天茄子乙酸乙酯部位化学成分研究

采用脂多糖诱导小鼠单核巨噬细胞RAW 264.7炎症模型导向研究天茄子(Ipomoea turbinata seeds)的抗炎活性成分。采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI、ODS柱色谱及半制备型高效液相等方法对乙酸乙酯活性部位进行分离纯化,结合现代波谱技术与理化性质确定化合物结构。从中共分离鉴定了15个化合物,分别为华佗豆甲碱(1)、华佗豆丙碱-4′-O-β-D-(6-O-反式香豆酰基)葡萄糖苷(2)、1,8,15,22-四氮杂环二十八烷-2,9,16,23-四酮(3)、1,8,15,22,29-五氮杂环三十五烷-2,9,16,23,30-五酮(4)、绿原酸甲酯(5)、绿原酸(6)、3,5-二咖啡酰基奎宁酸(7)、3,4-二咖啡酰基奎宁酸(8)、咖啡酸(9)、3,5-二羟基桂皮酸(10)、4-甲氧基肉桂酸(11)、6-氧-(E)-对羟基桂皮酰基-1-β-乙基-葡萄糖甙(12)、E-3-(3,4-二羟基苯亚甲基)-5-(3,4-二羟基苯基)二羟基呋喃-2-酮(13)、丁香脂素-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(14)和松脂素-4-O-β-D-葡萄糖苷(15)。化合物3~8和10~15为首次从该植物中分离得到,其中8个化合物(3~5、10~13和15)为首次从旋花科中分离得到。活性筛选结果表明,咖啡酰奎宁酸类(5~8)和苯丙酸类成分(9~12)显示有较好的抑制NO释放活性,在50μmol/L浓度下抑制率为29.07%~40.30%。

基于Ⅰ相代谢调控的葛根素微乳的制备及其药动学研究

目的:制备具有Ⅰ相代谢调控作用的葛根素微乳(R-PR-ME),并研究其在大鼠体内的药动学特征。方法:采用Shah法制备R-PR-ME和无代谢调控作用的葛根素微乳(NR-PR-ME),采用伪三元相图及以载药量为指标优化微乳处方,并用激光粒度仪对其粒径和多分散系数(PDI)进行表征。以大鼠为动物模型,采用高效液相色谱法,分别测定以葛根素计120 mg/kg的剂量灌胃R-PR-ME、NR-PR-ME和葛根素混悬液(PR-SP)前和灌胃后5、10、15、20、30、45、60、90、120、180、240、360、480、600min葛根素的血药浓度,使用DAS2.0软件计算药动学参数,SPSS19.0软件进行统计分析,以NR-PR-ME为参比制剂计算R-PR-ME的相对生物利用度。结果:R-PR-ME处方为油酸聚乙二醇甘油酯(油相)-聚山梨酯20(乳化剂)-辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(助乳化剂)的质量比为2∶4∶4,载药量为67.50mg/g,粒径为(22.59±0.53)nm(n=3),PDI为0.182±0.017(n=3);NR-PR-ME处方为大豆油(油相)-聚山梨酯80(乳化剂)-甘油(助乳化剂)的质量比1∶4.5∶4.5,载药量为61.32mg/g,粒径为(15.45±1.06)nm(n=3),PDI为0.156±0.012(n=3)。R-PR-ME、NR-PR-ME和PR-SP在大鼠体内的AUC0-600 min分别为(134.187±37.152)、(65.145±18.762)、(49.623±12.143) g min/mL;cmax分别为(1.316±0.306)、(1.082±0.294)、(0.425±0.106) g/mL;MRT分别为(155.068±33.204)、(100.264±27.683)、(60.524±14.086)min,t1/2β分别为(365.880±101.250)、(283.280±80.940)、(80.063±21.189)min(n=6);与PR-SP比较,R-PR-ME和NR-PR-ME的AUC0-600 min、cmax、MRT、t1/2β均明显增加(P<0.05或P<0.01);与NR-PR-ME比较,R-PR-ME的AUC0-600 min、MRT、t1/2β均更高(P<0.05),R-PR-ME的相对生物利用度为205.98%。结论:成功制得R-PR-ME,且其载药量高,与PR-SP和NR-PR-ME比较,R-PR-ME可显著增加葛根素在大鼠体内的生物利用度。

