Msx2条件性基因敲除小鼠动物模型的建立和表型的初步研究

目的利用Cre/LoxP系统建立晶状体组织特异性Msx2基因敲除小鼠模型,并初步研究其表型。方法设计基因敲除方案,获得条件基因敲除小鼠Msx2cko和对照野生型小鼠Msx2wt。通过PCR技术对小鼠或E10.5和E14.5胚鼠进行基因型鉴定,通过整胚LacZ染色鉴定Le-Cre重组酶活性,同时通过对P1小鼠晶状体组织行HE染色进行初步表型观察。结果通过基因型检测证实了Msx2基因敲除小鼠模型建立成功,LacZ染色显示Le-Cre重组酶特异性表达在发育中的小鼠胚胎形成晶状体板的表面外胚叶特定区域。Msx2cko P21小鼠表现为小眼球畸形,眼周至鼻线性脱毛。HE染色显示Msx2cko小鼠晶状体体积减小及晶状体茎形成。结论初步建立了Msx2条件性基因敲除小鼠模型,Msx2条件基因敲除后引起小鼠晶状体发育异常,小眼球畸形。

3种小鼠晶状体组织石蜡切片固定液的比较

目的比较3种固定液对小鼠晶状体组织石蜡切片的影响,优化小鼠晶状体组织石蜡切片固定方法。方法选取3种常用固定液(改良Davison’s固定液、传统Davison’s固定液和10%中性甲醛固定液),固定小鼠晶状体组织,并制成石蜡切片,经HE染色后在显微镜下观察。结果传统Davison’s固定液固定的晶状体组织切片无碎裂,改良Davison’s固定液固定的晶状体组织中央区碎裂。改良Davison’s固定液和传统Davison’s固定液固定的小鼠眼球外形均无明显变形和收缩,未见明显的视网膜脱离,镜下视网膜组织结构完整清晰,各层细胞排列紧密,无明显裂隙,染色鲜艳。采用10%中性甲醛固定液固定的小鼠眼球壁组织发生严重皱缩,晶状体组织皱缩,空隙和空泡形成。结论传统Davison’s固定液固定的小鼠眼球晶状体组织石蜡切片质量效果优于改良Davison’s固定液和10%中性甲醛固定液。

白内障术后眼内炎的危险因素及临床分析

目的探讨白内障术后眼内炎的危险因素和临床表现及玻璃体切割术治疗术后眼内炎的预后。方法收集白内障术后6周内发生眼内炎并于我院行玻璃体切割术的患者25例。将全部患者依据白内障术前既往史中危险因素的有无,分为伴有危险因素组(A组)和不伴有危险因素组(B组),回顾性分析两组的临床表现及预后。结果两组的病原菌检出率分别为A组60%,B组66%。最终视力1.0以上的比例两组分别为10%和46%,A组显著低于B组(P<0.05)。A组的病原菌以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和肠球菌居多。两组均有约70%的角膜切口出现术后切口闭合不全,且未被结膜覆盖的切口在A组中显著增多(P<0.05)。结论伴有危险因素的白内障术后眼内炎患者的视力预后不良,对此类患者行白内障手术时必须谨慎选择并制作切口。

中低度近视青少年角膜塑形术后屈光不正的生存质量量表分析

目的对中低度近视青少年在角膜塑形术后屈光不正的生存质量量表进行调查分析。方法对就诊于中国医科大学附属第四医院眼科验配角膜塑形镜矫正近视(中低度)的青少年进行问卷调查。共分发100份中文版屈光不正的生存质量量表,对完整完成的85份量表进行整理和统计分析,比较中低度近视青少年角膜塑形术后各条目的得分差异,采用配对t检验对数据进行分析。结果 85名青少年近视患者角膜塑形术前及术后6个月生活质量评分分别为(39.61±5.62)分和(22.07±2.35)分。角膜塑形术后生存质量明显提高,差异有统计学意义(P<0.05)。量表24项条目中,有19项条目的角膜塑形术后6个月得分较角膜塑形术前有改善,其中14项差异有统计学意义(P<0.05)。结论角膜塑形术后,中低度近视青少年患者生存质量有所提高。

