5-羟色胺受体3拮抗剂通过IκBα/NF-κB信号通路抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应

在败血症等炎症相关疾病中,巨噬细胞过度产生的炎症因子在疾病的发病机制中发挥关键作用。5-羟色胺受体3(5-hydroxytryptamine receptor 3,5-HT_(3)R)拮抗剂,近来被发现在免疫系统中具有抑制炎症的作用,但其具体机制尚不清楚。本文使用脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)刺激小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞,引发巨噬细胞炎症相关蛋白质的表达和炎症因子的释放。结果显示,在RAW 264.7细胞中,与无处理组相比,LPS以剂量和时间依赖的方式促进炎症相关蛋白质的表达和炎症因子的释放。进一步使用5-HT_(3)R拮抗剂格拉司琼(granisetron,GA)进行预处理,检测其抗炎作用。蛋白质免疫印迹和酶联免疫吸附测定的结果表明,与LPS处理组相比,随着GA浓度的升高,其抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症的效果越好(P<0.05)。同时,细胞活力和细胞毒性的结果也表明,所使用的GA对细胞不造成损伤。另外,通过免疫荧光实验和双荧光素酶检测表明,GA可以抑制LPS诱导的NF-κB的核移位和转录活性;进一步的蛋白质免疫印迹结果表明,GA可以通过抑制IκBα的磷酸化而抑制其降解,从而抑制NF-κB的功能。总之,本文的结果提示,GA可以通过抑制IκBα/NF-κB信号通路,抑制RAW 264.7巨噬细胞中炎症相关蛋白质的表达和炎症因子的释放。本研究结果为进一步探究5-HT_(3)R拮抗剂抗炎的分子机制,以及研发治疗败血症等炎症相关疾病的药物提供科学依据。

双分子荧光互补分析法检测α-突触核蛋白的聚集及在细胞间的传播

目的利用双分子荧光互补(BiF C)分析检测α-突触核蛋白的聚集及在细胞间的传播。方法首先利用高灵敏的荧光素酶human Gaussiaprinceps luciferase作为报告蛋白,将其N端(1～93)与C端(94～169)分别与α-突触核蛋白的C端融合,记作L1和L2,并将L1和L2同时在SK-N-SH细胞中共同表达,结果显示BiFC分析可以特异地检测出α-突触核蛋白的聚集。接下来将L1和L2分别在SK-N-SH细胞中表达,收集L1的培养基加入到表达L2的细胞中。同理,收集L2的培养基加入到表达L1的细胞中。结果 BiFC分析可检测到α-突触核蛋白在细胞间传播。结论 BiFC可有效检测α-突触核蛋白的聚集及在细胞间传播。

从明清小说“因果”模式看“命运主导性”之观念

在我国古代明清时期的小说中,许多作品都借助了“因果”之说的模式。并且,在这一类小说中对于人物“性格”与“命运”的刻画上,许多作品里都表现出了人物的命运主导性这一特点。我国明清时期小说中这一类依托“因果”之说、反映命运主导性特点的作品,表现了我国古代独特的民族文化宗教思想。

高等职业院校“双环境”素质教育模式研究

高职院校素质教育的最终目的是培养出能力结构适应岗位要求,素质结构满足企业精神文化建设的高素质技能型人才。构建"双环境"的人才培养模式,建立具有企业属性和职业教育"双环境"特色的大学校园文化,是高职院校实现素质教育目的的主要途径。

以“中国梦”为核心推动高职思政教育研究

大学阶段正是学生道德学习和思想建设的重要时期,是养成道德观念和树立正确人生观、价值观的关键阶段。高职院校应该为学生思想政治教育注入核心力量,强化课程改革,打造校园文化品牌活动,扩大影响范围,形成良好氛围。要把思想政治工作纳入学校的重点工作和主要任务,结合自身特点和相关行业需求,定期对大学生思想政治教育工作进行顶层设计,统筹安排、相互配合、强化管理、共同推进。

文化基础课对高职学生心理铸造的作用

如何更好地培养高职学生,使他们不仅能掌握过硬的专业技能,还可以拥有一份乐观向上的积极心态以及正确的人生观、价值观,是高等职业教育院校未来的工作发展方向。而文化基础课对高职学生的心理铸造有着积极的重要作用,它是帮助学生铸造坚强的内心世界和精神支持,培养正确成熟的人生观、价值观的重要途径。文化基础课可以为高职院校自身可持续发展注入新的动力和不竭能量,促进高职教育不断向前健康发展。

信息化时代高校党建宣传工作的创新研究

作为党的基层组织，党建宣传工作对高校基层党组织的建设发展和培养优秀的高校党员干部、学生人才都具有重要意义。利用网络新载体，创新形式、内容和手段，使宣传工作不再成为单一的附属工具，而是变成高校党建工作中关键性的一环，最大限度的发挥宣传工作的作用，就能更好地推动高校党建工作的健康发展，培养出更多的思想过硬、觉悟高、责任感强的高校党政领导干部和学生党员。

