响,毒性效应与藻密度有明显的相关关系.该藻对受精卵的抑制作用在100个/cm3的密度下最显著,36h后孵化率仅为对照组的30%.进一步的逐项毒性筛选实验表明此毒性来源于藻液、藻细胞和细胞碎片,而与去藻过滤液、藻细胞内容物、标准毒素STX无关,由此可以证实塔玛亚历山大藻确能产生一类非PSP毒素,并与细胞表面的未知毒素相关.

渤海裸甲藻和链状亚历山大藻的麻痹性贝毒毒素分析

目的:分析渤海裸甲藻(Gymnodinium sp.)和链状亚历山大藻(Alexandrium catenella)的麻痹性贝毒毒素,为渤海天津海域的赤潮研究积累基础数据。方法:通过实验室培养裸甲藻和链状亚历山大藻,选取对数生长期、平台生长期的裸甲藻以及平台生长期的链状亚历山大藻,利用高效液相色谱法(HPLC)对这两种微藻进行麻痹性贝毒(PSP)毒素分析。结果:裸甲藻细胞内不含有麻痹性贝毒(PSP);链状亚历山大藻细胞内含有C毒素和GTX1-4毒素,该微藻每个细胞毒素含量约为10.81 fmol/cell。结论:裸甲藻细胞内虽不含有麻痹性贝毒(PSP),但不能排除其含有其它毒素的可能。链状亚历山大藻细胞内含有麻痹性贝毒(PSP),属于有毒微藻,需要对其进行密切监测。