济南花鸡染色体研究

对山东省培育的家鸡优良品种济南花鸡的三个品系：草花鸡、麻花鸡和无翼鸡作了染色体核型分析，进行了染色体的显带处理，探讨了Ｇ－、Ｃ－带型和核仁组织者的分布，并进行了比较研究．

静水压休克诱导淡水鲳鱼三倍体的研究

采用静水压休克法，对淡水鲳鱼进行三倍体诱导实验研究，结果表明，在卵子受精后4min，60mPa静水压处理1．5min，尾芽期三倍体率可达100％，相对孵化率大于60％。文中对静水压休克的处理条件、效应期及其与三倍体出现率和胚胎存活率的关系进行了分析。

注射葡萄糖对吉富罗非鱼血浆生化指标、胰岛素和糖酵解关键酶的影响

研究注射葡萄糖对吉富罗非鱼(Oreochromis miloticus)生化指标、胰岛素和糖酵解酶的影响。选取体质量约80 g的吉富罗非鱼150尾,随机分为2个实验组,对照组腹腔注射0.7%的无菌生理盐水,处理组按照30 mg/100 g(体质量)的剂量腹腔注射葡萄糖。结果表明:(1)吉富罗非鱼在注射葡萄糖后1 h血糖达到最高水平,而后显著下降(P<0.05),3 h后降低到正常水平。注射葡萄糖可显著提高胆固醇的含量(P<0.05),并显著降低谷草转氨酶水平(P<0.05),但对血浆蛋白、甘油三酯和谷丙转氨酶水平没有显著影响(P>0.05)。(2)肝糖原在葡萄糖注射后的6 h达到最高水平,而后显著下降(P<0.05),肌糖原没有发生变化。(3)血浆和肌肉中的胰岛素均在葡萄糖注射后的3 h达到最高水平,而后显著下降(P<0.05),而肝中的胰岛素水平没有发生变化。(4)丙酮酸激酶的活力在葡萄糖注射后6h达到最高水平(P<0.05),己糖激酶的活力在注射葡萄糖后没有发生变化。结果表明,注射葡萄糖可显著提高吉富罗非鱼血糖水平,且维持时间较长,胰岛素含量和丙酮酸激酶(PK)活力的提高均相对延迟,而己糖激酶活力的不足又限制了葡萄糖的酵解反应,从而引起血浆胆固醇升高,并伴有持续的血糖和肝糖原升高,从而产生营养胁迫的生理反应,加重鱼类对葡萄糖的代谢负担。

一个奥利亚罗非鱼雌性特异性SCAR标记的建立

以奥利亚罗非鱼Oreochromis aureus为实验材料,通过对800多条随机引物的筛选,获得了1个奥利亚罗非鱼雌性特异性的、长度为1 488 bp的RAPD标记片段RAPD71699-1488,经琼脂糖凝胶电泳后回收、克隆、测序,并根据测序结果设计PCR特异引物,再经PCR条件优化,成功地将该RAPD标记片段转化为实验结果稳定、操作简便的SCAR标记,即SCAROaF1488。采用双重PCR技术,以mtDNA 16S rRNA基因片段为PCR扩增阳性对照,对该标记的有效性在两个群体共200个个体(雌、雄各100个)中进行验证。结果显示,标记检测结果与表型性别的符合度为100%。SCA-ROaF1 488标记的获得为奥利亚罗非鱼遗传性别鉴定及标记辅助选择提供了有效工具,为深入研究鱼类性别相关基因及性别决定机制提供了重要线索和新的思路。

高温诱导对尼罗罗非鱼性别分化及生长的影响

采用自雌鱼口腔中取出受精卵人工孵化的方法建立了尼罗罗非鱼家系20个。受精后9d,将各家系鱼苗分成两份,分别在28℃(对照组)和36℃(高温诱导组)下养殖,诱导处理12d后,统计高温诱导期成活率并将实验鱼转入自然水温下培育,养殖60～120d后对各实验组的雄性率及生长情况进行测定。结果表明,高温处理对仔鱼的成活率没有影响,但能显著提高某些家系的雄性率,如F27(诱导组88%,对照组49%)、F37(诱导组90%,对照组53%)和F41(诱导组91%,对照组53%);高温处理后多数家系的雄性率略有升高,但不显著;有两个家系高温诱导组雄性率低于对照组,分别是F8(诱导组43%,对照组46%)和F35(诱导组29%,对照组38%),这显示了尼罗罗非鱼性别分化受遗传和环境因子共同作用。生长情况测定结果表明,高温诱导对发育初期罗非鱼的生长没有显著影响。本研究结果说明,高温处理能显著提高某些家系的雄性率,高温诱导和家系选择有望成为高雄性率尼罗罗非鱼新品种培育的新的技术手段。