水解工艺对苦荞提取物中槲皮素含量的影响及其药代动力学研究

目的:以苦荞提取物为研究对象,通过正交实验设计优化苦荞提取物中芦丁被酸水解为槲皮素的工艺条件,并结合药代动力学研究探讨酸水解工艺对苦荞提取物中芦丁和槲皮素吸收的影响。方法:以盐酸百分含量、水解时间、乙醇百分含量、水解温度作为因素设计四因素三水平正交实验优化苦荞提取物中芦丁酸水解为槲皮素的工艺条件,以该工艺进行苦荞提取物酸水解,并在水解第1、2、4、6 h取样得到不同槲皮素含量的水解产物1、2、3、4。分别灌胃大鼠200 mg/kg的苦荞提取物及各水解产物,并在不同时间点采血,以黄芩素为内标,高效液相色谱(HPLC)测定血浆中槲皮素的浓度,DAS 2.0计算主要药代动力学参数。结果:苦荞提取物芦丁酸水解的最佳工艺参数为盐酸百分含量0.91%、水解时间6 h、乙醇百分含量50%、水解温度70℃,在该工艺条件下64.11%芦丁转化为槲皮素。苦荞提取物、水解产物1、2、3、4槲皮素的AUC_(0-t)分别为(17.604±5.422)、(42.175±9.435)、(87.917±19.347)、(116.706±46.256)、(178.509±49.478)mg/L·h,C_(max)分别为(2.743±1.217)、(7.109±2.603)、(12.438±3.197)、(15.727±4.68)、(20.044±5.736)mg/L。与苦荞提取物相比,其水解产物1、2、3、4的药代动力学参数AUC_(0-t)、C_(max)具有显著性差异(p<0.05)。结论:苦荞提取物经酸水解后部分芦丁转化为槲皮素,芦丁和槲皮素在大鼠体内的累计吸收量也相应提高。

四神丸方的化学成分及入血成分分析

目的采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱技术对四神丸方的化学成分及入血成分进行初步鉴定和分类归属。方法将SD大鼠分为空白组和给药组,给药组大鼠灌胃给予四神丸方水提液,分别采集空白及含药血浆。采用Hypersil GOLD VANQUISH色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.9μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱,体积流量0.3 mL·min^(-1),柱温35℃;采用电喷雾离子源(ESI),正、负离子扫描模式,进行色谱分离和质谱数据采集。将精确相对分子质量、碎片离子信息和相对保留时间与对照品图谱比对、与自建数据库匹配并结合文献报道,鉴定四神丸方化学成分;在此基础上比对空白血浆和含药血浆,分析四神丸方入血成分。结果从四神丸方中共鉴定出181种化学成分,主要包括黄酮类、生物碱类、木脂素类等成分。从血浆样本中共鉴定出49种原型入血成分,主要包括黄酮类、生物碱类等成分。结论全面、准确、快速地识别鉴定了四神丸方及其含药血浆中多种化学成分,各类成分归属到了方中各味药材,为四神丸方质量控制、药效物质基础研究及临床应用提供参考。

