实验用大林姬鼠种群微卫星标记开发及遗传特性分析

目的 开发大林姬鼠多态性微卫星标记,丰富大林姬鼠遗传数据,为大林姬鼠遗传质量控制及基因定位等工作奠定基础。方法 基于大林姬鼠基因组序列筛选微卫星位点,挖掘微卫星引物,通过多重PCR技术分析群体的遗传多样性。结果 成功开发出30个微卫星标记,利用60份大林姬鼠基因组DNA对30个微卫星位点进行评价,共检测出152个等位基因,平均每个位点有5.067个等位基因;平均观察杂合度为0.592;平均香农指数为1.265;平均多态信息含量为0.598。结论 基于本研究所开发的微卫星位点具有较好的多态性,能有效分析大林姬鼠群体的遗传多样性,适合为建立大林姬鼠遗传质量标准和遗传质量检测方法奠定基础。

水貂作为新型实验动物模型的应用研究

水貂(mink)作为一种小型珍贵的毛皮动物,不仅在经济上具有显著价值,还因其独特的生物学特征和与人类在呼吸系统、免疫反应等方面的相似性,逐渐展现出作为新型实验动物模型的巨大潜力。本文综述了水貂作为实验动物模型的应用研究,包括流感病毒动物感染、新型冠状病毒肺炎动物、动物行为、犬瘟热动物、呕吐、酶消化、睾丸退化及自伤行为模型中的应用。同时,本文强调了水貂动物福利的重要性,并提出了未来水貂作为实验动物模型在科学研究中的广阔前景,为后续水貂作为新型实验动物模型的广泛应用提供参考。

犬瘟热琼脂扩散试验方法的建立及初步应用

采用犬瘟热鸡胚成纤维细胞弱毒疫苗免疫绵羊制备琼脂扩散抗体，应用犬瘟热病貉肝脏（电镜检查“＋＋”以上）制备琼脂扩散抗原，建立了琼脂扩散试验方法，用于犬瘟热病死动物肝、脾脏器中病毒抗原成分的检出。检测送检病料１０份，与电镜检查结果比较，阳性符合率为８５．７％（６／７），阴性符合率为７５％（３／４），总体符合率为９０％（９／１０）。本方法特异、敏感，操作简便，易于推广应用。

梅花鹿肠毒血症的诊断与防治

双阳县某鹿场舍饲梅花鹿120头左右。1990年10月中旬,该场增添精饲料后,有3头幼龄鹿发生急性死亡。死前见有离群、饮食欲降低、转圈,继之倒地搐搦,迅速死亡。

PCR扩增近交系大鼠微卫星位点DNA多态性的研究

本实验选取大鼠 7条染色体上的微卫星位点合成了 10对引物 ,利用聚合酶链反应 (PCR)扩增技术对国内北京和哈尔滨等 4家单位提供的 6个品系 (SHR、SHRSP、LEW、RCS、WKY和F34 4)的 8个近交系大鼠群体进行了DNA多态性分析的研究。结果表明 :9个微卫星位点具有显著多态性 ;不同品系个体之间具有多态性 ;同一群体不同个体之间除SHR(哈 )的SMST位点和WKY(哈 )的AGT位点出现一定的差异外 ,其他均没有差异 ;不同地区同一品系的不同个体之间也存在一定的差异。该方法能有效地对近交系与杂交系、品系与品系、品系与亚系加以区分。因此 ,本实验为开展近交系大鼠遗传作图、基因定位和为实验动物的遗传背景监测提供可靠的信息 ,为大鼠遗传基因的研究提供了一个快捷简便、特异准确的方法。

建立新型实验教育体系 提高学生综合素质

以往的实验教学中存在多种问题,诸如实验内容迂腐陈旧、实验考核体系不规范等,与提高学生实践能力的教学目标背道而驰。因此,探索符合实验教学特点的新体系非常必要。根据现行体系和自身授教经验,总结出一套适应教学改革和人才培养要求的新型实验教育体系。该体系包括实验教育四年不间断计划和新型实验成绩评定方案。经实践,效果显著,赢得学生好评。

双抗体夹心ELISA检测牛病毒性腹泻病毒的研究

建立了从粪便中检测牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ。试验方法的最佳工作条件为，抗体包被量为１００μｇ／孔，酶标抗体的浓度为１：４００。对不同地区牛、羊、鹿粪样检测结果，牛的ＢＶＤＶ感染率为１６．５％～８９．０％，羊为１４．６％～８３．３％，鹿为１９．６％～４４．４％，并且从许多地区的牛、羊同时检测到ＢＶＤＶ，表明本病在国内某些地区存在着严重的感染。

