LED白光的亚甲蓝光化学法血浆病毒灭活研究

目的探讨LED白光的亚甲蓝光化学法对血浆中的病毒灭活效果。方法血浆中加入终浓度为1μM的亚甲蓝,以LED白光为光源,比较不同处理方式(10 cm/5 cm照射间距、单侧/双侧照射)、不同照射强度(30000 lx、35000 lx、40000 lx、45000 lx、50000 lx)和不同处理时间点(10 min、20 min、30 min)的血浆中凝血因子的活性及Sindbis病毒的灭活效果。结果在50000 lx照射强度下,随着照射时间的增加,血浆温度逐渐升高,升温幅度为5 cm间距>10 cm间距,双侧照射>单侧照射。5 cm/10 cm间距、单侧/双侧照射对凝血因子Ⅷ和纤维蛋白原(FIB)活性的影响均没有显著差异。以10 cm间距、双侧照射的处理方式作为病毒灭活装置条件参数,用30000 lx、35000 lx、40000 lx、45000 lx和50000 lx的光照强度分别照射5 min后,血浆中Sindbis病毒被灭活,滴度下降均>4 LogTCID50/0.1 mL;照射20 min后,血浆中凝血因子Ⅷ活性>70%、FIB活性>60%。光照强度与凝血因子损失的相关分析表明:不同的光照强度与凝血因子Ⅷ的活性损失没有相关性,光照的强度对FIB的影响表现在照射的20 min以内,照射强度越大FIB活性下降越严重,但照射30 min后不同的光照强度对FIB的影响已没有显著性差异。照射时间与凝血因子的损失高度相关,不同光照强度下凝血因子都随着照射时间的增加而损失。结论LED白光可以作为亚甲蓝病毒灭活方法的新光源,在合适的条件下有效灭活血浆中的病毒,并保留血浆中凝血因子的活性。

不同核黄素浓度与可见光光照强度对血浆中大肠杆菌的影响

目的研究不同核黄素浓度与可见光光照强度对血浆中大肠杆菌的影响,为建立血浆中污染细菌的灭活方法提供备选条件。方法随机选取谷氨酸氨基转移酶(ALT)检测不合格的新鲜冰冻血浆,按照处理方式将实验分为三大类:第一类为只添加菌液但不做任何处理的对照组,第二类为只添加菌液并接受光照处理的光照组,第三类为添加菌液与核黄素并接受光照处理的实验组。其中实验组根据核黄素浓度又细分为50、100、150和300μM的核黄素浓度组。光照组和各核黄素浓度组分别接受420 nm可见光的光照处理,每轮光照的光照强度分别为50 mW/cm^(2)、75 mW/cm^(2)和100 mW/cm^(2),光照时间为55 min(分别在25、35、45和55 min取样检测),光照结束后通过细菌培养评估不同核黄素浓度与可见光光照强度对血浆中大肠杆菌的影响。结果在420 nm光照55 min后,各核黄素浓度下大肠杆菌浓度分别下降了1.7~3.5 log(50 mW/cm^(2)),2.8~≥4.4 log(75 mW/cm^(2)),4.0~≥4.7 log(100 mW/cm^(2))。其中,高强度的光照(100 mW/cm^(2))协同高浓度的核黄素(150μM和300μM)能够有效降低血浆中大肠杆菌的浓度达到4 log以上。而光照强度的增加与核黄素浓度升高也会增加对大肠杆菌的处理效果,两者与大肠杆菌处理效果之间也呈正相关。结论在420 nm波长、光照强度75 mW/cm^(2)、核黄素浓度为150μM和300μM时,核黄素可见光照射方法对血浆中大肠杆菌具有最理想的处理效果,可有效降低血浆中污染的大肠杆菌浓度。

