加热法人心肌钙蛋白T的提取与纯化

目的以加热法从人左心室肌组织中提取并纯化心肌肌钙蛋白Ｔ（ＣＴｎＴ）。方法取新鲜人左心室肌经捣碎、淬取、加热、透析后提取ＣＴｎＴ，以ＤＥＡＥ５２柱层析纯化。结果经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳初步鉴定，每１００ｇ左心室肌经此法可得１１．７９ｍｇＣＴｎＴ纯品，纯化后的ｃＴｎＴ为单一条带，分子量为３７ＫＤ。结论本法提取ＣＴｎＴ步骤简单，纯度尚可，可做抗原使用。

蚊不咬香露对蚊虫驱避作用的研究

蚊不咬香露对蚊虫驱避作用的研究＊任红斌刘世国张海珠冯元春阎福林（新乡医学院，新乡，河南４５３００３）Ｄｅｅｔ（Ｎ，Ｎ－二乙基甲基甲酰胺）为５０年代以来发现的最有效的广谱昆虫驱避剂之一，本实验考察了由Ｄｅｅｔ配制的“蚊不咬香露”喷剂，对本地常见吸血蚊虫...

驱蚊花露水对常见蚊虫的驱避作用

目的研究以自产Ｄｅｅｔ（Ｎ，Ｎ－二乙基间甲基甲酰胺）为有效成分配制的驱蚊花露水对本地区常见吸血蚊虫的驱避作用。方法将自产和进口Ｄｅｅｔ分别配成２％、５％和１０％的花露水剂型，分别喷涂于实验动物的腹部皮肤及志愿者裸手，连续观察各浓度驱蚊花露水在６ｈ内对蚊虫的驱避效果。结果自产Ｄｅｔ配制的２％驱蚊花露水保护时间为２ｈ。５％和１０％的驱蚊花露水在６ｈ内的有效保护率为１００％。结论自产和进口Ｄｅｅｔ对蚊虫的驱避作用无显著性差异。５％的驱蚊花露水为有效驱蚊的最佳选择。

旋毛虫感染早期兔血清中IgM的检测

目的探讨斑，点酶联免疫吸附试验（Dot-ELISA）检测旋毛虫感染早期免血清中特异性抗体IgM在免疫诊断上的价值。方法正常家免经口灌入旋毛虫肌肉期幼虫，于感染后d7和d14静脉系血分离血清，以Dot－ELISA法检测血清中的IgM。结果感染后d7和d14旋毛虫特异性抗体IgM的阳性率分别为85．7％和100％，最高滴度可达1：6400，且与日本血吸虫和弓形虫无交叉反应。结论Dot－ELIS法检测旋毛虫特异性抗体IgM对旋毛虫感染早期诊断具有特异性较强、敏感性高、重现性好的优点．

两种驱避剂剂型对蚊虫驱避作用的比较研究

本文报导了以Deet为有效成分配制的驱蚊露剂和乳剂对本地区常见吸血蚊虫的驱避效果。将含Deet浓度分别为2％，5％和10％的露剂或乳剂喷涂于小鼠腹部皮肤及志愿者裸露部位，观察蚊虫叮咬情况。动物实验结果：两剂型2％组持效在3．1—4．3h，5％和10％组8h内均无一蚊虫叮咬。现场应用结果：2％，5％，10％露剂和乳剂持效时间（小时）分别为：2.5±1．17，7．5±1．29，10．4±0．98和4．7±1．56，12．3±0．87，18．3±1．42，两剂型持效时间有显著性差异（P＜0．01）。5％或10％的露剂或乳剂能满足人在室内外的防蚊需要，尤以乳剂效果更佳。

猪囊层蚴抗原分析及其诊断价值

猪囊尾蚴可在人体的多种组织内寄生而引起囊尾蚴病,尤其以脑囊尾蚴病最为多见。由于其临床症状复杂多样,易和其它神经系统疾病混淆而误诊。虽然CT技术对其诊断很有帮助,但大都为提示性、非确定性的,且设备复杂,费用昂贵。免疫学诊断技术对病人脑脊液(CSF)、血清或唾液进行猪囊尾蚴的特异性抗体或抗原检测是一种行之有效的方法。

人心肌特异性肌钙蛋白的提取与鉴定

目的从人心肌组织中提取和纯化心肌特异性肌钙蛋白，为建立心肌梗塞病人免疫诊断试剂准备抗原。方法取新鲜人心室肌组织经捣碎离心提取，ＤＥＡＥ５２柱层析纯化，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ凝胶电泳鉴定。结果１００ｇ心室肌可提取３７ｍｇ纯品肌钙蛋白。结论本次提取的心肌特异性肌钙蛋白纯度较高，能作抗原使用。