体内精原干细胞转染法建立转基因小鼠

将人Bcl-2 cDNA与小鼠乳清酸蛋白(WAP)5’上游调控序列融合后,与脂质体按一定比例混合,再加入适量的台盼蓝制成转染液,注入到小鼠睾丸中的曲细精管中,转染精原干细胞以探讨建立转基因小鼠的可行性。共注射了3只公鼠,4天后将公鼠与发情母鼠合笼交配,共生仔鼠20只。检测结果表明,有3只呈PCR阳性,Southern blot检测,阳性鼠2只,1只公鼠,1只母鼠,其中,公鼠意外死亡;Western blot证实,1只母鼠的乳腺组织表达了Bcl-2蛋白,其F1代的16只小鼠中,有7只呈PCR阳性。证实了体内精原干细胞转染建立转基因动物的可行性。

DNA指纹图与生化标记分析对近交系小鼠遗传检测的比较

采用 JL- 0 2多位点探针对来自北京和西安地区的 5个 BAL B/ c群、2个 BAL B/ c- nu/ nu群、4个 C57群、1个CBA/ N群和 1个 DBA/ 2群近交系小鼠进行了 DNA指纹图分析 ,并与常规生化标记分析法进行了比较。结果显示 ,DNA指纹图的图带数均为 17～ 2 2条 ,具有良好的多态性。生化标记分析中 Hbb位点显示异常的 BAL B/ c及 BAL B/c- nu/ nu小鼠与其同群体正常小鼠的 DNA指纹图有较大差异 ,2个体之间的相似系数 (F)及共有带率 (X)均在 0 .8以下 ,完全相同 DNA指纹图的概率 (P)均在 1.3× 10 - 2以下 ;生化标记分析未见异常的群体内 ,DNA指纹图基本一致 ,P>2 .2× 10 - 1 。 DNA指纹图显示 ,不同单位的同一品系间存在一定差异 ,其 F及 X均在 0 .8以下 ,P<1.1× 10 - 3 。不同品系间 DNA指纹图的 F及 X相差较大 ,均在 0 .4以下 ,P=2 .7× 10 - 1 0。BAL B/ c群与 BAL B/ c- nu/ nu群间 DNA指纹图的 F和 X在 0 .6 5以下 ,P=3.8× 10 - 6。同一动物的基因组 DNA,经不同次实验所得出的 DNA指纹图基本一致。2种方法比较表明 ,DNA指纹图在动物遗传检测中比生化标记分析有较大的优势 ,它不但能确切地反映生化标记分析显示的异常动物的遗传变化 ,而且还检出了生化标记分析未能检出的动物遗传变异 ,因此更加灵敏。

家兔群体遗传变异的微卫星标记

选用欧洲野兔的 5个微卫星位点 ,分析了 5个品种 (系 )家兔群体的遗传变异。结果表明 :Vc- 系獭兔的群体内平均多态信息含量和平均杂合度最大 ,分别为 0 .5 5 2 6和 0 .6 2 0 2 ;新西兰兔群体内平均多态信息含量和平均杂合度最小 ,分别为 0 .4 5 15和 0 .5 2 6 1。由此说明 ,5个品种 (系 )家兔中 ,新西兰兔群体内变异较小 ,相对较纯 ;Vc- 系獭兔群体内变异较大 ,纯度相对较小。但总的来看 ,5个品种 (系 )家兔的平均多态信息含量和平均杂合度相差都不大 ,说明Vc獭兔在遗传性能上已接近其他优良品种兔。聚类结果表明 :Vc- 系獭兔与 Vc- 系獭兔亲缘关系最近 ,与日本大耳白兔、青紫蓝兔亲缘关系较近 ,与新西兰兔亲缘关系最远 ,这与 Vc獭兔育种历史事实相符。另外 ,在 Sat4和 Sat8位点上分别检测出了 1条 Vc獭兔所特有的条带 ,从而为进一步研究

草原红牛及其杂种牛群体遗传变异与肉用性能的微卫星标记研究

选用草原红牛、草原红牛与利木赞杂交后代作为试验牛群体,经过基因组DNA的提取、微卫星引物的PCR扩增、扩增产物的电泳分型、各座位等位基因分析以及基因频率、多态信息含量(PIC)和杂合度(H)的计算等步骤,从分子水平上分析了草原红牛及其杂交牛群体的遗传变异。在此基础上,以体重、体尺作为衡量牛生长发育的指标,以肉牛线性体型评分方法中的肌肉度线性评分性状和屠宰肉用性状作为衡量牛肉用性能的指标,运用SPSS软件分析了21个性状与8个微卫星标记的关系,发现了6个微卫星标记对试验牛群体某些生长发育性状和肉用性状存在正面或负面影响。