2013年度中国国际输血感染预防和控制(CITIC)室间质评结果分析

目的总结和分析2013年度中国国际输血感染预防和控制(CITIC)室间质评结果。方法对2013年3次CITIC室间质评参评实验室、检测试剂、不正常结果和离群值情况做统计分析。结果 2013年度国内共有53家实验室参加了CITIC室间质评,其中血液中心实验室33家、中心血站实验室16家。血清学检测项目HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP所使用试剂中分别有66.03%(173/262)、75.57%(198/262)、64.50%(169/262)和96.02%(217/226)为国产试剂,核酸检测所用试剂中71.08%(59/83)为进口试剂。在HBsAg、抗-HCV、抗-HIV、抗-TP和核酸检测中,参评实验室出现不正常或错误结果的频率(以实验室为单位计算)分别为9.72%(14/144)、10.42%(15/144)、15.97%(23/144)、2.50%(3/120)和6.67%(5/75),68.18%(105/154)的参评实验室出现离群值,仅22.73%(35/154)的参评实验室检测结果无任何瑕疵。结论 CITIC项目的开展能较全面地持续监控国内采供血机构实验室血液筛查能力。室间质评有助于国内血液筛查实验室加强精细化管理和持续改进,从而进一步提高整体检测能力。

SYBRGreen荧光定量PCR检测HTLV-I前病毒tax基因方法的建立

目的建立HTLV—I前病毒tax基因的荧光定量PCR检测方法。方法根据HTLV—Itax基因序列设计引物，将PCR克隆的tax片段链接入质粒载体，经筛选鉴定后，以含有目的片断的质粒为阳性模板建立实时荧光定量检测方法。结果扩增体系的敏感度可达10拷贝／反应。模板浓度在10^5～10^1拷贝／反应时，模板浓度与循环闽值（Q）之间相关性良好，相关系数r=-0，9987，且模板浓度相同的反应管之间具有良好的重复性和稳定性。结论SYBRGreen荧光定量PCR检测HTLV—I前病毒tax基因方法具有简便、快速和灵敏度高等优点，可能在疾病诊断、监测以及血液筛查中具有一定的应用前景。

HBsAg阴性、HBV DNA阳性献血者病毒感染特征研究

目的了解上海地区献血人群中血清HBsAg阴性、HBV DNA阳性感染的流行率、病毒血清学和分子生物学特点。方法选取HBsAg阴性、核酸筛查确认为HBV DNA阳性的献血者血清标本,采用酶联免疫法(ELISA)检测病毒血清标志物抗-HBc和抗-HBs;PCR扩增HBV S区基因片段,对扩增后的产物进行测序分析后,将产物序列与Genbank中HBV序列进行Blast比对,获得标本HBV毒株的基因型;采用DNAMAN软件进行蛋白表达分析,确定标本毒株的血清型,并与Genbank中野生型HBV序列进行比较,获得S区基因编码蛋白突变情况。结果上海地区HBsAg阴性献血人群HBV DNA阳性感染率约为0.045%。18例HBsAg阴性、HBV DNA阳性标本血清病毒载量均低于200IU/ml,且大部分低于20IU/ml;其中14例(77.8%)病毒血清标志物为抗-HBc和/或抗-HBs阳性。18例样本全部为B和C基因型,主要为adw和adr血清型。14例血清抗-HBc和/或抗-HBs阳性样本中,13例样本发生了S蛋白氨基酸突变,其中8例B基因型较多发生Q101K/H、M103T/I、F134L、D144A突变,5例C基因型较多发生S114T/A、T118K/R、K141T、S143T突变;4例血清阴性样本中,均未发生S区蛋白位点突变。结论上海地区献血者存在HBsAg阴性、HBV DNA阳性感染者,其血清病毒载量低,感染病毒全部为B和C基因型,主要为adw和adr血清型;其中大部分为隐匿性HBV感染,少数可能为窗口期感染;隐匿性HBV感染病毒多发生S蛋白氨基酸位点突变。

