采用邻二氮菲比色法测定Fenton反应产生的.OH,确定了最佳实验条件为pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液,Fe2+、H2O2及邻二氮菲的浓度分别为0.4 mmol/L、0.015%及0.35 mmol/L,37℃水浴加热90 m in.并用抗坏血酸及硫脲验证了方法的可靠性.在上述条...采用邻二氮菲比色法测定Fenton反应产生的.OH,确定了最佳实验条件为pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液,Fe2+、H2O2及邻二氮菲的浓度分别为0.4 mmol/L、0.015%及0.35 mmol/L,37℃水浴加热90 m in.并用抗坏血酸及硫脲验证了方法的可靠性.在上述条件下利用怀山药提取液测定了其抗羟自由基活性,结果较为满意,表明该体系可作为筛选抗氧化剂的方法之一.展开更多
目的通过研究沉默信息调节因子1(SIRT1)基因敲除对骨关节炎小鼠VEGF/AKT通路的作用,探讨骨关节炎关节软骨退变的可能机制。方法将小鼠分为两组:SIRT1^(+/+)小鼠骨关节炎模型组(A组,n=6);SIRT1^(-/-)小鼠骨关节炎模型组(B组,n=6)。荧光...目的通过研究沉默信息调节因子1(SIRT1)基因敲除对骨关节炎小鼠VEGF/AKT通路的作用,探讨骨关节炎关节软骨退变的可能机制。方法将小鼠分为两组:SIRT1^(+/+)小鼠骨关节炎模型组(A组,n=6);SIRT1^(-/-)小鼠骨关节炎模型组(B组,n=6)。荧光定量聚合酶链反应检测SIRT1基因表达情况;HE染色、番红O-固绿双染色观察膝关节软骨形态结构改变,Mankin评分评价膝关节关节软骨退变,免疫组化染色检测膝关节软骨细胞中SIRT1、VEGF和AKT蛋白水平。结果 B组SIRT1 m RNA表达量为2.24417±1.316569,明显低于A组(P<0.01)。HE染色和番红O-固绿双染色结果显示,B组膝关节关节软骨退变明显,Mankin评分分值为9.8333±1.94079分,明显高于A组(P<0.05),B组SIRT1、VEGF和AKT免疫组化染色积分分别为3.3333±1.96638、10.0000±2.44949和1.3333±1.21106,B组SIRT1蛋白表达与A组相比差异不显著(P>0.05);B组VEGF蛋白表达明显高于A组(P<0.05);B组AKT蛋白表达明显低于A组(P<0.01)。结论 SIRT1基因敲除可能通过激活VEGF/AKT通路加重骨关节炎关节软骨的退变,因此SIRT1基因可能对骨关节炎起到保护作用。展开更多
背景:沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)基因是一个与衰老关系密切的基因,可以通过调节PI3K/AKT、NF-κB等信号通路影响到组织及机体的衰老过程,并参与骨科相关疾病的发生发展。建立慢病毒介导的SIRT1基因表达...背景:沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)基因是一个与衰老关系密切的基因,可以通过调节PI3K/AKT、NF-κB等信号通路影响到组织及机体的衰老过程,并参与骨科相关疾病的发生发展。建立慢病毒介导的SIRT1基因表达降低的ATDC5细胞模型,可以为研究SIRT1基因相关的骨科系统疾病如骨关节炎、骨质疏松症等提供实验基础。目的:构建携带小鼠SIRT1基因的RNAi慢病毒载体,将其转染ATDC5细胞系,建立SIRT1基因表达降低的ATDC5细胞模型。方法:根据RNAi序列设计原则设计并合成SIRT1基因的RNAi靶点序列,连接GV248(框架结构:h U6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin)载体,转化后经阳性克隆测序及PCR鉴定,质粒抽提后导入293T细胞,包装慢病毒,取上清检测滴度。将含有小鼠SIRT1基因RNAi的病毒颗粒转染ATDC5细胞系,并于荧光显微镜下进行观察,行RT-PCR检测ATDC5细胞中SIRT1 m RNA的表达情况。结果:经测序、PCR检测可知,SIRT1基因的RNAi靶点序列与GV248载体连接成功,并包装成高滴度的慢病毒。携带小鼠SIRT1基因的RNAi慢病毒感染ATDC5细胞后,荧光显微镜下观察显示感染率较高,RT-PCR检测发现,携带SIRT1基因的慢病毒感染组SIRT1基因m RNA的相对表达量为0.386±0.117,与阴性对照病毒感染组相比有统计学差异(P<0.05),敲减效率为61.4%。结论:成功建立SIRT1基因表达降低的ATDC5细胞模型,为研究SIRT1基因相关骨科系统疾病提供实验基础。展开更多
文摘采用邻二氮菲比色法测定Fenton反应产生的.OH,确定了最佳实验条件为pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液,Fe2+、H2O2及邻二氮菲的浓度分别为0.4 mmol/L、0.015%及0.35 mmol/L,37℃水浴加热90 m in.并用抗坏血酸及硫脲验证了方法的可靠性.在上述条件下利用怀山药提取液测定了其抗羟自由基活性,结果较为满意,表明该体系可作为筛选抗氧化剂的方法之一.
