阴道试产中转剖宫产术前Ⅲ型安尔碘阴道灌洗预防产褥感染效果

目的:分析阴道试产中转剖宫产术前Ⅲ型安尔碘阴道灌洗预防产褥感染效果。方法:回顾性分析2022年1月-2023年12月本院产科阴道试产失败中转剖宫产产妇400例临床资料,其中2022年1-12月术前作外阴备皮、冲洗的200例纳入对照组,2023年1-12月术前作外阴备皮、Ⅲ型安尔碘阴道灌洗、冲洗的200例产妇纳入观察组,对比两组术后体温、24h出血量、产褥感染率、切口感染率及白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)和降钙素原(PCT)水平变化情况。结果:观察组术后24h(36.90±0.17℃)、48h(36.70±0.15℃)、72h体温(36.50±0.12℃)均低于对照组(37.00±0.21℃、36.80±0.16℃、36.60±0.13℃),术后24h出血量(287.3±21.5ml)少于对照组(296.2±23.7ml),产褥感染率(0.5%)低于对照组(3.5%)(均P<0.05),两组切口感染率(0.5%、1.0%)无差异(P>0.05)。观察组术后72h WBC(10.07±2.28×10^(9)/L)、CRP(2.23±0.39mg/L)、PCT(4.05±0.62ng/ml)水平均低于对照组[(12.77±3.59)×10^(9)/L、5.06±1.28mg/L、7.33±1.51ng/ml](均P<0.05)。结论:阴道试产中转剖宫产术前Ⅲ型安尔碘阴道灌洗可有效控制术后产妇体温和WBC、CRP、PCT水平,减少产褥感染发生。

斯钙素2在宫颈癌组织中的表达及临床意义

目的:探究斯钙素2(STC2)在宫颈癌组织中的表达情况,并评估其临床意义。方法:回顾性选取2022年1月至2023年5月东莞市人民医院宫颈癌患者(n=88)作为研究对象,应用免疫组织化学法测定患者宫颈组织中STC2表达情况,采用实时荧光定量PCR检测STC2,比较宫颈癌组织与癌旁组织STC2 mRNA,分析STC2在不同临床特征宫颈癌中的表达情况,对其相关性进行Logistic回归分析。结果:宫颈癌组织中STC2 mRNA明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌组织中STC2阳性表达在年龄、肿瘤直径、病理分型、不同浸润深度、分化程度、TNM分期中差异无统计学意义(P>0.05),STC-2表达与淋巴结转移相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,淋巴结转移是STC-2阳性的独立影响因素;STC2阳性组无进展生存期(PFS)明显低于STC2阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson分析显示STC2表达与PFS均呈负相关(r=-0.683,P<0.05),由于未达OS终点,目前无法计算以及对比OS差异,后续密切追踪跟进。结论:STC2在宫颈癌组织中表达量高,与年龄、肿瘤直径、病理分型、浸润深度、分化程度、TNM分期无关,与淋巴结转移有关,应予以高度重视。

子宫肌瘤剔除术3种术式的对比分析及经脐单孔腹腔镜的应用研究

目的对比分析经脐单孔腹腔镜子宫肌瘤剔除术、传统多孔腹腔镜子宫肌瘤剔除术与开腹子宫肌瘤剔除术的临床疗效,并探讨经脐单孔腹腔镜对子宫肌瘤剔除术的影响。方法回顾性分析2020年6月至2021年12月在南方医科大学珠江医院妇产科行子宫肌瘤剔除术治疗的97例患者的临床资料。单孔组24例,行经脐单孔腹腔镜子宫肌瘤剔除术;多孔组42例,行传统多孔腹腔镜子宫肌瘤剔除术;开腹组31例,行经腹子宫肌瘤剔除术。对比分析手术时间、术中出血量等手术指标,术后首次肛门排气时间、术后首次下床活动时间、术后住院时间等术后恢复情况及总住院费用等。根据术前影像学检查对子宫肌瘤患者进一步分层,对比分析单发性、多发性或浆膜下、肌壁间子宫肌瘤患者中分别行经脐单孔腹腔镜、多孔腹腔镜或开腹子宫肌瘤剔除术的临床疗效;对比分析经脐单孔腹腔镜手术对单发性与多发性、浆膜下与肌壁间子宫肌瘤剔除术的临床疗效。结果与多孔组及开腹组相比,单孔组的术后首次下床活动时间明显缩短(P均<0.01)。与开腹组相比,单孔组的术后首次肛门排气时间及术后住院时间明显缩短,而手术时间延长、总住院费用较高(P<0.05,P<0.01)。单孔组与多孔组的手术时间、术后首次肛门排气时间、术后住院时间及总住院费用差异无统计学意义(P均>0.05),单孔组前期的术中出血量较多孔组多(P<0.05),后期两组的术中出血量差异无统计学意义(P>0.05)。4种不同类型子宫肌瘤患者中,3种术式的手术相关指标对比分析情况与上述总体一致。在经脐单孔腹腔镜手术中,单发性子宫肌瘤组较多发性子宫肌瘤组手术时间缩短(P<0.05);浆膜下子宫肌瘤组较肌壁间子宫肌瘤组术后首次下床活动时间缩短(P<0.01)。结论经脐单孔腹腔镜下子宫肌瘤剔除术临床疗效与传统多孔腹腔镜及开腹手术相当,但术后恢复更快。单发性及浆膜下子宫肌瘤相比多发性及肌壁间子宫肌瘤而言,更加适合行经脐单孔腹腔镜手术。