国内实验室参加NRL血液筛查核酸检测室间质评数据分析

目的分析2012-2015年国内实验室参加NRL血液筛查核酸检测(NAT)EQAS数据,评估参评实验室常用NAT筛查试剂对低浓度和极低浓度核酸阳性样品的检测能力。方法收集国内参评实验室2012-2015年12次(3次/年)NRL血液筛查NAT EQAS数据,对不正常结果及其原因进行统计分析。利用所有NRL参评实验室的数据,分析中国市场上常见的NAT筛查试剂对低浓度和极低浓度HBV DNA、HCV RNA和/或HIV-1阳性样品的检出率。结果 2012-2015年国内共有37家实验室参加了质评项目,其中70.27%(26/37)来自血液中心,18.92%(7/37)来自中心血站和10.81%(4/37)来自公司。12次质评共有305家(次)实验室提交了319个试剂检测结果,其中45.77%(146/319)采用Procleix TM TMA检测,25.39%(81/319)采用cobas Taq Screen MPX或MPX v.2.0检测,其余28.84%(92/319)为3种国产试剂检测。90.49%(276/305)参评实验室报告血清盘结果正确;6.89%(21/305)参评实验室出现了不正常结果,包括假反应性结果(2.62%,8/305)、假阴性结果(3.28%,10/305)和数据输入错误(1.64%,5/305)。10家(次)参评实验室共出现了11个假阴性结果,均来自于低浓度病毒载量样品HBV(40-400)IU/m L、HCV40 IU/m L或HIV-1 250 IU/m L。常用NAT筛查试剂对低浓度病毒载量样品的检出率为97.96%-100.00%,对极低浓度病毒载量样品HBV(A)0.4 IU/m L和HCV(1b)IIU/m L的检出率分别为8.82%-89.19%和6.25%-34.27%。结论国内NAT血液筛查实验室仍存在少数漏检和假反应性的问题。NAT筛查试剂能有效检出低浓度病毒载量样品,部分试剂还能正确检测极低浓度病毒载量样品。参评实验室通过参加EQAS活动,可以发现自身实验室可能存在的问题、获得更多试剂信息,有助于进一步提高实验室的检测能力和检测结果的可靠性。

2011-2014年中国国际输血感染预防和控制(CITIC)项目血液筛查核酸检测室间质评结果分析

目的总结和分析2011-2014年国内实验室通过中国国际输血感染预防和控制(CITIC)项目参加澳大利亚国立血清参比实验室(NRL)血液筛查核酸检测(NAT)室间质评(EQAS)结果。方法对2011-2014年CITIC项目参加全部10次血液NAT筛查NRL EQAS的参评实验室、检测试剂、不正常结果情况作统计和分析。结果 10次血液NAT筛查EQAS共有33家实验室221次参评,其中78%(172/221)为血液中心实验室、15%(28/221)为中心血站实验室和9%(21/221)为试剂公司实验室。共使用4种试剂检测血清盘234次,分别为Novartis 47%(111/234)、Roche 23%(54/234)、科华12%(27/234)和浩源18%(42/234)。10次EQAS共出现36个不正常结果,包括14个假阴性和22个假阳性。血液中心、中心血站和公司实验室出现不正常结果比例分别为0.27%(23/8 565)、0.22%(3/1 350)和1.06%(10/945),出现不正常结果的实验室比例分别为8.38%(14/167)、11.54%(3/26)和28.57%(6/21)。Novartis、Roche、科华和浩源试剂检测出现不正常结果比例分别为0.20%(13/6 540)、0.74%(9/1215)、0.79%(10/1 260)和0.22%(4/1 845)。阴性样品和阳性样品出现不正常结果频率分别为0.34%(14/4 092)和0.22%(24/11 140)。CITIC参评实验室出现不正常结果实验室比例为10.75%(23/214),低于NRL其他参评实验的27.11%(202/745)。结论 CITIC参评实验室核酸筛查检测整体水平高于参加NRL EQAS的其他参评实验室。实验室通过参加EQAS,可以发现存在的问题,不断改进和提高实验室的检测能力。