淡水鲨鱼形态性状与体质量关系的初步研究

选取1龄淡水鲨鱼(Pangasias sutchi Fowler)30尾,测量其体质量、全长、体长、体高、体宽、眼间距、头长、头高、头宽、吻长、尾柄长和尾柄高等12个形态性状,采用相关分析、通径分析和逐步回归分析的方法研究了各性状对体质量的影响效果。结果表明,(1)经相关分析,淡水鲨鱼各形态性状(除吻长)与体质量的相关系数均达到极显著水平;(2)经通径分析,保留了全长、头宽、体宽和尾柄高4个达到显著水平的形态变量,所得相关指数为:R2=0.939;(3)经逐步多元回归分析,建立最优回归方程为:Y=-458.204+0.997X1+6.610X8+2.506X4+2.825X11,式中X1、X8、X4、X11分别为全长(mm)、头宽(mm)、体宽(mm)和尾柄高(mm),为淡水鲨鱼的育种工作提供了重要的理论依据。

淡水黑鲷染色体核型分析

以淡水黑鲷(Hephaestus fuliginosus)头肾组织为材料,采用腹腔注射植物血细胞凝集素(PHA)、秋水仙素和空气干燥法制备染色体标本,进行染色体核型分析。结果显示,淡水黑鲷染色体为48条,核型公式为2n=48=4m+44t,NF=52;未发现随体、次级缢痕及异形性染色体;其核型符合典型的高位类群鱼类核型特征。

不同生长阶段宝石鲈消化酶活性的初步研究

测定了出膜后30 d、70 d、120 d至成鱼4种规格,体重分别为(2.29±0.49)g、(23.16±4.23)g、(88.06±6.73)g、(270.26±9.17)g的宝石鲈(Scorturm barcoo)胃、肝胰脏、前肠、中肠、后肠的淀粉酶、胃蛋白酶和脂肪酶的活性。结果表明,随着宝石鲈的生长,淀粉酶在各生长阶段活力均很小,肝胰脏、前肠和后肠中的淀粉酶活力表现出逐渐增大的趋势;胃中的胃蛋白酶活性表现为逐渐增高,至规格3后胃蛋白酶活性趋于稳定;肠道是脂肪消化的主要场所,其中前肠脂肪酶变化趋势表现为先上升后下降,在前肠脂肪酶下降后中肠脂肪酶升高,起到了继续消化脂肪的作用。

淡水黑鲷5种同工酶的组织特异性研究

运用聚丙烯酰胺垂直梯度凝胶电泳法对淡水黑鲷(Hephaestus fuliginosus)的6种组织(肝脏、心脏、脾脏、肾脏、肌肉和眼)的5种同工酶[酯酶(EST)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、苹果酸脱氢酶(MDH)、乳酸脱氢酶(LDH)]进行了研究,并对其同工酶位点及酶谱进行了分析。结果表明,淡水黑鲷5种同工酶系统具有不同程度的组织特异性。EST检测到2个位点,每个位点都有2个等位基因。CAT检测到1个基因位点,存在2个等位基因。POD酶谱较复杂,有5个位点,Pod-2,3,4,5都检测到2个等位基因。MDH具有s-MDH和m-MDH两种类型,在各组织中均表达,s-MDH只形成一种二聚体,m-MDH仅在肝脏中有2条带,其余组织中为1条带。LDH在6种组织中都表达,而Ldh-5只在心脏中能检测到。

丁香酚对澳洲长鳍鳗麻醉效果的研究

为研究一种适合澳洲长鳍鳗测量、标记、取血等试验操作的麻醉技术,进行了丁香酚对澳洲长鳍鳗麻醉效果的试验。结果表明,丁香酚对澳洲长鳍鳗有较好的麻醉效果(P<0.05),20～120mg/L浓度平均都可在10min内使其达到麻醉期,且麻醉后平均都能在10min内完成复苏,复苏率达100%。麻醉和复苏所需时间除40、60、80、100mg/L组之间差异不显著外,其他各组间以及其他各组与40、60、80、100mg/L组之间差异均达到显著水平(P<0.05)。麻醉需时并非总是随丁香酚浓度增加而缩短,浓度从20mg/L提高到30mg/L,平均需时从312.88s下降到252.25s;到40mg/L时,平均需时却陡增至582.00s;浓度40～120mg/L间,麻醉需时总体随丁香酚浓度增加而缩短,与浓度呈较强负相关关系(r=-0.84,P<0.05),至120mg/L时降至267.50s。麻醉后平均复苏需时以20mg/L最短,为233.50s,30mg/L次之,为420.05s;整体趋势与浓度并不呈明显的线性关系,而是与浓度及麻醉时间均有一定相关(r=0.52,P<0.05)。可见,丁香酚是安全、有效的澳洲长鳍鳗麻醉剂,浓度20～30mg/L效果最佳,平均可在4～5min达到麻醉期,麻醉后可在4～7min复苏,可满足常规实验操作的需要。