过继转移过表达Pellino-1的调节性T细胞对自身免疫性早发性卵巢功能不全小鼠卵巢功能的修复作用

目的探讨过继转移过表达Pellino-1(Peli1)的调节性T细胞(Treg细胞)对自身免疫性早发性卵巢功能不全(POI)小鼠的卵巢功能是否有修复作用,以及对其免疫功能是否具有调控作用。方法采用透明带3多肽(p ZP3)构建自身免疫性POI小鼠模型,将构建的过表达Peli1的慢病毒载体(LV-Peli1)转染至Treg细胞,最后将过表达Peli1的Treg细胞过继转移到模型小鼠体内。将POI模型小鼠随机分为4组(n=5),分别为LV-Peli1-POI组(过继转移过表达Peli1的Treg细胞)、LV-POI组(过继转移转染慢病毒空载体的Treg细胞)、Treg-POI组(过继转移未经任何处理的Treg细胞)、POI模型组(经尾静脉注射等体积PBS)。采用H-E染色观察各组卵巢结构并行各级卵泡计数,免疫组织化学染色检测卵巢组织增殖蛋白Ki-67表达及CD3+T淋巴细胞水平,TUNEL法检测卵巢颗粒细胞凋亡情况,ELISA法检测各组小鼠血清卵巢激素促卵泡激素(FSH)、雌二醇(E2)及细胞免疫因子IL-10、TGF-β的表达水平,考察过表达Peli1对自身免疫性POI的作用。结果与LV-POI组、Treg-POI组及POI模型组相比,LV-Peli1-POI组中始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡、成熟卵泡的数目均增加,Ki-67表达增高,卵巢颗粒细胞凋亡减少,FSH表达水平下降,E2表达水平升高(P<0.05,P<0.01);LV-Peli1-POI组的CD3+T淋巴细胞的数量减少,IL-10和TGF-β表达水平升高(P<0.05,P<0.01)。结论过继转移过表达Peli1的Treg细胞可有效促进POI小鼠卵巢颗粒细胞增殖、抑制其凋亡,同时改善POI小鼠的卵巢内分泌功能和调节免疫功能,对自身免疫性POI有一定的修复作用。

人骨髓间充质干细胞来源外泌体分离、鉴定及卵巢摄取

目的提取及鉴定人骨髓间充质干细胞(hBMSC)来源外泌体,探讨颗粒细胞及自身免疫性早发性卵巢功能不全(POI)小鼠卵巢摄取外泌体的情况。方法取P3至P9代hBMSC培养上清液,倒置显微镜下观察P4代hBMSC细胞形态,超高速离心法提取外泌体;纳米流式仪测外泌体粒径;透射电镜观察外泌体形态;Western blot检测外泌体标志蛋白CD63、CD9、肿瘤易感基因(TSG)101表达。外泌体采用DiR进行荧光标记;共聚焦显微镜观察人卵巢颗粒细胞(KGN)共孵育24 h和48 h摄取外泌体的情况;用ZP3蛋白多肽构建自身免疫性POI小鼠模型,在建模成功后的第1、7天腹腔注射150µg DiR标记的外泌体。在第2次注射外泌体后的第14天通过活体成像仪监测小鼠卵巢摄取情况。结果hBMSC呈纺锤状,大小均一,提取出的外泌体平均直径为(81.12±17.23)nm。透射电镜显示外泌体结构为双层膜状;外泌体表面相关特异性蛋白CD63、CD9和TSG101呈阳性。共聚焦显微镜下观察到KGN细胞能够摄取外泌体,并与共孵育24 h比,48 h摄取的外泌体量更多。在自身免疫性POI小鼠模型中观察到小鼠卵巢部位有发光信号。结论本研究成功提取出hBMSC来源外泌体,并观察到KGN细胞及自身免疫性POI小鼠卵巢组织摄取外泌体。

