miR-369-5p对SD大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的影响

目的探讨miR-369-5p对大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)活化增殖的影响。方法差速贴壁离心法提取CFs,并于倒置相差显微镜下进行形态鉴定。分别向各组细胞瞬时转染miR-369-5p抑制物、miR-369-5p模拟物、阴性对照组(NC)24～48 h后,应用实时定量PCR检测miR-369-5p、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和I型胶原前胶原A1(Col1A1)的蛋白表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;Western blot测定α-SMA和Col1A1蛋白表达。结果 miR-369-5p在模拟物组CFs中表达上调;而在抑制物组中的表达下降。Western blot结果显示,α-SMA和Col1A1蛋白在模拟物组中的表达明显降低,在抑制物组中的表达明显增加。CFs瞬时转染miR-369-5p模拟物后培养48 h,CFs增殖活力明显下降,而抑制物组的CFs活力明显增强。结论 miR-369-5p表达下调能够促进CFs的活化增殖,提示miR-369-5p是心肌纤维化的可能作用靶点。

表达miR-150shRNA细胞株的初步建立

为了探讨融合microRNA重组干扰载体构建的方法,为今后mi R-150对猪瘟病毒(CSFV)潜在的调控进行研究,利用生物信息学技术筛选出mi R-150,设计并合成了表达mi R-150的两条shRNA序列的DNA单链,将其退火后与干扰载体pGenesil-1连接,构建了含有mi R-150shRNA和绿色荧光蛋白基因的重组干扰质粒pGene-mi R-150shRNA,提取并纯化质粒后,采用脂质体法将重组质粒转染PK-15细胞,用G418抗性筛选。经过酶切鉴定和测序鉴定,表明成功构建了重组干扰质粒pGene-mi R-150shRNA,并在转染24 h后即可检测到绿色荧光。本研究成功得到稳定表达mi R-150的细胞株,所建的方法可以应用于各种microRNA的构建。

反思我国公司立法的资本充实责任

资本充实责任是指发起人违反出资义务,而由其他发起人就其缴纳资本不足的部分共同承担无过错的连带责任。在我国公司立法中表现为缴纳担保责任与差额填补责任。其立法目的在于维护交易安全,保护公司及债权人的利益。但与此同时,对诚实履行出资义务的其他发起人却科以较重的责任,不仅有悖公平,而且反过来会破坏资本制度的有效运行,因而有必要对其进行改良。

DNA甲基化转移酶3A调控心肌成纤维细胞活化过程中胶原的表达

目的目前关于甲基化对心肌纤维化形成的作用机制仍不明确。文章旨在探讨DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对心肌成纤维细胞活化过程中胶原表达变化的调控。方法选取50只乳鼠,提取培养SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs),进行细胞转染,根据CFs转染的试剂分为5组:DNMT3A组(CFs转染重组的DNMT3A基因过表达质粒)、空载体组(CFs转染p EGFP-C3空载体质粒)、DNMT3A siRNA组(CFs转染小干扰DNMT3A siRNA)、DNMT3A siRNA NC组(CFs转染DNMT3A siRNA NC空载体质粒)、空白对照组(CFs不作转染处理)。ELISA检测空白对照组、DNMT3A组、DNMT3A siRNA组细胞上清液胶原变化。qRT-PCR检测5组相关mRNA的表达,Western blot法检测除DNMT3A siRNA NC组外其余4组CFs中ColⅠ、ColⅢ和DNMT3a蛋白的表达及CCK8法检测4组细胞的增殖活性。结果 DNMT3A组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原明显高于空白对照组(P<0.05),DNMT3A siRNA组的Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的含量明显低于空白对照组(P<0.05)。DNMT3A组的ColⅠ、ColⅢ及DNMT3A表达量较空白对照组、空载体组明显升高(P<0.05),而DNMT3A siRNA组明显低于空白对照组及空载体组(P<0.05)。DNMT3A组细胞活力(2.087±0.317)明显高于空载体组(1.063±0.223)、空白对照组(1.082±0.207),差异有统计学意义(P<0.05); DNMT3A siRNA组(0.463±0.087)明显低于空载体组、空白对照组(P<0.05)。结论 DNMT3A可以促进CFs的活化增殖,并且能够增加胶原的表达,从而对心肌纤维化产生促进作用。