四神丸对肠易激合并抑郁模型大鼠的作用与机制研究

目的探讨四神丸对肠易激综合征合并抑郁模型大鼠的改善作用及机制。方法SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、盐酸氟西汀组和四神丸低、中、高剂量组。采用番泻叶灌胃联合慢性不可预知温和刺激建立模型,腹壁撤退反射、粪便含水量测定及糖水偏好实验检验模型。模型复制成功后给药14 d,给药结束后检测大鼠肠道敏感性和粪便含水量,并进行糖水偏好、旷场及强迫游泳实验,HE染色法观察海马和结肠病理结构变化,ELISA法测定大鼠海马5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)、多巴胺(dopamine,DA)、去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)水平和结肠及血清内5-HT含量。结果与正常组比较,模型组大鼠海马和结肠形态结构损伤并伴有炎性细胞浸润,糖水偏好率和自主活动明显降低(P<0.01),肠道敏感性、稀便率和强迫游泳不动时间明显增加(P<0.01),海马组织中5-HT、DA、NE、BDNF含量明显降低(P<0.01),血清和结肠5-HT含量明显升高(P<0.01)。与模型组比较,四神丸各剂量组及盐酸氟西汀组大鼠上述指标均有不同程度改善,其中四神丸高剂量组大鼠海马和结肠形态结构损伤修复,无炎性细胞浸润,糖水偏好率和自主活动明显增加(P<0.05),肠道敏感性,稀便率和强迫游泳不动时间明显下降(P<0.01);海马组织中5-HT、DA、NE、BDNF含量明显升高(P<0.01);血清和结肠5-HT含量明显降低(P<0.01)。结论四神丸具有改善肠易激综合征合并抑郁模型大鼠肠道症状及抑郁样行为的作用,可能与其调节海马内神经递质及血清和结肠5-HT水平、恢复肠道和中枢神经系统功能有关。

半夏乙酸乙酯部位化学成分及抗炎活性研究

研究半夏(Pinelliae Rhizoma)的化学成分及其抗炎活性。采用硅胶、MCI、ODS、Toyopearl HW-40C柱色谱及半制备液相等方法对半夏乙酸乙酯萃取部位进行分离纯化,根据理化性质结合现代波谱技术鉴定化合物结构。从中共分离鉴定了26个化合物,分别为环-(L-脯-8-羟基-D-异亮)二肽(1)、环-(L-脯-L-亮)二肽(2)、环-(L-脯-L-苯丙)二肽(3)、环-(L-脯-L-缬)二肽(4)、腺苷(5)、5′-硫甲基-5′-硫代腺(6)、2′-O-甲基腺苷(7)、腺嘌呤(8)、1,8,15-三氮杂环二十一烷-2,9,16-三酮(9)、1,8,15,22-四氮杂环二十八烷-2,9,16,23-四酮(10)、1,8,15,22,29-五氮杂环三十五烷-2,9,16,23,30-五酮(11)、壬二酸二甘油酯(12)、棕榈酸单甘油酯(13)、亚油酸甘油酯(14)、9,12-十八烷二烯基N-羟乙基(15)、亚麻酸2-丁氧基乙酯(16)、(2 S)-1-O-(9 Z,12 Z-十八烷二烯基)-3-O-β-半乳糖基甘油(17)、胡萝卜苷-6′-O-棕榈酸酯(18)、邻苯二甲酸二-(2-乙基)-己酯(19)、落叶松脂素(20)、落叶松脂醇-9-O-β-吡喃葡萄糖苷(21)、(+)-表松脂素-4′-O-β-吡喃葡萄糖苷(22)、(+)-异落叶松脂素-9′-O-β-吡喃葡萄糖苷(23)、(+)-异落叶松脂素-9-O-β-吡喃葡萄糖苷(24)、香草酸(25)、对羟基肉桂醇(26)。其中,化合物1、3、4、8~12、15、16、19、22和23为首次从半夏中分离得到。采用脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)模型对部分单体化合物进行抗炎活性筛选。结果显示,化合物2、3、11、16和21具有抑制NO释放作用,其中化合物16的NO抑制作用较强,其IC 50值为10.47±0.89μmol/L。

蟾皮化学成分的分离与结构鉴定

蟾皮为蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizansCantor的干燥皮,在我国民间多用来治疗原发性肝癌、肺癌、肠癌等,其水溶性成分制剂华蟾素注射液临床上用于消化道中晚期癌症,疗效确切,体外抗肿瘤活性筛选也表明蟾皮水提取物对结肠癌细胞HCT-8、肺癌细胞A-549生长均有明显的抑制作用。为了阐明其活性成分,对其水溶性成分进行了系统研究,采用Sephadex LH-20、硅胶柱色谱结合结晶法,从其水提物中分离得到6个化合物,分别鉴定为4-氨基-3-羟甲基-环辛酰胺骈四氢-α-呋喃酮(蟾蜍环酰胺B,I)、蟾蜍环酰胺C(II)、蟾蜍噻咛(III)、去氢蟾蜍色氨氢溴酸盐(IV)、辛二酸(V)和丁二酸(VI),其中化合物I和II为新化合物。