宝石鲈形态性状与体重的关系分析

随机选取4月龄宝石鲈(Scorturm barcoo)187尾,分别测量全长、体长、体高、体宽、眼间距、头长、头高、头宽、尾柄长、尾柄高和体重共11个形态学指标。采用相关分析和通径分析方法,计算了以形态性状为自变量、体重作为依变量的相关系数、通径系数、决定系数及相关指数,定量分析了各形态性状与体重的关系。结果表明,各形态性状与体重的相关性均达到了极显著水平。剔除与体长存在多重共线性的全长、体高、头长、头宽、尾柄高及回归方程中不显著的头高和尾柄长,保留了体长、体宽和眼间距3个形态性状,其中体长对体重的直接影响最大(P2=0.557)。所选性状与体重的相关指数R2=0.952,说明所选性状是影响体重的主要形态性状。采用逐步多元回归方程法建立了回归方程为:Y=-46.540+0.494X2+1.159X4+0.656X5(X2,X4,X5分别为体长(mm)、体宽(mm)和眼间距(mm)),为宝石鲈育种提供了理论依据。

克氏原螯虾和红螯螯虾出肉率与可量性状的相关性

为寻找合理的方法评估比较克氏原螯虾和红螯鳌虾出肉率的高低,从而为其选育工作提供科学依据,运用统计分析方法研究了2种虾的出肉率和可量性状之间的相关性。结果表明:红螯螯虾出肉率高于克氏原螯虾出肉率,第1腹节宽为影响克氏原螯虾出肉率的重点性状;体长和头胸甲长为影响红螯螯虾出肉率的重点性状,全长次之。得出结论:(1)可量性状与出肉率的相关性相较于可量性状与肉质量的相关性更能突出重点性状;(2)通过测量可量性状或通过性状比值进行克氏原螯虾和红螯螯虾出肉率方面的选育都是可行的。

澳洲宝石鲈线粒体DNA COI基因的克隆与序列分析

对澳洲宝石鲈线粒体DNA细胞色素氧化酶I亚基(cytochrome oxidase subunit I,COI)基因进行了扩增、克隆和测序,并对COI序列进行了分析。结果显示,澳洲宝石鲈COI基因序列长度为631 bp,其中A、T、G和C 4种碱基的含量分别为27.7%,23.6%,29.8%和18.9%。与从GenBank中查到的其他4种鯻科鱼类的同源序列比对,邻接法(neighbor-joining)构建系统进化树。结果显示,5种鯻科鱼类聚在一起,分为两个大的支系,其中花身鯻与条纹鯻首先聚成一支,然后与詹氏弱棘鯻和银锯眶鯻聚成的一支共同组成一个支系;而高体革鯻单独聚为一个支系,所得的聚类结果与传统的分类结果基本一致。

5个罗非鱼品种(系)线粒体DNA 16S rRNA和Cyt b基因片段序列分析

对3个尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)品系(埃及、无锡、吉富)和奥利亚罗非鱼(Oreochromis au-reus)以及杂交种奥吉(奥利亚♀×吉富♂)的线粒体16SrRNA和细胞色素b(Cytb)的部分序列进行了PCR扩增和序列测定,并分析了其序列差异。结果表明:PCR产物纯化后测序,16S rRNA扩增产物得到长度为596bp的基因片段,其碱基组成G+C平均含量为47.5%,序列比对分析显示变异位点13个,没有碱基的插入/缺失变异,转换/颠换比率为3.33;Cytb扩增产物测序得到659bp的同源片段,其碱基组成G+C含量平均为45.2%,无插入/缺失变异,变异位点共2个,都为转换,2处变异都发生在密码子第3位上,编码的氨基酸未发生变异。序列分析表明,尼罗罗非鱼3品系的序列完全相同,奥利亚的序列则与奥吉相同。这表明在罗非鱼线粒体DNA中,16S rRNA进化速率相对较快,而Cytb基因则高度保守,不适于研究罗非鱼种内和种间的亲缘关系和种类鉴别标记。

澳洲长鳍鳗染色体组型的初步研究

以澳洲长鳍鳗(Anguilla reinhardtii)头肾组织为材料,采用腹腔注射植物血细胞凝集素(PHA)、秋水仙素和空气干燥法制备染色体标本,进行染色体组型分析。结果显示:澳洲长鳍鳗染色体为38条,核型公式为2n=14m+6sm+18t,NF=58;未发现随体、次级缢痕及异形染色体。