骨髓间充质干细胞移植修复化疗所致卵巢损伤的实验研究

目的：探讨大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）移植对化疗所致卵巢损伤的影响。方法：采用腹腔注射环磷酰胺（CTX）建立化疗所致大鼠卵巢损伤模型，并随机分为模型组、实验对照组及移植组。同龄正常大鼠作为空白对照组。移植组在建模结束后每侧卵巢注射绿色荧光标记约1×10^6个MSCs。于移植后1、15、30、45天及60天，留取各组血标本，并于后4个时间点分批处死大鼠，留取卵巢标本。荧光显微镜下观察绿色荧光及其分布情况。阴道脱落细胞涂片观察大鼠动情周期的变化；以化学发光法检测雌二醇（E2）浓度，放射免疫法检测卵泡刺激素（FSH）浓度；计数各级卵泡数。结果：移植MSCs后15天，移植组卵巢组织内可见到明亮的绿色荧光，持续至移植后2月。绿色荧光分布在卵巢间质组织。移植组30％（6／20）的大鼠在移植后15～30天内恢复正常的动情周期，在移植后30～60天内又有4只大鼠恢复正常的动情周期。移植后15、30、45天和60天时，移植组E2浓度高于实验对照组相应时间点E2浓度，而FSH浓度则低于实验对照组相应时间点FSH浓度，差异有显著性。移植45、60天时，移植组各级卵泡数目均高于模型组和实验对照组，低于空白对照组。结论：骨髓间充质干细胞可以在环磷酰胺损伤的大鼠卵巢组织中存活、迁移，但其分化为卵泡组分的可能性小。骨髓间充质干细胞移植可修复环磷酰胺损伤的卵巢组织，部分改善卵巢内分泌功能。

BrdU,CFSE和GFP标记大鼠间充质干细胞的比较

目的:研究BrdU,CFSE和GFP作为大鼠间充质干细胞标记物的可行性.方法:分别用上述三种标记物标记大鼠间充质干细胞,检测即时、15和30d的标记率,通过检测细胞周期、凋亡率和描绘生长曲线,来明确标记物对体外培养大鼠间充质干细胞生长特性的影响;通过流式细胞仪检测标记物对细胞表面标志(CD29,CD34,CD44,CD45)表达的影响.结果:BrdU,CFSE,GFP的即时标记率为77.0%,99.4%,89.7%,1mo后分别下降至51.9%,77.5%,82.9%.三者对体外培养的大鼠间充质干细胞的生长特性和表面标志的表达均无明显影响.结论:GFP,BrdU和CFSE均可以作为大鼠间充质干细胞的标记物.

化疗所致卵巢早衰动物模型的建立

目的探索建立化疗所致卵巢早衰动物模型的方法。方法以Wistar雌性大鼠为研究对象,以5种不同剂量和方案腹腔注射环磷酰胺,观察大鼠一般情况、动情周期、性激素(雌二醇和卵泡刺激素)水平、卵巢重量及形态学、各级卵泡数的变化。结果环磷酰胺可引起大鼠体重明显下降,动情周期紊乱,低雌激素血症,高促性腺激素血症,卵巢重量明显减轻,卵巢间质增生明显,窦前及窦状卵泡数减少,与对照组相比均有明显差异。结论采用腹腔注射环磷酰胺负荷剂量50mg/kg后以8mg/(kg.d)的维持剂量连续注射14d的方案建模,大鼠卵巢功能明显衰退,卵巢组织学及内分泌改变与临床卵巢早衰患者相似。该方法简便易行、成模时间短、成功率高、死亡率低,是建立化疗所致卵巢早衰动物模型的一种较好的方法。

