血管生成素与tRNA片段化

t RNA主要功能是转运氨基酸参与蛋白质合成,在蛋白质生物合成过程中起着关键性的作用.近年来发现,t RNA是细胞内小RNA分子的重要来源,具有其它重要的生物学功能.来源于成熟t RNA分子的t RNA片段根据切割位置及生成机制的不同,主要分为两类:一类是t RNA半分子(t RNA halves);另一类是较小的t RNA片段,称为t RFs(t RNA fragments).在哺乳动物细胞中,t RNA半分子由血管生成素在t RNA分子反密码环处切割生成.本文主要针对t RNA半分子的加工机制、功能及在临床上的潜在应用进行综述.

人端粒酶催化亚基基因启动子调控的肿瘤细胞特异表达载体

为获得端粒酶阳性肿瘤细胞特异表达载体用于癌症的基因治疗 ,克隆并构建了人端粒酶催化亚基 (hTERT)基因启动子调控的萤光素酶报告载体 .用脂质体转染法将其分别转染肿瘤细胞和正常细胞 ,检测其在肿瘤细胞和正常细胞中的转录活性 .hTERT启动子在所检测的 4种端粒酶阳性的肿瘤细胞中具有明显的转录活性 ,平均为阳性对照的 4 4 3% ;而在端粒酶阴性的正常人胚肺成纤维细胞中则无明显的转录活性 .提示hTRET启动子的转录活性在端粒酶阳性的肿瘤细胞中明显上调 。

SF_6气体分解物与GIS设备运行状态关系的探讨

随着近几年GIS设备的广泛投用,其在运行中发生故障的情况越来越多,笔者应用便携式色谱仪及SF6分解气体快速测试仪对现场SF6气体分解物进行了测试,例举了几起500 kV变电站GIS设备故障状态下的SF6气体色谱分析图和SF6气体分解物组分含量数据表,结合实例初步探讨了GIS设备几种不同故障类型与SF6气体分解物之间的关系,为准确诊断GIS设备运行状态提供了宝贵经验,该工作还需今后进一步论证与实践检验。

人端粒结合蛋白TRF1的克隆、表达和抗体制备

利用RT PCR技术 ,从HeLa细胞的cDNA文库中扩增到人端粒结合蛋白 1(hTRF1)基因编码区序列 ,克隆至pUCm T载体 ,测序正确后 ,构建带His6 tag原核表达载体pET 2 8c TRF1,经IPTG诱导表达的His6 TRF1融合蛋白分子量约为 6 5kD ,Western blot证实表达产物可特异地与TRF1抗体sc 6 16 5结合。用Ni2 + NTA胶亲和层析纯化可得到电泳均一的融合蛋白 ,免疫新西兰纯种大白兔 ,获得特异性好的多克隆抗体 ,该抗体可用于免疫荧光染色和Western blot方法检测哺乳动物细胞内源性的TRF1分子。

两种高效RNA干涉载体系统的构建及应用

在真核细胞基因功能研究中,RNA干涉(RNAi) 已成为一种强有力的选择性沉默基因表达的实验工具. 建立一套可在哺乳动物培养细胞中高效、经济地表达siRNA的载体系统是RNA干涉研究的必要前提之一. 从HepG2细胞基因组DNA中克隆得到H1全长启动子(374 bp),以之为基础构建了两套RNA干涉载体系统,pSL和带有绿色荧光蛋白(EGFP) 标签的pESL,并对p53基因进行了相应的RNA干涉研究. 干涉质粒瞬时转染HepG2细胞后,分别利用半定量RT-PCR和蛋白质印迹检测p53表达水平. 与商品化载体pSilencerTM 3.1-H1 hygro相比,pSL和pESL对p53基因表达具有更高的干涉效率. 结果显示:干涉载体pSL和pESL能高效特异地下调目的基因表达,可作为哺乳动物中基因功能分析的有效工具.

人工miRNA簇表达载体的构建及检测

目的构建人工miRNA表达簇,并研究miRNA的加工对蛋白质表达水平的影响。方法从miRNA表达库中扩增miR-34a及miR-424的前体序列,将上述两种miRNA串联,构建PGL-34a-424人工miRNA簇表达载体。通过RT-PCR的方法检测人工miRNA簇的表达情况。然后将miRNA前体突变,再用荧光素酶报告基因技术研究miRNA的加工对蛋白质表达的影响。结果成功构建人工miRNA簇表达载体,荧光素酶实验显示miRNA的加工能够抑制蛋白的表达。结论人工miRNA表达簇能够高效表达,miRNA的加工对蛋白质的表达有抑制作用。