上海地区献血人群隐匿性HBV感染状况

目的了解HBsAg阴性、抗-HBc阳性的献血人群中HBV DNA感染情况。方法采用酶联免疫法(ELISA)检测5 121份HBsAg阴性的合格献血者血清抗-HBc和抗-HBc阳性反应滴度;对抗-HBc阳性样本采用ELISA法检测血清抗-HBs,采用巢式PCR三区段扩增法检测HBV DNA。结果 HBsAg阴性的献血人群中抗-HBc阳性反应率达26.4%,其中抗-HBs阴性占16.4%;抗-HBc阳性样本中PCR扩增出1例HBV DNA阳性样本,抗-HBc滴度为1∶8,血清抗-HBs阴性。结论抗-HBc检测用于献血者筛查的特异性太低,高度敏感和特异的核酸检测方法可有效检出隐匿性HBV感染,进一步降低输血传播HBV风险。

蛋白激酶抑制剂G6976增强慢性髓系白血病细胞对三氧化二砷化疗敏感性的研究

研究G¨o6 976是否能去除As2 O3引起的G2 M周期阻滞 ,增加慢性髓系白血病 (CML)细胞株 (K5 6 2细胞 )对As2 O3的敏感性。K5 6 2细胞经不同浓度的G¨o6 976及和As2 O3(5 μmol L)作用后 ,流式细胞术检测细胞周期 ,台盼蓝排斥试验检测细胞活力 ,四唑盐 (MTT)比色试验分析细胞的生长增殖。结果表明 ,流式细胞术细胞周期检测发现K5 6 2细胞经As2 O3作用 2 4小时和 4 8小时后 ,G2 M期细胞比例分别为 (38.0 2± 7.70 ) %和 (32 .5 8± 7.4 3) % ,未出现明显凋亡 ;5 0nmol LG¨o6 976与As2 O3联合作用后 ,G2 M期细胞分别减少至 (2 3.2 4± 2 .93) %和 (16 .18±1.6 0 ) % ,subG1 期细胞分别增加至 (11.82± 2 .31) %和 (2 7.80± 2 .89) % ;且其变化随G¨o6 976浓度及作用时间而增加。同时台盼蓝排斥试验及MTT试验观察到G¨o6 976与As2 O3联合作用能明显降低细胞活力、抑制其生长 ,但G¨o6 976本身无明显作用。结论 :G¨o6 976可能通过去除G2 M期阻滞 ,有效增强了K5 6 2细胞对As2 O3化疗的敏感性。

上海地区HTLV—Ⅰ相关高危人群病毒感染的检测

目的建立人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ（HTLV—Ⅰ）前病毒的核酸检测方法，对HTLV—Ⅰ相关高危标本进行检测，初步了解上海地区HTLV-1在相关疾病和高危人群中的流行特点，探讨核酸检测法在HTLV—Ⅰ高危人群中的检测意义。方法实验收集了69例淋巴瘤／白血病患者，72例有多次输血史的其他血液病患者以及1例HTLV—Ⅰ相关脊髓病（HAM）／热带痉挛性下肢瘫痪（TSP）疑诊患者血液标本。采用荧光定量PCR筛查HTLV-1前病毒tax基因，酶联免疫法检测血清HTLV—Ⅰ／Ⅱ抗体，对上述2种检测中出现任一阳性结果的标本进一步采用nest—PCR检测HTLV-1前病毒env基因以确定HTLV—Ⅰ的感染。结果仅HAM／TSP疑诊患者tax基因扩增出现阳性曲线；ELISA检测标本血清HTLV—Ⅰ／Ⅱ抗体均为阴性；nest—PCR扩增env基因未见特异性条带。结论上海地区小样本HTLV—Ⅰ相关高危人群中未检出HTLV—Ⅰ感染；建立的核酸检测方法能对HTLV—Ⅰ病毒感染进行有效的筛查和确认。

三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞周期及Survivin表达的影响

目的 研究三氧化二砷 (As2 O3 )对慢性髓系白血病细胞 (K5 62 )的作用特点及其机制。方法 不同浓度As2 O3 作用于K5 62细胞后 ,四唑盐 (MTT)比色法分析细胞增殖 ;流式细胞术检测细胞周期分布、细胞凋亡及Survivin抗原表达 ;RT PCR检测SurvivinmRNA的表达。结果 2～ 10 μmol/L的As2 O3 能有效抑制K5 62细胞增殖 ,但未能诱导明显的细胞凋亡。周期分析显示 ,G2 /M期细胞比例显著增多 ;同时G2 /M细胞周期依赖性表达的SurvivinmRNA和蛋白表达增加。结论 As2 O3 明显抑制K5 62细胞的生长 ,其机制是诱导G2 /M期细胞周期停滞。Survivin表达上调可能是K5 62细胞对As2O3诱导凋亡抵抗的机制之一。