眩光的共识及新进展

早期白内障患者,视力还没有受到影响,但常有眼前光幕遮档,夜间驾驶困难等主诉,究其原因,可能是视功能的一项指标——散射光值出现了改变,因此伴随眩光的主诉。白内障术后人工晶状体眼的患者,有可能主诉视野中出现光圈、光晕、闪光、亮点等,这也是眩光幻影所致。眩光是指视野中干扰光源的存在导致视力的减退,换句话说,就是由于散射光的存在导致视网膜成像对比敏感度的减退。本文就眩光研究目前取得的共识与近期的新进展展开论述,并针对眩光的影响因素提出相应的解决方法,为进一步的研究提供线索。

选择性激光小梁成形术治疗激素性青光眼的疗效观察

目的:观察选择性激光小梁成形术(SLT)治疗激素性青光眼的临床疗效。方法:对全身激素用药引起的激素性青光眼8例8眼进行房角全周SLT,其中男5例,女3例,年龄55～74(平均65)岁。激素的持续用药时间为11.5±3.3a,给药开始6.2±2.9a后眼压开始上升,使用2.9±0.5种类的抗青光眼药局部点眼。SLT术后继续点眼治疗和激素口服。结果:平均眼压术前为26.8±5.1mmHg,SLT术后1mo为20.2±3.2mmHg,术后3mo为17.6±2.2mmHg,术后6mo为16.1±1.4mmHg。各时点的眼压值与术前眼压相比均有显著降低(P<0.05)。结论:SLT对于全身激素用药继发的激素性青光眼是一种安全而有效的治疗方法。

先天性鼻泪管阻塞致泪囊炎的病原菌及药敏结果分析

目的:分析小儿先天性鼻泪管闭塞所致泪囊炎的病原菌及其药敏结果,指导临床合理用药。方法:对先天性鼻泪管阻塞患儿98例110眼的泪囊分泌物进行病原菌分离培养及药物敏感试验。结果:从94眼的分泌物中共分离出155株细菌,病原菌阳性率为85.5%。其中革兰氏阳性球菌65.8%,革兰氏阴性杆菌23.9%。分离出的所有菌株对左氧氟沙星的敏感率为94.2%。结论:药敏试验表明绝大多数细菌对左氧氟沙星有较高的敏感性,对于小儿先天性鼻泪管闭塞所致泪囊炎可给予新喹诺酮类抗生素滴眼液治疗。

棘阿米巴角膜炎6例治疗分析

目的总结6例因配戴角膜接触镜(CL)引起的棘阿米巴角膜炎的临床资料,并探讨其成功治疗经验。方法回顾性分析6例棘阿米巴角膜炎的临床资料和治疗经过。结果 6例患者(平均年龄25岁)均配戴CL(1例硬性CL,5例软性CL)。其中5例以角膜剧烈疼痛为主诉就诊。4例初次眼科检查时确诊假树枝状角膜炎,2例表现为放射状角膜神经炎和环状基质混浊。所有病例进行角膜刮片培养并确诊棘阿米巴感染。5例立即开始0.02%氯己定联合抗真菌滴眼液滴眼治疗,最终矫正视力获得不同程度的提高,范围为0.5～1.5。另外1例未能及时治疗,角膜炎症状恶化,视力下降为手动,施行穿透性角膜移植+白内障手术,术后矫正视力提高到0.6。结论棘阿米巴角膜炎病例早期阶段及时应用0.02%氯己定联合抗真菌药物滴眼可提高疗效,避免不必要手术,并产生相对较好的最终视力。

大鼠视网膜标本石蜡切片的固定方法

目的探讨制备大鼠视网膜石蜡切片的固定方法。方法将大鼠眼球固定于4%多聚甲醛(PFA)和不同浓度(1%、5%、10%、20%)甲醇组成的混和固定液中并制成石蜡切片,经HE染色后在显微镜下观察。结果经4%PFA+不同浓度甲醇固定的眼球外形均无明显变形和收缩。用添加1%和5%甲醇固定液固定的标本未见明显的视网膜脱离,而用添加10%和20%甲醇固定液的眼球的周边部视网膜出现轻度脱离。显微镜下视网膜组织结构完整清晰,各层细胞排列紧密,无明显裂隙,染色鲜艳。相反,采用福尔马林固定的视网膜发生严重脱离。结论 4%PFA+甲醇的固定方法即可保持视网膜结构完整,无脱离,又能提高抗原保存性,效果优于福尔马林固定液,是适合大鼠眼球,尤其是视网膜固定的一种有效方法。