蟾皮和华蟾素注射液中蟾蜍噻咛含量测定

目的：建立蟾皮中蟾蜍噻咛的含量测定方法，比较不同产地及养殖方式对蟾皮中蟾蜍噻咛含量的影响。方法：采用高效液相色谱法测定了不同产地蟾皮中蟾蜍噻咛的含量，色谱柱Lichrosob C18（4．6mm×250mm，5μm），流动相乙腈-水（10：90），检测波长225nm，流速1．0mL·min^-1。结果：回归方程为Y=7．489×10^4＋2．791×10^5X，r=0.9999，平均回收率为99．2％，蟾皮中蟾蜍噻咛的质量分数在36．4～641．8μg·g^-1，华蟾素注射液中的质量分数在22．47～33．16μg·mL^-1。结论：蟾皮中蟾蜍噻咛在野生和养殖品种中的差异较大。该方法快速简便，重复性良好，可用于蟾皮和华蟾素注射液中蟾蜍噻咛的含量测定。

河南新乡县农村居民幽门螺杆菌感染调查

目的 了解河南省新乡县农村居民幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，lip）的感染情况，为预防Hp感染和Hp相关疾病的防治提供依据。方法 对河南省新乡县小冀镇有上消化道症状或有消化道疾病家族史者及其家庭成员1057人，采用酶联免疫吸附试验（ELIsA）法检测Hp-IgG抗体。应用SPSS10．0统计软件进行分析。结果 血清Hp抗体阳性率为77．22％，其中男性为78．16％，女性为76．57％，男女间差异无统计学意义。各年龄组Hp感染率经趋势Y0检验差异无统计学意义，以25岁～组感染率最高（85．21％）。195对配偶中，一方Hp阳性，其配偶Hp阳性率为92．81％；一方Hp阴性，另一方Hp阳性率为30．95％，差异有统计学意义（x^2=77．335，P〈0．01）。结论 新乡县农村居民Hp感染率很高，且有家庭聚集性。

河南省新乡县农村居民慢性病现状调查

目的调查分析河南省新乡县居民健康状况。方法采取整群抽样的方法对新乡县9334名农村居民以家庭为单位进行慢性病问卷调查,数据用SPSS软件进行分析。结果新乡县慢性病患病率为12.42%,是1998年全国农村水平的1.35倍;男性患病率高于全国水平,但未高于女性;年龄越大,患病率越高;婚姻状况不良者,患病率较高;随文化程度的升高,患病率降低。主要的慢性病病种是心血管系统和消化系统疾病。结论慢性病的预防工作应作为农村医疗卫生工作的重点,农村卫生服务需求量仍较大。

幽门螺杆菌融合蛋白HspA-UreB的表达和免疫学活性

目的:构建表达幽门螺杆菌(H pylori)融合蛋白HspA-UreB 的重组表达质粒,并研究其免疫学活性. 方法:定向克隆方法将郑州分离Hp菌株MEL-HP27的hspA 和ureB基因融合连接入原核表达载体pET30(a),构建重组表达质粒pET-HU27.该质粒转化大肠杆菌BL21后经IPTG诱导,SDS-PAGE分析融合蛋白HspA-UreB表达情况.Ni2+柱亲和层析纯化融合蛋白,与小鼠免疫血清进行Western blot分析,检测融合蛋白的免疫反应性. 结果:特异PCR法与质粒酶切鉴定证实重组表达质粒pET- HU27构建成功.SDS-PAGE分析显示在82.1 KDa处出现特异蛋白带,占菌体总蛋白的21%,亲和层析法获得纯度为91%的纯化融合蛋白,经免疫小鼠制备的血清可以识别该融合蛋白. 结论:成功构建表达H pylori HspA-UreB融合蛋白的重组表达质粒,表达的融合蛋白具有良好的免疫反应性.