草鱼MHC class Ⅰ基因多态性及其与鱼体抗柱形病能力关系分析

用1对引物HMC6-S和MHC6-A分别从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)40尾抗病个体和40尾易染个体的基因组DNA中扩增MHC基因片段,扩增产物长度为262bp。在262bp的核苷酸序列中,有50个(19%)多态位点。在其编码的87个氨基酸位点中,有16个多态位点(18.39%),其中有10个位点发生在多肽结合位点上(62.5%)。对核苷酸替代的类型和位点进行分析,发现多肽结合位点的非同义碱基替代率与同义碱基替代率均大于非多肽结合位点的非同义碱基替代率与同义碱基替代率,表明氨基酸替代替换集中出现在多肽结合位点(PBR)上。分析80个个体的测序结果,发现有17种不同的MHC classⅠ等位基因,编码17种不同的氨基酸序列。等位基因A、B、C、D是2个群体共有的,其中等位基因A出现的频率最高,占总样本数量的36.25%;等位基因E、F、G、H、I、P只出现在抗病个体中,等位基因J、K、L、M、N、O、Q只出现在易染个体中。

丁香酚对苏氏圆腹(鱼芒)成鱼麻醉效果的研究

研究了24℃水温条件下,20、40、60、80、100、120mg/L的丁香酚对苏氏圆腹(鱼芒)(Pangasiussutchi)成鱼的麻醉及复苏效果,探讨了以80mg/L丁香酚将苏氏圆腹(鱼芒)成鱼麻醉,再分别在空气中暴露5、10、15、20、25min后对其复苏效果的影响。结果表明,60～120mg/L丁香酚效果最佳,平均都可以在3min内使其麻醉,麻醉后可在5min内完成复苏,以80mg/L为例麻醉后在空气中暴露长达25min仍可完全复苏。可见,丁香酚是安全、有效的苏氏圆腹(鱼芒)麻醉剂,完全可以满足常规实验操作对其麻醉的需要。

盐度胁迫对高体革鯻幼鱼消化酶活力的影响

研究了盐度对高体革(Scortum barcoo)幼鱼消化酶活力的影响。在温度25±2℃下,将平均体质量为2.50±0.23 g的高体革幼鱼分别饲养在盐度0,5,8,11,13和16条件下20 d,检测幼鱼胃蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性的差异。结果表明:盐度胁迫对高体革幼鱼胃蛋白酶活力有显著影响(P<0.05),对脂肪酶和淀粉酶活力有极显著影响(P<0.01)。随着盐度的升高,胃蛋白酶活力先升后降,当盐度升高到13时又急剧升高;脂肪酶的活力则是随盐度的升高而受到抑制,当盐度升高到13时也急剧升高,盐度16时最高;而淀粉酶活力变化则是盐度升高时显著降低。这说明环境盐度对高体革消化酶比活力的影响比较大,不同消化酶随盐度变化规律有所差异。

盐度对澳洲宝石鲈幼鱼3个免疫因子活力的影响

实验室条件下测定了在盐度0、5、8、11、13、16下胁迫20d,澳洲宝石鲈(Scortum barcoo)幼鱼内脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)及酸性磷酸酶(ACP)共3个免疫相关因子的活力变化。结果表明,盐度胁迫对澳洲宝石鲈3个免疫因子均有一定的影响,在不同盐度的胁迫下,随着盐度的升高,其SOD活性先下降、再升高;碱性磷酸酶(AKP)活性在低盐度胁迫下有短暂升高的过程,然后随着盐度的升高,其活性又明显下降;而酸性磷酸酶(ACP)则是随盐度的升高逐渐增大。试验结果说明低盐度胁迫能引起宝石鲈的应激反应,适当提高其免疫力,而大幅度升高盐度可显著影响其免疫力。

DNA指纹技术鉴定尼罗罗非鱼各家系父本

为了对8个尼罗罗非鱼家系进行亲子鉴定，利用GM024、GM435、GM459、UNH719、UNH846、GM558六个微卫星标记设计引物并进行PCR扩增，在12％聚丙烯酰胺凝胶上电泳分型，应用cervus3．0软件统计分析。结果表明，各微卫星位点的等位基因数在4—12之间；观测杂合度在0．313—0．988之间，平均观测杂合度为0．696；期望杂合度在0．318～0．794之间，平均期望杂合度为0．638。平均多态信息含量为0．608。已知一亲本时，各个位点的非父排除率在0．301～0．818之间；双亲未知时，各位点的累计排除率在0．113—0．69之间。当已知一亲本时，6个位点的累积排除率达到了0．9962。当双亲都未知时，6个位点的累积排除率也达到了0．9674。所以利用这6个位卫星位点能够有效地确认尼罗罗非鱼各家系父本。