GnRHa和避孕药保护化疗所致卵巢损伤的比较研究

目的:探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)和口服避孕药(OC,达英-35)对注射环磷酰胺(CTX)大鼠卵巢功能的保护作用。方法:实验分为6组:空白对照组、CTX组、OC组、GnRHa组、OC保护组、GnRHa保护组,每组15只,分别接受生理盐水、CTX、达英-35、GnRHa、达英-35+CTX、GnRHa+CTX注射或灌胃。阴道涂片观察大鼠动情周期,以放射免疫法检测血清雌二醇(E2)和卵泡刺激素(FSH)浓度,每组在停药当天、15天及30天分别处死5只大鼠,观察卵巢重量、卵巢结构及各级卵泡数目。结果:停药后30天,OC保护组和GnRHa保护组的E2浓度分别为51.33±2.00pg/ml、44.38±5.98pg/ml,FSH浓度分别为3.69±0.28mIU/ml、3.35±0.22mIU/ml,两组比较及与空白对照组(51.76±2.57pg/ml、3.44±0.20mIU/ml)相比,差异均无统计学意义;与CTX组(21.78±2.11pg/ml、6.24±0.22mIU/ml)比较,差异有统计学意义。OC保护组和GnRHa保护组的卵巢重量、卵泡数量与空白对照组相比,差异无统计学意义,明显高于CTX组,两组间比较差异亦无统计学意义。结论:GnRHa和口服避孕药均能减轻化疗药物对卵巢功能的损伤,从而保护卵巢储备功能。

化疗性卵巢功能早衰动物模型及患者血清miR-21水平的变化

目的检测化疗性卵巢功能早衰(CIPOF)大鼠动物模型及患者血清micro RNA-21(mi R-21)的水平,探讨mi R-21与CIPOF的发生是否存在相关性。方法采用腹腔注射环磷酰胺建立CIPOF动物模型,在建模后第1、15天尾静脉采血,QT-PCR法检测血清mi R-21水平,同时检测雌二醇(E2)及卵泡刺激素(FSH)水平、卵巢结构,并行相关性分析。收集2014年1月-2015年6月就诊的CIPOF患者30例,以及健康体检的育龄女性30例作为对照,检测血清mi R-21水平,同时与其他检测指标[黄体生成素(LH)、E2、FSH、泌乳素(PRL)]进行相关性分析。结果 CIPOF动物模型及患者血清mi R-21水平分别较对照组明显降低,差异有统计学意义(t=15.467,P=0.000;t=10.197,P=0.000)。动物模型中mi R-21分别与E2,始基、初级、次级及窦状卵泡数目呈正相关(r=0.750,P=0.000;r=0.403,P=0.006;r=0.704,P=0.000;r=0.783,P=0.000;r=0.849,P=0.000),与FSH呈负相关(r=–0.801,P=0.000)。临床患者中mi R-21与E2呈正相关(r=0.817,P=0.000),与FSH、LH呈负相关(r=–0.771,P=0.000;r=–0.784,P=0.000),与PRL无相关性(r=0.204,P=0.207)。结论在CIPOF动物模型及患者血清中mi R-21水平降低,与卵巢功能下降呈正相关,提示mi R-21可能参与CIPOF的发病过程,有望成为防治CIPOF的新靶点。

开腹卵巢癌肿瘤细胞减灭术中应用腹腔镜器械与传统手术的对照研究

目的:探讨在开腹卵巢癌肿瘤细胞减灭术中应用腹腔镜器械(超声刀和血管闭合切割系统)的优势及应用前景。方法:回顾性分析2010年6月至2013年12月我院40例开腹卵巢癌肿瘤细胞减灭术患者的临床及手术资料,前25例患者使用传统开腹器械,后15例使用腹腔镜器械。比较2组患者切口长度、术中出血量、手术时间、术后排气时间、住院时间、术后并发症的差异。结果:腹腔镜器械组与传统开腹器械组比较,腹部切口长度短[(13.4±2.2)cm vs.(20.0±2.8)cm,t=7.734,P=0.000],手术时间短[(160.7±30.1)min vs.(208.8±32.2)min,t=4.691,P=0.000],术中出血量少[(286.7±76.69)mL vs.(404.0±73.5)mL,t=4.811,P=0.000],住院时间短[(10.3±2.2)d vs.(12.2±2.2)d),t=2.631,P=0.012]。两组患者均顺利完成手术,无术后并发症发生。结论:在开腹卵巢癌肿瘤细胞减灭术应用腹腔镜器械有利于患者恢复,具有良好的应用前景。

