白细胞介素4基因转移的肿瘤细胞体外生物学特性及体内致瘤性的研究

观察了白细胞介素４（ＩＬ－４）基因转移的肿瘤细胞体内致瘤性的变化。构建了含５００ｂｐ的小鼠ＩＬ－４ｃＤＮＡ的真核表达载体ＢＭＧＮｅｏ－ＩＬ－４．用该表达载体将ＩＬ－４基因转移至小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞，通过Ｇ４１８抗性筛选、有限稀释法及ＩＬ－４活性检测，获得了高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞克隆株并经Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹鉴定，将其接种于小鼠皮下后观察到肿瘤生长缓慢、小鼠存活期延长，表明高分泌ＩＬ－４的细胞克隆株体内致瘤性显著下降。该结果为进一步研究肿瘤的ＩＬ－４基因治疗打下了基础。

调节性T细胞在肿瘤免疫和肿瘤免疫治疗中的作用

肿瘤局部存在多种类型的免疫抑制性细胞,其中调节性T细胞(regulatoryT cell,Treg)在肿瘤的发生、发展过程中发挥着极为重要的作用。Treg通过多种机制抑制免疫效应细胞的功能,是肿瘤免疫逃逸的关键因素。这些机制包括分泌抑制性细胞因子抑制效应细胞功能、分泌颗粒酶和穿孔素杀伤效应细胞、干扰效应细胞的代谢功能,以及通过调控树突状细胞影响Treg的分化和增殖,等等。Treg的深入研究为肿瘤免疫治疗提供了新的思路,以Treg及相关免疫抑制性分子作为靶点,通过特异性或非特异性清除Treg、控制Treg的数量和功能等开展肿瘤免疫治疗具有良好的临床应用前景。

联合应用成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法及IL-2基因疗法对肿瘤的治疗作用

本研究探讨了成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法联合应用IL-2基因疗法及时对小鼠Ⅰ期肾癌的治疗作用。经NIH3T3-IL-2基因疗法、NIH3T3-G-CSF基因疗法单独治疗后的荷瘤小鼠存活期明显延长,而经以上两者联合治疗后的荷瘤小鼠存活期的延长更为明显,且有75％荷瘤小鼠长期存活。对经G-CSF基因疗法及IL-2基因疗法联合治疗后的荷瘤小鼠体内抗肿瘤免疫功能的检测表明,经治疗后第14天,荷瘤小鼠脾脏明显增大,脾脏淋巴细胞数量明显增多;肿瘤局部的常规病理检查可见数量较多的嗜酸性粒细胞浸润。荷瘤小鼠脾细胞NK活性、经诱导后的LAK活性及CTL杀伤活性均明显升高,小鼠腹腔巨噬细胞杀伤活性在NIH3T3-IL-2基因疗法治疗组升高,而在NIH3T3-G-CSF基因疗法组未见明显升高。以上结果表明,联合应用成纤维细胞介导的G-CSF基因疗法与IL-2基因疗法可因对小鼠体内抗肿瘤免疫功能的联合增强作用而取得更佳的抗肿瘤效果。

白细胞介素4基因转移的肿瘤细胞体内诱导杀伤细胞活性及细胞因子产生的实验研究

观察了小鼠接种高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞后体内免疫效应细胞（包括ＣＴＬ、ＮＫ细胞及ＬＡＫ细胞）抗肿瘤活性及其分泌的细胞因子（包括ＩＬ－２、ＩＦＮ－ｒ、ＴＮＦ及ＧＭ－ＣＳＦ）水平的变化，荷瘤后第１５天小鼠脾细胞ＮＫ活性及经诱导后的ＬＡＫ活性有所降低，而经诱导后的ＣＴＬ杀伤活性显著升高，荷瘤小鼠腹腔内巨噬细胞杀伤活性及其分泌的ＩＬ－１水平也明显升高；在荷瘤后第４天及第１２天出现两个高峰，实验结果表明，高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞体内生长受抑制是因为ＩＬ－４基因的导入及ＩＬ－４的分泌使体内ＣＴＬ及巨噬细胞杀伤活性提高，因而使机体抗肿瘤免疫功能得以增强。

树突状细胞与免疫激活和免疫耐受

树突状细胞 (DC)在诱导 T细胞活化或耐受的过程中发挥了十分重要的作用 ,其摄取的外源性抗原多通过 MHC- 类途径呈递给 CD4 + T细胞 ,也能通过 MHC- 类途径呈递内化的外源性抗原。 DC能打破机体对多种抗原的免疫耐受 ,也在机体对某些抗原免疫耐受的建立过程中发挥了重要作用。此外 ,DC的作用还与 DC的亚群、DC的成熟程度有关。在 DC对 T细胞功能调控的过程中 ,T细胞对

