乳中共轭亚油酸异构体合成机制的研究进展

共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)是一组十八碳共轭二烯酸的统称,具有多种重要的生理活性,其中c9,t11-CLA具有很强的抗癌作用,t10,c12-CLA具有减肥和防治Ⅱ型糖尿病的功能。在自然界,CLA主要存在于牛羊的乳中,通常包含c9,t11-CLA和t10,c12-CLA等异构体,但含量很低。牛羊瘤胃中的一些微生物参与了不同CLA异构体的生物合成。本文综述了CLA的结构和功能、CLA异构体分析方法、乳中CLA的组成、乳中CLA的合成途径、提高乳中CLA含量的方法和瘤胃中合成CLA的微生物的研究进展,为开展更深入的研究提供一些思路和参考。

直投式菌种发酵藜蒿酸奶研究

目的与方法:开发酸奶新品种,提高藜蒿的经济价值;以藜蒿和脱脂奶粉等原料,采用直投式菌种发酵生产藜蒿酸奶产品;结果:影响产品风味的最佳处理工艺参数为:藜蒿原汁含量2%,蔗糖用量4%,发酵温度41℃,培养时间4h。

乳酸菌产乳糖酶的培养条件研究

本文从初始pH、培养基成分及培养方式等不同的方面对产乳糖酶的乳酸菌发酵条件进行研究,找出最适发酵条件为L-MRS培养基,pH5.0,实验表明胆盐对乳酸菌的生长和乳糖酶的产生有明显的抑制作用。

抗乳糖不耐受添加剂的研究

对产乳糖酶的三株乳酸菌进行协同发酵制成抗乳糖不耐受添加剂,冻干的乳糖酶在4℃贮存三个月活性基本不变,确立抗乳糖不耐受添加剂乳酸菌添加浓度为107/L。

基于纳米抗体-碱性磷酸酶融合蛋白的一步酶联免疫吸附分析法检测黄曲霉毒素B_1

从噬菌体展示的抗黄曲霉毒素B1(AFB_1)纳米抗体文库中,通过四轮亲和淘选,得到抗AFB_1纳米抗体G8。将编码纳米抗体G8的基因与碱性磷酸酶(AP)基因融合,构建了重组融合表达载体pET25b(+)-G8-AP,将其转化大肠杆菌BL21(Rosetta,DE3)感受态细胞,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导融合基因表达。SDS-PAGE结果表明,融合蛋白G8-AP为可溶性表达,Ni^(2+)-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,对硝基苯磷酸二钠(pNPP)法测得纯化后的G8-AP的碱性磷酸酶比活力为(364.5±8.3)U/mg。ELISA检测结果表明,G8-AP具有特异识别AFB1的活性,与其它真菌毒素(AFB_2、AFG_1、AFG_2、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏马菌素B_1)无交叉反应。基于G8-AP建立了检测AFB1的一步ELISA法。在优化的条件下,即甲醇浓度20%、盐离子浓度20 mmol/L、pH 7.4条件下,方法的半数抑制浓度(IC_(50))为19.8 ng/mL,线性范围为4.3~92 ng/mL,检出限为2.6 ng/mL。对玉米和小麦样品加标回收实验结果表明,基质对本方法的干扰不明显,可用于实际样品检测。

富硒发芽糙米生产工艺的优化

目的:研究富硒发芽糙米的最佳生产工艺。方法:通过单因素试验及Box-Behnken组合设计考察浸泡液中亚硒酸钠质量浓度、发芽时间、发芽温度以及它们之间的交互作用对糙米发芽率及重要营养物质γ-氨基丁酸含量的影响,通过软件分析得到使发芽率及γ-氨基丁酸含量均达到最大值的最佳生产工艺。结果:建立富硒发芽糙米发芽率与γ-氨基丁酸含量的数学模型,富硒发芽糙米的最佳工艺参数为:浸泡液中亚硒酸钠质量浓度5mg/L,浸泡时间9h,浸泡温度28℃,培养时间21h,培养温度31.5℃。该条件下得到发芽率77.67%,GABA含量330mg/kg,硒含量0.5mg/kg的富硒发芽糙米。

富钙发芽糙米的生产工艺研究

以江西产糙米为原料,首先确定糙米发芽的最适浸泡条件与培养条件,再在糙米发芽过程中以不同浓度氯化钙处理,考察氯化钙浓度对糙米发芽率及发芽糙米中重要营养物质γ-氨基丁酸含量的影响。得到最佳的富钙发芽糙米生产工艺为:以浓度为0.2%的氯化钙作为浸泡液,于28℃浸泡糙米9h,再转入30℃恒温恒湿培养箱培养21h。在此条件下可得到钙元素含量为0.62g/kg、γ-氨基丁酸含量为0.36g/kg、发芽率大于80%的富钙发芽糙米。

