两种核酶对烟草花叶病毒RNA片段的体外剪切

两种核酶对烟草花叶病毒ＲＮＡ片段的体外剪切于善谦吴政宏朱乃硕秦进赵立山章道道（复旦大学微生物系，上海２００４３３）关键词核酶，烟草花叶病毒，体外剪切核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ）是具有特殊结构的ＲＮＡ分子，表现酶解活性，对核酸的切割有顺序专一性。...

金瓜花叶病病原及其侵染来源

从上海崇明县发生花叶症状的金瓜病株上分离的病毒,系统感染金瓜、黄瓜、甜瓜、丝瓜、南瓜和冬瓜等,引起花叶和叶脉坏死,但不感染西瓜;病毒还系统感染蚕豆和绿豆而不显症状,局部感染苋色藜、茴藜和灰藜。病毒颗粒长600—700nm,直径13nm,纯化制剂的紫外吸收最大值在260nm,最小值在245nm,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现三条带。病毒可由桃蚜传播。血清学试验表明病毒与同源抗血清有反应,与西瓜花叶病毒抗血清无反应,因而认为该病毒为香甜瓜叶脉坏死病毒(MVNV)的一个分离株。田间有些野生及栽培植物带有与该病毒抗血清起反应的同类病毒,可能为病毒的初侵染源。

小鼠腹水培养液体外培养杂交瘤细胞的研究

培养动物细胞,除要提供各种氨基酸、维生素、无机盐等基本营养要素外,尚需加入一定浓度的小牛血清。血清具有提供营养、中和毒素及刺激细胞生长繁殖等作用。但血清组成复杂,还可能含有抑制细胞生长和功能的物质,同时也由于生物工程技术的发展。

中国人CTLA-4基因的PCR-SSCP和DNA序列分析

ＣＴＬＡ４是主要表达于成熟Ｔ细胞表面的蛋白分子，与Ｔ细胞参与的免疫应答负调控有关，目前有关ＣＴＬＡ４的分子生物学资料多为外国提供，为了掌握中国人ＣＴＬＡ４基因的第一手资料，我们对５０例中国人（其中２５例为正常人，２５例为类风湿性关节炎患者）的ＣＴＬＡ４基因Ｖ区进行了ＰＣＲ扩增，并对其中４例正常人进行了ＤＮＡ序列分析，结果显示中国人ＣＴＬＡ４Ｖ区的ＤＮＡ序列与国外报道有两个位点存在差异，其中第５４位密码子处中国人为ＡＴＧ（甲硫氨酸），第１１０位密码子处为ＡＣＣ（苏氨酸），进一步对正常人和类风湿性关节炎病人进行ＰＣＲＳＳＣＰ分析，结果显示在所分析的人群中不存在多态性，表明ＣＴＬＡ４分子具有高度保守性。

山东烟台小麦土传病毒病由小麦黄花叶病毒和土传小麦花叶病毒相关病毒复合侵染所致

Analysis of ISEM, SDS PAGE, Western blot, Northern blot and RT PCR indicated that the soil borne mosaic disease occurred on winter wheat in Yantai district, Shandong Province, was caused by co infection of two different viruses. The filamentous virus was identified to be wheat yellow mosaic virus (WYMV) as it had a coat protein of 33kD, which was serologically related to WYMV, wheat spindle streak mosaic virus(WSSMV) and barley yellow mosaic virus (BaYMV), but not to barley mild mosaic virus(BaMMV) and soil borne wheat mosaic virus(SBWMV). In addition, DNA fragments specifically amplified from its cDNAs template with WYMV primers were identical to those amplified from the homologous template. The rod shaped virus was identified to be a SBWMV related virus as it had a coat protein of 19 kD, which was serologically related to SBWMV and TMV, but not to WYMV, WSSMV, BaYMV, BaMMV and three monoclonal antibodies to SBWMV. Its RNA1 (7.1kb) and RNA2 (3.6 kb) were respectively hybridized by cDNA probes of RNA1(p3H5) and RNA2(pJC2G6) of SBWMV, but no DNA fragments specifically amplified from cDNA template of its RNA with primers of SBWMV RNA 1 and RNA2.