对高职教育发展的几点思考

职业教育是教育的重要组成部分,它肩负着振兴民族、发展经济,提高劳动者素质的重任,所以,我们应该认清现状,加强职业教育的发展改革。

DNA损伤诱导的长链非编码RNA-UCA1促进HeLa细胞增殖

尿路上皮癌抗原1(UCA1)是一种长链非编码RNA,在多种肿瘤内高表达.然而,其在宫颈癌细胞和组织中的表达报告颇不一致,且功能尚未确定.本文探索UCA1在宫颈癌He La细胞中的生物学功能.实时定量PCR(qRT-PCR)结果显示,UCA1、p21和p53 mRNA在阿霉素(doxorubicin,DOX)或γ射线照射的He La细胞中表达上调;相反,敲减p53表达则可抑制DOX诱导的UCA1上调.表明DNA损伤诱导的UCA1可能与p53有关.转染结合CCK8检测He La细胞增殖活力结果显示,与对照比较,过表达UCA1促进He La细胞增殖,干扰UCA1表达则减缓细胞增殖.此外,流式细胞术结果显示,过表达UCA1导致阿霉素诱导的凋亡率下降;siRNA抑制UCA1表达后引起细胞G2/M期比例上升,S期下降,且阿霉素诱导的细胞凋亡率上升.上述结果说明,DNA损伤诱导的UCA1可促进He La细胞增殖,减少细胞凋亡.然而,是否DNA损伤诱导的UCA1上调依赖p53尚需进一步实验证明.

人源microRNA分子表达库的构建

microRNA(miRNA)是一类长度为22nt左右的单链非编码小RNA分子,通过与靶mRNA分子结合而沉默其表达.目前,虽然在多种生物中发现了大量的miRNA,但对它们的功能还知之甚少.为了深入研究miRNA的功能,构建了一个包括170多种人源miRNA表达载体的miRNA分子表达库,并对部分表达载体采用RNA印迹及双荧光素酶分析技术进行验证.实验证明:这些miRNA表达载体在HEK-293细胞内可以高水平表达miRNA前体和成熟的miRNA,并且能抑制含有相应靶位点的报告基因的表达.这些结果表明:该miRNA表达库可以表达功能miRNA,并可用于miRNA功能的筛选和研究.

类胰岛素生长因子与肝癌

肝癌是常见的恶性肿瘤之一,其病程快且预后很差.其发生是一个多因素多步骤协同的复杂过程.近来的研究报道,肝癌发生分子机制与类胰岛素生长因子体系信号通路异常相关.类胰岛素生长因子是一种多功能细胞增殖调控因子,他在胚胎发育、中枢神经系统发育及肿瘤细胞增殖等方面具有重要的生物学功能.类胰岛素生长因子的生物学活性受到包括类胰岛素生长因子不同类型的受体、类胰岛素结合蛋白及类胰岛素结合相关蛋白等多因素参与的复杂的调控网络调控.本文主要介绍了类胰岛素生长因子体系在肝癌中的异常改变、类胰岛素生长因子相关信号通路及其作用机制以及在肝癌靶向治疗中的应用.

利用CRISPR/Cas系统构建在XRCC6内源基因插入Flag标签序列的HeLa细胞系

目的:利用CRISPR/Cas系统在XRCC6基因5′端插入Flag标签序列,筛选XRCC6-Flag稳定表达的宫颈癌细胞(He La)株。方法:根据Gen Bank中XRCC6基因序列,设计XRCC6基因敲入的g RNA序列,构建入p Cas-Guide载体中,获得p Cas-XRCC6载体;设计XRCC6基因的同源臂序列,利用搭桥PCR方法将同源臂和Flag标签序列作为模板进行扩增,得到供体DNA片段,并将其克隆到p Back Zero-T表达载体上,获得p XRCC6-Donor载体;将上述2个载体共转染He La细胞,采用PCR、Western印迹等方法检测和筛选Flag标签序列插入XRCC6基因5′端的细胞株。结果:构建了p Cas-XRCC6和p XRCC6-Donor载体,筛选获得3株XRCC6-Flag稳定表达细胞株。结论:构建了XRCC6-Flag稳定细胞株,为研究XRCC6基因及其蛋白产物的生物学功能奠定了基础。

反义RNA对胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭性的抑制作用

目的:膜研究膜型-1基质金属蛋白酶(MT1- MMP)反义RNA对人胃癌细胞BGC823靶基因表达和侵袭特性的影响方法:利用基因重组技术构建人MT1-MMP反义RNA真核表达载体,转染人胃癌细胞BGC823,应用RT-PCR、MTT、明胶酶谱和体外侵袭实验等方法观察人胃癌细胞BGC823转染前后,MT1-MMP mRNA表达水平、细胞生长、明教酶A活性及细胞体外侵袭能力等指标的变化.结果:成功构建了MT1-MMP反义RNA真核表达载体pasMMP14,将其转染胃癌细胞BGC823后,与阴性对照组相比,实验组MT1- MMP mRNA表达水平降低,抑制率为36%.转染48 h,明教酶A的活化受到了明显抑制.转染72 h,细胞增殖明显受抑(t=2.358,P<0.01 vs空白组:t=2.727 P<0.01 vs阴性组).实验组的穿膜细胞数明显低于空白对照组和阴性对照组(t=5.744,P<0.01;t=5.695,P<0.01).结论:反义RNA对人胃癌细胞MT1-MMP基因表达和侵袭能力具有明显的抑制作用,MT1-MMP基因可作为胃癌抗侵袭治疗的分子靶点.