文摘目的通过研究沉默信息调节因子1(SIRT1)基因敲除对骨关节炎小鼠VEGF/AKT通路的作用,探讨骨关节炎关节软骨退变的可能机制。方法将小鼠分为两组:SIRT1^(+/+)小鼠骨关节炎模型组(A组,n=6);SIRT1^(-/-)小鼠骨关节炎模型组(B组,n=6)。荧光定量聚合酶链反应检测SIRT1基因表达情况;HE染色、番红O-固绿双染色观察膝关节软骨形态结构改变,Mankin评分评价膝关节关节软骨退变,免疫组化染色检测膝关节软骨细胞中SIRT1、VEGF和AKT蛋白水平。结果 B组SIRT1 m RNA表达量为2.24417±1.316569,明显低于A组(P<0.01)。HE染色和番红O-固绿双染色结果显示,B组膝关节关节软骨退变明显,Mankin评分分值为9.8333±1.94079分,明显高于A组(P<0.05),B组SIRT1、VEGF和AKT免疫组化染色积分分别为3.3333±1.96638、10.0000±2.44949和1.3333±1.21106,B组SIRT1蛋白表达与A组相比差异不显著(P>0.05);B组VEGF蛋白表达明显高于A组(P<0.05);B组AKT蛋白表达明显低于A组(P<0.01)。结论 SIRT1基因敲除可能通过激活VEGF/AKT通路加重骨关节炎关节软骨的退变,因此SIRT1基因可能对骨关节炎起到保护作用。
文摘背景:沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)基因是一个与衰老关系密切的基因,可以通过调节PI3K/AKT、NF-κB等信号通路影响到组织及机体的衰老过程,并参与骨科相关疾病的发生发展。建立慢病毒介导的SIRT1基因表达降低的ATDC5细胞模型,可以为研究SIRT1基因相关的骨科系统疾病如骨关节炎、骨质疏松症等提供实验基础。目的:构建携带小鼠SIRT1基因的RNAi慢病毒载体,将其转染ATDC5细胞系,建立SIRT1基因表达降低的ATDC5细胞模型。方法:根据RNAi序列设计原则设计并合成SIRT1基因的RNAi靶点序列,连接GV248(框架结构:h U6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin)载体,转化后经阳性克隆测序及PCR鉴定,质粒抽提后导入293T细胞,包装慢病毒,取上清检测滴度。将含有小鼠SIRT1基因RNAi的病毒颗粒转染ATDC5细胞系,并于荧光显微镜下进行观察,行RT-PCR检测ATDC5细胞中SIRT1 m RNA的表达情况。结果:经测序、PCR检测可知,SIRT1基因的RNAi靶点序列与GV248载体连接成功,并包装成高滴度的慢病毒。携带小鼠SIRT1基因的RNAi慢病毒感染ATDC5细胞后,荧光显微镜下观察显示感染率较高,RT-PCR检测发现,携带SIRT1基因的慢病毒感染组SIRT1基因m RNA的相对表达量为0.386±0.117,与阴性对照病毒感染组相比有统计学差异(P<0.05),敲减效率为61.4%。结论:成功建立SIRT1基因表达降低的ATDC5细胞模型,为研究SIRT1基因相关骨科系统疾病提供实验基础。