论物保与人保并存之法律适用

我国现阶段诚信体制的不完善,使物保和人保并用已成为现实需要。然而,目前对于此类担保立法的缺失和理论研究的不足,造成了司法实践的混乱。在主张区分债务人提供的物保和第三人提供的物保的前提下,坚持"物保和人保平等"原则,债权人无论放弃物保还是人保,或者其中一项担保无效或被撤销,除另有约定外,都不会对另一担保产生影响。

检警一体——水土不服

检察机关和侦查机关在刑事诉讼中扮演着不同的角色,既相互制约,又密切配合。他们究竟应当联系更加紧密形成一体,还是保持一定的距离实行检警分离,学术界争论不休。本文将从检察机关的产生及性质入手,分析我国检察机关在宪政体系中的地位和主要职能——监督和“公诉过滤”决定了其需要和侦查机关保持适当的距离。因而,我国不宜推行“检警一体化”。

重症心脏瓣膜病换瓣后发生低心排综合征的危险因素分析

目的探讨重症心脏瓣膜病患者行瓣膜置换术后发生低心排综合征(LCOS)的相关危险因素。方法对87例重症心脏瓣膜病患者行心脏瓣膜置换术,根据术后是否发生LCOS将其分为观察组(发生LCOS)和对照组(未发生LCOS)。采用单因素分析和二分类Logistic回归分析对患者的临床资料进行统计分析。结果单因素分析结果显示:术前心功能Ⅳ级、术前合并肾功能不全、主动脉阻断时间>70min、失血比>20%(失血量/总血容量>20%)、高血压、体外循环时间>100 min、术前心律失常等组间差异有统计学意义(P=0.030、0.016、0.048、0.019、0.013、0.017、0.029);进一步二分类Logistic回归分析表明:患者术前心功能Ⅳ级、体外循环时间>100 min、失血比>20%、术前合并肾功能不全是术后发生LCOS的独立危险因素(P=0.035、0.030、0.019、0.014)。结论患者术前心功能Ⅳ级、体外循环时间>100 min、失血比>20%、术前合并肾功能不全为重症心脏瓣膜病患者术后发生LCOS的重要危险因素。

猪瘟病毒囊膜蛋白E2基因真核分泌型表达载体的构建及其表达

【目的】构建猪瘟病毒囊膜蛋白(E2 protein)基因的真核表达载体,并将其在猪脐静脉血管内皮细胞中进行表达。【方法】采用PCR技术扩增出E2蛋白全长基因(E2qc)序列和去除跨膜基因(E2sh)序列,并将其克隆入真核表达载体pSecTag2(A)中,构建pSecTag-E2qc和pSecTag-E2sh表达载体,分别进行PCR、双酶切及测序鉴定。用脂质体法将阳性克隆瞬时转染猪脐静脉血管内皮细胞,对转染细胞进行RT-PCR检测目的基因的转录情况,同时对转染细胞及细胞上清液进行SDS-PAGE和Western-blot分析,以检测目的蛋白的表达情况。【结果】成功克隆了E2蛋白基因全长序列1119bp和去除E2蛋白跨膜基因序列999bp的目的基因。构建的表达载体经PCR、双酶切法及测序鉴定均无误。转染后细胞的RT-PCR结果显示,目的基因被成功转录。转染后细胞及细胞上清液的SDS-PAGE和Western-blot结果显示,目的基因被成功表达。【结论】成功构建了猪瘟病毒E2蛋白的真核表达载体,转染猪脐静脉血管内皮细胞后,分泌表达了猪瘟病毒E2重组蛋白。

TGF-β_1基因真核表达载体的构建及在猪脐静脉内皮细胞中的表达

应用RT-PCR技术从猪外周血单个核细胞扩增转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)全基因,构建含有TGF-β1基因及EGFP报告基因的真核表达质粒pEGFP-C1-TGF-β1。采用脂质体法转染体外培养的猪脐静脉内皮细胞(SUVECs)后,通过直接荧光观察pEGFP-C1-TGF-β1融合蛋白在细胞中的分布定位,并通过RT-PCR、间接免疫荧光方法检测TGF-β1基因在SUVECs中的表达。结果在转染后1周观察到绿色荧光,RT-PCR、间接免疫荧光法检测TGF-β1表达均为阳性。本研究成功构建了含有绿色荧光蛋白基因的真核表达载体pEGFP-C1-TGF-β1,且TGF-β1基因在SUVECs中获得表达。

