以“维生素B_(1)质量分析”为例探索药物分析实验教学改革

以药物分析综合性实验《维生素B_(1)原料药及片剂的质量研究》为例,将新教学模式应用于药物分析综合实验项目,参照药物质量控制研究岗位的工作特点把项目培养方案与该岗位的职业需求相对接,设置岗位情景、明确岗位目标、增加岗位实例。最终提高学生的岗位适应能力和职业技能。以此,培养具备专业基础扎实、严格控制药品质量、具有良好药学职业道德的综合型药学人才。

HPLC-UV-ELSD同时测定灰毡毛忍冬中9种成分的含量

目的：建立HPLC-UV-ELSD同时测定灰毡毛忍冬中9种成分（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木犀草苷、3,4-二咖啡酰奎尼酸、3,5-二咖啡酰奎尼酸、4,5-二咖啡酰奎尼酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙）的含量。方法：采用Shiseido C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以0.2%甲酸-乙腈为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0m L/min,柱温为35℃,检测波长为326、350nm。ELSD漂移管温度为100℃,载气（氮气）流速为3L/min。结果：上述成分在考察范围内,进样量与各自峰面积之间线性关系良好（r〉0.9983）,精密度RSD〈2.5%,重复性RSD〈3.8%,平均加样回收率在96.3%~100.7%。结论：该方法准确、快速、重复性好,可用于灰毡毛忍冬中9种成分的测定。

高效液相色谱法同时测定忍冬藤中7个活性成分的含量

采用HPLC测定不同市售地、不同直径的忍冬藤药材中各活性成分的质量分数（新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、獐牙菜苷、马钱苷、3,5-二咖啡酰喹尼酸、4,5-二咖啡酰喹尼酸）。色谱柱为Shiseido C18（4.6 mm×250 mm×5μm）,流动相为乙腈-0.1%磷酸,并进行梯度洗脱,体积流量为1 m L/min,柱温为35℃,检测波长为238,326,350 nm。结果显示,上述成分的进样质量与峰面积之间线性关系良好（r〉0.999 5）,精密度RSD〈4.3%,重复性RSD〈4.1%,平均加样回收率在96.8%~104.1%。本方法简单、准确,适用于忍冬藤的质量控制。

双黄连粉针及其活性成分对大鼠细胞色素P_(450)酶的体外抑制作用

目的考察双黄连粉针及其7种主要活性成分对大鼠肝微粒中细胞色素P450酶(CYP)1A、CYP2D和CYP3A酶的体外抑制作用。方法将CYP1A、CYP2D和CYP3A的探针底物(非那西丁、右美沙芬、咪达唑仑)分别与双黄连粉针及其7种活性成分(黄芩苷、连翘苷、连翘酯苷A、芦丁、绿原酸、咖啡酸、木樨草苷)在大鼠肝微粒中进行孵育反应,采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定3种探针底物的含量,评价底物的代谢率是否被抑制。结果与空白对照组比较,双黄连粉针和黄芩苷对CYP2D和CYP3A有抑制作用,对CYP1A无影响;其他活性成分对三种酶无影响。结论双黄连粉针在与CYP2D和CYP3A底物合用时可能产生相互作用,黄芩苷可能是这种作用的主要效应物质。

氯胺酮多次给药对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶的诱导作用

目的考察氯胺酮对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶活性的影响。方法以10mg.kg-1.d-1氯胺酮灌胃给予大鼠,连续给药10d。在第11d处死大鼠,以钙离子沉淀法制备肝微粒体。采用Omura和Sato方法测定细胞色素P450含量,采用7-戊氧基试卤灵-O-去烷基反应测定细胞色素P450_2B酶的活性。结果给药组和对照组细胞色素P450的总含量分别是(0.679±0.216)nmol·mg-1和(0.398±0.109)nmol·mg-1,细胞色素P450_2B酶的活性分别是(13.40±3.15)pmol·min-1.mg-1和(7.04±2.09)pmol·min-1.mg-1。结论氯胺酮能够增加大鼠肝微粒中细胞色素P450含量,并能显著诱导细胞色素P450_2B酶的活性。