富含γ-氨基丁酸发芽糙米生产工艺的研究

探索适合糙米发芽的最佳工艺条件。采用中心组合旋转试验设计,评价糙米发芽过程中的4个关键因素,即浸泡温度、浸泡时间、培养温度、培养时间及其交互作用对γ-氨基丁酸含量及发芽率的影响,确定最佳工艺条件。分别建立发芽过程4个关键因素对γ-氨基丁酸含量和发芽率的影响的数学模型。借助模型方程统计软件,分析得出最佳γ-氨基丁酸含量及发芽率下各个因素的最适水平分别为浸泡时间9.5 h、浸泡温度28℃、培养时间16.7 h和培养温度36℃。在此条件下,γ-氨基丁酸含量340 mg/kg,发芽率81.7%。

富铁发芽糙米生产工艺研究

[目的]研究富铁发芽糙米的最佳生产工艺。[方法]以江西产糙米为原料,首先确定糙米发芽的最适浸泡条件与培养条件,然后在糙米发芽过程中以不同浓度硫酸亚铁(稀释浓度为0.25、0.50、1.00、2.50和5.00 g/L)处理,考察硫酸亚铁浓度对糙米发芽率及发芽糙米中铁含量的影响及铁元素富集情况,优化富铁发芽糙米的生产工艺条件。[结果]在一定范围内,发芽糙米中铁元素含量随硫酸亚铁浓度的增大而逐渐增加。最佳的富铁发芽糙米生产工艺为:以浓度为0.25 g/L的硫酸亚铁作为浸泡液,在28℃下浸泡糙米9 h,再转入30℃恒温恒湿培养箱培养20 h。在此条件下可得到铁元素含量为100 mg/kg,发芽率大于80%的富铁发芽糙米。[结论]在生产富铁发芽糙米时浸泡液中硫酸亚铁浓度不宜超过1.0 g/L。

γ-氨基丁酸的功能及其在发芽糙米中富集的研究进展

综述了γ-氨基丁酸的主要保健功能,探讨了发芽糙米中γ-氨基丁酸富集的思路,提出了富含γ-氨基丁酸发芽糙米保健产品的开发方向。

抗黄曲霉毒素B_1纳米抗体的原核表达、纯化及活性分析

表达和纯化抗黄曲霉毒素B1（Aflatoxin B1,AFB1）纳米抗体（G8）,并分析纳米抗体的热稳定性及生物学活性,建立基于纳米抗体检测AFB1的ELISA方法。将编码抗AFB1纳米抗体的基因亚克隆至原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21（Rosetta,DE3）,IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析蛋白表达情况;采用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）分析纳米抗体的热稳定性、有机溶剂耐受性、盐离子耐受性及耐酸碱性。结果显示,在大肠杆菌中成功表达可溶性的抗AFB1纳米抗体,表达量为80 mg/L,在25~65℃之间,抗体具有良好的热稳定性。在5%甲醇、p H7.4、10 mmol/L PBS条件下,建立了G8-ELISA检测AFB1的方法,该方法的半抑制浓度（IC50）为4.61 ng/m L,线性范围为0.95~42.45 ng/m L。

瘤胃中干酪乳杆菌的亚油酸异构酶基因的克隆与表达

以从黄牛瘤胃中分离到的一株具有将亚油酸转化为c9,t11-共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)Fx为出发菌株,提取其基因组DNA,聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增得到1 700 bp大小的亚油酸异构酶(linoleic acid isomerase,LAI)基因片段,将该基因片段纯化后进行TA克隆,得到重组质粒p UCm-T-LAI,将重组质粒p UCm-T-LAI和表达质粒p ET-Dsb A同时进行双酶切,连接得到重组表达载体p ET-Dsb A-LAI,经PCR鉴定和酶切后,将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21中,得到具有LAI活性的重组菌株,能将亚油酸转化为c9,t11-CLA,表明从Lactobacillus casei Fx成功克隆LAI,该研究将有助于深入了解不同瘤胃细菌特异性合成不同CLA异构体的LAI基因差异。

高效提取米糟分离蛋白的研究

以水洗、碱溶的办法从米糟中提取大米分离蛋白,实验表明,水洗后的米糟的碱提效率显著提高,在碱提的过程中,温度的影响比较明显。水洗优化工艺条件为:温度70℃、料液比1∶6、水洗3次;碱提的优化条件为:温度65℃、碱浓度0.8%、时间8h、料液比为1∶6。在此条件下产品蛋白质含量为80.1%,米蛋白得率为76.2%。

抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇纳米抗体随机突变与筛选

采用易错聚合酶链式反应技术,对来源于天然纳米抗体文库的抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)纳米抗体进行随机突变,通过优化和比较突变条件,构建了突变分布均匀的突变文库。噬菌体展示技术对突变文库进行了6轮筛选,获得了8种突变序列,其检测信号为野生型2.1倍。多序列比对及三维结构建模分析表明,突变序列的突变位点集中于互补决定区与框架区连接的区域,并且部分序列出现了可以形成二硫键的氨基酸残基。研究结果为抗DON纳米抗体进一步的深度突变和改造提供了线索,同时可为其他抗小分子纳米抗体的改造提供借鉴。