化学发光技术在CITIC血液筛查室间质评中的应用情况分析

目的分析化学发光技术(ChLIA)在血液筛查中的应用情况。方法对2017年6月—2018年4月一共3次室间质评的结果报告数据进行分析,统计ChLIA与酶联免疫法(ELISA)检测的不正常结果,以及既往室间质评中抗-HCV弱阳性样品和HIV p24抗原定量和HIV窗口期样品的检出情况。结果全球共有140余家实验室参加了室间质评活动,其中国内参评实验室50余家。全部参评实验室3次室间质评共使用检测试剂1 567个,ChLIA试剂占34%。ChLIA检测的假阴性和假反应性发生率分别为0.08%(8/10 569)和0.35%(37/10 569),ELISA分别为0.04%(7/18 145)和0.50%(91/18 145)。ChLIA与ELISA试剂检测HIV的假反应性发生率分别为0.31%(9/2 896)和0.68%(34/5 010)(P<0.05)。大部分ChLIA试剂(3/4种)能检出抗-HCV弱阳性样品,全部ChLIA试剂(4种)对HIV p24抗原定量为1.5 IU/mL的样品和窗口期样品均无检出结果。结论化学发光技术已经用于国外血液筛查,其假反应性发生率低于ELISA,但其对HIV p24抗原检测的应用效果值得进一步探讨。

上海地区无偿献血者乙型肝炎病毒隐匿性感染情况和突变分析

目的了解上海地区无偿献血人群乙型肝炎病毒隐匿性感染的情况、病毒基因型的分布及S区氨基酸的突变情况。方法对上海市血液中心2011年10月～2012年7月使用血清学联合核酸检测所作的常规血液筛查结果进行分析,综合乙型肝炎血清学标志物二对半检测结果,以判断献血者HBV DNA+标本的感染状态,从中选择部分HBsAg-HBVDNA+的隐匿性HBV感染(OBI)标本作S区巢式PCR、克隆测序,基因分型和突变分析。结果从250 376(人)份无偿献血者标本中筛查出197例HBsAg-HBV DNA+,包括OBI 172例(0.069%);经S区巢式PCR的47例OBI标本中,有17例扩增出S区:14例为C亚型、突变率为35.71%(5/14),3例为B亚型,有1例发生突变,突变主要发生在S抗原的主要亲水区(MHR)。结论上海地区无偿献血者OBI携带率为0.069%,S抗原MHR区的突变可能是OBI发生的贡献因素之一。

丙型肝炎病毒抗体筛查阳性结果确证方案的探讨

目的明确抗-HCV酶免检测结果与确证阳性结果之间的相互关系,以期建立简便、经济的血液筛查实验室抗-HCV确证试验方案。方法使用重组免疫印迹试验结合核酸检测方法对134份酶免抗-HCV阳性样本确证,初步探讨2或3种抗-HCV酶免试剂(Ortho、Murex和科华联合复检的S/Co值与阳性预期值的关系及不同试剂组合检测的阳性预期值。结果134份样本中,92份真阳性,5份可疑,其余均为阴性。Ortho和Murex试剂的S/Co与阳性预期值呈正相关,当S/Co≥3.8时,阳性预期值分别可达98.33%和97.78%。Murex联合科华、Ortho联合科华以及3种试剂同时检测为阳性时的阳性预期值为100%;Ortho联合Murex的阳性预期值为98.48%,与上述其它2或3种试剂组合比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论2种或3种酶免试剂联合复检的确证方案优于美国CDC推荐的S/Co≥3.8方案。在常规血液筛查实验室,可以选择3种抗-HCV试剂中的任2种同时复检,先行对抗-HCV阳性标本确证,对无法确证的样本再作重组免疫印迹试验分析。