犬卵母细胞体外成熟的影响因素

采集发情期和间情期犬卵巢，回收大腔（直径大于１ｍｍ）卵泡和不可见卵泡的卵母细胞，在４种成熟液（ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ，ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ，ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ和ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ）中成熟后进行了受精试验。结果：（１）发情期大于２ｍｍ和１～２ｍｍ的大腔卵泡卵母细胞的体外成熟率（４２．５％，３２．５％）显著高于间情期卵母细胞（２０．４％），但发情犬不可见卵泡卵母细胞的体外成熟率（２８．９％）与间情期卵母细胞差异不显著；（２）在成熟液中添加促性腺激素，能有效地提高卵母细胞成熟率，不可见卵泡的卵母细胞对促性腺激素的依赖性（３０．０％比７．８％）大于大腔卵泡的卵母细胞（４２．５％比２９．０％）；（３）卵丘扩散与卵母细胞成熟存在相关性；（４）ＥＤＳ可诱导卵丘扩散，但不能有效提高卵母细胞的成熟率；（５）发情期卵巢上的大腔卵泡和不可见卵泡的卵母细胞以及间情期卵巢不可见卵泡的卵母细胞体外培养后，与体外获能的精子进行体外受精，其卵裂率分别为１６．０％（４／２５），０％（０／４０）和２．５％（１／４０）。

添加不同水平铁对吉戎Ⅱ系獭兔血液酶活力影响的研究

为了探索獭兔日粮中铁的适宜添加量，选用军需大学育种中心的50日龄吉戎Ⅱ系獭兔112只，将其随机分为7组，每处理3个重复，每个重复4只兔，试验期为60d。对照组采食基础日粮，试验组在基础日粮的基础上，分别添加30，60，90，120，150，200mg／kg FeSO4·H2O，进行饲养试验。在试验的第20，40，60d对獭兔进行心脏采血，对其血液酶活力进行分析。结果表明：过氧化氢酶（CAT）和琥珀酸脱氢酶（SDH）的活力随铁水平的增加而增强，与对照组相比差异显著（P〈0．05），但各试验组间差异不显著。在1—20d和40—60d以90mg／kg添加量CAT和SDH的活力最高，在20—40d以120mg／kg添加量CAT和SDH的活力最高。组织中铁的沉积量随铁添加量的升高而增多，各组间差异显著（P〈0．05）。

检测牛病毒性腹泻－粘膜病病毒抗原试剂盒的研制及应用

本研究在双抗体夹心ＥＬＩＳＡ检测牛病毒性腹泻－粘膜病病毒（ＢＶＤ－ＭＤＶ）抗原的基础上，研制了检测ＢＶＤＭＤＶ抗原的试剂盒。经试验证明特异、敏感，４℃保存６个月检测结果稳定；与原方法比较，易于保存及运输，使用方便，为商品化推广应用提供了前提。

犬瘟热病毒R/20-8株核衣壳蛋白基因的克隆和表达

应用RT-PCR技术扩增出犬瘟热病毒(CDV)核衣壳(N)蛋白基因的高度保守序列,将其克隆至质粒pMD18-T中,获得了重组质粒pMD18-T-N。将N基因的目的片段克隆到表达载体pGEX-4T-1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,并将该重组质粒转化大肠杆菌BL21株,经IPTG诱导,N基因融合蛋白获得了高效表达。SDS-PAGE电泳和Western-blot分析结果显示,表达产物的分子质量为55 ku,与CDV标准阳性血清呈阳性反应。表明,大肠杆菌表达的CDV N蛋白在免疫原性上与天然N蛋白具有一定的相似性,可作为诊断用抗原。

