柔嫩艾美耳球虫感染鸡盲肠内容物非靶向代谢组学分析

【目的】基于非靶向代谢组学探究感染柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)后鸡盲肠内容物中代谢物的变化差异,为识别和鉴定鸡球虫病潜在的生物标志物及治疗靶点提供参考依据。【方法】将60羽健康罗曼粉鸡随机分为正常组和模型组,每组30羽,模型组经口灌服柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊(1×104个/羽),正常组经口灌服等体积生理盐水,连续灌服5 d,然后解剖试验鸡,无菌采集鸡盲肠内容物,基于非靶向代谢组学分析正常组和模型组鸡盲肠内容物,筛选出显著差异代谢物进行KEEG代谢通路富集分析。【结果】从模型组与正常组的鸡盲肠内容物中共筛选到253种显著差异代谢物,其中,上调表达的显著差异代谢物有184种,包含L-酪氨酸、L-蛋氨酸、L-谷氨酰胺、牛磺酸、花生四烯酸、二十二碳六烯酸乙酯、胆碱和磷酸胆碱等;下调表达的显著差异代谢物有69种,包括脱氧腺苷、L-缬氨酸、N-(5-氨基戊基)乙酰胺和N-乙酰-L-谷氨酸等。正离子模式下,主要有牛磺酸、磷酸胆碱、甜菜碱、L-亮氨酸、L-谷氨酰胺、胆碱、神经鞘氨醇和L-色氨酸等20种代谢物上调表达;负离子模式下,主要有花生四烯酸、牛磺酸、L-苯丙氨酸、L-亮氨酸、琥珀酸、黄嘌呤、尿嘧啶和L-谷氨酰胺等20种代谢物上调表达。鸡盲肠内容物显著差异代谢物主要被富集到ABC转运蛋白、氨酰tRNA生物合成、赖氨酸降解、嘧啶代谢、嘌呤代谢、不饱和脂肪酸生物合成等20条KEEG代谢通路上。【结论】柔嫩艾美耳球虫感染后鸡盲肠代谢物发生显著变化,主要影响ABC转运蛋白、氨酰tRNA生物合成、氨基酸代谢、嘧啶代谢和嘌呤代谢等代谢通路。因此,牛磺酸、磷酸胆碱、L-谷氨酰胺、花生四烯酸等显著差异代谢物可作为潜在的生物标志物,用于鸡球虫病诊断检测。

弗氏柠檬酸杆菌的鉴定及其药敏试验

为进一步明确分离自仔猪腹泻肛拭子样本的弗氏柠檬酸杆菌病原特性、耐药情况及其对小鼠的致病性,试验通过5%兔鲜血TSA培养基培养、生化指标测定、敏感药物和耐药基因筛选对其进行鉴定,并用其腹腔注射攻毒小白鼠,分析其对小鼠的致病性。结果显示,分离到的弗氏柠檬酸杆菌在血平板上生长时导致溶血现象。生化试验中,硝酸盐还原、山梨醇和葡萄糖发酵等9个检测指标为阳性;且该菌对氧氟沙星、诺氧沙星、万古霉素、青霉素和链霉素耐药,并携带aacA-aphD、ileS和vanA3种耐药基因。该菌对小鼠的致死率为60%,剖检发现小鼠肝脏、肺脏、肠道、肾脏和脾脏组织发生不同程度病理变化,其中,小鼠肝脏和肺脏组织的出血症状最为明显;组织病理学观察发现,肝脏组织可见多量中央静脉淤血,肝窦内可见淤血;肺脏组织可见大量血管淤血,大面积肺泡壁间质淤血;肠绒毛黏膜上皮与固有层轻度分离。试验结果可为弗氏柠檬酸杆菌致病机理的进一步研究提供参考,也可为仔猪潜在细菌性疫病防治提供了数据支撑。