GABA_(A)受体激动剂通过NF-κB信号通路抑制炎症因子的释放

在帕金森病(Parkinson's disease,PD)等神经退行性疾病中,小胶质细胞的过度激活引发的炎症与神经元进行性丢失密切相关。中枢神经系统中主要的抑制性神经递质γ-氨基丁酸(GABA),近来被发现在免疫系统中,可发挥抑炎作用,但其具体机制尚不明确。本文利用脂多糖(LPS)刺激的BV2细胞,取其培养基培养SH-SY5Y细胞,检测炎症因子及神经细胞的损伤作用。结果显示,在BV2细胞中,与无处理组相比,LPS以剂量依赖的方式促进炎症因子的释放(P<0.01)。同时,细胞活力和细胞毒性的结果也表明,释放的炎症因子会诱导SH-SY5Y细胞活力衰退;进一步使用GABA及GABA_(A)受体激动剂蝇蕈醇(Muscimol)进行干预处理,检测其抑炎作用。酶联免疫吸附测定(ELISA)的结果表明,与LPS组相比,GABA,GABA_(A)R激动剂Muscimol预处理都以剂量依赖方式抑制LPS诱导的炎症因子释放(P<0.05)。细胞活力和细胞毒性的结果也表明,GABA,GABA_(A)R激动剂Muscimol的预处理挽救了炎症因子造成的SH-SY5Y细胞活力衰退(P<0.05)。另外,通过免疫荧光分析以及双荧光素酶的检测表明,Muscimol可以抑制NF-κB的入核和相关炎症因子的转录(P<0.0001,P<0.01)。总之,本文的结果提示,GABA可能通过抑制BV2小胶质细胞分泌的炎症因子的方式发挥神经保护作用,而GABA的这种作用主要是依赖于GABA_(A)受体-NF-κB通路。本研究结果为进一步探究GABA抗炎的分子机制,以及研发中枢系统抗炎药物提供科学依据。

论高职院校加强辅导员队伍胜任力建设

辅导员是高校教师和管理队伍的重要组成者，是开展大学生思想政治教育工作的骨干力量，是学生日常思想政治教育和管理的组织者、实施者和指导者。在高职院校辅导员队伍中，引入胜任力建设，可以打破以往高职院校辅导员队伍考核的局限，完善辅导员队伍的专业化建设。

烟碱通过α7 nAChR-JAK2通路抑制BV2小胶质细胞炎症因子的释放

神经炎症是包括帕金森病(Parkinson’s disease,PD)等的神经退行性疾病重要的发病机制之一。因此,抑制神经炎症应该是改善神经退行性疾病的有效途径。烟碱等烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptors,nAChR)激动剂对PD的干预有积极作用,但是其具体的机制尚不明确。本文主要通过细胞来研究烟碱在神经炎症模型中调节小胶质细胞炎症因子分泌及其在神经元的保护中发挥的作用,并进一步探讨烟碱发挥抗炎作用的分子机制。为此,用脂多糖(LPS)诱导BV2小胶质细胞的炎症反应,并用烟碱进行预处理;随后,收集经烟碱和LPS处理过的BV2细胞培养基,并用以继续培养SK-N-SH神经母细胞瘤细胞系。结果显示:与无处理对照组相比,LPS以剂量依赖的方式促进BV2细胞释放炎症因子TNF-α和IL-6(P<0.05)。而且随着LPS使用浓度的增加,经LPS处理过的BV2条件培养基对SK-N-SH细胞的损伤增加(P<0.05)。另外,在LPS损伤BV2细胞之前加入不同浓度的烟碱对其进行预保护,与仅添加LPS的损伤组相比,随着烟碱使用浓度的增高,其下调BV2细胞释放炎症因子TNF-α和IL-6的能力逐渐增强(P<0.05),而且烟碱预处理显著缓解LPS导致的BV2条件培养基对SK-N-SH细胞的毒性作用(P<0.05)。此外,我们发现,烟碱抑制炎症因子分泌及其对SK-N-SH细胞的保护作用可以被nAChR的非选择性抑制剂筒箭毒碱(d-TC),α7 nAChR的特异性抑制剂甲基牛扁亭柠檬酸盐(MLA)以及Janus激酶2(JAK2)特异性抑制剂α-氰基-(3,4-羟基)N-苄苯乙烯胺(AG-490)阻断(P<0.05)。这些结果提示,烟碱可能通过抑制BV2小胶质细胞分泌炎症因子的方式发挥神经保护作用,而烟碱的这种作用主要依赖于α7 nAChR-JAK2通路。本研究为进一步探讨烟碱抗炎的分子机制,以及研发中枢系统抗炎药物提供科学依据。