结核分枝杆菌感染诱导的人巨噬细胞细胞因子及其调控基因的差异表达谱

研究人巨噬细胞细胞因子在抗结核分枝杆菌感染免疫中的作用。利用表达谱芯片技术研究细菌感染后 ,宿主巨噬细胞基因表达情况 ,在全局表达谱分析基础上 ,重点分析细胞因子及相关基因的表达 ,并比较无毒株和临床分离有毒株在诱导细胞因子及其调控基因表达方面的差异。结果显示细菌感染影响较多细胞因子及其调控基因的表达 ,如IFN、TNF、TGF、IL系列及其受体、NF kappaB和TLR受体等 ;首次报道IL 1 9参与了抗结核分枝杆菌感染免疫。被临床株感染影响的细胞因子较无毒株广泛和丰富。细胞因子及相关基因参与了宿主细胞对感染细菌的免疫应答 ,有关细胞因子及相关基因在抗结核免疫中的作用有待进一步研究。

香石竹斑驳病毒三种脱毒方法比较

本文通过花瓣愈伤组织培养、胚珠培养以及茎尖培养与抗病毒化学药物——病毒唑处理相结合等3种方法,进行香石竹斑驳病毒的脱毒试验。用指示植物法、电子显微镜及酶联免疫吸附试验方法,对各种脱病毒处理后的试管苗进行严格的病毒检测。结果表明:(1)花瓣愈伤组织培养的脱毒率可达到78.26％;(2)胚珠培养法可以完全脱毒;(3)随着病毒唑处理时间的延长,茎尖培养的脱毒率增加,用病毒唑最佳浓度5 mg/L处理不同长度的茎尖,发现3mm以内者脱毒有效,1mm者脱毒率达80％。同时用显微免疫组织化学方法追踪检查病毒唑处理后病毒在茎夫区域的分布,发现病毒唑处理4周后,生长锥中已无病毒,仅小叶中含有病毒;5周后病毒完全脱去。讨论了香石竹3种脱病毒方法的应用以及病毒唑和组织培养相结合脱病毒的可能机理。

用单克隆抗体作芜菁花叶病毒不同分离物外壳蛋白抗原结构的比较研究

用芜菁花叶病毒辽宁分离物（ＴｕＭＶ一ＬＮ）、山东分离物（ＴｕＭＶ一ＳＤ）和榨菜分离物（ＴｕＭＶ一ＺＣ）作抗原，分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经脾细胞与ＳＰ２／Ｏ一Ａｇ１４骨髓细胞融合，共获得７个单克隆抗体分泌细胞株。为研究３个分离物的抗原差异，用胰蛋白酶消化ＴｕＭＶ的外壳蛋白（ＣＰ），分别形成４、２和１条降解带，经ＳＤＳ一１５％ＰＡＧＥ后，转移至硝酸纤维薄膜上，用３个分离物的抗血清和７种单隆抗体分别做Ｗｅｓｔｅｍ一ｂｌｏｔ，结果表明：多抗均能与降解带呈现不同程度的反应；２个单抗反应极弱或不反应；２个单抗与所有降解带反应；３个单抗与不同的降解带呈现的反应。３个ＴｕＭＶ分离物的病毒颗粒与多抗及单抗分别做ＥＬＩＳＡ，结果显示：同源抗血清与抗原的反应都高于与异源抗血清的反应，不同分离物作抗原制备的单抗有交叉反应，但与同源分离物的反应强度远远大于异源分离物。这些结果为ＴｕＭＶ分离物之间的鉴别提供了重要的抗原组成与结构信息。

大麦条纹花叶病毒单克隆抗体及抗原特性的分析

采用杂交瘤技术建立了4株分泌抗大麦条纹花叶病毒新疆株系(BSMV-Xj)单克隆抗体的细胞株,分别命名为2A_2、2B_3、7D_1、7D_7,经ELISA法测定亚类,其中单克隆抗体MA-2A_2、MA2B_3属IgG2b亚类,MA7D_1属IgG_(2a)亚类,MA7D_7属IgG_1亚类。ELISA测定MA-2A_2、MA2B_3腹水效价为10~3,MA7D_1,MA7D_7腹水效价为10~7,4种单抗与BSMV-Xj有较强的反应,而与BSMV美国株系(BSMV-Am)仅有微弱反应。BSMV-Xj经不同条件处理后,与4种单抗ELISA反应值均有不同程度的下降。