猪场舍内环境中葡萄球菌的分离鉴定及耐药分析

为了明确重庆市某规模猪场舍内环境中葡萄球菌的病原特性及耐药情况,试验采用空气细菌培养自然沉降法和物体表面采样法采集猪场舍内环境样本20份,进行葡萄球菌的分离纯化,提取分离株基因组DNA,扩增16S rRNA基因序列,构建系统进化树,检测其生化指标,确定敏感药物,并分析病原菌耐药基因的携带情况。结果表明:分离纯化得到2种革兰氏阳性球菌,分别与头状葡萄球菌和沃氏葡萄球菌相似性较高(均为99%),在系统进化树中也分别与其聚为一簇,两种菌的硝酸盐还原、MR-VP和甘露醇等7种指标检测结果均为阳性,确定为头状葡萄球菌和沃氏葡萄球菌,均对多西环素、复方新诺明和阿奇霉素耐药;头状葡萄球菌携带vanA、rpoB、ermB和tetM 4种耐药基因,沃氏葡萄球菌携带ileS、rpoB、blaZ、ermC、aacA-aphD、tetK和tetM 7种耐药基因,两种菌均含有rpoB和tetM基因,并证实头状葡萄球菌和沃氏葡萄球菌的耐药类型与耐药基因具有相关性。说明该猪场舍内环境中存在头状葡萄球菌和沃氏葡萄球菌,在生猪养殖和人畜共患病防控方面应加强对环境中病原微生物的监测。

猪口蹄疫的诊断与防制

猪口蹄疫是口蹄疫病毒感染猪引起的急性、热性、接触性传染病，以口腔粘膜、蹄部、乳房、皮肤出现水疱为特征。传播速度极快。目前在世界许多地区时有发生或流行。世界动物卫生组织早已把该病列为A类法定传染病中的第一个传染病，是国际动物及动物产品进出口贸易最重要的检疫病原之一。

规模化猪场如何防控副猪嗜血杆菌病

副猪嗜血杆菌是一种存在于猪上呼吸道的共栖菌．在特定的条件下常引起猪以关节炎、呼吸困难及高热为特征的传染性疾病，即副猪嗜血杆菌病，又称猪格氏病（Glasser＇sdisease）。该病主要发生于断奶仔猪。常见于5～8周龄的猪，病死率可达50％。随着养猪业，特别是规模化养猪的不断进步，该病逐渐成为制约养猪业的重要疫病之一，引起了人们的广泛重视。特别是在近年流行的“猪高热性疾病”中也常有分离到副猪嗜血杆菌的报道。

非洲猪瘟检测技术要点

非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起所有品种及各年龄阶段的猪均易感染的一种高接触性传染病,该病具有高度接触传染性、高热、出血性和极高致死率等特性。本研究就非洲猪瘟及其检测技术进行综述。

抗鸡球虫病中兽药处方筛选及其对球虫病鸡盲肠组织病理学的影响

【目的】筛选出对鸡球虫病具有良好治疗效果的中兽药处方,以确保养鸡业的持续健康发展。【方法】将84羽患有球虫病且每克粪便球虫卵囊数(OPG)超过105个的病鸡随机分为7组(处方①~处方⑥及感染对照组),每组12羽,另取12羽同日龄的健康仔鸡作为空白对照组。各处方处理组均按2.4 mL/kg的剂量给药,每天1次,连用7 d,感染对照组及空白对照组不投喂任何药物。试验期间观察球虫病鸡的临床表现,测定其生长性能、存活率、血便和盲肠病变计分、卵囊值及抗球虫指数(ACI),并采集盲肠组织制作病理切片,综合评价中兽药处方对鸡球虫病的临床治疗效果。【结果】给药后,各处方处理组球虫病鸡精神状态明显好转,采食量增加,血便减少,尤其以处方①和处方③的恢复效果较好;在6个抗球虫中兽药处方中以处方③的平均日增重最高、料重比最低,除处方③外,其他处方处理组均有病鸡死亡;处方③的ACI为170.41,依据药物效果判定标准可知,处方③对球虫病鸡的治疗效果良好;病鸡盲肠组织病理切片观察结果显示,处方①和处方③的盲肠组织结构正常,上皮细胞排列有序,未见有明显的组织病理损伤,与空白对照组相比无明显差异。【结论】处方③(青蒿∶常山∶仙鹤草∶地榆=5∶2∶2∶1)对鸡球虫病的治疗效果良好,其ACI为170.41,且能有效改善球虫病鸡受损的盲肠组织,加快其肠道功能恢复。