宫腔镜子宫内膜电切术在治疗难治性功能失调性子宫出血中的应用

目的探讨宫腔镜子宫内膜电切术治疗难治性功能失调性子宫出血（功血）的效果。方法 2006年8月-2008年9月,采用宫腔镜子宫内膜电切术（transcervical resection of endometrium,TCRE）治疗反复药物治疗无效的功血36例,术前诊断性刮宫子宫内膜病理为单纯性增生23例,息肉样增生13例。术后第1、3、6、12个月随访。结果 36例TCRE手术均顺利完成。无子宫穿孔、过度水化综合征和盆腔脏器电损伤等并发症。均完成1年随访,闭经29例（80.6%）,点状出血5例（13.9%）,月经少2例（5.6%）。术后6个月FSH与术前差异无显著性（P〉0.05）。结论 TCRE是治疗难治性功血的微创技术,具有安全有效、不影响卵巢内分泌功能等优点。

大鼠间充质干细胞的体外分离培养及CFSE标记

目的探讨体外分离、培养及荧光染料CFSE标记大鼠间充质干细胞(MSCs)的方法。方法Wistar大鼠10只。用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离纯化大鼠MSCs并进行鉴定。荧光染料CFSE标记MSCs,荧光显微镜检测标记率,CCK-8法检测标记细胞的增殖能力。结果原代MSCs72h贴壁,呈梭形,集落样生长;传代后,细胞变为形态均一,排列有序的成纤维细胞样。CFSE标记当天,荧光显微镜下大鼠MSCs呈明亮的绿色荧光,标记率达100%,随着培养时间延长,荧光强度逐渐减弱,标记率随之下降,标记4周后,标记率下降至78%;标记细胞的增殖能力与未标记细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论利用密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs;CFSE短期标记MSCs效率很高,且标记细胞的增殖能力不受影响,但荧光强度及标记率随着时间延长而下降。

腹腔镜器械在开腹卵巢癌肿瘤细胞减灭术中的应用

目的探讨腹腔镜器械（超声刀和血管闭合切割系统）在开腹卵巢癌肿瘤细胞减灭术中的应用价值。方法回顾性分析2010年1月～2013年6月45例开腹卵巢癌肿瘤细胞减灭术的临床资料，前30例使用传统开腹器械，后15例使用腹腔镜器械。比较2组的切口长度、手术时间、术中出血量、术后排气时间以及术后并发症的差异。结果与传统开腹器械相比，使用腹腔镜器械可缩小切口长度[（13．4±2．2）emVS．（20．2±2．7）cm，t=－8．391，P：0．000]，缩短手术时间[（160．7±30．1）min vs．（205．7±31．3）min，t=一4．610，P=0．000]，减少术中出血量[（286．7±76．7）mlVS．（403．3±80．9）ml，t=－4．639，P=0．000]，缩短住院时间[（10．3±2．2）dVS．（12．1±2．3）d），t：－2．523，P=0．015]。2组术后均无并发症发生。结论腹腔镜器械在开腹卵巢癌肿瘤细胞减灭术中有着良好的应用前景，值得推广。

miR-21慢病毒载体构建及对骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景:骨髓间充质干细胞移植后凋亡成为治疗化疗性卵巢早衰效果欠佳的主要原因。miR-21参与细胞增殖与凋亡的调控,有重要的抗凋亡作用。目的:构建miR-21慢病毒载体并感染骨髓间充质干细胞,观察其对化疗药物磷酰胺氮芥诱导的骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法:构建携带miR-21基因慢病毒表达载体LVX-shRNA2-rno-miR-21-5p,双酶切及基因测序鉴定证实载体构建成功。对载体进行包装、测定病毒滴度。将慢病毒颗粒以不同感染复数(20和40)感染骨髓间充质干细胞,检测感染效率,使用real-time PCR法检测骨髓间充质干细胞中miR-21的表达。流式细胞仪、Hoechst33342染色检测骨髓间充质干细胞在磷酰胺氮芥模拟的化疗微环境中的凋亡率。结果与结论:(1)成功构建miR-21慢病毒载体,病毒滴度约为6×10^(11) CFU/L;(2)载体转染骨髓间充质干细胞效率达90%以上;(3)miR-21组1(感染复数为20)、miR-21组2(感染复数为40)miR-21表达量明显高于骨髓间充质干细胞组及空载组(P=0.000);(4)转染组骨髓间充质干细胞的凋亡率、凋亡指数均低于空载组及骨髓间充质干细胞组(P=0.001);(5)实验成功构建大鼠miR-21慢病毒载体系统,miR-21上调能抑制骨髓间充质干细胞凋亡,促进细胞增殖。