一氧化氮光学生物传感器用于药物活性的考察

目的研制一氧化氮(NO)吸光型生物传感器,并将之用于考察刺激巨噬细胞产生NO药物的活性。方法以A l2O3/S iO2为载体,溶胶凝胶法固定细胞色素C(Cyt C),组装传感池,通过紫外分光光度(UV)法考察该传感池在酸化的细胞培养液中对NO的响应性能。测定含有γ-干扰素(IFN-γ)、脂多糖(LPS)、以及以上述溶液为阳性对照的硫酸海藻多糖、香菇多糖、甘露聚糖肽的细胞培养液中NO含量。结果传感池抗干扰能力强,在酸化的培养液中,NO在20.0μm o l/L^180.0μm o l/L的浓度范围内线性关系良好(r=0.9959),检测限为5.0μm o l/L,日内精密度(RSD)=3.5%,日间RSD=7.9%。三种培养液中的NO含量分别为(12.24±3.39)μm o l/L、(8.51±0.19)μm o l/L、(8.23±0.26)μm o l/L。与传统G riess法比较两种方法差异无统计学意义。结论该传感器法可以对细胞培养液中的NO进行半定量分析,作为药物活性初筛的一种新手段。

HPLC法测定维生素E片含量

目的建立测定维生素E(VitE)含量的高效液相色谱法。方法采用ShimadzuC18色谱柱(4·6mm×250mm,5μm),以甲醇为流动相;检测波长为284nm,流速1·5ml·min-1。结果维生素E在0·125～5·0mg·ml-1范围内,峰面积与其浓度线性关系良好(r=0·9999),高、中、低3种浓度的平均加样回收率为101·4%～102·7%,RSD为0·46%～0·71%,最低检测限为0·4μg·ml-1。结论本法准确、简便、快速,适用于维生素E片的含量测定。

不同方法固定的细胞色素C对一氧化氮的响应性能

目的 比较不同方法固定的细胞色素C(CytC)对一氧化氮(NO)的响应性能。方法 以不同的溶胶凝胶法对CytC进行固定,并通过UV法考察固定化CytC的性质及其对一氧化氮响应的性能。结果 以硅溶胶法固定的CytC膜性质较好,对NO的响应时间较快,敏感度较高,可逆速度快,重复性好,NO在1 2 3～2 85 μmol·L-1 范围内与吸光度线性关系良好(r =0 . 9995 )。结论 为进一步研制NO光学传感器奠定了基础。

远隔缺血时处理减轻心脏瓣膜置换术后的肝损伤

【目的】观察远隔缺血时处理（remote ischemic preconditioning ，RIPer）对心脏瓣膜置换术患者的肝保护作用。【方法】40例择期体外循环下行瓣膜置换术的患者，随机分为两组：远隔缺血时处理组（RIPer组）和对照组（C组），每组20例。麻醉诱导前，将止血带绑于患者左下肢，RIPer组在主动脉阻断即刻，对患者左下肢实施缺血5 min/再灌注5 min处理，重复3个循环。C组不做缺血处理。于麻醉诱导前（d0），术后d1，d3及d7各时间点取颈内静脉血5 mL ，检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、谷氨酸转氨酶（AST ）、总胆红素（TBIL ）、总胆汁酸（TBA）、RIPer处理前和处理后24 h超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase ，SOD）的浓度。【结果】手术后两组患者的血清ALT及AST浓度均不同程度升高，RIPer组ALT水平在术后d1，d3，d7低于C组（ P＜0．05），AST水平在d1，d3低于C组（ P ＜0．05），而在d7则没有显著性差异（ P＞0．05）；两组TBIL、TBA水平在术后d1，d3， d7不具有显著性差异。远隔缺血时处理24 h后血浆SOD活力明显高于对照组。【结论】远隔缺血时处理可减轻体外循环后的急性肝损伤，但对肝脏的储备功能影响不大；这种保护作用可能与SOD有关。

采用USB技术的速率冷冻仪的研制

该仪器可以根据样品的相变点,人工设置降温曲线,以达到克服样品相变热,提高生物制品在低温冷冻预处理过程中的存活率的目的。使用USB技术,免去了机内插卡,实现了即插即用和热插拔,具有推广价值。

甘露消毒丹辅助治疗小儿急性重症手足口病临床研究

目的:观察甘露消毒丹辅助治疗对小儿急性重症手足口病症状体征的改善作用。方法:收集我院儿科门诊或住院收治的急性重症手足口病患儿共110例,随机分为对照组和试验组各55例。两组急性重症手足口病患儿均进行常规治疗,包括利巴韦林抗病毒、糖皮质激素抑制炎症反应及甘露醇脱水等对症治疗。试验组在对照组治疗的基础上,辅助用甘露消毒丹治疗,1疗程为7天。观察并比较两组的临床疗效,体温、皮疹及口腔疱疹消退时间。结果:对照组显效16例,好转30例,总有效率83.64%;试验组显效31例,好转19例,总有效率90.91%。两组临床疗效比较,差异具有显著的统计学意义(P=0.015)。对照组患儿体温、皮疹及口腔疱疹消退的时间分别为(3.59±1.46)天、(4.48±1.61)天及(5.88±1.71)天;试验组分别为(2.84±1.35)天、(3.57±1.58)天及(5.07±1.78)天;两组比较,差异具有统计学意义(t=2.797,P=0.006;t=2.992,P=0.003;t=2.434,P=0.017)。结论:甘露消毒丹辅助治疗小儿急性重症手足口病,可明显提高临床疗效,缩短患儿发热、皮疹及口腔疱疹消退的时间,减少院内死亡及住院天数,降低住院费用,值得在临床推广应用。