表达猪白介素2基因重组腺病毒的构建及其免疫增强作用

以猪白介素2基因(pIL-2)为研究对象构建表达pIL-2的重组腺病毒,并研究其作为细胞因子佐剂的免疫增强作用。用RT-PCR的方法扩增pIL-2基因,将pIL-2基因克隆到腺病毒穿梭载体AdTrack中,构建出重组腺病毒穿梭质粒AdTrack-pIL-2,然后在大肠杆菌BJ5183内和骨架载体AdEasy同源重组,获得重组腺病毒骨架载体AdEasy-pIL-2,转染HEK293细胞,包装出重组腺病毒Ad-pIL-2,并通过兔体交互试验来检测Ad-pIL-2的免疫增强作用。经PCR、RT-PCR和Western blot检测,成功构建了Ad-pIL-2,病毒滴度可以达到108.25pfu/mL,并通过兔体交互免疫试验证明Ad-pIL-2可以提高兔的抗体水平。用腺病毒构建的Ad-pIL-2在兔体上具有免疫增强作用,为下一步的猪体试验研究和细胞因子佐剂的开发奠定基础。

猪血管内皮细胞中与猪瘟病毒相关microRNA的初步筛选

本试验旨在筛选猪脐静脉血管内皮细胞(SUVECs)内作用于猪瘟病毒(CSFV)的microRNA。通过构建CSFV3′和5′非翻译区(Untranslated region,UTR)的双荧光素酶报告基因载体,经生物信息学预测可能与CSFV相互作用的microRNA,然后瞬时共转染重组载体与microRNA的抑制物,最后通过发光检测仪测定荧光素酶活性。结果表明,成功构建了CSFV5′非翻译区(373 bp)和3′非翻译区(252 bp)的报告基因载体,并合成了4条预测出的microRNA(ssc-mi R-let7c、ssc-mi R-106a、ssc-mi R-18、ssc-mi R-139)的抑制物,共转染后发光检测仪检测到荧光素酶的活性被不同程度抑制。本研究发现microRNA作用位点主要在CSFV的3′-UTR,而且以上4种microRNA都对CSFV3′-UTR有不同程度的抑制作用,其中ssc-mi R-18的抑制作用比较明显。

临界肺功能食管癌患者微创手术的临床疗效研究

目的探讨胸腔镜微创手术治疗临界肺功能食管癌患者的临床疗效。方法选取安徽医科大学第二附属医院心胸外科2014年1月至2017年10月收治的20例临界肺功能的食管癌患者为治疗组,同时选取20例肺功能基本正常的食管癌患者为对照组。两组患者均实行全胸腔镜食管癌根治术,记录两组患者术中出血量、术中淋巴结清扫数、手术时间、术后拔除气管插管时间、术后输血量、住院时间、术后重新气管插管入住ICU及手术死亡病例,术后颈部吻合口瘘的发生率、心血管并发症发生率及术后肺部感染等情况。结果两组患者在手术时间、淋巴结清扫数目、术中失血量、术中输入晶体量和胶体量以及住院时间等方面比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组患者均无术后重新气管插管入住ICU及手术死亡病例。治疗组术后并发症发生率如颈部吻合口瘘、术后心律失常以及术后肺部感染等高于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组术后拔除气管插管的时间长于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论对于临界肺功能的食管癌患者,胸腔镜微创手术安全有效、对肺功能影响较小,未明显增加术后呼吸循环等并发症的发生率。

中国农地资本化流转风险分析

农地资本化流转是实现中国农业现代化的必然途径。农地资本化流转风险主要有:农地用途改变,影响粮食安全的风险;产权权能缺位,强制农民流转的风险;盲目推进规模化,经营风险失控的风险;资本化流转的市场风险。化解农地资本化流转风险的对策有:加强对流转农地的监管、推进农地确权、构建"三位一体"的农地流转市场、弱化农地的社会功能。

“以房养老”产品的定价模型及其精算分析

本文在"以房养老"传统精算定价法的基础上,以无追索权不可赎回产品为研究对象,以连续死亡模型代替现有定价研究普遍采用的离散死亡模型,构建一个更具现实应用价值的"以房养老"产品定价模型,并藉此通过精算模拟分析指出"以房养老"产品具有较强的利率和房价波动敏感性。在中国要实行"以房养老",除了应破除观念约束外,还应营造一个稳定的利率和房地产市场环境。