重组腺病毒介导的细胞因子基因疗法的实验研究

IL-4是一种较强的巨噬细胞激活因子。将IL-4基因转染巨噬细胞可使其表达较高水平的IL-4并可使其抗肿瘤活性明显增强。M-CSF在体外能促进单核／巨噬细胞的生长。研究表明，重组IL-4及M-CSF在体外具有协同维持巨噬细胞生长的作用。因此，将IL-4基因及M-CSF基因同时转移至巨噬细胞，将有可能对其抗肿瘤活性产生一定的影响。

成纤维细胞介导的IL-2及IL-6基因疗法增强常规瘤苗抗肿瘤作用的实验研究

研究表明，IL-2、IL-6单独或联合应用具有较强的抗肿瘤作用，但当大剂量使用时，却伴随着一系列毒副作用的发生，IL-6相对其它细胞因子具有毒性小功能广泛等优点，它能刺激T细胞的分化与增殖、诱导IL-2及IL-2R的表达，IL-2在免疫反应过程中也发挥了重要调节作用．其作用之一是能刺激杀伤性T细胞的增殖并增强其杀伤活性。

白细胞介素4基因转移的肿瘤细胞体内增强巨噬细胞功能的实验研究

观察了小鼠接种高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞后腹腔内巨噬细胞功能的变化。荷瘤小鼠腹腔内巨噬细胞杀伤性在荷瘤后第４天及第１２天出现两个高峰；荷瘤后第１５天小鼠腹腔内巨噬细胞的吞噬能力及ＭＨＣⅡ类抗原的表达增强，抗原提呈能力增高；荷瘤后第４天及第１２天腹腔内巨噬细胞经诱导的ＩＬ－１水平出现两个高峰，经诱导的ＴＮＦ水平变化不明显。此实验结果表明，高分泌ＩＬ－４的黑色素瘤细胞体内生长受抑制的原因之一是ＩＬ－４基因的导入及ＩＬ－４的分泌使体内巨噬细胞的抗原提呈能力增强及杀伤活性的显著提高，因而使机体抗肿瘤免疫功能得以增强。

肿瘤免疫学研究某些新进展

近年来，随着免疫学基础理论研究的迅速发展，尤其是对人类肿瘤抗原的确认及ＭＨＣⅠ类分子参与的抗原加工和提呈分子机制等的深入研究，肿瘤免疫学基础理论研究以及相应的肿瘤免疫治疗研究均取得了较大进展。由于肿瘤免疫的进展太快且内容十分丰富，本文仅对肿瘤免疫学领...

肿瘤的抑癌基因治疗研究进展

近年来由于抑癌基因在肿瘤的发生发展过程中所发挥的特殊作用而使肿瘤的抑癌基因疗法研究取得了相当的进展,在目前已分离克隆的抑癌基因中,对Rb,WTp53,nm23等基因在肿瘤治疗方面的作用研究最为深入,而新近发现的MTS基因则显示了良好的临床应用前景。恢复视网膜母细胞瘤、小细胞肺癌等肿瘤细胞中Rb基因的表达对于这类肿瘤的治疗具有一定的临床治疗价值;利用反义核酸阻断或以正常的野生型p53基因替换肿瘤细胞中突变的p53基因是p53基因疗法最基本的应用策略;作为一种与肿瘤转移关系最为密切的肿瘤抑制基因,恢复肿瘤细胞中nm23基因的表达对于防止该肿瘤的转移具有一定的临床应用价值。

肿瘤的共刺激分子基因疗法研究进展

T细胞抗肿瘤作用的激活需要传统的特异的抗原提呈信号外,还需非抗原特异的、非MHC限制的共刺激信号;介导共刺激作用的共刺激分子有多种,最重要的是B7分子;B7基因转染的肿瘤细胞在体内外能诱导机体产生较强大的抗肿瘤免疫反应,利用共刺激机制所开展的肿瘤基因治疗的研究即肿瘤的共刺激分子基因疗法的研究取得了飞速发展,显示出良好的临床应用前景。

IL-4抗肿瘤作用及其机理的研究进展

作为一种具有重要免疫调节功能的细胞因子,IL-4对多种肿瘤细胞有较强的抑制和杀伤作用.体内外实验表明,这一效应的发挥是通过多途径的综合机制进行的,但以调动机体的细胞免疫机制为主.目前IL-4和毒素蛋白的融合蛋白对肿瘤的靶向杀伤及IL-4基因转移后的抗肿瘤作用已引起人们的注意和重视.尽管临床应用IL-4后存在一定副作用,但它仍具有很大的潜在应用价值.