关于国内企业职务专利申请现状的思考

在二十一世纪,企业生存与发展的环境和条件发生了巨大的变化.是否拥有自主知识产权以及拥有量的多寡已经成为企业能否在激烈的国际竞争中取得优势的关键因素之一.知识产权中的专利权对企业发展有着绝对重要的作用,企业拥有职务专利是拥有自主知识产权的重要前提.然而,国内企业职务专利申请现状主要呈现三个特点:职务专利申请量相对数目小;职务专利申请量少于非职务专利申请量;高技术申请与低技术申请的比例失调.为了改变这种现状,其对策是改善企业外部环境和强化企业内部管理,尤其是要强化企业内部管理.

用一氧化氮光学生物传感器研究供体药物体外释放的通路

目的研究一氧化氮（NO）供体药物体外释放的通路。方法用自制NO光学生物传感器通过模拟硝普钠（SNP）释放NO的3种通路所需要的体外环境，测定了不同条件的生理溶液中SNP释放的NO。结果光照和巯基化合物是引起SNP体外释放NO的主要因素。在酸化的生理液中，NO在40．0—360．0μmol·L^-1的浓度范围内。线性关系良好（r=0．9992），检测限为4．0μmol·L^-1，日内精密度RSD=2．3％，日间精密度RSD=3．4％。干扰试验发现，L—Cys和L—GSH在中性环境下对CytC膜有干扰，但在酸性条件下无干扰。与经典方法Griess比色法比较，无显著性差异。结论所用生物传感器系统为NO供体药物的体外释放研究提供了一种较好的手段。

国际知识产权新规则及我国企业的对策探讨

本文就DVD等事件,揭示了知识经济条件下,发达国家推出了国际知识产权新规则,即“技术专利化———专利标准化———标准许可化”,对中国企业实施不公平的技术垄断。面对如此严峻的挑战,作者在对这一新的游戏规则进行剖析的基础上,提出了我国企业调整自身知识产权战略的对策。

中药联合针灸治疗小儿夏季腹泻临床观察

目的:观察中药联合针灸治疗小儿夏季腹泻的临床效果,从而选择更好的治疗方案,提高治疗效果。方法:选取小儿夏季腹泻患者160例,随机分为观察组与对照组,每组80例。两组患儿均给予常规的支持治疗,包括纠正水、电解质紊乱以及酸碱失衡等。在此基础上,观察组患儿给予中药联合针灸的方案进行治疗,对照组给予西药治疗。观察两组临床治疗效果及改善时间。结果:观察组有效率为97.50%,对照组有效率为86.25%,观察组治疗有效率明显高于对照组,经统计学检验,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组患儿平均止泻时间为(32.53±4.24)小时,平均脱水纠正时间为(27.35±4.27)小时,平均住院时间为(3.75±1.45)天,对照组患儿平均止泻时间为(46.26±5.34)小时,平均脱水纠正时间为(41.64±4.99)小时,平均住院时间为(5.35±1.75)天。观察组恢复时间明显短于对照组,经统计学检验,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:中药联合针灸治疗小儿夏季腹泻的临床治疗效果显著,且恢复快,值得推广。

盐酸戊乙奎醚对体外循环心脏手术缺血再灌注心肌保护作用的Meta分析

目的采用Meta分析评价盐酸戊乙奎醚对体外循环(CPB)心脏手术缺血再灌注心肌的保护作用。方法通过计算机检索中国知网(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CBM)、万方数据知识服务平台、维普网,内容为CPB心脏手术中使用盐酸戊乙奎醚的随机对照研究(RCTs),检索时间为建库至2021年11月,采用RevMan 5.3软件对收集的资料进行Meta分析。结果纳入研究12项,患者464例,其中盐酸戊乙奎醚组239例,对照组225例。与对照组比较,盐酸戊乙奎醚组术后24 h[WMD=-0.37,95%CI(-0.49~-0.24),P<0.00001]及术后48 h[WMD=-0.98,95%CI(-1.38~-0.58),P<0.00001]心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平显著降低;盐酸戊乙奎醚组术后24 h[WMD=-22.13,95%CI(-29.40~-14.86),P<0.00001]及CPB停止即刻[WMD=-24.62,95%CI(-33.02~-16.22),P<0.00001]肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平显著降低;主动脉开放30 min,2组cTnI及CK-MB水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸戊乙奎醚能降低CPB心脏手术患者cTnI及CK-MB水平,对缺血再灌注心肌具有保护作用。