白点状眼底与视网膜色素变性共存家系的RDH5基因诊断

目的:在母亲诊断为白点状眼底(fundus albipunctatus,FA)而3个子女均为视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)的家系中进行RDH5基因的分子遗传学检查,确定一种新型变异。方法:对家系成员进行系统的眼科检查,同时采用聚合酶链反应(PCR)和DNA直接测序法对RDH5基因的编码区进行基因组测序和突变筛查,并在100名正常对照者中对RDH5基因突变的检测结果进行验证。结果:先证者的母亲确诊为FA,而3个子女诊断为RP。母亲、哥哥和姐姐的RDH5基因检测出c.689_690CT>GG突变,而先证者及其母亲存在已报道的c.928delCinsGAAG变异。结论:本家系中母亲的FA来源于复杂的异质突变,其中c.689_690CT>GG突变是包括欧美各国在内没有报道过的新变异,而3个子女患RP的分子遗传学病因还有待进一步的研究。

羊膜移植联合结膜瓣移植治疗复发性翼状胬肉的疗效观察

目的探讨不使用丝裂霉素C（MMC）的羊膜移植联合带蒂结膜瓣移植术治疗复发性翼状胬肉的临床疗效。方法选取2010年1月至2013年6月于我院行羊膜移植联合带蒂结膜瓣移植术并经半年以上随访的复发翼状胬肉患者42例42眼,年龄26~74岁,观察期6~24个月。根据病例记载,对翼状胬肉有无复发、手术前后有无眼球运动障碍和睑球粘连、手术至复发的时间、术前既往手术次数等内容进行回顾性分析。结果 42眼经长期随访观察,3级大胬肉的30眼中29眼（97%）未确认复发或复发后形成较小的胬肉,复发程度得到控制。同时,术前伴有睑球粘连和眼球运动障碍的病例术后分别有47%（17眼中8眼）和56%（25眼中14眼）得到改善。复发多见于术后6个月内,术后1年以上复发的仅有1例。在复发的8眼中有3眼（38%）需要再次手术。结论本术式未联合应用MMC,在过去反复多次手术病例的81%中有效防止了复发。即使在复发的病例中胬肉的大小也得到了很好的控制。但仍有需要再次手术的病例,本术式也有一定的局限。存在重度睑球粘连和眼球运动障碍的病例有必要考虑联合MMC的术式。另外,应在根据客观检查判断睑球粘连和眼球运动障碍程度的基础上,结合复视这一主观检查作为术式选择时的指标。

IOL-Master测量硅油眼眼轴长的精确度评价

目的评价IOL-Master测量硅油填充眼眼轴长的精确度。方法采用IOL-Master测定玻璃体切割联合眼内硅油填充术3~6个月后行硅油取出术的30例眼的眼轴长度。其中18例在硅油取出同时植入人工晶体（IOL）,植入前后分别测量眼轴长。结果硅油取出术前后的眼轴平均长度分别为（24.27±3.01）mm和（24.26±2.79）mm,2组间差异无统计学意义。IOL-Master和A超2种方法测量硅油眼的眼轴长度无显著差异。结论 IOL-Master测量硅油眼眼轴长的精确度高,可用于硅油取出联合IOL植入的IOL度数计算。

人工晶状体屈光指数对白内障术后眩光的影响

目的:通过眼内散射光的检查,探讨人工晶状体屈光指数对白内障术后眩光值的影响。方法:采用病例对照研究,选取2013-08/2014-03期间就诊于中国医科大学眼科医院的最佳矫正视力BCVA≥0.5的年龄相关性白内障患者77例77眼,行白内障超声乳化吸除联合后房型非球面人工晶状体植入,所有的人工晶状体均为疏水性丙烯酸酯材料,随机分为3组;选用Tecnis ZCB00(屈光指数1.47)组22例22眼;选用Hoya PY60AD(屈光指数1.52)组24例24眼;选用Alcon SN60WF(屈光指数1.55)组31例31眼;测量患者术后的BCVA、瞳孔直径、散光度数等数据,C-QUANT测量散射光值。结果:各组的年龄、眼轴、BCVA、瞳孔大小、散光度数变化差异无统计学意义(P>0.05)。Tecnis组散射光值1.04±0.15;Hoya组散射光值1.19±0.14;IQ组散射光值1.14±0.18;眼内散射光值各组差异有统计学意义(F=5.352,P=0.007<0.05),BCVA与散射光值相关性分析无统计学意义(r=-0.133,P=0.124>0.05)。结论:选用高屈光指数人工晶状体的患者术后散射光值会更高。