Vc-獭兔、日本大耳白兔与新西兰白兔血液蛋白多态性研究

为给加速 Vc-獭兔育种提供理论依据 ,利用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对 Vc- 系、 系獭兔、日本大耳白兔和新西兰白兔血液中的红细胞酯酶 (Es-1、Es-2和 Es-3 )、血清前转铁蛋白 (Prt)、后白蛋白 (Po)等 5个蛋白位点的多态性进行了测定 ,结果表明 :在 4个群体中 ,Es-1、Es-2、Es-3和 Po各有 3种表型 ,分别受 2个共显性等位基因控制 ,Prt有 6种表型 ,受 3个共显性等位基因控制。计算表型频率及基因频率。并根据基因频率计算遗传距离和聚类分析 ,分析结果 :Vc- 系、Vc- 系獭兔的亲缘关系最近 ;Vc-獭兔与日本大耳白兔的亲缘关系较近 ,与新西兰白兔的亲缘关系较远 ,日本大耳白与新西兰白兔的亲缘关系最远。

家兔微卫星标记群体遗传变异快速分析方法的建立

目的分析VcⅠ系獭兔(VcⅠ)、VcⅡ系獭兔(VcⅡ)、青紫蓝兔(QZL)、新西兰兔(NZR)和日本大耳白兔(JWR)5个品种(系)家兔群体内遗传变异和群体间遗传距离。方法每个品种(系)兔随机抽取16只,综合利用微卫星多重PCR、DNA池、复合点样和快速银染技术。结果建立起了一套快速分析家兔群体遗传变异的方法。5个品种(系)家兔群体内遗传变异情况为VcⅡ>VcⅠ>JWR>QZR>NZR,聚类结果为VcⅠ与VcⅡ亲缘关系最近,与JWR、QZL亲缘关系较近,与NZR亲缘关系最远。结论实验所得的各群体家兔遗传变异结果与Vc獭兔实际育种事实相符。

小鼠体外受精、胚胎培养及胚胎快速冷冻的研究

目的 为扩大胚胎来源并获取特定胚龄胚胎 ,建立小鼠冷冻胚胎库。方法 运用超数排卵、体外受精与胚胎培养及胚胎冷冻技术系统研究了小鼠受精卵的体内发育与运行规律。卵母细胞的体外成熟与受精、单细胞胚胎培养及胚胎快速冷冻。结果 (1)注射hCG后 12～ 2 0h受精卵发育至原核期 ,4 2～ 4 8h为 2 细胞期 ,4 8～ 6 0h为 4 细胞期 ,6 0～ 6 8h为 8 细胞期 ,以上各期受精卵均处于输卵管中 ;75～ 78h为桑椹胚 ,78～ 80h为致密桑椹胚 ,90～ 92h为早期囊胚 ,92～ 96h为囊胚 ,以上各期均处于子宫角中。 (2 )培养液中添加促性腺激素 (FSH与hCG) ,能显著提高卵母细胞的体外受精率 ,添加FCS和激素组的体外受精率又显著高于单独添加激素组 ,FCS还能显著提高胚胎发育。 (3)在培养液中添加EDTA ,能有效克服小鼠胚胎的 2 细胞阻断 ,其 2 细胞胚的发育率达 10 0 % ,8 细胞胚发育率达 5 5 %以上 ;牛、羊上皮细胞培养液上清也能有效克服 2 细胞阻断。添加乳酸钠和丙酮酸钠可使 2细胞与 8细胞期胚的发育率显著提高。 (4)以D PBS +甘油 +蔗糖为冷冻液 ,以D PBS +蔗糖为稀释液 ,对小鼠胚胎进行快速冷冻 ,桑椹胚的存活率为 6 9 3% ,早期囊胚的存活率为 6 0 4 %。结论 研究为将生物技术应用于小鼠 。

猪胰岛素样生长因子I基因表达与调控的研究进展

胰岛素样生长因子-I(I nsulin-like growth factor-I,I GF-I)是机体生长、发育和代谢的一个重要调控因子,同时也是生长激素(growth hormone,GH)启动生长活性的主要介导者。血液中的I GF-I主要来源于肝脏,以内分泌的形式作用于其他组织;许多肝外组织也能合成I GF-I,其主要以自分泌或旁分泌的形式发挥作用。多种因素调控其表达。本文就猪I GF-I的表达与调控方面的最新研究进展进行一综述。

牛胚胎移植技术的发展概况、研究进展及前景展望

胚胎移植技术是现代畜牧业中继人工授精技术之后的又一次巨大飞跃,业已成为一项充分发挥优良母畜繁殖潜力的实用新技术,已广泛应用于牛的繁殖科研与生产.胚胎移植的关键技术包括供体的超数排卵处理、胚胎的冷冻保存等.近年来诱导双犊、体细胞核移植等新型方法手段的出现,进一步促进了牛胚胎移植的发展,作为一项现代养牛业中重要技术,牛胚胎移植意义重大,发展前景广阔.