4种不同浓度的水凝胶在小鼠脑、肝、肾组织透明化中的应用效果比较

目的比较4种不同浓度水凝胶在小鼠脑、肝、肾组织透明化中的应用效果。方法根据丙烯酰胺(A)、甲叉双丙烯酰胺(B)、多聚甲醛(P)的终浓度比,制备A4B4P4(A∶B∶P=4%∶0. 05%∶4%)、A2B2P4(A∶B∶P=2%∶0. 025%∶4%)、A1B1P4(A∶B∶P=1%∶0. 0125%∶4%)、A4B4P0(A∶B∶P=4%∶0. 05%∶0)水凝胶。选取8只昆明小鼠随机分为4组,每组2只,分别采用A4B4P4、A4B4P0、A2B2P4、A1B1P4水凝胶进行灌注,然后行组织固定及透明化处理。计算经4种水凝胶处理后小鼠脑、肝、肾组织的相对透明度及蛋白损失量。结果 A2B2P4组、A1B1P4组小鼠脑组织相对透明度均高于A4B4P4、A4B4P0组(均P <0. 05); A1B1P4组小鼠肝组织的相对透明度高于其他3组(均P <0. 05); A2B2P4、A1B1P4组小鼠肾组织的相对透明度均高于A4B4P4、A4B4P0组(均P <0. 05)。A4B4P0组小鼠脑、肝、肾组织蛋白损失量均大于其他3组(均P <0. 05),A2B2P4组小鼠肝、肾组织蛋白损失量均低于A1B1P4组(均P <0. 05)。结论 A2B2P4、A1B1P4水凝胶在小鼠脑组织透明化中的应用效果最佳,A1B1P4、A2B2P4水凝胶分别在小鼠肝组织、肾组织透明化中的应用效果最佳。

双相水凝胶组织固定联合脂肪酶浸泡对小鼠肝组织透明化的影响

目的:探讨双相水凝胶组织固定联合脂肪酶浸泡对小鼠肝组织透明化的影响。方法:取10只昆明小鼠的肝组织,利用双相水凝胶进行固定,切取1mm厚的肝组织10片,将其随机分为十二烷基硫酸钠(SDS)组和SDS+脂肪酶组。SDS组采用SDS清除液进行被动脂质清除9d,SDS+脂肪酶组先采用SDS清除液被动脂质清除5d,随后浸泡于脂肪酶溶液中4d。两组于清除前、清除后第1天至第9天均进行透明灰度值测定,于脂质清除完毕后予以细胞核DAPI染色检测标记深度。结果:在被动脂质清除过程中,第1天至第5天肝组织薄片的透明灰度值逐渐提升,但之后肝组织片清除速度缓慢,在第10天的清除仍然是不透明的;在第7、第9天,两组相对透明灰度值比较,差异有统计学意义(P<0.01);SDS+脂肪酶组DAPI染色深度达115μm,而SDS组DAPI染色深度达60μm,SDS+脂肪酶组DAPI渗透深度是SDS组的1.92倍。结论:双相水凝胶组织固定联合脂肪酶浸泡脂质清除技术可以快速实现小鼠肝组织透明化,为肝组织生物学研究提供技术支持。

清晰脂质交换丙烯酰胺杂交精细成像相容性组织水凝胶技术的改良及应用研究进展

清晰脂质交换丙烯酰胺杂交精细成像相容性组织水凝胶(CLARITY)技术作为一种全新的组织形态学研究技术,通过将组织器官脂质清除与光学成像结合,允许整个组织器官在亚细胞分辨率中具有可视化,其已经成为进一步了解完整生物组织结构信息的有力途径。目前该技术已经广泛应用到生物系统各领域,从小鼠神经组织到整体器官、斑马鱼、死后人脑组织,甚至植物器官。本文主要针对CLARITY技术改良及应用生物研究进展进行综述。

岩黄连水提物对肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响及其可能机制

目的观察岩黄连水提物对原发性肝癌HepG2细胞增殖和迁移能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法将含不同浓度(0.4 mg/mL、0.8 mg/mL、1.6 mg/mL)的岩黄连水提物100 m L作用于肝癌HepG2细胞,以等量未处理培养基培养的肝癌HepG2细胞为对照组。采用CCK-8法检测肝癌HepG2细胞的增殖能力,Transwell法检测细胞迁移能力,Western blot和荧光定量PCR分别检测NF-κBp65蛋白和m RNA的表达水平。结果 CCK-8实验结果显示,24 h、48 h和72 h不同浓度岩黄连水提物作用肝癌HepG2细胞的增殖抑制率组内差异均有统计学意义(P<0.01),且0.8 mg/mL、1.6 mg/mL干预的细胞增殖抑制率均高于0.4 mg/mL(P<0.01)。Transwell实验结果显示,不同浓度岩黄连水提物作用肝癌HepG2细胞48 h后的细胞迁移数均低于对照组(P<0.001),且可上调NF-κBp65蛋白和mRNA的表达(P<0.001)。结论岩黄连水提物能抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移能力,其作用机制可能与上调NF-κBp65表达有关。

干扰PRMT2基因对肝癌细胞系生物学行为的影响

目的:研究抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因的表达对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测人肝癌细胞系(HepG2和SMMC-7721)和人正常肝细胞(LO2)中PRMT2的表达情况;设计并合成针对PRMT2基因的3对小干扰RNA,体外通过脂质体Lipofectamine 3000转染到相对高表达PRMT2的人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中抑制PRMT2基因的表达,并设置阴性对照组(NC组)和空白对照组。qRT-PCR、Western blot检测转染后细胞PRMT2 mRNA水平和蛋白水平的变化。CCK-8法检测转染后细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞体外迁移及侵袭能力。结果:与人正常肝细胞LO2相比,PRMT2基因在人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中相对高表达。将siPRMT2转染HepG2和SMMC-7721细胞后,与NC组相比,siPRMT2-1和siPRMT2-2组的PRMT2 mRNA和蛋白表达均明显降低(P均<0.05),NC组与空白对照组无明显差异。与NC组相比,将siPRMT2-1和siPRMT2-2转染进HepG2和SMMC-7721细胞后,细胞增殖速度减慢、迁移和侵袭能力显著减弱(P均<0.05),NC组与空白对照组无明显差异。结论:RNA干扰抑制PRMT2表达后,抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,PRMT2可能影响肝癌的预后。