树突状细胞分化发育的研究进展

DC 的来源和分化发育所处的阶段与其功能有非常密切的关系,未成熟的 DC 能摄取和加工处理抗原,处于成熟期的 DC 则能提呈抗原并活化处女型 T 细胞(Naive T cells)。来源于髓系的 DC 前体可发育为 LC,再进一步发育为成熟的 DC,也可先发育为 Mo 再进一步发育为成熟的DC。髓系 DC 的主要功能为加工处理和提呈外源性抗原(包括自身细胞衰老、突变等产生的抗原)。目前用于体外研究的髓系 DC 常来源于小鼠骨髓和脾脏、人 CD34^+干细胞及人 Mo,来源于淋巴系的 DC 主要参与中枢和外周免疫耐受,目前常用于体外研究的淋巴系 DC 主要为胸腺内 DC。体内外这两类来源的 DC 分化发育和成熟需要不同的刺激信号。

人外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定

树突状细胞(DC)作为抗原提呈细胞,在激发T细胞免疫应答及T细胞依赖性抗体生成中起重要作用,骨髓及外周血的CD34造血前体细胞在GM-CSF和TNF-α的作用下,可在体外分化发育,生成树突状细胞.本研究从正常人外周血分离获得单核细胞,加入100ng/ml hGM-CSF、500U/ml hIL-4,体外培养1周后,获得大量高纯度的树突状细胞,其高表达MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子及共刺激分子B7-1和CD40,能强烈激发同种异体T淋巴细胞增殖,培养条件以应用自体血清或胎牛血清为最佳;单独应用hGM-CSF只能生成巨噬细胞;在培养末期加入TNFα可促进DC进一步成熟.本研究为DC的深入研究与临床应用奠定了基础.

bcl-2,bax与肿瘤细胞凋亡

在肿瘤发生和发展过程中 ,细胞不仅发生了异常增殖 ,更重要的是其发生凋亡的能力和倾向降低了。bcl 2家族在细胞凋亡调控中有重要的作用 ,是目前细胞凋亡研究的热点之一。bcl 2家族分为抑制凋亡和促进凋亡蛋白两大类。bcl 2和bax分别是Bcl 2家族中最主要的抑制凋亡和促进凋亡蛋白。在多数肿瘤中 ,bcl 2表达水平升高 ,而bax表达下降。上调bcl 2或下调bax能抑制多种因素诱导的多种肿瘤细胞凋亡。反之 ,下调bcl 2或上调bax则促进多种肿瘤细胞凋亡。肿瘤的bcl 2 /bax表达比例与其发生和发展密切相关。作者综述了bcl 2和bax与肿瘤发生的关系、在肿瘤中的表达情况及其对肿瘤细胞凋亡的调控研究现状 ,探讨了存在的问题和对策。

肿瘤细胞培养上清对小鼠骨髓来源的树突状细胞分化发育的影响

目的 :探讨肿瘤细胞对树突状细胞 (dendriticcells ,DC)分化发育的影响。方法 :在诱导小鼠骨髓DC发育的过程中 ,加入肿瘤细胞培养上清 ,观察DC生成情况 ,并与正常培养条件下的DC比较共刺激分子、Ⅱ类分子、黏附分子的表达 ,刺激同种T细胞增殖 ,以及抗原提呈功能水平。通过ELISA法检测肿瘤细胞分泌的细胞因子。结果 :经小鼠黑色素细胞瘤B16和肺癌细胞 3LL的分泌上清培养后 ,DC表达共刺激分子CD4 0 ,CD86,CD80 ,和黏附分子CD5 4的水平下降 ;分泌Th1细胞因子IL 12的水平也降低 ;并且DC的抗原提呈功能和刺激同种混合淋巴细胞反应的功能下降。上述肿瘤细胞均可分泌抑制性细胞因子IL 10。结论 :在肿瘤组织的微环境中存在免疫抑制性因子 。