抗DON单域重链抗体序列分析及三维建模与对接

探讨应用分子模拟与对接技术预测抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)单域重链抗体(DONIV2)的三维结构及其与DON的结合模式。采用生物信息学相关工具和网站分析预测DONIV2的理化特性及其二级结构,同源建模方法获得三级结构,然后采用分子对接软件Autodock 4.2将三维结构模型与DON进行分子对接。二级结构和三级结构分析显示,DONIV2由10个β片层结构组成,CDR区为无规则卷曲结构,位于分子的一端,在CDR1、CDR2与CDR3之间形成1条宽度约为1.2 nm的凹槽结构。对接结果显示,可能的DON结合位点由Arg59、Arg103和Arg105等残基组成,他们位于CDR2和CDR3区域。表明通过分子模拟与对接相关工具获得了DONIV2的一、二、三级结构及可能的结合活性位点,为深入认识DON与抗体相互作用机理提供了理论指导,并为下一步DONIV2体外亲和力的成熟提供了线索。

多形拟杆菌对仔猪肠道菌群的影响

多形拟杆菌在健康动物和人体的粪便中数量可达3.2×109cfu/g,是绝对的优势菌,多形拟杆菌在帮助宿主吸收多糖以及提高营养利用率、调控脂肪积累、加快肠道黏膜的血管形成和提高宿主的免疫力、维持肠道微生态平衡等方面均有着非常重要的作用。本实验从健康的猪肠道中分离多形拟杆菌,采用了生理生化实验进行鉴定。本文通过研究多形拟杆菌对仔猪肠道菌群的影响,对提升猪肉品质,增加猪肉瘦肉率和预防仔猪腹泻,维持仔猪肠道微生物态平衡有很大的借鉴意义。

乳酸菌微囊化的初步研究

运用喷雾干燥方法对保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌的微囊化进行了初步研究。结果表明，微胶囊化对菌体活性的保护具有良好的效果，其中各组壁材所得的最佳结果，其存活率均在５０％以上，与未微囊化样品相比，微囊化对菌体活性的保持具有明显的效果。

鼠伤寒沙门氏菌对肠道屏障的破坏作用

为了研究鼠伤寒沙门氏菌对肠道屏障的破坏作用,应用小鼠结肠病理组织切片技术、蓝色葡聚糖2000渗透量检测并结合transwell细胞层模型和荧光定量PCR方法探寻鼠伤寒沙门氏菌破坏肠道屏障的可能机制。病理切片结果显示:鼠伤寒沙门氏菌感染可导致肠上皮细胞受损,Babl/c小鼠小肠外蓝色葡聚糖2000渗透量在2、4和6h升高(P<0.05),昆明小鼠小肠外其渗透量在2和4h时显著升高(P<0.005);细胞跨膜电阻值降低(P<0.05);细胞间紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1基因mRNA转录水平下调(P<0.005)。结果表明,鼠伤寒沙门氏菌能够通过下调肠上皮细胞紧密连接蛋白的表达来破坏细胞间的紧密连接结构,从而达到破坏肠道屏障的作用。补充阐明了鼠伤寒沙门氏菌感染对肠道屏障的影响,对揭示研究鼠伤寒沙门氏菌的致病机制提供一定依据。

混和菌株发酵富含共轭亚油酸酸奶的特性

功能性酸奶作为一种保健食品逐渐被人们熟知,其特别之处在于添加了具有独特功效的物质。本文利用植物乳杆菌R6、德氏乳杆菌保加利亚亚种、嗜热链球菌3株益生菌发酵添加了亚油酸的脱脂乳。其中植物乳杆菌R6能合成共轭亚油酸(CLA),从而制备出富含CLA的酸奶。进一步优化发酵条件,探寻最佳的发酵工艺。最后利用PCR-DGGE分析酸奶菌群变化与CLA合成关系,得出酸奶中混合菌株生长良好,相互之间没有抑制作用,因此,既能保证酸奶的品质,也保证了CLA的合成。

抗幽门螺杆菌尿素酶B纳米抗体的制备及鉴定

制备抗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)尿素酶B(UreB)纳米抗体。用灭活的全幽门螺杆菌免疫羊驼,以重组蛋白UreB为靶分子,从噬菌体展示文库中筛选出能与重组蛋白UreB特异性结合的纳米抗体,构建原核表达载体,IPTG诱导表达,ELISA鉴定纳米抗体特异性。获得5×10^(7)cfu的噬菌体文库,将筛选的两个OD450值较高且序列不同的纳米抗体HU2-9和HU2-36分别进行表达SDS-PAGE鉴定均为可溶性且表达量分别为92和32 mg·L^(-1)。ELISA结果表明两个纳米抗体能特异性结合Hp菌体蛋白,并对尿素酶活性具有一定的抑制作用。成功淘选出6种独特序列的抗幽门螺杆菌UreB纳米抗体。