5个重庆地方猪种遗传多样性的微卫星分析

为了分析5个重庆地方猪种的遗传多样性和系统发生关系,采用FAO-ISAG联合推荐的27个微卫星标记,以有效等位基因数、期望杂合度和多态信息含量等遗传参数为指标,评估了品种内遗传变异。计算了F统计量、Nei氏遗传距离(DA)和Nei氏标准遗传距离(DS)并进行UPGMA和NJ聚类分析及主成分分析,进而探讨了品种间的遗传分化和亲缘关系。结果,27个微卫星座位共检测到542个等位基因,其中43个等位基因为单一品种所特有。5个猪种的遗传多样性丰富:有效等位基因数(Ne)在9.4933～11.0280之间,期望杂合度(He)在0.8897～0.9091之间,多态信息含量(PIC)在0.8689～0.8926之间。F统计量分析表明,重庆地方猪种遗传分化明显(P<0.001),各群体内存在一定程度的近交。2种聚类方法以NJ法更为可靠。5个猪种聚为两类,荣昌猪、渠溪猪和合川猪为一类,罗盘山猪和盆周山地猪为一类。相关性分析表明,遗传距离与地理距离间无显著的相关(P>0.05)。该研究结果为重庆地方猪种的保护和利用提供了重要的理论依据。

女黄颗粒对免疫抑制小鼠外周血T淋巴细胞亚群及脾脏细胞因子mRNA表达的影响

【目的】考察不同剂量女黄颗粒对免疫抑制小鼠外周血T淋巴细胞亚群及细胞因子IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γ表达量的影响,旨在明确女黄颗粒对小鼠免疫的调节作用。【方法】选取50只健康昆明小鼠,随机分为阴性对照组、模型组及女黄颗粒高、中、低剂量组,每组10只。除阴性对照组外,其他处理组均通过腹腔注射环磷酰胺(80 mg/kg,1次/d,连续5 d)建立小鼠免疫抑制模型;建模后,阴性对照组和模型组灌胃生理盐水,女黄颗粒处理组则分别按0.5、1.0和1.5 g/kg剂量灌胃女黄粒颗溶液(以水稀释),1次/d,连续7 d。采用流式细胞仪检测小鼠外周血T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+和CD8+的百分率及CD4+/CD8+比值,以实时荧光定量PCR检测小鼠脾脏细胞因子IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γ的表达情况。【结果】经腹腔注射环磷酰胺后,小鼠的CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞百分率及CD4+/CD8+比值较阴性对照组小鼠极显著降低(P<0.01,下同),小鼠脾脏IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γmRNA的相对表达量极显著下降。灌胃给药(女黄颗粒)后,CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞百分率及CD4+/CD8+比值均有所升高,其中女黄颗粒高、中剂量组小鼠的CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞百分率较模型组小鼠极显著升高;除女黄颗粒高剂量组小鼠脾脏IL-2 mRNA的相对表量较模型组小鼠极显著下降外,各女黄颗粒处理组小鼠脾脏IL-2、IL-4、TNF-α和IFN-γmRNA的相对表达量均呈上升趋势,尤其是女黄颗粒中剂量组小鼠脾脏IL-4、TNF-α和IFN-γmRNA的相对表达量均极显著高于模型组小鼠。【结论】女黄颗粒通过上调CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞百分率及提高IL-2、IL-4、TNF-α、IFN-γ的相对表达量以增强免疫抑制小鼠的免疫功能,临床推荐使用剂量为1.0 g/kg。

女黄颗粒对免疫抑制模型小鼠脾组织病理及细胞周期的影响

为分析女黄颗粒对免疫抑制小鼠脾组织病理学及细胞周期的影响,选取50只健康昆明小鼠,随机分为空白组、模型组和女黄颗粒高、中、低剂量组,每组10只。除空白组外,其余几组采用腹腔注射环磷酰胺(80 mg·kg^(-1),1次·d^(-1),连续5 d)复制免疫抑制模型,复制模型成功后,给各组分别灌胃生理盐水(模型组)或女黄颗粒,连续7 d,以考察女黄颗粒对免疫抑制小鼠脾组织病理学及细胞周期的影响。结果显示:注射环磷酰胺后,小鼠脾指数降低,血液白细胞数、淋巴细胞百分比及单核细胞百分比降低,脾组织受到损伤,脾细胞G0/G1期细胞百分比明显减少,S期细胞百分比增加。给药后,脾指数增加,血液白细胞数、淋巴细胞百分比及单核细胞百分比升高,脾组织结构得到改善,脾细胞G0/G1期细胞百分比明显增加,S期细胞百分比减少,其中中剂量效果明显。女黄颗粒可以改善免疫抑制小鼠的脾的组织结构,使G0/G1期细胞百分比增加,S期细胞百分比减少,增加小鼠脾指数。