胚胎成纤维细胞与含LIF的培养体系支持鼠造血祖细胞体外扩增

为了探讨胚胎成纤维细胞与含白血病抑制因子 (LIF)的培养体系对鼠骨髓造血祖细胞体外扩增效应 ,并观察其对造血表面归巢相关黏附分子VLA 4 (CD4 9d)、VLA 5 (CD4 9e)、LFA 1(CD11a)、HCAM (CD4 4 )、L selectin(CD62L)的表达影响 ,将丝裂霉素C灭活的鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)和含LIF的培养体系与鼠骨髓单个核细胞(BMMNC)体外共同培养 7天 ,检测BMMNC细胞总数、CFC、Sca 1+细胞百分率、细胞凋亡率和Sca 1+细胞表面黏附分子CD4 9d、CD4 9e、CD11a、CD4 4、CD62L的表达率。结果表明 :MEF和含LIF的培养体系明显扩增了BMMNC细胞总数、CFC和Sca 1+细胞 ,抑制细胞凋亡 (P <0 .0 5 ) ,而去掉MEF和LIF后的对照组培养体系BMMNC细胞总数明显下降 ,CFC和Sca 1+细胞完全死亡 ,细胞大部分凋亡 (P <0 .0 1)。扩增后Sca 1+细胞表面各黏附分子CD4 9d、CD4 4和CD61L表达与扩增前相当 (P <0 .0 5 ) ,而CD4 9e和CD11a表达明显高于扩增前 (P <0 .0 5 )。结论 :胚胎成纤维细胞和含LIF的培养体系体不仅可以体外显著扩增鼠骨髓造血祖细胞 ,而且扩增后的造血祖细胞(HPC)总体上保持其表面归巢相关黏附分子的表达 ,扩增后HPC归巢功能不受影响。

新型亚甲蓝病毒灭活套材对血浆成分的质量影响

目的观察使用新型亚甲蓝病毒灭活套材对血浆组分质量指标的影响。方法随机领取100m L/U的新鲜冰冻血浆50U,连接至亚甲蓝病毒灭活套材,溶解内置的冻干亚甲蓝,置病毒灭活箱内照射,照射结束后,通过亚甲蓝白细胞滤器滤除亚甲蓝。分别于照射前、照射后及过滤后留取样品,置-20℃冰箱保存。检测各样品FⅤ、FⅧ、FⅨ、FⅪ、FⅫ、FIB-C、AT、VWF-Ag、VWF-Rco、F1+2、C3a、C5a、IL-6及IL-8的含量。结果经病毒灭活处理后血浆凝血因子Ⅴ∶C、Ⅷ∶C、Ⅸ∶C、Ⅺ∶C、Ⅻ∶C、FIB-C、VWF-Rco的回收率分别为81.70%、71.55%、81.69%、87.78%、90.93%、71.82%和85.05,AT和VWF-Ag的含量未受影响。F1+2、C3a、C5a、Il-6和IL-8分别下降了9.03%、3.25%、19.01%、20.37%、14.55%。结论使用新型亚甲蓝病毒灭活套材处理后,血浆凝血因子及其他血浆组分影响在可接受范围内,符合国家全血及成分血质量要求以及临床安全输血的需求。