河南新乡地区猪弓形虫感染与风险因素分析

为了解河南新乡地区猪弓形虫感染的情况及风险因素,用间接血凝法对2011年-2013年采集的猪血样进行检测。采用SPSS13.0统计分析资料,χ~2检验比较年度间及各风险因素的差异。结果显示,新乡地区2011年-2013年猪弓形虫血清阳性率分别为20.9%、34.4%和23.9%,年度间弓形虫血清阳性率差异不显著(P>0.05);弓形虫感染的风险因素中,猫出现次数的高低之间、是否接触啮齿类(鼠类)之间、有否与狗接触之间和有无流产史之间差异显著(P<0.05)。调查结果表明,河南新乡地区的猪弓形虫感染普遍存在,猫出现的次数、接触啮齿类(鼠类)、接触狗和有流产史等因素对猪感染弓形虫有影响。

生物素-链霉亲和素技术一步法检测人心肌肌钙蛋白T

目的:用已获得的两株抗人心肌肌钙蛋白T(cTnT)单克隆抗体N15C和N16D建立检测cTnT的生物素-链霉亲和素技术一步法。方法:应用酯化生物素对N15C进行标记,应用辣根过氧化物酶对N16D进行标记。将待检血清或抗原标准品、生物素标记的N15C和酶标记N16D加入经链霉亲和素包被的96孔酶标板微孔中,然后加入OPD,硫酸终止反应后,在λ=490 nm处读取A值,根据标准曲线求出各样本值。结果:建立的方法检测cTnT,检测灵敏度为1.0μg/L,可定量检测范围为2.0～32.0 μg/L。11例AMI患者和10例正常人用该法进行血清检测,与Enzymun-Test TnT试剂盒相比,阳性符合率为82％,特异性为100％。经重复检测表明本方法检测低浓度cTnT批内变异系数为4.70％,批间变异系数为9.36％;检测高浓度cTnT批内变异系数为3.20％,批间变异系数为8.25％。结论:该方法特异性高,重复性好,较常规双抗体夹心ELISA法有更高的灵敏度。

人心肌肌钙蛋白T单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

目的 :建立抗人心肌肌钙蛋白T(cTnT)单克隆抗体 (McAb)的杂交瘤细胞株。方法 :从人心肌组织中提取纯化人cTnT ,免疫BALB/C小鼠 ,采用杂交瘤技术 ,间接ELISA法选择能稳定分泌抗cTnTMcAb的杂交瘤细胞株。结果 :建立了 2株稳定分泌抗cTnTMcAb的杂交瘤细胞株N15C和N16D ,其染色体数目为 90～ 10 6 ,McAbIg亚类均为IgG1,间接ELISA法测定McAb腹水效价分别为 1 80 0 0和 1 32 0 0 0。免疫印迹结果显示 2株McAb均可识别cTnT中Mr 为 370 0 0的单一区带 ,不识别人骨骼肌提取物。间接ELISA法测定N15C和N16DMcAb与cTnT反应的最低浓度分别为 4 7μg/L和 2 3μg/L。相加试验表明 2株McAb能识别不同的抗原表位。 结论 :获得

刚地弓形虫MIC2与醛缩酶作用位点的鉴定

目的确定刚地弓形虫微线体蛋白2(MIC2)与醛缩酶的作用位点。方法利用定点突变技术,将MIC2羧基端(MIC2C)的767位色氨酸(W767)突变为丙氨酸(A)。PCR扩增MIC2CW/A突变体基因片段;构建MIC2CW/A/pGEX-4T-1重组原核表达系统,IPTG诱导表达GST-MIC2CW/A突变体蛋白。分别以该蛋白和GST-MIC2C蛋白(对照蛋白)作为探针蛋白与弓形虫速殖子裂解液进行GST pull-down实验,SDS-PAGE及Western blot分析。结果获得了MIC2CW/A突变体基因片段,制备了GST-MIC2CW/A突变体蛋白;GST-MIC2C蛋白的pull-down产物中有一蛋白条带,而且可以被醛缩酶抗体识别,而GST-MIC2CW/A蛋白的pull-down产物中未见蛋白条带。结论将MIC2的W767突变为A后,MIC2失去与醛缩酶的作用,即MIC2与醛缩酶的作用位点为色氨酸(W)。

丝光绿蝇幼虫饲料改进

目的 比较两种幼虫饲料对室内饲养丝光绿蝇的影响。方法 将丝光绿蝇分成两组,以两种人工配制的幼虫饲料进行室内饲养,一种幼虫饲料不加鱼粉,改进的饲料中添加鱼粉,对室内饲养的两组丝光绿蝇第二代部分指标进行比较。结果 添加鱼粉组丝光绿蝇室内第二代蛹羽化率与不加鱼粉组元显著性差异,添加鱼粉组蛹重、蛹长、成蝇头宽、产卵次数等指标显著大于不加鱼粉组。结论 添加鱼粉的幼虫饲料有利于丝光绿蝇的生长发育。