中国人共刺激信号抑制配体表达载体的构建及在大肠杆菌DH5α中的表达

目的 :构建CTLA 4基因表达载体并在大肠杆菌DH5α中表达CTLA 4蛋白。方法 :用PCR方法获得中国人CTLA 4基因第二外显子 ,构建重组表达质粒pPBCTLA ,转化大肠杆菌DH5α ,以PCR和RFLP方法筛选阳性克隆 ,以免疫印迹技术检测表达产物。结果 :阳性重组子在DH5α中经温度诱导可表达CTLA 4蛋白 ,分子量与理论值相符 (约 12kD)。进一步分析表明 ,CTLA 4蛋白主要以包涵体形式存在。Western blot结果证实 ,12kD的表达条带可与标准羊抗人CTLA 4IgG起特异反应。淋巴细胞转化实验结果表明该蛋白具有明显的免疫抑制作用。结论 :用基因工程技术获得中国人CTLA 4基因表达蛋白 ,为进一步研究CTLA 4的生物学功能及研制抗CTLA 4抗体奠定了基础。

中国人群中一个新的HLA-DRB4等位基因(DRB4*NC)的发现及比较分析

目的 :对人群进行HLA DRB的分型及多态性研究 ,发现未曾报道过的HLA DRB等位基因。方法 :用HLA DRB通用引物扩增该个体所有DRB等位基因的第二外显子 ,并对扩增产物进行克隆 ,通过双脱氧法进行DNA测序。结果 :发现一个新的HLA DRB核苷酸序列。结论 :通过与已发表的序列及Genbank已收载的序列比较 ,显示该序列属于HLA DRB4家族的新等位基因 ,我们暂时称它为DRB4 NC。该序列已被Genbank收载 (登录号为AF2 0 75 48)。

小苍兰褪绿条纹花叶病毒的分离鉴定

从表现褪绿条纹花叶症状的小苍兰(Freesia hybrida)上分离得到一种棒状病毒,能感染茄科、藜科、苋科、玄参科和葫芦科的部分植物。病毒粒子长500—575nm,直径13nm。外壳蛋白由一种分子量17500dalton的蛋白亚基组成。纯化的病毒制剂具有典型的核蛋白紫外吸收,A260/A280为1.39。稀释终点10^(-7),致死温度约为95℃,在4℃下体外保毒期大于6个月。排蚜不能传毒。病毒与PVX有血清学关系。实验表明,该病毒属于马铃薯X病毒群,不同于已报道的感染小苍兰的其它病毒。本文还讨论了小苍兰褪绿条纹花叶病毒的控制和检测问题。

7种蛇毒小肽对临床分离耐(多)药结核分枝杆菌的体外活性研究

目的 检测 7种从蛇毒分离的小肽是否对临床分离的耐药性结核分枝杆菌菌株具有活性。方法 放射性方法检测蛇毒小肽对结核分枝杆菌的最小抑制浓度 ,细菌存活计数确证放射性方法的结果。结果 7种蛇毒小肽对耐药性结核分枝杆菌菌株都有活性。其MIC值分别为 (μg·mL-1) :Opiophagushannah 5 .4 ,Najaatra 8.6 ,Bungarusfasciatus 6 .4 ,Trimeresurusste jnegri 12 .6 ,Protobothropsmucrosquamatus 11.8,Protobothropsjerdonii 7,Agksistrodonhalys 4 .2。 结论 这些结果是首次报道 。

单克隆抗体对小苍兰褪绿条纹花叶病毒及其决定簇的作用特性

采用杂交瘤技术，得到抗小苍兰褪绿色条纹花叶病毒（FCSMV）六个单克隆抗体P3、4A4，6B、，7A6，7D1和7DS。ELISA效价分别为1：1062－1：10^6。7A6攻7D1属于IgG1亚类，7D8和4A4分属IgG2a和IgG2b亚类，P3和6B1属于IgG2亚类。电镜观察单克隆抗体与病毒形成的复合物发现7D1能使病毒粒子发生严重裂断。6株单克隆抗体中P3，4A4、6B1对应于病毒外壳蛋白上的顺序决定簇。纯化的病毒外壳蛋白经酶裂解和改进的盘状电泳分离，得到八段与多克隆抗体反应的收集液。用顺序决定族的单克隆抗体检出P3对应的肽段22和4A4对应的肽段78。本文还讨论了7D1使病毒粒子发生断裂的原因和与病毒粒子表面结构的关系以及分离抗原决定族所在片段的意义。