便携式色谱仪在六氟化硫电气设备故障检测中的应用研究

介绍了六氟化硫分解产物的种类及分析方法,重点介绍了SP-Ⅴ便携式色谱仪的性能、测试方法以及与其它几种六氟化硫分解产物测试仪、纯度仪相比较的优势;列举了几个在六氟化硫电气设备发生故障时,应用SP-Ⅴ便携式色谱仪分析检测六氟化硫气体分解产物种类及含量,从而迅速确定故障点并初步判断故障类型的案例;并通过这些案例,对六氟化硫电气设备不同的故障类型所产生的特征气体作出研究探讨。

玻纤格栅在沥青路面防治反射裂缝中的应用

结合襄荆高速公路沥青路面施工的工程实践,对沥青路面产生反射裂缝的原因进行分析,阐述了玻纤格栅的特性、防治反射裂缝的作用机理、施工方法、注意事项及经验体会。

超高压变电站变压器标准油样专用配置装置设计与应用

针对现有变压器标准油样配置装置工作中会产生困油现象、配置完成的标准油样中的组份发生变化、随着循环时间组份变化数值不断增高、标准油样组份变化等问题,会对变压器的运行安全造成影响。文中提出了一种避免标准油组份变化的变压器标准油样配置装置。该装置设计中仅使用真空泵、控制阀、储油胶囊等结构,无需齿轮泵及其他机械结构,保证整个系统内的工作温度,从而避免油液组份发生变化,确保标准油样的质量。同时,该系统使用自动化设计,只需使用计算机启动配置工作,待设备自动配置完毕后,即可对设备内的油样用于变压器油色谱分析系统进行校准。此外,该设计的配置装置结构简单,设备的成本低、安装方便,具有良好的工程应用价值。

30m直径筒仓中心井架环式平台滑模施工技术

以工程实例阐述了30m直径筒仓中心井架环式平台滑模施工技术,该技术解决了30m(及以上)直径筒仓仓壁施工时支模和仓顶锥壳施工支撑体系的安全技术问题。

地下筒仓逆作法施工技术

介绍了地下筒仓逆作法施工技术。认为相对沉井施工技术,逆作法具有施工方便、施工工期短、施工期间风险较小、可节约成本投入等施工优点。

用气相色谱分析法诊断电抗器故障

介绍了应用色谱分析技术对大型充油电气设备内部故障进行分析与诊断的方法。并通过一起用气相色谱分析诊断电抗器故障的案例介绍了该诊断方法和经验估算公式,证明该诊断方法可解决设备在电网安全运行与经济运行的矛盾。

肺纤维化大鼠模型造模方法的优化

目的 比较气管内滴注、气管内雾化喷入博来霉素(5 mg/kg)两种给药方式,以及比较腹腔注射3%戊巴比妥钠麻醉、异氟烷呼吸麻醉(与氧气混合吸入时,异氟烷浓度为0.5%)两种麻醉方式对肺纤维化大鼠模型的影响,探讨更优的造模方法。方法 选择雄性SPF级SD大鼠50只,随机分为空白对照组、腹腔麻醉气管内滴注组、腹腔麻醉气管内雾化喷入组、呼吸麻醉气管内滴注组和呼吸麻醉气管内雾化喷入组,每组各10只。观察给药后1、3、7、14、21 d,各组大鼠的生存状况及体重变化;给药3周后处死大鼠,取肺称重,计算肺系数;HE染色观察肺组织炎症变化;Masson染色观察肺组织中胶原增殖;Western Blot检测肺组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达量;碱水解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)的含量。结果 与空白对照组比,4种模型组的大鼠精神状态不佳、体重下降、肺指数上升;肺组织损伤明显,炎症水平增加,胶原增殖显著;肺组织中TGF-β1蛋白表达水平升高(P<0.001);发现仅气管内雾化喷入博来霉素组大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量增加(P<0.05)。发现气管内滴注的建模方式其模型大鼠肺部纤维化病灶分布不均匀,纤维化程度不一。麻醉程度均为中麻醉的情况下,异氟烷呼吸麻醉(与氧气混合吸入时,异氟烷浓度为0.5%)的大鼠平均苏醒时间和死亡率均低于腹腔注射3%戊巴比妥钠麻醉方式。结论 异氟烷呼吸麻醉下气管内雾化喷入博来霉素是建立肺纤维化大鼠模型的优选造模方法。

粉煤灰在煤炭行业中的应用综述

粉煤灰亦称飞灰或漂灰(Fly-ash),是火力发电厂煤粉燃烧后随烟气排放的细灰状残留物,为煤炭燃烧的副产品。文章从粉煤灰的危害入手,对其物理化学性能和矿物组成进行了介绍,综述了粉煤灰在煤炭行业中的主要应用,对其作用机理和产生的效益进行了分析,并对粉煤灰应用的注意事项和发展方向进行了剖析。