大鼠肝微粒中5种细胞色素P-450的特异性底物含量的高效液相色谱法同时测定

目的建立同时测定大鼠离体肝微粒体中5种细胞色素P-450特异性底物含量的方法。方法选择非那西丁、甲苯磺丁脲、右美沙芬、氯唑沙宗和咪达唑仑分别作为CYP1A、CYP2C、CYP2D、CYP2E、CYP3A的特异性底物。采用高效液相色谱法,以艾司唑仑为内标,色谱柱为Welchrom C18,流动相为乙腈-0.01 mol.L-1乙酸胺(pH 5.25,含0.03%三乙胺)=40∶60,流速为1 ml.min-1,检测波长分别为202,247,280,220 nm,柱温为30℃,进样量为40μl。结果在线性范围内线性关系良好,相关系数r>0.999 0;日内RSD均小于14.4%,日间RSD均小于14.7%;方法回收率在为91.1%～114.3%之间,提取回收率在84.6%～94.9%之间。结论该方法灵敏、简便、准确,可用于大鼠肝微粒体中细胞色素P-450特异性底物的含量测定。

RP-HPLC测定家犬血浆中维生素E的含量

目的:建立家犬血浆中维生素E(VitaminE,VitE)测定的高效液相色谱法,并进行VitE在家犬体内代谢的初步研究.方法血浆样品用乙醇沉淀蛋白,用正己烷提取浓集后进样;流动相为甲醇,检测波长为284nm,流速1.5ml·min-1.结果在此色谱条件下,VitE峰形良好,血浆内源性成分对药物测定无干扰;血药浓度在0.286-10.54μg·mL-1范围内,浓度与峰面积有良好的线性关系,r=0.9992;方法回收率>94%(n=3),日内精密度和日间精密度的RSD<5%(n=5).结论该法灵敏、简便、准确,适用于VitE在家犬体内的药代动力学研究.

HPLC法同时测定大鼠CYP2B、2C、2E酶活性及其应用

建立同时测定大鼠肝微粒体中CYP2B、2C、2E酶活性的HPLC法,并用该方法评价氯胺酮对这3种酶的影响。以盐酸安非他酮、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗作为CYP2B、CYP2C、CYP2E的特异性底物。以非那西丁为内标,色谱柱为Welchrom C18,流动相为甲醇:0.01 mol/L乙酸铵(pH 5.0)=55∶45,流速为1 mL/min,检测波长为220,247,250,280 nm,柱温为30℃,进样量为40μL。体外孵育反应的蛋白浓度为3.75mg/mL,孵育时间为30min。采用上述方法测定3种底物在对照组和氯胺酮给药组中的代谢速率,结果显示,各底物在线性范围内线性关系良好,相关系数r】0.9991;日内RSD【12.1%,日间RSD【12.5%;方法回收率为84.4%~114.3%,提取回收率为93.65%~100.7%。本方法灵敏、准确、简单,可用于大鼠肝微粒体中CYP2B、2C、2E酶活性的测定。

HPLC法同时测定大鼠肝微粒中原儿茶酸和香草酸的含量

目的：建立测定大鼠离体肝微粒中儿茶酚氧甲基转移酶（ COMT）底物（原儿茶酸）和代谢产物（香草酸）含量的HPLC法。方法离体肝微粒体样品经酸化后，乙酸乙酯提取。以绿原酸作为内标，色谱柱为 Welchrom C18，流动相为甲醇：0.1％磷酸＝25：75，流速为1 ml/min，检测波长为260 nm、326 nm，柱温30℃，进样量20μl。结果原儿茶酸和香草酸分别在0.5-20μg/ml和0.375-15μg/ml范围内线性关系良好，r≥0.9995；原儿茶酸的日内精密度和日间精密度RSD≤13.2％，方法回收率为90.3％-115.4％，提取率≥94.9％；香草酸的日内精密度和日间精密度RSD≤8.5％，方法回收率为93.4％-103.1％，提取回收率≥88.5％。结论该方法灵敏、简便、准确，可用于大鼠肝微体中COMT活性的测定。