Doxycycline诱导表达Msx2-GFP的鼠晶状体上皮Alpha-TN4细胞株的建立

目的利用基因开关调节系统(Tet-on),拟建立由doxycycline调控表达的Msx2诱导细胞株,经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。方法向鼠晶状体上皮细胞(Alpha-TN4)中稳定转染质粒Msx2-GFP-M2和TAP-GFP-M2,转染后的细胞经过G418筛选,挑出doxycycline诱导Msx2-GFP表达且具有较低背景的诱导细胞株M8,将空载体细胞株T9作为阴性对照细胞株。并对2组细胞行二维凝胶电泳(2-DE)及基因表达微阵列进行分析。结果从二维凝胶电泳图谱上获得蛋白质斑点。对照组T9检测到5389个斑点,实验组M8检测到5460个斑点。经与SWISS-2DPAGEDATA比对,发现差异蛋白点。经基因表达微阵列分析发现,与晶状体及白内障疾病相关的差异基因为Col3α1,并在RNA水平进行了验证。结论Msx2基因过表达对Alpha-TN4蛋白质表达谱有影响,其中差异基因Col3α1与晶状体及白内障疾病相关。

选择性激光小梁成形术的疗效观察

目的观察选择性激光小梁成形术(SLT)降眼压的临床疗效。方法对青光眼患者30例37眼进行SLT。其中男性17例,女性13例,平均年龄(65±13)岁。有晶体眼20眼,假晶体眼17眼。病种有原发性开角型青光眼28眼,正常眼压青光眼6眼,囊膜性青光眼3眼,随访病程均超过3个月,平均8.6个月。Nd:YAG激光斑打击在下方180°范围的小梁网,激光点数约70～90点。结果平均眼压术前为(21±5)mm Hg,术后3个月为(16±5)mm Hg,术后6个月为(15±4)mm Hg。眼压下降率在20%以上的有20眼(54%),20%以下的17眼(46%)。无明显效果的6眼(16%)再次追加SLT,3眼(8%)行小梁切除术。SLT治疗前应用2种以下滴眼液点眼的病例比3种以上的病例可获得更好的疗效(P<0.05)。结论 SLT治疗青光眼安全且有降眼压的效果。眼压较高的青光眼患者在进行手术前可先考虑SLT治疗。

卵黄样黄斑营养不良家系的VMD2基因诊断

目的:通过VMD2基因的分子遗传学检查确诊卵黄样黄斑营养不良家系,为Best病的基因诊断和遗传咨询提供依据。方法:对家系成员进行系统的眼科检查,同时采用聚合酶链反应(PCR)和DNA直接测序法对VMD2基因的编码区进行基因组测序和突变筛查,并在100例正常对照者中对VMD2基因突变的检测结果进行验证。结果:先证者双眼底均可见黄斑部卵黄样改变,但眼底荧光造影检查未见脉络膜新生血管。VMD2基因变异分析结果,在外显子8中检出第886位碱基的A>G错义突变(Asn296Asp)。结论:本家系中检出的VMD2基因的Asn296Asp变异是包括欧美各国在内没有报道过的新变异。VMD2基因突变筛查可用于Best病的诊断和遗传咨询。对待黄斑部有异常的病例,应充分考虑Best病的可能性,慎重地进行诊疗工作。

波前像差引导的准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术后早期客观视觉质量的临床观察

目的评估行波前像差引导的准分子激光上皮瓣下角膜磨镶术(LASEK)的患者术后早期视觉质量。方法对我院2017年5月至2018年2月采用波前像差引导的LASEK手术的56例(110眼)临床资料进行回顾性分析。采用欧卡斯测量仪双通道视觉质量分析系统(OQAS^(TM)Ⅱ)评估入选患者术后的调制传递函数截止空间频率(MTF cutoff)、斯特列尔比值(SR)及客观散射指数(OSI)。应用重复测量方差分析的方法分析患者术前与术后1、3及6个月视觉质量的变化。结果术后不同时期视力和等效球镜度数与术前相比均有统计学差异(P <0.001)。术后1个月的MTF cutoff较术前下降(P=0.014),术后3个月和6个月时该数值逐渐恢复,且较术前升高,差异有统计学意义(P <0.001)。术后各时间点的SR与术前比较无统计学差异(P=0.096,P=0.146,P=0.055)。术后1个月和3个月OSI较术前略有提升(P <0.001,P=0.032),术后6个月时较术前降低,但差异无统计学意义(P=0.252)。结论采用波前像差引导的个性化切削模式LASEK的患者术后早期视觉质量较术前提高。OQAS^(TM)Ⅱ能够对准分子激光术后患者的视觉质量进行定性和定量分析,有助于近视矫正患者术前及术后视觉质量的随访观察。