女黄颗粒对小鼠的急性毒性和大鼠的亚慢性毒性试验

依据《兽药研究技术指导原则汇编》中"兽药急性毒性试验指导原则"和"兽药30天和90天喂养试验指导原则",研究中药女黄颗粒对小鼠的急性毒性和对大鼠的亚慢性毒性。药物组以16、4、1、0.5 g/kg的剂量一次性灌服女黄颗粒药液,观察7 d并记录小鼠的表现及死亡情况,测定女黄颗粒的半数致死量(LD50);以90 g/kg的剂量灌服女黄颗粒药液,观察14d并记录小鼠的反应及死亡情况,测定女黄颗粒的最大给药剂量;药物组以18、6、2 g/kg的剂量连续灌服女黄颗粒药液30 d,期间观察大鼠的临床表现和体质量变化,试验结束时检测其血液学、血液生化指标和组织病理学指标,确定其亚慢性毒性。结果表明:急性毒性试验中,女黄颗粒各剂量组均未发现小鼠死亡,无法测出女黄颗粒的LD50;最大给药量试验期间,小鼠临床表现正常,未发现死亡,女黄颗粒的最大给药量为90 g/kg;亚慢性毒性试验期间,大鼠精神状态良好,血液学、血液生化指标均在正常范围内,组织病理学检查未发现病变。可见,女黄颗粒毒性评价为实际无毒,临床用药安全性较高。

柔嫩艾美耳球虫感染对罗曼粉鸡盲肠组织病理学和细胞免疫相关基因的影响

【目的】明确柔嫩艾美耳球虫感染对罗曼粉鸡盲肠组织病理学和细胞免疫相关基因mRNA表达量的影响。【方法】将100只鸡随机分为空白组、感染Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组,每组20只,感染Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组分别口服3×104、2×104、1×104和0.5×104个孢子化鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊,空白组口服相同体积的生理盐水。试验结束时,剖解试验鸡,采集盲肠制作病理切片,观察组织病理学变化并进行评分;采用荧光定量PCR方法检测盲肠IL-2、IL-17、TGF-β1和IFN-γ基因mRNA表达量。【结果】感染Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组试验鸡黏膜层破坏严重,出血明显,大量炎性细胞浸润,腺上皮细胞内见大量虫体,病理损伤评分为重度损伤;感染柔嫩艾美耳球虫第5、7天,感染组盲肠组织IL-2、IL-17、TGF-β1和IFN-γ基因mRNA表达量均升高,与空白组相比差异极显著(P<0.01)。【结论】不同剂量的柔嫩艾美耳球虫可造成鸡盲肠组织不同程度损伤,且能上调盲肠组织IL-2、IL-17、TGF-β1和IFN-γ基因的表达。

川渝两地猪弓形体血清流行病学调查

猪弓形体病又称弓形虫病、弓浆虫病和毒浆虫病，是由艾美耳科龚地弓形体引起的一种严重人畜共患原虫病。临床常称为”无名高热”病，常以突然发病、高热稽留、呼吸及神经系统症状。皮肤发绀、妊娠母猪流产、死胎、胎儿畸形等为其特征。剖检时肺、肝、淋巴结等脏器肿胀，有出血点和坏死灶，主要通过呼吸道、消化道、皮肤、胎盘等途径感染。