脐带间充质干细胞移植对免疫性卵巢早衰的影响

目的探讨脐带间充质干细胞(UCMSCs)移植对自身免疫性卵巢早衰小鼠卵巢结构、功能的影响。方法以透明带3(ZP3)作为免疫原建立小鼠自身免疫性卵巢早衰动物模型。实验分为4组:空白对照组、模型组、实验对照组及移植组。空白对照组不注射ZP3及UCMSCs;模型组建立动物模型,不予移植;实验对照组建模后,双卵巢内注射生理盐水;移植组在建模成功即予每侧卵巢约注射1×106个UCMSCs。于移植后15、30、45及60 d分批处死小鼠,收集血标本检测性激素[雌二醇(E2)、卵泡刺激素(FSH)]浓度;留取卵巢标本,荧光显微镜下观察有无绿色荧光及其分布,计数卵泡数目。结果 UCMSCs移植后15 d,移植组卵巢组织内可见到绿色荧光,且持续至移植后2个月。绿色荧光主要分布在卵巢的间质组织,而卵泡内则见不到绿色荧光的分布。移植组部分小鼠恢复正常的动情周期。移植后各个时间点内,移植组E2浓度高于模型组及实验对照组,FSH浓度则降低。移植45、60 d时,移植组的各级卵泡数目均高于模型组及实验对照组,但低于空白对照组。结论 UCMSCs可以在透明带抗原免疫损伤的小鼠卵巢组织内存活并迁移,但其分化为卵泡组分的可能性较小。UCMSCs移植可修复透明带免疫损伤的卵巢组织,从而部分改善其内分泌功能。

重组腺病毒介导的绿色荧光蛋白基因转染大鼠间充质干细胞的实验研究

目的体外研究重组腺病毒载体介导绿色荧光蛋白基因转染大鼠间充质干细胞(MSCs)的方法。方法用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离纯化大鼠MSCs并进行鉴定,重组绿色荧光蛋白的腺病毒载体Ad-GFP转染,荧光显微镜检测其转染效率,CCK-8法检测转染细胞的增殖能力。结果Ad-GFP对大鼠MSCs的感染率高达90.0%,感染1月后仍有稳定表达;转染细胞的增殖能力与未转染细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组腺病毒载体Ad-GFP可高效感染MSCs,基因转染后细胞的增殖能力不受影响,可作为一种高效的大鼠MSCs的标记方法。

骨髓间充质干细胞抑制磷酰胺氮芥诱导的卵巢颗粒细胞凋亡

目的:探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对磷酰胺氮芥(Phosphoramide Mustard,PM)诱导卵巢颗粒细胞凋亡的影响及可能机制。方法:培养雌性Wistar大鼠卵巢颗粒细胞,加入PM诱导凋亡后,与MSCs共培养(MSCs:颗粒细胞分别为1:1,1:5和1:10),Hochest33342、PI双染和DNA-ladder检测凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果:PM可引起颗粒细胞凋亡。与MSCs共培养后,电泳图无明显的梯状带形,凋亡细胞比例下降,细胞存活率上升,差异有统计学意义。Western blot显示,与MSCs共培养后,颗粒细胞Bcl-2表达水平增高,Bax表达水平无变化。结论:MSCs对PM诱导的卵巢颗粒细胞凋亡有抑制作用,其作用机制可能与上调Bcl-2在颗粒细胞中的表达密切相关,为进一步的体内实验及临床应用提供了实验依据。

体外培养、冻存及复苏对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

用密度梯度离心及贴壁法相结合的方法分离纯化Wistar大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)。第3代MSCs在10%二甲亚砜(DMSO)保护下放入液氮中(-196℃)冻存,6个月后复苏,检测其存活率,观察形态及生长情况,细胞计数试剂-8(CCK-8)检测MSCs的增殖能力、流式细胞仪检测细胞表面标记(CD29、CD34、CD44和CD45)的表达及细胞周期特性。结果:原代MSCs 72 h贴壁,呈梭形,呈集落样生长;传代后,细胞变为形态均一排列有序的成纤维细胞样。冻存MSCs复苏后存活率为86.5%。冻存MSCs与未冻存MSCs比较,增殖能力、细胞表面标记及细胞周期无明显变化。认为密度梯度离心法结合贴壁法可以获得比较纯的MSCs,采用液氮冻存大鼠MSCs不改变其增殖能力及生物学特性。