人HEK293T细胞外泌体的蛋白质组学分析

目的建立一套完整的外泌体样品提取,液质联用蛋白质组学检测方法。方法采用超速离心法提取细胞培养液外泌体,经过FASP酶切,收集酶解肽段,通过Easy-Nano LC液相色谱仪和Triple TOF6600质谱仪(美国Sciex公司)液质联用检测外泌体全酶解产物,并通过ProteinPilot软件(Sciex)处理数据,检索Uniprot的相应数据库,从而鉴定外泌体蛋白质。结果通过超速离心法,成功提取到细胞培养液外泌体。并通过LC-MS-MS方法,软件分析和数据库检索到833个匹配蛋白。结论此方法可有效获取外泌体,并鉴定外泌体蛋白质。

蛋白质/多肽片段互补分析法检测alpha-突触核蛋白在细胞中的聚集

Alpha-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)聚集是引起帕金森病(Parkinson’s disease,PD)发生发展主要原因。本文用蛋白质/多肽片段互补分析法(protein-fragment complementation assays,PCAs)检测α-syn在细胞内的聚集。分别构建融合α-syn与人工改造的荧光素酶human Gaussiaprinceps luciferase(h GLuc)蛋白N端或C端蛋白的质粒,共转入人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞,通过检测酶活性来确定野生型(wild type,WT)及A53T突变体α-syn在细胞中的聚集情况。结果表明WT和A53T突变α-syn都能使荧光素酶活性增强,而且与野生型α-syn相比,突变体A53T的荧光素酶活性更强,说明二者都能聚集,而且A53T聚集程度高于WT。PCAs法具有高灵敏度,不仅能检测α-syn在细胞内的聚集,而且能反映其聚集的程度,为研究帕金森病提供了研究思路和相应药物筛选的有效工具。

蛋白磷酸酶2A Cα在昆虫杆状病毒中的表达及活性

目的利用昆虫杆状病毒系统表达蛋白磷酸酶(PP)2A Cα亚基并进行活性分析。方法先将PP2A Cα构建进入昆虫杆状病毒表达载体,然后将其转染到昆虫细胞Sf9中并进行蛋白表达,最后检测PP2A Cα的功能。结果 Western印迹结果表明PP2A Cα蛋白已经在昆虫细胞成功表达;PP2A活性检测和GST pull-down实验结果表明PP2A Cα蛋白既有生物学功能,又有结构学功能。结论昆虫杆状病毒载体系统可以成功表达有活性的PP2A Cα蛋白。

双重结合肽段协助胞内蛋白酶体系统降解alpha-突触核蛋白

alpha-突触核蛋白(alpha-synuclein,α-syn)异常累积与聚集是帕金森病的重要致病因素之一。目前,已有的降低细胞内α-syn的方法多是从抑制新蛋白质合成角度进行,而无法干预已经存在并产生毒性的蛋白质。该研究旨在探索一种可以降解α-syn的新方法,从而挽救α-syn造成的细胞损伤。本研究依据Trim-Away方法设计了2种针对α-syn降解的肽段,即Pep1和Pep2,并将其过表达至HEK293T以及SH-SY5Y细胞中。Western印迹检测和免疫荧光分析以及免疫共沉淀结果表明,Pep1和Pep2可以在上述细胞系中表达,并与α-syn形成复合物,协助胞内蛋白酶体系统降解α-syn(P<0.05,P<0.0001)。进一步的细胞活力以及细胞毒性结果显示,Pep1和Pep2可以挽救α-syn引起的细胞活力的下降(P<0.0001),并且可以缓解α-syn造成的细胞毒性的增加(P<0.0001)。总之,本文的结果提示,肽段可以协助胞内蛋白酶体系统降解α-syn,并缓解α-syn造成的细胞损伤。本研究为短肽的研发、应用以及帕金森病的干预提供新的思路。

高效液相色谱法、胶体金快速定量法测定新收获小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的对比

本文分别使用高效液相色谱法和胶体金快速定量法对小麦中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇进行检测。通过对比两种方法可知,高效液相色谱法测定结果更精确,胶体金快速定量法测定速度更快,因此在以后的检测中,可通过两种方法互相结合的方式进行脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的检测,让检测数据更具备参考价值。

基于AHP(层次分析法)的领导情绪智力研究

现代社会的领导观强调情感领导、魅力领导,由此而引发的领导情绪智力的问题也成为人们研究的对象。研究表明,情绪智力是可以培养的。因此,本文通过采用层次分析法(AHP)对所建立的领导情绪智力模型进行分析,其中引入了4个影响领导情绪智力的变量。由最终的分析结果我们得出这4个变量的相对重要程度,从而为领导培养其情绪智力提供参考,使其能够抓住主次。

QuEchERS-气相色谱法测定玉米中有机磷农药残留

建立了改进的QuEchERS方法与气相色谱结合测定玉米中多种有机磷农药残留方法,样品水化后采用酸性乙腈作为提取溶剂,QuEchERS方法净化,基质标准溶液外标法定量,在10~200μg/L范围内,4种农药线性关系良好,相关系数均大于0.999,3个添加水平下回收率为70.4%~89.5%,相对标准偏差5.9%~8.7%,该方法简便、快捷,适合玉米中多种农药残留检测分析。