小鼠肌节同源盒基因同系物2条件性敲除在先天性白内障发生中的作用

目的：研究晶状体中肌节同源盒基因同系物2（Msx2）条件性基因敲除与先天性白内障发生的关系。方法：实验研究。选取条件性基因敲除小鼠Msx2CKO（Msx2fl/fl/Le-Cre＋）为实验组，野生型小鼠Msx2WT（Msx2fl/fl）为对照组。取胚胎17.5 d（E17.5）Msx2WT小鼠胚胎头部组织作冰冻切片，采用RNA原位分子杂交方法检测Msx2在眼组织内的正常表达。取2 组小鼠E17.5 和生后8 d（P8）眼球组织石蜡切片HE染色观察晶状体组织形态学变化。比较2 月龄Msx2CKO和Msx2WT小鼠晶状体质量和直径，组间比较采用独立样本t检验。结果：本研究观察到超过50%的2 月龄Msx2CKO小鼠眼部出现角膜轻微混浊，晶状体变小（质量和直径），晶状体混浊及小眼球畸形。石蜡切片HE染色观察到Msx2CKO E17.5及P8小鼠晶状体内分化的纤维细胞排列紊乱，赤道部晶状体上皮细胞及邻近的纤维细胞中有空泡，排列明显紊乱。2月龄Msx2CKO组小鼠的直径小于Msx2WT组小鼠（t=4.80，P 〈 0.05），重量小于后者（t=14.29，P 〈 0.05）。结论：Msx2基因对小鼠晶状体发育起重要的调控作用，晶状体条件性敲除该基因可引起先天性白内障发生。

不同设备评估配戴夜戴型角膜塑形镜后泪膜质量的变化

目的:采用2种不同干眼检查设备评估患者配戴夜戴型角膜塑形镜后泪膜质量的变化。方法:前瞻性临床研究。选取2016年1月至2017年10月于中国医科大学附属第四医院眼科就诊并验配角膜塑形镜的患者共计118例,选取右眼数据用于统计。年龄8~18(11.8±2.5)岁。应用Keratograph5M眼表综合分析仪观察患者在戴镜前及戴镜后1、3、6个月的泪河高度(TMH)、非侵入首次泪膜破裂时间[NIBUT(f)]和平均泪膜破裂时间[NIBUT(av)];同时应用DR-1型干眼仪测量患者戴镜后不同时间点泪膜脂质层光干涉图像。采用重复测量方差分析和Pearson相关分析进行数据统计。结果:TMH:戴镜后1、3、6个月与戴镜前比较差异均无统计学意义。NIBUT(f)和NIBUT(av):戴镜后1个月的泪膜破裂时间和戴镜前比较明显缩短(均P<0.001),之后各时间点和戴镜前比较差异无统计学意义。泪膜脂质层分级:配戴角膜塑形镜后1个月较戴镜前有明显下降(P<0.001),之后各时间点与戴镜前比较差异无统计学意义。泪膜脂质层分级与泪膜破裂时间[NIBUT(f)、NIBUT(av)]之间具有相关性(r=-0.145,P=0.011;r=-0.147,P=0.019)。结论:青少年患者配戴角膜塑形镜后泪液的分泌量未受影响,但在早期降低了泪膜稳定性,随时间延长可逐渐恢复。Keratograph5M眼表综合分析仪和DR-1型干眼仪可从不同层面上辅助干眼疾病的诊断。

五年制眼视光医学专业课程体系的构建及思考

2016年起,我国五年制眼视光医学专业开始扩大招生规模,中国医科大学成为东北地区首个获批眼视光医学专业招生资格的高等学校。结合我国国情,围绕如何培养眼视光医学专业学生良好的职业道德素养、专业知识、执业技能和科研能力,使学生既具备完整的临床医学基本理论和技能,又具备眼科学和视光学专业特长;积极探索五年制眼视光医学专业"以全面医学教育为基石,以系统眼视光教育为特色,以人文医学教育为内涵"的课程体系构建,创新性提出眼视光医学专业"基础-临床主干-专业方向与特色发展课程"模式;为培养现阶段亟须的眼视光医学应用型、复合型人才提供参考。