基于理化鉴别法的中药鉴定学教学模式的建立

中药鉴定学是中药专业骨干专业课程,是一门实践性较强的应用学科。如何以中药鉴定学课程为依托进行学生实践能力与创新能力的培养,是新时期高等医药教育人才培养的重要组成部分。以理化鉴别课堂教学环节为载体,探讨中药鉴定学加强实践能力培养教学模式的建立,明确专业课与基础课相互关系,强化专业课在高等教育能力培养与素质教育中的桥梁作用,具有重要的现实意义。

幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位编码基因的克隆与序列分析

目的 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)热休克蛋白A亚单位的编码基因(hspA)克隆和序列分析,为H.pylori基因工程疫苗的研究奠定基础。方法 应用PCR方法获得国内分离H.pylori菌株MEL-HP27和国际标准参考株H.pylori的hspA基因,通过定向克隆的方法分别插入克隆载体pNEB193中,用质粒酶切电泳和特异PCR方法鉴定重组质粒。克隆基因经测序后进行核苷酸和氨基酸的同源性比较。结果 重组质粒经双酶切后得到0.35kb的hspA基因片段,特异PCR可扩增出hspA基因片段,证实H.pylorihspA基因的重组克隆质粒构建成功。经测序,国内分离HpMEL-HP27的hspA基因全长357bp(Genbank收录号:AY295084),编码由118个氨基酸残基组成的肽链,hspA基因序列与GenBank公布的H.pylori相应基因同源性高达95.20％-97.48％,氨基酸序列同源性在95.76％-97.46％之间。结论 克隆了H.pylori菌株MEL-HP27的hspA基因,其核酸序列与国际参考株NCTC11637同源性为97.48％。

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位编码基因的克隆与序列分析

目的 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)尿素酶B亚单位的编码基因(ureB)的克隆和序列分析,为H.pylori基因工程疫苗的研究奠定基础。方法 应用PCR方法获得国内分离H.pylori菌株MEL-HP27和国际标准参考株H.pylori的ureB基因,通过定向克隆的方法分别插入克隆载体pNEB193中,用质粒酶切电泳和特异PCR方法鉴定重组质粒。克隆基因经测序后进行核苷酸和氨基酸的同源性比较。结果 重组质粒经双酶切后得到1.71 kb的ureB基因片段,特异PCR可扩增出ureB基因片段,证实H.pyloriureB基因的重组克隆质粒构建成功。经测序,国内分离H.pylori MEL-HP27的ureB基因全长1710bp(Genbank收录号:AY295085),编码由569个氨基酸残基组成的肽链,ureB基因序列与GenBank公布的H.pylori相应基因同源性高达96.08％-98.30％,氨基酸序列同源性在98.77％-99.82％之间。结论 成功克隆了MEL-HP27菌株的ureB基因,其核苷酸序列与国际参考株NCTC11637的同源性为97.67％。

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位在大肠杆菌中的融合表达与鉴定

目的 通过对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hipylori)尿素酶B亚单位在大肠杆菌中表达的研究,探索其免疫反应性。方法 用高保真PCR方法扩增H.pylori ureB基因,并定向克隆入pNEB193中,然后经酶切回收后插入原核表达载体pMAL-C2X进行融合表达。采用蛋白印迹法对表达产物进行鉴定。结果 特异PCR和酶切鉴定证实融合基因ureB克隆入表达载体,SDS-PAGE结果显示ureB在大肠杆菌中以融合蛋白形式MBP-ureB高效表达,约占细胞总蛋白量的26.7％。该融合蛋白可与H.pylori阳性病人血清发生特异反应。结论 成功构建了能高效表达H.pylori ureB的重组菌,为Hp基因工程疫苗的进一步研究奠定了基础。