DEET不同剂型对小鼠日本血吸虫感染防护作用比较

目的 比较3种N,N -二乙基间甲苯甲酰胺(DEET)剂型对日本血吸虫尾蚴侵入小鼠皮肤的防护效果。方法 制备含10 % DEET的DEET液、DEET霜和DEET凡士林软膏,分别用于单纯涂抹实验和浸泡实验。每种实验均将昆明鼠随机分为3个实验组和3个对照组。实验组小鼠腹部皮肤分别涂抹不同剂型的DEET,对照组小鼠分别涂抹异丙醇、“郁美净”霜和凡士林软膏。在涂抹实验中,实验组小鼠分别于涂药后0 .5、1、2、4、8h感染日本血吸虫尾蚴,对照组小鼠在涂药后0 .5 h感染尾蚴。在浸泡实验中,实验组和对照组小鼠涂药后分别浸泡10 min,0 .5、1、2、4 h,然后感染尾蚴。各组小鼠均经腹部感染尾蚴(5 0±5 )条。于感染后6～7周处死小鼠,经心脏灌注法收集成虫,计数后计算减虫率及进行秩和检验。结果 单纯涂抹实验中,3种剂型DEET涂抹小鼠至少在1h内可获得10 0 .0 %的减虫率。涂药后2、4、8h感染尾蚴,DEET液组减虫率分别为94 .8% ,89.9%和13.3% ;DEET霜组减虫率分别为10 0 .0 % ,97.8%和5 0 .7% ;DEET凡士林软膏组减虫率分别为10 0 .0 % ,99.0 %和98.0 %。浸泡实验中,若以小鼠获得5 0 .0 %以上的减虫率为保护有效,则DEET液的持效时间为10 m in;DEET霜为30 min;DEET凡士林软膏为2 h。

刚地弓形虫微线体蛋白6和醛缩酶在虫体内的定位

目的观察刚地弓形虫微线体蛋白6(MIC6)和醛缩酶在虫体内的定位。方法聚合酶链反应扩增微线体蛋白2羧基端(MIC2C)基因片段,构建MIC2C/pGEX-4T-1/BL21表达系统,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达谷胱苷肽巯基转移酶-MIC2C(GST-MIC2C)蛋白,用该蛋白免疫新西兰兔,制备GST-MIC2C多克隆抗体。刚地弓形虫速殖子涂片,分别用一抗、荧光二抗温育,荧光显微镜下观察。结果成功获得GST-MIC2C多克隆抗体。荧光显微镜下显示MIC6(红色荧光)和醛缩酶(绿色荧光)2种蛋白皆定位于弓形虫的顶端。结论刚地弓形虫MIC6与醛缩酶在虫体内存在共定位关系,为2种蛋白相互作用关系的确立提供了细胞定位学证据。

刚地弓形虫谷胱苷肽巯基转移酶-醛缩酶融合蛋白的制备及纯化

目的体外制备刚地弓形虫醛缩酶(aldolase)蛋白并纯化。方法以刚地弓形虫cDNA链为模板,聚合酶链反应扩增aldolase基因,克隆至质粒pGEX-4T-1上,转化至大肠杆菌BL21;异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导表达,亲和层析纯化表达产物。结果获得了aldolase基因序列,构建了aldolase/pGEX-4T-1原核表达系统,表达并纯化了谷胱苷肽巯基转移酶-醛缩酶(GST-aldolase)融合蛋白。结论体外获得了纯化的GST-aldolase蛋白,为后续的aldolase功能研究奠定了基础。

人心肌特异性肌钙蛋白T单克隆抗体的制备与鉴定

目的 制备抗人心肌肌钙蛋白T的单克隆抗体。方法 利用纯化的人心肌肌钙蛋白T免疫BALB/C小鼠 ,常规方法制备抗人心肌肌钙蛋白的单克隆抗体 2株N15C和N16D。结果 利用普通ELISA方法检测 2株单抗 ,小鼠腹水N16D滴度可达 1/ 32 0 0 0 ,N15C滴度达 1/ 80 0 0 ;斑点酶联免疫吸附试验证明N16D对急性心肌梗塞患者血清中出现的肌钙蛋白T有较好的亲和性。

丝光绿蝇抗菌物质诱导初步研究

目的丝光绿蝇抗菌物质的诱导初步研究。方法丝光绿蝇三龄幼虫，采用超声波处理后２４ｈ提取其血淋巴，采用大肠杆菌作指示菌，作抑菌试验，以抑菌圈直径表示活力大小。结果丝光绿蝇三龄幼虫每１６０只约提取血淋巴０．５ｍｌ，超声波诱导后２４ｈ取血淋巴，对大肠杆菌有抑菌活力。结论超声波诱导丝光绿蝇后，其体内产生了抗菌物质。

寄生虫学实验教学模式的改进

随着医学寄生虫学学科的不断发展,传统的寄生虫学实验教学模式已经不能满足教学的需要。为克服传统实验教学模式的弊端,新乡医学院寄生虫学实验室开展了以活体教学、实验教学与社会实践相结合以及综合模式实验教学为特色的实验教学改革。通过学生自做观察活体标本,参加寄生虫病调查,多媒体优化辅助教学等手段强化实验教学效果。学生座谈会和问卷调查结果显示采用新教学模式后学生的学习兴趣、综合素质、对教师教学效果的满意度均比之前明显提高。