丙型肝炎病毒样颗粒作为亚甲蓝光化学法灭活HCV效果评价物的可行性研究

目的探讨丙型肝炎病毒样颗粒(HCVLPs)在亚甲蓝光化学灭活处理过程中的变化趋势及其作为亚甲蓝光化学法灭活HCV效果评价物的可行性。方法以HCV阳性血浆作为平行对照组(HCV RNA载量约6.53 logcopies/m L)(n=6),将HCVLPs用代血浆调整成合适浓度(HCV RNA定量约为6.74 logcopies/m L)的悬液作为实验组(n=5),将2组分装至PVC血袋中,MB+L 1μmol/L进行病毒灭活处理,分别于光照处理0、5、10、20、30 min时取样,用荧光定量PCR技术检测病毒核酸载量;同时以细胞病变法测定HCV模型病毒sindbis病毒的残余滴度,验证MB+L灭活HCV的效果。结果模型病毒sindbis的病毒滴度降至检测限以下(log TCID50/m L≤0.5);MB+L处理过程中,随着光照处理时间的增加,HCV及HCVLPs的核酸载量明显下降,分别从6.53与6.74下降至4.51和2.89log copies/m L(P<0.05),且2组在不同取样点的HCV RNA载量之间具有相关性(R2>0.98,Significance F<0.01)。结论 HCVLPs能够反映MB+L灭活处理中HCV RNA动态变化,或有望成为安全而有效的HCV灭活评价物来监控HCV灭活效果。

环介导的等温扩增技术对HBV、HCV和HIV核酸检测的研究

目的建立环介导的等温扩增技术(LAMP)对HBV、HCV和H IV核酸检测的方法并对检测灵敏度和特异性作初步考核。方法通过引物设计和筛选、内质控的设计与时间分辨浊度检测方法的运用,建立LAMP HBVDNA、HCV RNA和H IV RNA扩增体系;用连续稀释的阳性样本和不含任何病毒核酸的正常人血浆考核所建立的LAMP扩增体系的灵敏度和特异性。结果建立了LAMP HBV DNA扩增体系及HCV/H IV RNA双联检体系,该体系对5 CP/m l的HBV DNA样本的检出率为51.85%,对100 CP/m l的HCV RNA阳性样本的检出率为61.90%,对100 CP/m l的H IV RNA阳性样本的检出率为45%。对考核样本检测的相对灵敏度和特异性均为100%。结论LAMP HBV、HCV和H IV检测灵敏度较高,在进一步优化以后能用于HBV、HCV和H IV的核酸检测。

血源肝炎病毒筛查试验结果的分析

目的探讨血筛酶免疫试剂的质量以及2次化验试剂的合理搭配,最大限度地避免漏检和减少假阳性。方法对随机抽取的73份HBsAg和99份抗-HCV检测不合格的献血标本分别采用与常规筛查相同的2种进口试剂和另1种国产酶免试剂进行复检,并对复检中至少1种试剂为反应性的标本进行HBsAg中和试验或抗-HCV重组免疫印迹试验确证。结果73份HBsAg不合格标本中,20份确证阳性,11份可疑,42份阴性;99份抗-HCV不合格标本中,29份确证阳性,70份阴性。针对研究范围内特定的标本,进口试剂的漏检率可达13.79%～27.59%,且也存在不同程度的假阳性。2种进口试剂间检测结果互补,而国产试剂无法查出进口试剂的漏检。结论无论是进口还是国产血筛酶免试剂,都存在不同程度的漏检和假阳性情况,应选择2种检测结果互补的试剂对血液进行筛查,以保障血液安全。

国产化学发光免疫试剂检测血清HBsAg的应用评价

目的考核国产化学发光免疫分析试剂检测血清HBsAg的效果,探讨其在血液筛查和临床检测应用中的可行性。方法采用国产化学发光免疫分析试剂筛查345份HBsAg确认阳性的血清标本,比较其与常用的进口和国产酶联免疫检测试剂盒的漏检率;并采用不同浓度的标准HBsAg血清对国产化学发光免疫分析试剂进行线性分析和精密性试验。结果国产化学发光免疫分析检测试剂的漏检率高于Murex和Organon酶联免疫试剂盒,差异有统计学意义(P<0.01),而与国产英科新创(厦门)科技公司和上海科华生物技术有限公司的HBsAg酶联免疫诊断试剂盒的差异无统计学意义;采用标准血清进行线性分析,标本浓度在(0.5～150)ng/ml范围时与化学发光单位量(RLUs)呈良好的线性正相关;分别对低、中、高浓度标准血清进行板内和板间的重复检测,其反应具有良好的重复稳定性。结论化学发光免疫分析法检测血清HB-sAg具有快速、可定量、反应稳定的特点,可用于血液筛查和临床标本的检测。