结核分枝杆菌感染对人巨噬细胞离子通道及其调控元件转录表达的影响

为研究人巨噬细胞的离子通道及其调控元件是否参与了抗结核分枝杆菌感染免疫 ,利用表达谱芯片技术研究细菌感染后宿主巨噬细胞基因的表达情况。在全局表达谱分析的基础上 ,重点分析了离子通道及其调控元件的表达 ,并比较无毒株和临床分离有毒株在诱导离子通道及其调控元件表达方面的差异。结果表明 ,细菌感染影响离子通道及其调控元件基因的表达 ,涉及的离子通道包括钾通道、钠通道、氯通道、钙通道 ,差异表达的调控元件包括G蛋白、G蛋白偶联受体、蛋白质激酶和磷酸化酶 ;临床株感染影响的离子通道及其调控元件较无毒株广泛和丰富。这些观察结果提示 ,离子通道及其调控元件参与了宿主细胞对感染细菌的免疫应答 ,有关离子通道及其调控元件在抗结核免疫中的作用有待进一步研究。

食用真菌病毒的研究概况

食用真菌在我国栽培历史悠久,在世界许多国家也有广泛的栽培。据1984年不完全统计,世界食用菌产量约1336000吨,我国的产量可能仅次于美国而与法国的相当。1988年,我国食用菌的产量和出口量已跃居世界第一位。随着大规模生产的发展,病害问题受到人们的关注。

结核杆菌诱导人巨噬细胞肿瘤坏死因子受体相关信号传导元件的表达谱

目的 调查人巨噬细胞肿瘤坏死因子受体 (TNFR)相关信号传导元件在结核分枝杆菌入侵前后的转录水平和变化幅度。方法 利用含有 12 80 0个基因和 192 0 0个基因全长序列或部分序列的基因芯片研究结核分枝杆菌无毒株和有毒株入侵导致的人巨噬细胞U937全基因组在转录水平的表达谱变化的基础上 ,然后 ,在Northern验证的基础上 ,通过生物信息学分析TNFR相关信号传导元件的表达。结果 结核分枝杆菌无毒株入侵导致的人巨噬细胞U937中与TNFR有关的表达变化不如有毒株的明显 ,TNFR被抑制 ,与TNFR相关的下游基因的表达没有检测到。有毒株导致的变化比较明显 ,MAP激酶 ,NF kappaB ,caspase ,p5 3途径等下游元件的表达分别提高 2～ 3倍 ,内源TNF表达上升 2～ 4倍 ,TNF的转换酶disintegrin金属蛋白酶表达上升 2倍。 结论 TNFR相关的信号传导途径元件参与了宿主对细菌的免疫反应 ,这些基因在转录水平被调控。结核分枝杆菌有毒株比无毒株激发的基因表达变化大。造成这种差异的原因有待进一步分析。

寡核苷酸表达谱芯片揭示的抗结核分枝杆菌感染免疫特征

目的 研究临床分离的结核分枝杆菌菌株感染人巨噬细胞所引起的表达变化 ,寻找与其它细菌在诱导细胞表达方面的共性和特性。方法 用 192 0 0个基因的寡核苷酸芯片比较临床分离细菌感染U937前后细胞基因的表达变化 ,以生物信息学统计分析其它细菌引起宿主细胞的基因表达变化。结果 结核分枝杆菌感染导致 1395个基因 (7.2 6 % )差异表达 ,特别显著的是细胞因子、锌指蛋白、转录因子和凋亡有关因子。与沙门菌、铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌、单孢李斯特菌、百日咳菌等细菌感染引起的免疫反应具有相似之处。结论 结核分枝杆菌感染与其它细菌感染引起的免疫反应在转录水平具有共性 ,也富有特性。锌指蛋白和fibronectin受体等因子在抗结核分枝杆菌感染免疫中的作用值得深入研究。