8种肿瘤相关抗原检测原发性肝癌的诊断价值评价

目的:对8种肿瘤相关抗原(tumor-assoc iated antigen,TAA)用于检测肝癌的诊断价值进行评价,从而寻找一种真实可靠的肝癌早期诊断方法。方法:利用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测原发性肝癌患者血清和正常血清中8种TAA抗体(包括C-myc,Cyc linB1,IMP1,Koc,P16,P53,P62,Survivin),利用流行病学方法对各抗原检测结果的真实性进行评价。结果:每种抗原检测结果单独进行判断时,大多数指标的灵敏度偏低;对8种TAA进行不同的组合,结果随着抗原种类的增多,诊断的灵敏度随之增加,8种抗原联合检测的灵敏度达到了81%,特异度也达到了86.7%,阳性预测值92.1%,阴性预测值70.3%,提示8种抗原并联试验检测肝癌时大大提高了诊断质量。阳性似然比6.09,说明8种抗原联合检测肝癌的临床诊断价值较高,kappa值0.78,提示该试验诊断结果与真实值之间高度一致。结论:利用8种TAA抗原联合检测肝癌,具有较高的真实性,为现场高危人群的筛检和临床中肝癌的早期诊断提供了一种新方法。

阻塞性睡眠呼吸暂停不同亚型患者脂代谢紊乱的初步研究

目的初步探索阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)不同亚型的脂代谢紊乱差异。方法选取2017年1月—2019年12月就诊于郑州大学第一附属医院经多导睡眠监测(PSG)确诊的成年OSA患者848例。根据OSA严重程度及基于年龄、性别、绝经状态的不同亚型分组,比较各组血脂水平的差异。结果男性比例、BMI、吸烟史和高血压病史、呼吸暂停低通气指数(AHI)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)随着OSA严重程度增加而逐渐升高(P<0.05),夜间最低血氧饱和度(LSaO_(2))、高密度脂蛋白(HDL)随着OSA严重程度增加而逐渐降低(P<0.05)。非老年男性组AHI、TG高于非老年女性组,HDL、LSaO_(2)低于非老年女性组(P<0.05);老年男性组LSaO_(2)高于老年女性组(P<0.05);老年男性组AHI、TC)、TG、LDL低于非老年男性组,LSaO_(2)、HDL高于非老年男性组(P<0.05);老年女性组AHI高于非老年女性组(P<0.05)。绝经后女性组AHI高于未绝经女性组(P<0.05)。高血压组AHI高于非高血压组,TC、HDL、LDL低于非高血压组(P<0.05)。结论不同亚型OSA患者的血脂异常存在差异。OSA患者血脂异常与性别、年龄相关,非老年男性血脂变化更加显著。对OSA患者不同亚型分别进行综合评估,对于心脑血管并发症的管理有重要意义。

幽门螺杆菌vacA基因PCR-RFLP分型

目的为幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,简称Hp)的基因分型提供一种可选择的指标,并通过分型与空泡毒素(vacuolatingcytotoxingeneAproduct,VacA)表达情况分析HpvacA基因的多态性。方法用自行设计的引物对18株Hp的vacA基因进行扩增,用7种限制性内切酶对基因扩增产物进行限制性片段长度多态性(RestrictionFragmentLengthPolymorphism,RFLP)分析;通过细胞测毒法对18株HpVacA活性进行检测。结果18株Hp的vacA扩增产物为2.75kb左右,但长度有差异;只有HeaⅢ可将vacA基因切出整齐的谱型,18株Hp被分为12种谱型。未发现VacA表达相关的谱型。结论HpvacA基因具有一定的多态性,而vacA基因的PCR产物经HeaⅢ酶切的RFLP分型可作为Hp基因分型的较理想选择指标。为Hp分子流行病学调查提供一种有效方法。

羚羊角与柴性羚羊角生药学研究

目的采用不同的方法对羚羊角、柴性羚羊角进行生药学研究。方法分别采用性状鉴别法、显微鉴别法、薄层色谱法、紫外光谱法对柴性羚羊角、羚羊角进行对比研究。结果柴性羚羊角与羚羊角药材的性状特征、显微特征、紫外光谱特征等方面均存在显著差异;色谱法、光谱法鉴别结果均提示羚羊角药材风化后其化学成分差别较大。结论从药材形态及所含物质基础两个层面对柴性羚羊角与羚羊角对照药材进行了比较研究,建立了柴性羚羊角药材生药学资料库,为柴性羚羊角的鉴别方法提供了有益探讨。