IL-2基因修饰对树突状细胞表达细胞因子的影响

目的：观察用白细胞介素 ２（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－２，ＩＬ－２）基因修饰小鼠骨髓来源的树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｃ ｃｅｌｌｓ， ＤＣ）后，ＤＣ表达细胞因子和趋化因子的变化及ＤＣ体内免疫后，小鼠体内主要脏器中ＩＬ－２表达情况。探讨其对抗原提呈微环境的改善及其可能的机制。方法：用ＥＩＪＳＡ方法检测ＤＣ培养上清和小鼠血清及脏器中ＩＬ－２的含量，用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ＤＣ中ＩＬ－２，ＩＦＮ－γ，ＩＬ－１２，ＧＭ－ＣＳＦ，ＩＬ－４，ＩＬ－１０，ＴＮＦ－α，ＩＬ－１－β，ＭＩＰ－１β，ＭＣＰ－１，ＲＡＮＴＥＳ和ＩＰ１０等的表达，用ＦＡＣＳ分析ＤＣ表面ＩＬ－２受体的变化。结果：经ＩＬ－２基因修饰后，ＤＣ除了分泌高水平的ＩＬ－２外，尚能分泌一定水平的ＩＦＮ－γ和ＩＬ－１２，其表面表达的ＩＬ－２Ｒα密度增加。ＲＴ－ＰＣＲ分析表明其表达多种细胞因子和趋化因子，用ＩＬ－２基因修饰的ＤＣ免疫小鼠后，血清和脏器中能检测到高水平的ＩＬ－２。结论：ＩＬ－２基因修饰ＤＣ，能促进ＤＣ表达ＩＬ－２受体，并以自分泌形式分泌高水平的ＩＬＺ，优化其抗原提呈的微环境，提示可增强ＤＣ的抗原提呈功能。

他克莫司对角质形成细胞生长的抑制作用及其机制

为观察他克莫司对角质形成细胞表面表达趋化因子受体CXCR2的影响,探讨其在治疗银屑病中的作用机制,在不同时间段内用不同浓度的他克莫司处理人类角质形成细胞株HACAT,通过MTT法检测了他克莫司抑制HACAT增殖的有效剂量及时间;通过流式细胞术(FACS)分析他克莫司处理的HACAT表达CXCR2的情况。结果显示,HACAT经他克莫司在39ng/mL～5000ng/mL浓度范围内处理24h后的OD值较未处理组降低,但不具有统计学意义(P>0.05);经他克莫司处理48h的细胞OD值较未处理组明显降低(P<0.05),各浓度之间无显著差异(P>0.05);HACAT在39ng/mL他克莫司处理48h后CXCR2的表达明显低于正常对照组。结果说明,他克莫司治疗银屑病的作用机制部分是通过抑制角质形成细胞表达CXCR2,从而达到抑制角质形成细胞增殖的目的。

重组腺病毒介导IFN-γ基因转染的巨噬细胞的体外免疫效应功能分析

巨噬细胞既是免疫效应细胞又是抗原提呈细胞，为研究ＩＦＮ－γ基因转染的巨噬细胞过继回输疗法，以重组腺病毒为载体将小鼠ＩＦＮ－γｃＤＮＡ转染入小鼠腹腔巨噬细胞，观察了对其体外免疫功能的影响，结果表明，ＩＦＮ－γ基因转染１８ｈ后巨噬细胞上清中存在高水平ＩＦＮ－γ，ＩＦＮ－γ基因转染的巨噬细胞杀伤活性显著增高，其分泌ＴＮＦ、ＩＬ－１、ＮＯ的水平均有不同程度的升高，表明重组腺病毒载体能将ＩＦＮ－γ基因成功地转染入巨噬细胞并增强巨噬细胞免疫效应功能。

白细胞介素18基因修饰的树突状细胞的表型分析及其免疫刺激活性

目的:研究IL-18基因修饰后的树突状细胞(DC)的表型和功能的变化.方法:以含IL-18基因的重组腺病毒体外转染小鼠骨髓来源的DC,RLIDS检测IL-18分泌水平,以RT-PCR检测IL-18mRNA表达,以FACS法分析其DC表型变化,采用TdR检测其MLR的变化.结果:IL-18基因修饰的DC有效分泌IL-18,可检测到IL-18mnRNA的表达,分泌上清具有诱导T细胞产生IFN-γ的作用,IL-18基因修饰的DC同种异体MLR明显增强,且仅能被IL-18抗体部分阻断,表型分析表明,IL-18基因修饰后的Ia,B7.2,ICAM-1太阳性的DC的比例明显增加.结论:IL-18基因修饰的DC可有效表达有功能的IL-18,部分表面分子表达上调,刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力的提高,提示其抗原提星功能增强.