立式加工中心主轴静刚度测试的新方法

介绍了一种立式加工中心主轴静刚度测试的新方法及进行的试验研究。以立式加工中心XH7132为研究对象,采用应变式力传感器作为测力装置,并用最小二乘法对其进行标定,用标定后的应变式力传感器、电阻应变仪、电感测微仪对主轴静刚度进行测试,得出主轴的静刚度值。

高精密零件拉压刚度的试验研究

对某航空用轴承组件中的一个高精密套筒进行刚度测试研究,将测试结果与有限元分析得到的结果进行比较,提出一种在微机控制万能压力机上测试高精密零件刚度的改进方法,该方法可以显著提高零件刚度测试的准确度,可以为高精密零件的优化设计提供有价值的参考依据。

TGF-β1诱导SUVEC向平滑肌样细胞转分化的初步研究

用不同浓度TGF-1β对猪脐静脉血管内皮细胞(SUVEC)进行诱导,研究体外诱导SUVEC向平滑肌细胞分化的可能性。倒置显微镜下观察诱导前后细胞形态的变化,并采用免疫细胞化学SP法对细胞表面特异性标志物进行染色。结果表明,诱导后细胞失去内皮细胞典型的铺路石样形态,而呈现出肌成纤维样细胞;对诱导后的细胞进行免疫组化检测,发现5～10ng.mL-1 TGF-1β诱导后,平滑肌特异性蛋白-αSMA的相对表达量均显著升高;而浓度升高为20 ng.mL-1时,升高不显著;内皮细胞特异性标志(F-ⅧRAg)的表达均显著下降。该研究表明TGF-1β可诱导猪脐静脉血管内皮细胞向肌样细胞分化,但诱导分化的能力与TGF-1β的浓度有关。

境外异常资金流入对中国证券市场的影响与对策

随着我国证券市场的快速发展和人民币汇率的持续上涨,流入我国证券市场的境外资金不断扩大,其在促进我国证券市场快速发展的同时也使得各种金融风险和负面效应逐渐显现。文章从分析境外资金流入的现状入手,通过模型检验证实了境外异常资金流入与我国证券市场的相关性,重点研究了境外异常资金对我国证券市场的影响和应对措施。

论电子传媒带来的弊端——以乌青的诗《对白云的赞美》为例

按照麦克卢汉的观点,电子传媒的出现,不但让人的感官获得全面而平衡的发展,而且让人获得整体思维和整体把握世界的能力。可电子传媒并不是百利而无一弊的,从传媒本身来考察,电子传媒既打破了纸质传媒的线性阅读和逻辑思维,也给我们带来了种种弊端:语言的平淡、词汇的匮乏、想象力的枯竭以及平面化的思想。针对这些弊端,文章提出了一些有针对性的措施。为便于理解,我们以乌青的诗《对白云的赞美》作为切入点。

安徽农村老年人多重慢病与肌肉减少症的相关性

目的 探讨安徽农村老年人多重慢病与肌肉减少症的相关性,为预防或延缓肌肉减少症的发生提供参考依据。方法 采用方便抽样,在安徽省六安市和阜阳市选取652名60岁及以上的老年人,多重慢病由研究对象自我报告并经二级及以上医院确诊,肌肉减少症通过肌肉减少症5条目量表(sarcopenia-five,SARC-F)来评估。采用线性回归和logistic回归探讨多重慢病状况、数量与肌肉减少症的关系。结果 本研究共纳入616名老年人,其中有194名(31.5%)患有肌肉减少症。线性回归结果显示,相对于无慢性病的老年人,患有慢性病的老年人SARC-F得分较高(模型3:β=0.866,P<0.05),患有多重慢病的老年人SARC-F得分较高(模型3:2种慢性病:β=1.071,3种慢性病:β=1.174,4种慢性病:β=1.147,P均<0.01)。Logistic回归结果显示,相较于无慢性病的老年人,患有慢性病的老年人患肌肉减少症的风险较高(模型3:OR=2.075,P<0.05),患有2种和3种慢性病的老年人患肌肉减少症的风险较高(模型3:2种慢性病OR=1.980,3种慢性病OR=2.632,P均<0.05)。结论 在安徽农村老年人中,是否患有多重慢病、多重慢病数量与肌肉减少症的发生有一定的相关性,及时开展对多重慢病的健康管理,对预防或延缓肌肉减少症的发生具有重要意义。