柔嫩艾美耳球虫感染对鸡盲肠菌群的影响

将60只健康罗曼粉鸡随机分为正常组和模型组,每组30只,模型组灌服1×10^(4)个孢子化卵囊进行人工复制鸡球虫病模型,正常组灌服等体积生理盐水,感染5 d,剖杀试验鸡,无菌采集鸡盲肠内容物,并通过Illumina PE250型高通量测序仪对肉鸡盲肠内菌群进行16SrDNA基因V3~V4可变区检测,对肠道菌群可操作分类单元(OTUs)数、α多样性、β多样性及差异菌门与菌属进行综合性分析与评价,探究柔嫩艾美耳球虫感染对鸡盲肠菌群结构和多样性的影响。结果表明:与正常组相比,感染柔嫩艾美耳球虫后鸡肠道菌群的OTUs数、Chao1指数极显著降低,Shannon指数显著降低,Simpson指数显著升高;门水平上,模型组变形菌门的相对丰度极显著升高,而厚壁菌门的相对丰度显著降低,拟杆菌门和柔膜菌门的相对丰度显著降低;属水平上,正常组的优势菌属为拟杆菌属、瘤胃菌属-UCG014、副拟杆菌属,而模型组瘤胃球菌属-uncultured、球藻菌属、埃希菌-志贺菌属相对丰度极显著升高。可见,艾美耳球虫破坏了盲肠菌群的完整性,促进潜在致病菌的建立和生长,尤其使埃希菌-志贺菌属大量繁殖,快速生长。

女黄扶正颗粒对大鼠体液免疫功能和抗氧化力的影响

为阐明女黄扶正颗粒对大鼠体液免疫功能和抗氧化力的影响,将80只大鼠随机分为空白对照组、女黄扶正颗粒高、中、低剂量组,每组20只,女黄扶正颗粒高、中、低剂量组分别按照3 g/kg,2 g/kg,1 g/kg剂量给药,每天1次,连续灌胃14 d,空白对照组给相同剂量的生理盐水.试验结束时,Elisa法检测大鼠血清免疫球蛋白IgA,IgM,IgG和细胞因子IL-10,IL-6水平,同时检测血清中丙二醛(MDA)水平和过氧化物酶(POD)及超氧化物歧化酶(SOD)活力.结果显示:女黄扶正颗粒中剂量组大鼠血清IgG,IL-6质量浓度升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(p<0.01);女黄扶正颗粒中剂量组大鼠血清IL-10质量浓度升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(p<0.05);女黄扶正颗粒各剂量组大鼠血清SOD,POD活性及MDA浓度与空白对照组相比,差异无统计学意义(p>0.05).表明一定剂量的女黄扶正颗粒可通过提高机体IgG,IL-6及IL-10质量浓度从而提高机体的体液免疫功能,但其抗氧化力不明显.

不同猪瘟疫苗对荣昌仔猪的母源抗体影响

猪瘟疫苗的免疫是养猪生产中最重要的一环,现在市场上的猪瘟疫苗的种类越来越多,养猪户面对众多的疫苗不知如何选择？不同疫苗免疫后是否有差异？我们选择了3个厂家生产的2种类型的猪瘟疫苗在荣昌母猪进行试验,通过检测试验母猪所产仔猪体内母源抗体的持续时间,确定现在的脾淋源猪瘟疫苗的首免日龄应该在14日龄,而且在实际生产中无需将免疫剂量任意加大,以免造成不必要的浪费.结果报告如下.

郁金颗粒剂制备工艺研究

研究了郁金颗粒所需中药提取物与辅料的比例,黏合剂的使用浓度和用量,通过对颗粒的色泽、过筛率、成品率等进行考察,结果表明郁金颗粒剂的原辅料(提取物、糊精、蔗糖)的最佳比例为1∶0.5∶1,酒精的最佳浓度为75%,使用量8 mL,烘干温度为55～60℃,时间2 h。制备出的郁金颗粒剂色泽均匀,颗粒蓬松,易于溶解,颗粒的流动性好,颗粒干燥度高,粒度为8.96%,符合兽药典规定。粒度、水分、吸湿性、临界相对湿度等的测定结果表明,研制出的郁金颗粒制备工艺能够满足兽药生产企业进行该制剂的规模化生产。

奶牛乳房炎的防治研究进展与前景

本文综述了近年来奶牛乳房炎由抗生素到疫苗到中草药的防治进展,比较了这几种方法的优劣,提出了中草药是防治该病的最有效、最安全、最环保绿色的一种方法,并提出了这一方法的发展前景及发展方向。